CD_3AK细胞的培养与抗肿瘤活性研究

目的体外扩增经ＣＤ３单抗（ＣＤ３ＭｃＡｂ）活化的杀伤细胞（ＣＤ３ＡＫ），并测定其抗肿瘤细胞作用和表型变化。②方法取１３例肺癌和２例肝癌病人外周血，经密度梯度离心获取淋巴细胞，以ＣＤ３ＭｃＡｂ和ＩＬ－２作为诱导剂，采用液相三步扩增方法扩增培养，并分别用ＭＴＴ和ＩＦＡ法与自体ＬＡＫ对照细胞比较细胞动力学、细胞毒作用和表型变化。③结果ＣＤ３ＡＫ细胞扩增速度、数量和抗肿瘤活性均优于自体ＬＡＫ细胞，其表型为ＣＤ３，ＣＤ４，ＣＤ８和ＣＤ１６的特殊异源淋巴细胞群。其中ＣＤ４亚群表型数量随培养时间延长明显升高（χ２＝７．６６，Ｐ＜０．０１），而ＣＤ１６则明显下降（χ２＝５．２３，Ｐ＜０．０５），该亚群表型变化可能与培养时间有关。④结论ＣＤ３ＡＫ细胞具有较强的杀肿瘤细胞作用，同时也可作为基因治疗的理想载体细胞。     

人rδT淋巴细胞抗肿瘤特性的研究

分别采用４ｈ＾５１Ｃｒ释放法及＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法检测，ｒδＴ淋巴细胞对各种肿瘤细胞的杀伤作用结果显示：ｒδＴ细胞对ＸＧ－７，Ｋ５６２，ＤａｕｄｉＵ９３７，Ｊｕｒｋａｔ等肿瘤株皆可介导高效杀伤作用，对自体及异休新鲜白血病细胞亦有明显的细胞毒效应，对正常的自体及异体淋巴母细胞却无明显的杀伤作用，同时ＴＮＦ－α，ＩＬ－４等细胞因子可协同提高ｒδＴ细胞对肿瘤细胞的杀伤活性。     

结核杆菌抗原活化的γδT细胞的抗肿瘤活性

目的：探讨经结核杆菌抗原特异性活化的γδＴ细胞的抗肿瘤活性。方法：结核杆菌抗原（Ｍｔｂ－Ａｇ）、ＩＬ－２、ＰＨＡ做为刺激原,活化正常人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）,用流式细胞仪分析活化后淋巴细胞的表型,用ＭＴＴ法测定活化淋巴细胞的杀伤活性。结果：Ｍｔｂ体外活化ＰＢＭＣ可于１８天获得大量淋巴细胞,且γδＴ细胞占有较高比例,对肿瘤细胞有较高杀伤活性。结论：用Ｍｔｂ为刺激原可获得大量γδＴ细胞,且在体外     

人实体瘤肿瘤浸润淋巴细胞的高效扩增及功能评价

目的体外高效扩增肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ），为进一步开展基因治疗肿瘤奠定基础。②方法采用机械分离、酶消化和不连续密度梯度离心法分离提取ＴＩＬ前体细胞；以ＩＬ－２作为诱导剂，采用液相三步扩增方法扩增培养，并分别用ＭＴＴ和ＩＦＡ法与对照的自体ＬＡＫ细胞比较细胞动力学。同时对Ｋ５６２细胞和自体肿瘤细胞（ＡＴＣ）进行杀伤试验以及表型检测。③结果从２８例实体瘤组织和肿瘤引流淋巴结中获取的ＴＩＬ前体细胞，２６例培养成功，其中２３例ＴＩＬ数量达到治疗数量级；ＴＩＬ细胞对ＡＴＣ杀伤作用强于自体ＬＡＫ细胞（ｔ＝１１．４，１８．９，Ｐ＜０．０１）。ＴＩＬ细胞表型特点为ＣＤ３，ＣＤ４，ＣＤ８淋巴细胞亚群。④结论ＴＩＬ细胞具有高效杀肿瘤细胞作用，ＴＩＬ细胞可作为基因治疗的理想载体细胞。     

