HCV核心抗原C33肽单克隆抗体的研制与初步鉴定

用ＨＣＶ核心抗原（Ｃ３３肽）与鼠血清白蛋白交联后免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，用杂交瘤技术获得有实用价值的二株ＭｃＡｂ。此二株ＭｃＡｂ除与免疫抗原有较强的抗原－抗体反应外，与ＨＣＶ核心抗原ＣＰ１０也有很好的反应；但与ＨＣＶＮＳ３、ＶＳ５及核心区ＣＰ９抗原无反应性。在竞争ＥＬＩＳＡ中对抗ＨＣＶ－ＩｇＧ阳性血清有较好的抑制作用。     

抗HSV－1杂交瘤细胞系的建立及单抗特性研究

以ＨＳＶ－１为抗原，免疫ＢＡＬＢ／Ｃ鼠，取其脾细胞在ＰＧＥ介导下与ＳＰ２／０细胞常规融合，ＩＦＡ法筛选鉴定，反复克隆，共获得７株能稳定、持续分泌抗ＨＳＶ的ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞系。核型分析染色体数为８７～１０３条之间，Ｉｇ类型分别为ＬｇＧ＿１、ＩｇＧ＿（２ｇ）、ＩｇＧ＿３，腹水抗体效价在１０￣（－５）～１０￣（－７）之间免疫沉淀。ＳＤＳ—ＰＡＧＥ分析，２株与１３２Ｋ多肽发生特异性反应，只具有ＨＳＶ－１型特异性，其余３株与１２０～１２８Ｋ多肽，２株与６０Ｋ多肽发生特异性反应，具有ＨＳＶ型共同抗原特异性。７株ＭｃＡｂ与ＣＭＶ均不发生特异反应。这些杂交瘤细胞系的建立对于ＨＳＶ的临床早期、快速诊断有重要的应用价值。     

抗HCV NS3抗原单克隆抗体的研制与初步鉴

目的：为研制抗丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＮＳ３抗原单克隆抗体,用于检测丙肝患者血清中的ＨＣＶＮＳ３抗原。方法：用基因工程表达的ＨＣＶ非结构区ＮＳ３蛋白与鼠血清白蛋白交联后,免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,用杂交瘤技术获得能分泌单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的细胞株。结果：获得有实用价值的两株ＭｃＡｂ。两株ＭｃＡｂ与免疫抗原有较强的抗原－抗体反应,与ＨＣＶＮＳ４、ＮＳ５及核心区Ｃ３３肽、ＣＰ９、ＣＰ１０抗原无反应性,在竞争ＥＬＩＳＡ中,对ＨＣＶ－ＩｇＧ阳性血清有较好的抑制作用。结论：用基因工程表达的ＨＣＶ非结构区ＮＳ３蛋白,能够制备出有实用价值的单克隆抗体。     

人巨细胞病毒特异性转移因子对小鼠脾细胞分化增殖的作用

①目的检测人巨细胞病毒特异性转移因子（ＨＣＭＶ－ＳＴＦ）对小鼠脾细胞分化增殖作用。②方法采用微量细胞培养法培养小鼠脾细胞，共分５组，分别加入１６４０培养液（空白对照），ＰＨＡ，ＨＣＭＶ－Ａｇ，ＨＣＭＶ－ＳＴＦ，ＨＣＭＶ－Ａｇ＋ＨＣＭＶ－ＳＴＦ．培养４８ｈ后加入氚－胸腺嘧啶（３Ｈ－ＴＤＲ），再培养２４ｈ，收集细胞，用液体闪烁计数器计数（ｃｐｍ），计算促进率。③结果ＨＣＭＶ－Ａｇ＋ＨＣＭＶ－ＳＴＦ组与ＨＣＭＶ－Ａｇ，ＨＣＭＶ－ＳＴＦ组比较具有明显的促进小鼠脾细胞分化增殖的作用（ｑ＝３．３５，４．７５，Ｐ＜０．０５）。④结论ＨＣＭＶ－ＳＴＦ具有相应抗原的依赖活性；同时也证明３Ｈ－ＴＤＲ掺入法检测小鼠脾细胞分化增殖效应，是特异性转移因子质控的一种较为理想的测试方法。     

酶联免疫吸附试验检测HCV NS3-4A蛋白酶活性

目的 建立一种检测丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＮＳ３－４Ａ丝氨酸蛋白酶的酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）方法,用于筛选ＨＣＶ蛋白酶抑制剂。方法 将闰ｐＭＡＬ－ｃ２／ＮＳ３－４Ａ转化到大肠杆菌Ｋ１２ＴＢ１中,经ＩＰＴＧ诱导表达,亲和层析柱纯化后得到麦芽糖结合的ＮＳ３／ＮＳ３－４Ａ融合蛋白,用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析其免疫学活性,并以酶联免疫吸附试验检测其生物学活性。结果 ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳分析并用考马     

