反义C—myc寡核苷酸对人肝癌细胞SMMC—7721的生长抑制

针对Ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ第二外显子起始妈ＡＵＧ及下游４个密码子设计合成了反义、正义及锚配寡核苷酸（ＯＤＮｓ）、并对合成的ＯＤＮｓ进行 硫代磷酸化修饰。在人肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１培养体系中，对反义寡核苷酸（ＡＳＯＤＮ）抑制细胞增殖的作用进行了研究。发现（１）与正义和错配ＯＤＮｓ相比较，反义Ｃ－ｍｙｃＯＤＮ有明显抑制人肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１生长的作用；（２）该生长抑制作用随ＡＳＯＤＮ剂量增加而增     

反义寡核苷酸对HPV16阳性人宫颈癌细胞增殖的影响

目的：探讨反义硫代寡核苷酸对ＨＰＶ１６阳性的人宫颈癌细胞增殖的影响，方法：人工合三段１８－ｍｅｒ的反义硫代寡核苷酸Ｓ－ＯＤＮ１－３，其中Ｓ－ＯＤＮ１（ＡＥ６），Ｓ－ＯＤＮ２（ＡＥ７）分别与ＨＰＶ１６Ｅ６Ｅ７基因的起始码及其下游序列互补Ｓ－ＯＤＮ，为一随机序列，分别用三种反义寡核苷酸处理整合有ＨＰＶ１６基因组的人宫颈癌细胞ＳｉＨａ。通过四唑盐比色法，＾３Ｈ－ＴｄＲ参入试验观察不同浓度反义寡核苷酸对Ｓ     

c-myc反义寡核苷酸对低氧内皮细胞条件培养液诱导的肺血管周细胞增殖的影响

应用细胞培养、核酸斑点杂交、~３Ｈ－胸腺嘧啶核苷（~３Ｈ－ＴｄＲ）掺入、免疫细胞化学、图像分析等技术观察ｃ－ｍｙｃ反义寡核苷酸（ＯＤＮｓ）对低氧内皮细胞条件培养液（ＨＥＣＣＭ）诱导的大鼠肺血管周细胞ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ表达、增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）表达及~３Ｈ－ＴｄＲ掺入量的影响。结果表明,ＨＥＣＣＭ显著促进周细胞 ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ表达、ＰＣＮＡ表达（Ｐ＜０．０１）及~３Ｈ－ＴｄＲ掺入量增加（Ｐ＜０．０１）,反义ＯＤＮｓ显著阻抑 ＨＥＣＣＭ诱导的周细胞ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ表达、ＰＣＮＡ表达（Ｐ＜０．０１）及~３Ｈ－ＴｄＲ掺入量增加（Ｐ＜０．０５）,而同义ＯＤＮｓ无上述作用（Ｐ＞０．０５）。结果提示,ＨＥＣＣＭ可通过上调ｃ－ｍｙｃ基因表达促进肺血管周细胞增殖,反义ＯＤＮｓ通过下凋ｃ－ｍｙｃ基因表达,抑制ＨＥＣＣＭ诱导的肺血管周细胞增殖。     

氧化修饰LDL及VLDL对兔主动脉平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白1mRNA表达的作用

单核细胞趋化蛋白１（ＭＣＰ－１）是一种强的单核细胞趋化因子，在体外可由多种细胞分泌，包括血管平滑肌细胞（ＳＭＣ）。本研究采用斑点杂交方法检测了氧化修饰低密度脂蛋白（ＯＸ－ＬＤＬ）、极低密度脂蛋白（ＶＬＤＬ）及氧化修饰极低密度脂蛋白（ＯＸ－ＶＬＤＬ）对培养的兔主动脉ＳＭＣＭＣＰ－１ｍＲＮＡ表达的作用。结果表明，培养的ＳＭＣ可表达ＭＣＰ－１ｍＲＮＡ，而且ＳＭＣ暴露于ＯＸ－ＬＤＬ、ＶＬＤＬ及ＯＸ－ＶＬＤＬ后，其ＭＣＰ－１ｍＲＮＡ表达水平明显增高，分别增高约１１倍、６倍和２０倍。因此我们认为ＯＸ－ＬＤＬ、ＶＬＤＬ及ＯＸ－ＶＬＤＬ可以刺激培养的兔主动脉ＳＭＣＭＣＰ－１ｍＲＮＡ的表达。     