单克隆抗体对活化腹腔巨噬细胞抗胰腺癌作用的影响

观察重组人白细胞介素２（γ－ＩＬ２）体外诱导的腹腔巨噬细胞，在ＹＰＣ３抗人胰腺癌单克隆抗体（ＹＰＣ３ｍＡｂ）介导下，通过抗体依赖性细胞介导的细胞毒性（ＡＤＣＣ）机制对胰腺癌细胞的杀伤作用。４ｈ５１Ｃｒ释放实验表明，在ＹＰＣ３ｍＡｂ作用下，活化腹腔巨噬细胞对Ｃａｐａｎ－２人胰腺癌细胞的杀伤活力明显增强，比单用巨噬细胞杀伤活力约提高７０．０％，而对照１－Ｆ／７抗登革热病毒单抗无明显影响。γ－ＩＬ２作用的腹腔巨噬细胞和脾淋巴细胞具有类似的ＡＤＣＣ杀伤效应。结果提示，γ－ＩＬ２和ＹＰＣ３ｍＡｂ联合腹腔注射，可能为胰腺癌的局部治疗提供一个新方法。     

CD3AK细胞的培养与抗肿瘤活性研究

目的 体外扩增经ＣＤ３单抗（ＣＤ３ＭｃＡｂ）活化的杀伤细胞（ＣＤ３ＡＫ），并测定其抗肿瘤细胞作用和表型变化。方法 取１３例肺癌和２例肝癌病人外周血，经密度梯度离心获取淋巴细胞，以ＣＤ３ＭｃＡｂ和ＩＬ－２作为诱导剂，采用液相三步扩增方法扩增培养，并分别用ＭＴＴ和ＩＦＡ法与自体ＬＡＫ对照细胞比较细胞动力学、细胞毒作用和表型变化。结果 ＣＤ３ＡＫ细胞扩增速度、数量和抗肿瘤活性均优于自体ＬＡＫ细胞，其表型     

一株小鼠自发性乳腺癌细胞系MA—891的建立及其免疫生物学…

从津白Ⅱ号小鼠自发性乳腺癌ＴＡ２ＭＡ８９１建立了体外长期传代细胞系ＭＡ８９１。ＭＡ８９１细胞保持了ＴＡ２ＭＡ８９１的高转移特性，皮下接种后肿瘤进行生长，并无一例外地发生肿瘤肺转移。ＭＡ８９１细胞的免疫原性极弱，表现为：（１）淋巴细胞－肿瘤细胞混合培养（ＭＬＴＣ）只能诱导出低水平的细胞毒Ｔ细胞（ＣＴＬ）；（２）肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）含量少，体外经ＩＬ－２扩增后只表现出微弱的细胞毒活性；（３）在上     

5名电离辐射事故患者外周血T细胞T细胞抗原受体,T细胞分化抗原…

文中报道了５名事故性急性骨髓型放射病患者照后２．５和３．５年外周血Ｔ淋巴细胞Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）基因，ＴＣＲ、Ｔ细胞分化抗原决定簇－３（ＣＤ３）表达与ＴＣＲ／ＣＤ３复合物功能的辐射效应。发现５名患者于照后２．５年，２名（５．２Ｇｙ和２．４Ｇｙ，５５岁）于照后３．５年外周血Ｔ细胞应答抗ＣＤ３单抗刺激而增殖的能力尚未完全恢复；经同时用ＩＬ－２和抗ＣＤ３单抗刺激，增殖能力比单用抗ＣＤ３单抗刺激有所增强；     

人卵巢癌细胞特异CTL系的免疫学特性初步研究

目的 探讨人卵巢癌细胞体外刺激、诱导的肿瘤特异细胞毒性T淋巴细胞（CTL）对靶细胞的杀伤活性。方法 应用建株的人卵巢癌细胞（OVA－319），在体外定期刺激、诱导肿瘤患者外周血淋巴细胞，经微量淋巴细胞毒试验和流式细胞术分别测定扩增的淋巴细胞组织相容性白细胞抗原（HLA）Ⅰ类分子表型和膜表面免疫标志物，并通过4－甲基偶氮唑盐（MTT）法分析其对肿瘤细胞的杀伤活性。结果 经卵巢癌细胞刺激、诱导3周后扩增的淋巴细胞主要为T细胞抗原受体（TCR）－α、β及CD8阳性的CTL，具有明显特异性杀伤肿瘤细胞的作用，并发现经OVA－319细胞刺激、诱导后不同个体的卵巢癌患者CTL的杀伤活性与效靶细胞的HLA－A、B位点相同数成正比。结论 肿瘤细胞体外激活的CTL具有特异杀伤靶细胞作用，提示CTL特异杀伤作用与刺激细胞、靶细胞及本身CTL表型的HLA－A、B位点密切联系。     

