PML-RAR_α融合基因检测方法学的建立

应用筑巢式逆转录聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测２３例急性早幼粒白血病（ＡＰＬ），早幼粒白血病基因ＰＭＬ维甲酸受体α融合基因（ＰＭＬ－ＲＡＲα），肯定了２例与急非淋白血病Ｍ２不易鉴别的不典型ＡＰＬ。１５例缓解在２年以内ＡＰＬ此融合基因均阳性，其中Ｌ型８例，Ｓ型７例，Ｌ型中尚发现一个变异型。８例缓解在３年以上ＡＰＬ，此融合基因４例阳性，其中Ｌ型３例，Ｓ型１例，Ｌ型１例已有复发倾向，而缓解超过４年ＡＰＬ此融合基因均为阴性。     

PML—RARa融合基因检测方法学的建立

应用筑巢式逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测２３例急性早幼粒白血病（ＡＰＬ）早幼粒白血病基因ＰＭＬ维甲酸受体α融合基因（ＰＭＬ－ＲＡＲａ）肯定了２例与急淋白血病Ｍ２不易鉴别的不典型ＡＰＬ，１５例缓在２年以内ＡＰＬ此融合基因均阳性，其中Ｌ型８例，Ｓ型７例，Ｌ型中尚发现一个变异型，８例缓解在３年以上ＡＰＬ，此融合基因４例阳性，其中Ｌ型３例，Ｓ型１例，Ｌ型１例已有复发倾向，而缓解超过４年ＡＰＬ此     

急性早幼粒细胞白血病PML-RARα融合基因异构体的临床意义

目的：探讨急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因异构体及其临床关系。方法：用逆转录／聚合酶链反应（ＲＴ／ＰＣＲ）检测２１例初诊ＡＰＬ患者细胞中ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因转录本，并分析其对临床特征的可能不同影响。结果：在ＡＴＲＡ诱导治疗过程中，短型ＰＭＬ－ＲＡＲα异构体ＡＰＬ组的早期死亡和复发率（４／８）（５０％）高于长型ＰＭＬ－ＲＡＲα异构体组（２／１３）（１５．４％）；与长型异构体相反，存活期２月至２年患者含短型异构体的比例（７５％）大于存活期２年以上组（３３．３％）；未观察到患者血液学参数改变与不同ＰＭＬ－ＲＡＲα异构体有关。结论：与长型ＰＭＬ－ＲＡＲα异构体组ＡＰＬ患者相比，短型ＰＭＬ－ＲＡＲα异构体组的预后可能更差。     

RT-PCR检测氧化砷治疗APL复发患者的PML-RARα融合基因

目的：探讨急性早幼粒细胞性白血病（ＡＰＬ）患者在氧化砷（Ａｓ２Ｏ３）治疗过程中，ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因的变化。方法：应用ＲＴ－ＰＣＲ技术动态观察１４例ＡＰＬ复发患者在Ａｓ２Ｏ３治疗过程中，骨髓单个核细胞中ＰＭＬ－ＲＡＲα转录本的改变。结果：检测的１１例诱导缓解患者中，９例存在阳性ＰＭＬ－ＲＡＲα转录本，随访的６例患者中，３例呈现ＰＭＬ－ＲＡＲα转阴，但２例分别在缓解后５、７个月转阳。结论：ＲＴ－ＰＣＲ检测ＰＭＬ－ＲＡＲα转录本可能在一定程度上为氧化砷的疗效及预后判断提供依据     

急性早幼粒细胞白血病PML-RAR_αmRNA的检测和临床意义

应用热启动ＲＴ ＰＣＲ 方法检测急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）ＰＭＬ ＲＡＲαｍ ＲＮＡ，与传统“巢式”ＰＣＲ 比较，仅需１ 对引物而获１０－ ４ 的敏感性。对７ 例ＡＰＬ患者，分别在诊断时及缓解后进行ＰＭＬ ＲＡＲαｍ ＲＮＡ的动态监测。这些患者分别接受如下治疗：２ 例仅给予全反式维甲酸（ＡＴＲＡ） 治疗；其余５ 例接受ＡＴＲＡ 联合化疗药物治疗。所有缓解后患者均进一步接受强化治疗。每月均对骨髓及外周血标本进行ＰＭＬ ＲＡＲαｍＲＮＡ 的检测，发现仅予ＡＴＲＡ 可获血液学缓解，但不能达到ＰＣＲ 缓解，骨髓及外周血仍存在ＰＭＬ ＲＡＲαｍＲＮＡ；而接受ＡＴＲＡ 联合化疗药物治疗获缓解后，骨髓及外周血ＰＣＲ 结果均阴性，显示了对恶性克隆的有效根除。２ 例患者ＰＣＲ 结果持续阳性，并在６ 个月后复发。ＰＣＲ方法不仅可评价化疗效果，指导临床用药，更可以预测复发。     