反义寡脱氧核苷酸抑制丁型肝炎病毒基因链核酶活性的作用

目的探讨反义寡脱氧核苷酸（ａｓＯＤＮ）抑制丁型肝炎病毒（ＨＤV）核酶活性以阻断ＨＤＶ复制的作用，方法在构建含ＨＤＶ基因链和抗基因链核酶ｃＤＮＡ片段的重组质粒ｐＨＤＶｒｚ２７７的基础上，体外转录出１１２聚核苷酸（ｎｔ）的基因链核酶，观察５条ａｓＯＤＮ抑制核酶活性的作用，并对作用最好的一条进行序列优化。结果 互补于６８３－７０３ｎｔ的自裂位点和茎样结构（ｓｔｅｍ）１区的ａｓＯＤＮ可完全抑制该１１２ｎｔ核酶的活性，互补于７５６－７７０ｎｔ（ＳＳｒＢ区）和７２１－７３５ｎｔ（ＳＳｒＡ区）的ａｓＯＤＮ亦有较高活性，抑制率分别为６９．３６％和４８．６４％，而对应于７３６－７５０ｎｔ（ｓｔｅｍｗ区）和７０４－７２０ｎｔ＜ＳＳｒＣ区）者几乎无抑制作用。对互补于６８３－７０３ｎｔ的ａｓＯＤＮ进行序列优化发现，封闭自裂位点在内的１３ｎｔ（６８３－６９５ｎｔ）的ａｓＯＤＮ仍保留很高抑制作用，抑制率大于９０％。结论ｓｔｅｘｎｌ和ＳＳｒＢ在基因链核酶中起重要作用，ａｓＯＤＮ可有效抑制ＨＤＶ基因链核酶活性。     

c—myc反义寡核苷酸对低氧内皮细胞条件培养液诱导的肺血管？…

应用细胞培养、核酸斑点杂交、Ｈ＾３－胸腺嘧啶核苷（＾３Ｈ－ＴｄＲ）掺入、免疫细胞化学、图像分析等技术观察ｃ－ｍｙｃ反义寡核苷酸（ＯＤＮｓ）对低氧内皮细胞条件培养液（ＨＥＣＣＭ）诱导的大鼠肺血管周细胞ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ表达、增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）表达及＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入量的影响。结果表明,ＨＥＣＣＭ显著促进周细胞ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ表达、ＰＣＮＡ表达（Ｐ〈０．０１）及＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入量增加（     

抗HCV NS3抗原单克隆抗体的研制与初步鉴

目的：为研制抗丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＮＳ３抗原单克隆抗体,用于检测丙肝患者血清中的ＨＣＶＮＳ３抗原。方法：用基因工程表达的ＨＣＶ非结构区ＮＳ３蛋白与鼠血清白蛋白交联后,免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,用杂交瘤技术获得能分泌单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的细胞株。结果：获得有实用价值的两株ＭｃＡｂ。两株ＭｃＡｂ与免疫抗原有较强的抗原－抗体反应,与ＨＣＶＮＳ４、ＮＳ５及核心区Ｃ３３肽、ＣＰ９、ＣＰ１０抗原无反应性,在竞争ＥＬＩＳＡ中,对ＨＣＶ－ＩｇＧ阳性血清有较好的抑制作用。结论：用基因工程表达的ＨＣＶ非结构区ＮＳ３蛋白,能够制备出有实用价值的单克隆抗体。     

Lipofectin介导DNA聚合酶α反义寡核苷酸抑制人胃癌细胞生长

目的 研究阳离子脂质体Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ（Ｌｉｐ）介导的ＤＮＡ聚合酶α（ＤＮＡ－ｐｏｌα）反义寡核酸（ＡＳＯＤＮ）体外抑制人胃癌细胞的生长。方法 合成与人ｐｏｌα催化亚基ｍＲＮＡ翻译起始区１８个碱基互补的寡核苷酸（ＯＤＮ）,与Ｌｉｐ混合制备Ｌｉｐ＋ＯＤＮ复合物,作用于ＭＧＣ－８０３、ＳＧＣ－７９０１人胃癌细胞２４ｈ后,细胞换液,继续培养２４ｈ,用噻唑蓝（ＭＴＴ）比色法测细胞存活状态,流式细胞术（     

肝癌及癌旁组织中丙型肝炎病毒NS_5抗原的免疫组织化学观察

肝癌及癌旁组织中丙型肝炎病毒ＮＳ５抗原的免疫组织化学观察汪荣泉周子成杨建民房殿春我们采用链霉菌抗生物素蛋白－过氧化酶连接法（ＳＰ法）和ＨＣＶＮＳ５的单克隆抗体、ＨＢｓＡｇ的多克隆抗体对肝癌（ＨＣＣ）及其癌组织中ＨＣＶＮＳ５抗原和ＨＢ－ｓＡｇ的表达进行...     

反义寡核苷酸抑制血管平滑肌细胞增殖

目的 证实反义ｃ－ｍｙｃ,ＰＣＮＡ寡核苷酸阻遏血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖的效应。方法 人工合成正义、反义及错配反义ｃ－ｍｙｃ,ＰＣＮＡ寡核苷酸,转入体外培养的ＶＳＭＣ中,分别于作用后１～５ｄ进行细胞计数和＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定。结果加入反义ｃ－ｍｙｃ,ＰＣＮＡ寡核苷酸的ＶＳＭＣ增殖受到抑制,崦正义和错配反义寡核苷酸对ＶＳＭＣ增殖没有明显影响。结论 反义ｃ－ｍｙｃ,ＰＣＮＡ寡核苷酸可有效阻遏