脐血CD34^＋造血干细胞体外扩增的研究

目的：探讨在体外液体培养中,多种细胞因子联合应用对脐血 Ｃ Ｄ３４＋ 造血细胞的扩增作用。方法：用 Ｉｓｏｌｅｘ ５０ 免疫磁珠法分离纯化脐血 Ｃ Ｄ３４＋ 细胞,在液体培养中,经不同细胞因子组合的诱导,检测有核细胞和集落形成细胞（ Ｃ Ｆ Ｃ）的增殖倍数。结果：干细胞生长因子、白细胞介素 Ｉ Ｌ３、 Ｉ Ｌ６、粒细胞集落刺激因子和红细胞生成素５ 种细胞因子联合对脐血 Ｃ Ｄ３４＋ 细胞扩增效果最好,其增殖高峰在第３～４ 周,单个核细胞数和 Ｃ Ｆ Ｕ Ｇ Ｅ Ｍ Ｍ 增殖倍数最高分别达３２６８±１０２４ 倍和８５±３１ 倍。结论：以干细胞生长因子、 Ｉ Ｌ３、 Ｉ Ｌ６ 为主的不同细胞因子组合,能维持脐血 Ｃ Ｄ３４＋ 细胞在体外长期造血达６ 周,使 Ｃ Ｆ Ｃｓ 大量扩增,这在造血调控研究和造血细胞支持治疗中具有重要意义     

脐血CD34+造血细胞体外扩增

目的：探讨造血细胞生长因子（细胞因子）的不同组合对脐血ＣＤ３４＋造血干（祖）细胞的扩增作用。方法：应用吸附单克隆抗体———磁珠分离系统分离纯化脐血ＣＤ３４＋细胞,在液体培养体系中经３组不同组合的细胞因子扩增３周。结果：３组不同组合的细胞因子对ＣＤ３４＋细胞均有明显的扩增作用。其中由ＦＬＴ３配基（ＦＬ）＋干细胞因子（ＳＣＦ）＋白细胞介素（ＩＬ）１＋ＩＬ３的组合扩增效果最好,其细胞总数扩增９０４６７±１３２２３倍,ＣＤ３４＋细胞扩增３７９９±１３２１倍,粒单造血祖细胞（ＣＦＵＧＭ）扩增７２７３±３５９８倍,多向祖细胞（ＣＦＵＧＥＭＭ）扩增３７７６±２３０３倍,总造血集落形成细胞（ＣＦＣｓ）扩增５７９５±２７９６倍。ＣＤ３４＋细胞扩增在第２周达最高值,ＣＦＣｓ在第３周达最高值。结论：由ＦＬ、ＳＣＦ、ＩＬ１及ＩＬ３联合扩增效果最好。ＣＤ３４＋细胞和ＣＦＣｓ分别在第２周、第３周达最高峰,说明其时仍保持造血活性。本实验结果对临床脐血造血干细胞移植选择最佳扩增方案和最佳移植时间有一定的参考价值。     

脐血CD34+细胞体外扩增的实验研究

目的：探讨用体外扩增脐血造血干细胞进行成人脐血移植的可能性。方法：从１５份新鲜脐血标本中纯化ＣＤ３４＋细胞，将其接种于含２０％的胎牛血清（ＦＢＳ）的ＩＭＤＭ培养基中，分别加入由Ｆｌｔ３配体（Ｆｌｔ３　ｌｉｇａｎｄ，ＦＬ）、干细胞因子（ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌ　ｆａｃｔｏｒ，　ＳＣＦ）、血小板生成素（ｔｈｒｏｍｂｏｐｏｉｅｔｉｎ，　ＴＰＯ）及白细胞介素６（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ１，ＩＬ－６）组成的三组细胞因子组合（Ａ组：ＦＬ＋ＴＰＯ；Ｂ组：ＦＬ＋ＳＣＦ＋ＴＰＯ；Ｃ组：ＦＬ＋ＳＣＦ＋ＴＰＯ＋ＩＬ－６）培养扩增１４ｄ。结果：①各组对各阶段造血细胞均有扩增效果，其中Ｂ、Ｃ组优于Ａ组（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１）；②　经体外１４ｄ的培养扩增后，单份脐血可产生足够量的造血干细胞用于成人脐血移植。结论：脐血ＣＤ３４＋细胞经体外扩增可用于成人脐血移植。     

体外扩增造血细胞重建小鼠造血功能的实验研究

目的 探讨体外扩增造血祖儿定向诱导功能血红细胞生成的条件及扩增细胞重建长期造血能力的维持。方法 应用免疫磁珠法（ＭＡＣＳ）分离纯化脐带血ＣＤ３４＾＋造血干或祖细胞,在体外液体培养体系中经不同细胞因子的组合进行扩增和定向诱导,并将扩增细胞移植经亚致死剂量照射的ＳＣＩＤ小鼠。结果 ＦＬ、干细胞因子血小板生成素（ＴＰＯ）等细胞因子的不同组合可分别扩增细胞总数、粒系及巨核系造血祖细胞、ＣＤ３４＾＋ＣＤ３８     