鼻咽癌患者前列环素及血栓素与外周血细胞免疫状况

应用间接免疫荧光法和放射免疫法分别检测了３４例鼻咽癌口才外周血中淋巴细胞的数量和血浆前列环素（ＰＧＩ２）及血栓素（ＴＸＡ２）的含量,并与正常对照组对比研究。结果显示：鼻咽癌患者外周血中ＣＤ４细胞减少（Ｐ〈０．０１）,而ＣＤ６细胞则明显同（Ｐ〈０．０５）。同时鼻咽癌血浆中ＰＧＩ２和ＴＸＡ２的稳定代谢产物６０ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α及ＴＸＢ２分别比组升谪,以ＴＸＢ２升高更明显（Ｐ〈０．０５）,提示鼻咽癌患     

Graves病淋巴细胞白介素2受体及转铁蛋白受体的表达

应用卵白素·生物素·过氧化物酶复合物（ＡＢＣ）法检测５４例Ｇｒａｖｅｓ病患者外周血淋巴细胞ＩＬ－２Ｒ，ＣＤ２５及ＴｆＲ，ＣＤ７１的表达。结果表明，Ｇｒａｖｅｓ病亢进期患者ＩＬ－２Ｒ与ＴｆＲ均显著高于正常对照组（Ｐ＜０．００１），缓解期ＩＬ－２Ｒ及ＴｆＲ迅速恢复（与亢进期比，Ｐ＜０．００１），但ＩＬ－２Ｒ仍高于正常对照组（Ｐ＜０．００１），而ＴｆＲ与正常对照组差异无显著性（Ｐ＞０．０５），ＩＬ－２Ｒ与Ｔ３（ｒ＝０．５８６８，Ｐ＜０．０１），Ｔ４（ｒ＝０．４９８５，Ｐ＜０．０１）呈正相关，ＴｆＲ与Ｔ３（ｒ＝０．４８５２，Ｐ＜０．０１），Ｔ４（ｒ＝０．４２３８，Ｐ＜０．０１）呈正相关，并对Ｇｒａｖｅｓ病出现ＩＬ－２Ｒ及ＴｆＲ变化的意义进行了讨论     

转录因子GATA-2基因在淋巴系白血病中的表达特点

我了解ＧＡＴＡ－２基因在淋巴系白血病中的表达情况。方法 利用反转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）、慢性淋巴细胞白血病（ＣＬＬ）、多毛细胞白血病（ＨＣＬ）和淋巴细胞白血病等１０１０例病人外周血单个核细胞吕ＣＡＴＡ－２基因。结果 ＧＡＴＡ－２基因在ＡＬＬ和ＣＬＬ中的表达率分别为７９．２％和９４．４％,３例ＨＣＬ均表达ＧＡＴＡ－２,３例淋巴瘤细胞白血病仅１例表达ＧＡＴＡ－     

用IL－2／LAK细胞对中晚期癌症病人细胞免疫的影响

为了探讨ＩＬ－２／ＬＡＫ细胞对中晚期癌症病人细胞免疫的影响，用３Ｈ－ＴｄＲ掺入ＤＮＡ法测定了１７例中晚期癌症病人在ＩＬ－２／ＬＡＫ细胞治疗前后外周血加ＰＨＡ或不加ＰＨＡ淋巴细胞体外增殖试验，结果显示无论空白对照（１１／１６）还是ＰＨＡ诱导的Ｔ淋巴细胞增殖试验（１２／１６），ｃｐｍ值较治疗前均有明显的提高（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１）；在Ｔ细胞亚群的测定中，ＩＬ－２／ＬＡＫ细胞治疗前后比较，ＣＤ３＋和Ｃ８＋细胞都未发现明显的差异，只有Ｃ４＋细胞较治疗前（１３／１７）有了显著提高（Ｐ＜０．０１）；ＮＫ细胞虽未达到正常水平，但也显示较治疗前有显著增高的倾向；结果表明，ＩＬ－２／ＬＡＫ细胞疗法既对肿瘤细胞有直接杀伤作用，也对细胞免疫起了明显的促进作用。     