卵巢癌抗独特型单链抗体诱导特异性体液免疫应答的动物实验研究

目的：用卵巢癌抗独特型单链抗体６Ｂ１１ｓｃＦｖ代替肿瘤抗原免疫动物，观察是否诱导动物产生特异性体液免疫反应。方法：将６Ｂ１１ｓｃＦｖ交联钥孔虫戚虫血蓝素，辅以弗氏佐剂反复免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，制备抗血清。采用间接法ＥＬＩＳＡ，竞争抑制ＥＬＩＳＡ及免疫流式细胞法分析抗血清特性。结果：经ＥＬＩＳＡ检测显示，由６Ｂ１１ｓｃＦｖ刺激产生的抗抗独特型单链抗体（Ａｂ３）能与６Ｂ１１ｓｃＦｖ和卵巢癌组织抗原ＯＣ１６６９特异性结合。竞争抑制ＥＬＩＳＡ表明，Ａｂ３能有效抑制卵巢癌单抗ＣＯＣ１６６９（Ａｂ１）与ＯＣ１６６９的特异性结合。免疫流式分析结果可见，Ａｂ３能与表达卵巢癌抗原的人卵巢癌细胞系ＯＶ１细胞表面结合而不能与无卵巢癌抗原表达的人宫颈癌细胞系ＨｅＬａ细胞表面结合。从以上结果可以证明Ａｂ３与Ａｂ１的抗原结合特性相同。结论：６Ｂ１１ｓｃＦｖ能代替卵巢癌抗原诱导动物产生特异性体液免疫反应，具有模拟抗原的作用，为６Ｂ１１ｓｃＦｖ作为卵巢癌抗独特型单链抗体疫苗的实际应用提供依据     

合成衣原体属特异LPS决定簇糖结合物的抗原性分析

合成衣原体属特异脂多糖（ＬＰＳ）的四糖链α－２－酮基－３－脱氧辛酸（ＫＤＯ）（２→８）－α－ＫＤＯ（２→４）－α－ＫＤＯ（２→６）－β－ＧｌｃＮＡｃ与牛血清白蛋白（ＢＳＡ）共价结合，制成糖－ＢＳＡ结合物抗原，用其免疫小鼠所制备的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）经间接血凝试验、血凝抑制试验、ＥＬＩＳＡ、免疫荧光试验和免疫印渍等试验分析，结果把这些ＭｃＡｂ分为两组：一组与衣原体ＬＰＳ和Ｒｅ型ＬＰＳ有交叉反应；另一组为衣原体特异性抗体，其中ＫＤＯ３特异抗体与衣原体原体ＭｃＡｂ有共同决定簇特异性，但亲和力却高于后者１００多倍。表明合成糖－ＢＳＡ结合物与衣原体ＬＰＳ有相似的抗原性。     

血管活性肽对同型半胱氨酸刺激平滑肌细胞增殖的实验研究

目的 观察对兔主动脉平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖起负调节作用的Ｃ－型利钠利尿肽（ＣＮＰ）、肾上腺髓质素（Ａｄｍ）、降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）、生长抑素（ＳＳＴ）和甲状旁腺素相关蛋白（ＰＴＨｒＰ）等活性肽对同型半胱氨酸（Ｈｃｙ）刺激的ＶＳＭＣ增殖的影响。方法 ６只大耳白兔胸主动脉贴块法离体培养平滑肌细胞;分对照及Ｈｃｙ加不同处理因素组;＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入测定ＶＳＭＣ增殖;差速离心分离细胞膜、胞浆及胞     

分泌抗丙型肝炎病毒NS5蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步鉴定

目的建立能稳定分泌抗丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＮＳ５重组蛋白单克隆抗体（ＭｃＡｂ）,并对其生物学活性进行实验室鉴定。方法用重组ＨＣＶＮＳ５区蛋白为抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞ＳＰ２／０进行融合,经有限稀释克隆３次后制备分泌ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株,并用酶免疫（ＥＩＡ）法对其分泌抗体进行初步鉴定。结果融合后的阳性克隆中筛选出６株能稳定分泌ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株,命名为２Ｃ８,２Ｄ２,１Ｄ６,２Ｇ２,１Ｆ５和１Ｆ１０。这６株ＭｃＡｂ与ＮＳ５重组抗原均有良好的反应性,杂交瘤培养上清的ＥＩＡ抗体滴度为１∶４００～１∶１６００,其中１株诱生的同系小鼠腹水滴度为１∶８００００。这６株ＭｃＡｂ均为ＩｇＧ１亚型。结论该ＭｃＡｂ的制备,可为ＨＣＶ感染者血清和肝组织中抗原检测方法的建立和生物工程药物的研制创造条件。     

抗人IgG单克隆抗体制备和鉴定

以人ＩｇＧ为抗原，采用杂交瘤技术获得６株不同性质的抗人ＩｇＧ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）（ＡＩ２、ＡＩ３、ＡＩ４、ＡＩ５、ＡＩ６、和ＡＩ）。ＡＩ２ＭｃＡｂ具有抗ＩｇＧ１亚类的特异性，可识别ＩｇＧγ链和Ｆ（ａｂ＇）２片段，作用位点可能在人ＩｇＧ１铰链区。ＡＩ３ＡＩ、ＭｃＡｂ分别为ＩｇＧ３、ＩｇＧ４亚类限制性ＭｃＡｂ，可能作用于ＩｇＧＣＨ１区。ＡＩ４ＭｃＡｂ可识别χ和λ型ＩｇＧ四个亚类以及Ｆ（ａｂ＇）２片段，不识别游离χ、λ链。ＡＩ５ＭｃＡｂ特异地抗ＩｇＧ１结合型χ，作用于ＩｇＧ独特型位点。ＡＩ６ＭｃＡｂ只抗λ型ＩｇＧ，可能作用于ＩｇＧＣＬ区。６种抗人ＩｇＧＭｃＡｂ除了ＡＩ５外，均能用于人血清中ＩｇＧ的检测。