体外培养与扩增对脐血CD34+细胞及HLA抗原表达的影响

采用免疫组织化学方法．观察脐血细胞体外培养与扩增前后ＣＤ３４~＋细胞的比例以及ＨＬＡ抗原的表达。结果表明：脐血ＣＤ３４~＋细胞的百分比以及ＨＬＡ抗原的表达于体外培养前后无显著性变化（Ｐ＞０．０５）,而在细胞因子的联合作用下,经一定时间的扩增后,ＣＤ３４~＋细胞百分比下降（Ｐ＜０．０１）,ＨＬＡ抗原的表达有一定程度的提高。提示：体外扩增对脐血ＣＤ３４~＋细胞的比例以及ＨＬＡ抗原的表达有一定的影响,而未加细胞因子的体外直接培养则不产生明显影响。     

体外培养与扩增对脐血CD34^＋细胞及HLA抗原表达的影响

采用免疫组织化学方法,观察脐血细胞体外培养与扩增前后ＣＤ３４＾＋细胞的比例以及ＨＬＡ抗原的表达。结果表明：脐血ＣＤ３４＾＋细胞的百分比以及ＨＬＡ抗原的表达于达体外培养前后无显著性变化（Ｐ〉０．０５）,而在细胞因子的联合作用下,经一定时间的扩增后,ＣＤ３４＾＋细胞百分比下降（Ｐ〈０．０１）,ＨＬＡ抗原的表达有一定程度的提高。提示：体外扩增对脐血ＣＤ３４＾＋细胞的比例以及ＨＬＡ抗原的表达有一定的影响,     

重组人FLT3配基对人脐血CD34＋细胞的体外扩增作用

目的观察重组人ＦＬ（ｒｈＦＬ）对脐血ＣＤ＋３４细胞的体外扩增作用。方法用磁性细胞分离仪富集人脐血ＣＤ＋３４细胞。在ＣＤ＋３４细胞体外液体培养中加入不同的细胞因子,在不同时间取样测试ＣＤ＋３４细胞阳性百分率、晚期造血祖细胞（粒细胞巨噬细胞集落生成单位及红系爆增式集落形成单位）并计数细胞总数。结果用磁性细胞分离仪可快速富集脐血ＣＤ＋３４细胞,纯度高达８０％以上。ｒｈＦＬ可协同白细胞介素（ＩＬ）－３、ＩＬ－６、粒－巨噬细胞集落刺激因子及促红细胞生成素促进ＣＤ＋３４细胞总数在７天时扩增３．４倍,无ｒｈＦＬ的对照组ＣＤ＋３４细胞只扩增１．５倍,但对晚期造血祖细胞的扩增无明显协同作用。结论用排除法证实ｒｈＦＬ主要扩增了早期造血祖细胞。     

低温冷冻对脐血CD＋34细胞和造血祖细胞增殖的影响

采用－８０℃低温冷冻法,观察冷冻前及冷冻后１、２、３周时单个核细胞（ＭＮＣ）的回收率,脐血造血前体细胞在体外的增殖力,并用流式细胞仪检测ＣＤ３４＋细胞的百分率。旨在探讨低温冷冻对脐血造血前体细胞的影响。结果表明：脐血冷冻后１、２、３周时ＭＮＣ的回收率分别为９３．６％,９１．５％和９０．７％（Ｐ＞０．０５）;细胞活力分别为９８％,９７％,９５％和９１％（Ｐ＞０．０５）;ＣＤ３４＋细胞依次为１．２０％、１．１８％、１．１６％和１．１７％;ＣＦＵ－ＧＭ,ＣＦＵ－Ｅ冷冻后１、２周时回收率达９７％和９５％（Ｐ＞０．０５）,第３周时达８９％（Ｐ＞０．０５）。结果提示：长期冷冻可能导致冷冻之脐血祖细胞产率下降,但对代表造血干细胞的ＣＤ３４＋细胞影响则不大。     

白细胞介素-2对脐血CIK细胞体外增殖活性的影响

目的研究白细胞介素2对脐血细胞因子诱导的杀伤细胞增殖的影响。方法将白细胞介素2与经CD3单抗、γ干扰素活化的脐血细胞因子诱导的杀伤细胞体外共培养,以台盼蓝拒染法、MTT法检测细胞增殖水平,Giemsa染色观察细胞集落。结果体外培养3、7、10d后脐血单个核细胞分别扩增至3倍、9倍、25倍,培养10d后细胞密度增大,集落形成。结论白细胞介素2能诱导脐血细胞因子诱导的杀伤细胞增殖,是脐血造血干细胞扩增的重要细胞因子。     

脐血免疫活性和造血干细胞活性体外研究

目的 探讨造血生长因子不同组合方式对脐血有核细胞的扩增作用。方法 ①用流式细胞术检测脐血中ＣＤ３４＾＋、ＣＤ３８＾－、Ｔｈ（ＣＤ４＾＋、ＣＤ８＾－、ＣＤ３＾＋）细胞和Ｔｓ（ＣＤ４＾－、ＣＤ８＾＋、ＣＤ３＾＋）细胞;②用液体培养及半固体琼脂培养方法检测不同刺激因子的组合ＣＤ３４＾＋、ＣＤ３８＾－、Ｔｈ、Ｔｓ扩增后的变化。结果 在各种造血因子的协同作用下脐血中有核细胞数、ＣＤ３４＾＋、ＣＤ３８＾－分别