人源性抗EB病毒IgG/VCA抗体在SCID小鼠中的诱导

将人外周血淋巴细胞（ＰＢＬ）和腹腔淋巴结淋巴细胞（ＰＬＮＬ）移植入严重联合免疫缺陷疾病（ＳＣＩＤ）小鼠腹腔，２个月后，小鼠血清内产生人源性ＩｇＧ和抗ＥＢ病毒壳抗原ＩｇＧ抗体（ＩｇＧ／ＶＣＡ）。比较结果显示，用Ｂ９５－８细胞作为ＶＣＡ来源所诱导的实验组１０只小鼠，ＩｇＧ／ＶＣＡ阳性率为７０％（７／１０），对照组为１７％（２／１２）。ＩｇＧ／ＶＣＡ的几何平均滴度（ＧＭＴ）和血清ＩｇＧ浓度，在１４只ＳＣＩＤ－ＰＬＮＬ小鼠中为１∶１０８和（９６．２±５６．４）μｇ／Ｌ；在８只ＳＣＩＤ－ＰＢＬ小鼠为１∶７．８和（１３．８４±６．０）μｇ／Ｌ。该结果提示，ＳＣＩＤ－ＰＬＮＬ小鼠较ＳＣＩＤ－ＰＢＬ小鼠更适合用于人源性特异ＩｇＧ的诱导。     

体外利用MGc80-3胃癌细胞诱导肿瘤杀伤细胞的实验研究

以健康人外周血单个核细胞作为肿瘤杀伤细胞的前体细胞，ＭＧｃ８０ ３胃癌细胞作为刺激细胞，在体外进行同种异体淋巴细胞和肿瘤细胞混合培养之后，单独加入重组白介素 ２和同时加入重组白介素 ２、抗ＣＤ３单克隆抗体，分别诱导出Ｌ 肿瘤杀伤细胞和ＣＤ３ 肿瘤杀伤细胞．用噻唑蓝比色法在体外检测其对ＭＧｃ８０ ３胃癌细胞的杀伤活性，并与淋巴因子 激活杀伤细胞、ＣＤ３ 肿瘤杀伤细胞相比较结果显示，ＣＤ３ 肿瘤杀伤细胞的杀伤活性最高．在倒置显微镜下及透射电镜下观察ＣＤ３ 肿瘤杀伤细胞对ＭＧｃ８０ ３胃癌细胞的杀伤过程，发现ＣＤ３ 肿瘤杀伤细胞首先接触、粘附靶细胞，以细胞坏死和细胞凋谢的方式杀伤肿瘤细胞     

乳腺癌细胞抗原和自身淋巴结树突状细胞对细胞因子诱导的杀伤细胞作用研究

目的：从乳腺癌患者淋巴结　中分离和定向诱导培养扩增　树突状细胞（ＤＣ），观察其经自身肿瘤细胞抗原冲击后对自身细胞因子诱导的杀伤细胞（ＣＩＫ）　杀伤活性的影响。方法：取手术切除肿瘤周围转移的淋巴结，提取单个核　细　胞，将贴壁生长的细胞用细胞因子基因重组粒巨集落生长因子（ｒｈＧＭ－ＣＳＦ）、基因重组白介　素４（ｒｈＩＬ－４）、基因重组α－肿瘤坏死因子（ｒｈＴＮＦ－α）联合诱导培养ＤＣ，然后用　自身肿瘤细胞抗原冲击ＤＣ并作用ＣＩＫ，最后检测ＣＩＫ杀伤３种靶细胞（自身乳腺癌细胞、Ｋ５６２和　ＳＧＣ－７９０１细胞）的活性。结果：乳腺癌患者转移淋巴结中的贴壁细胞，经　细胞因子联合诱导培养，ＤＣ含量可达１５．３％～３７．０％。经自身肿瘤抗原冲击的淋巴结ＤＣ活化的Ｃ　ＩＫ，杀伤自身肿瘤细胞活性达７１．３％，单纯ＣＩＫ为３７．０％，两者比较差异有显著性（Ｐ＜０　．０１）；而对Ｋ５６２和ＳＧＣ－７９０１细胞杀伤活性无明显差异。结论：肿瘤周围转　移淋巴结贴壁细胞在体外能定向诱导扩增出大量ＤＣ；ＤＣ经自身肿瘤抗原冲击后能明显提高ＣＩ　Ｋ对自　身肿瘤细胞的杀伤活性。     

γδT淋巴细胞与常规LAK动物学特性的比较研究

用自建体外快速扩增人γδＴ细胞法，对正常人γδＴ细胞和常规ＩＬ－２诱导的ＬＡＫ细胞的生物学特性比较。结果：γδＴ细胞在体外的增殖能力、生存时间、细胞毒活性明显优于Ｃ－ＬＡＫ；免疫表型分析；γδＴ细胞高表达ＣＤ３、ＣＤ８、ＣＤ２５分化原，不表达或低表达ＣＤ１６、ＣＤ５６，而Ｃ－ＬＡＫ细胞则以ＣＤ１６、ＣＤ５６表型为主；γδＴ细胞经反复冻存，复苏后，上述生物学特性无明显变化。表明，γδＴ细胞作为一种新     

骨肉瘤特异杀伤性T淋巴细胞的体外扩增

目的 研究骨肉瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）体外扩增培养的方法，并进行细胞毒检测。方法 抽取骨肉瘤患自身的外周血，分离淋巴细胞，用IL-2体外短期刺激方法提高对骨肉瘤细胞的免疫性，再按一定比例体外与多西紫杉醇处理的骨肉瘤细胞及巨噬细胞混合培养（MTLC）可获得骨肉瘤的特异性CTL细胞，进行鉴定并观察其杀伤特性。结果 混合培养4d后，即可扩增出大量淋巴细胞，流式细胞仪证实主要是CD8^ 细胞，这些具有杀伤活性的CTL细胞体外对自身肿瘤细胞有很强的细胞毒作用。结论 在IL-2作用下，应用巨噬细胞、自体肿瘤细胞及淋巴细胞体外混合培养，是体外扩增特异性细胞毒性T淋巴细胞的较好方法，CTL作为新的特异性免疫治疗方法有望提高骨肉瘤的免疫治疗效果。     

树突状细胞刺激γδT细胞扩增诱导干细胞移植时GVL研究

目的：研究γδＴ细胞的体外生存期,抗白血病活性及可能引起的移植物抗宿主反应（ＧＶＨＤ）,为自体及异体移植后输注γδＴ细胞诱导移植物抗白血病反应作前期基础研究。方法：对移植患者采集物用ＧＭ－ＣＳＦ＋ＩＬ－４进行培养,使其分化和扩增为树突状细胞（ＤＣ）;然后用ＤＣ和细胞因子ＩＬ－２刺激其ＣＤ４＾＋Ｔ细胞扩增后,协同ＤＣ共同刺激γδＴ细胞扩增,进而用ＭＴＴ比色法和ＣＦＵ－ＧＭ集落培养研究其功能。结果：γ     

银屑病病人T淋巴细胞免疫功能的变化及影响因素

（１）目的 探讨进行期重症建党型银屑病病人外周血Ｔ淋巴细胞免疫的变化及影响因素。（２）方法 采用免疫酶技术和淋巴细胞培养法，对４９例病人和２０例正常人的外周血Ｔ淋巴及其亚群和膜白细胞介素－２受体（ｍＩＬ－２Ｒα）进行检测。（３）结果 未服用抗癌药的初发和长病程病人血中ＣＤ３，ＣＤ４细胞百分率，ＣＤ４／ＣＤ８比值和ｍＩＬ－２Ｒａ的表达率均明显低于正常人（Ｆ＝３．３５～１１．８８，ｑ＝２．８３～４．２