临床病人口服外消旋维拉帕米的对映体药物动力学结合药效学分析

以三甲基－β－环糊精为手性选择剂，采用毛细管区带电泳模式快速监测临床病人口服外消旋维拉帕米（ＶＰＭ）后ＶＰＭ和去甲维拉帕米（ＮＶＰＭ）对映体的血浆浓度，同时测量心血管系统的药物效应（血压、心率、心电图）。运用分析临床零散数据的ＮＯＮＭＥＭ程序，分析２７名患者ＶＰＭ和（－）－ＶＰＭ的稳态群体药物动力学和１６例患者的群体药效学。ＶＰＭ的Ｒ／Ｓ（ＣＳＳ）比值为３．６２±０．９６（２．２８～５．５８），ＮＶＰＭ的Ｒ／Ｓ（ＣＳＳ）比值为２．８９±０．５３（１．６６～３．６９）；ＶＰＭ和（－）－ＶＰＭ的群体药物动力学参数θＣＬ／Ｆ（Ｌ／ｈ）、θＳＥＸ（Ｌ／ｈ）、ωＣＬ／Ｆ（％）、σＣｓｓ（％）分别为８３，－９．７，４７．５，３４．８和２００，５０，３１．５，４５．５，男女性别之间存在差异。ＶＰＭ和（－）－ＶＰＭ的群体药效学参数Ｅｍａｘ（％）、ＣＥ５０（ｎｇ／ｍｌ）、γ、ωＥｍａｘ（％）、ωＣＥ５０（％）、ωγ（％）、σＥ（％）分别为１４．８，２７．６，２．３８，４３．２，３７．６，１３４，３４．９和１４．３，４．６８，１．８２，１４．３，３０．４，８．９，１８．２。     

三氧化二砷对急性早幼粒细胞性白血病细胞株的双重效应研究

观察不同浓度的三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）对急性早幼粒细胞性白血病（ＡＰＬ）细胞株ＮＢ４细胞的影响。方法不同浓度的三氧化二砷（０．１～２μｍｏｌ／Ｌ）与ＡＰＬ细胞株ＮＢ４细胞共同孵育一定时间后，观察ＮＢ４细胞的存活，细胞形态学，免疫表型（ＣＤ１１ｂ，ＣＤ３３），细胞ＤＮＡ含量分布及ＰＭＬ／ＰＭＬ－ＲＡＲα蛋白在细胞内定位的改变。结果经１～２μｍｏｌ／Ｌ氧化砷处理的ＮＢ４细胞呈现凋亡的特征性改变。在细胞形态学上表现为胞膜完整，染色质固缩及核碎裂。流式细胞仪分析显示与三氧化二砷作用浓度及时间相关的亚Ｇ１期细胞。经０．１～０．２５μｍｏｌ／Ｌ三氧化二砷处理１０天的ＮＢ４细胞呈现某些与分化相关的形态学改变和分化相关抗原（ＣＤ１１ｂ和ＣＤ３３）的调变，而０．１～２μｍｏｌ／Ｌ的三氧化二砷均能快速调变和减少ＰＭＬ／ＰＭＬ－ＲＡＲα蛋白的表达。结论氧化砷对ＮＢ４细胞具有诱导凋亡和不完全分化双重作用，并能快速调变及降解ＰＭＬ／ＰＭＬ－ＲＡＲα蛋白的表达。     

血小板激活因子和维甲酸对中性粒细胞功能和ICAM－1，ELAM－1表达的影响

目的：探讨血小板激活因子（ＰＡＦ）和维甲酸（ＲＡ）对多形核中性粒细胞（ＰＭＮ）功能和肺微血管内皮细胞（ＰＭＶＥＣ）ＩＣＡＭ－１和Ｅ－选择素（ＥＬＡＭ－１）表达的影响。方法：采用作者创建的无创性分离法分离培养ＰＭＶＥＣ；将ＰＡＦ和ＲＡ分别加入培养有ＰＭＶＥＣ的９６孔板中，观察二者对ＰＭＮ－ＰＭＶＥＣ粘附的影响；ＥＬＩＳＡ法测定ＰＭＶＥＣ上ＥＬＡＭ－１和ＩＣＡＭ－１的表达；测定ＰＡＦ和ＲＡ对ＰＭＮ的趋化性、聚集和酸性磷酸酶的释放的影响。结果：（ｌ）ＰＭＶＥＣ用ＰＡＦ处理３．５ｈ后，它与ＰＭＮ的粘附率从５７．３％增加到７２．８％（Ｐ＜０．０１）。而用ＰＡＦ处理ＰＭＮ同样可增加ＰＭＮ－ＰＭＶＥＣ的粘附率。（２）ＲＡ可阻断未刺激ＰＭＮ与ＰＡＦ刺激的ＰＭＶＥＣ之间的粘附，但对ＰＡＦ刺激的ＰＭＮ与未刺激的ＰＭＶＥＣ之间的粘附却无作用。（３）ＰＡＦ可增加ＰＭＶＥＣ上ＩＣＡＭ－ｌ和ＥＬＡＭ－ｌ的表达、增加酵母多糖激活血清和组胺对ＰＭＮ的趋化性、增加ＰＭＮ的聚集和ＰＭＮ酸性磷酸酶的释放。（４）ＲＡ则可抑制ＰＡＦ诱导的ＰＭＮ聚集、酸性磷酸酶的释放及ＰＭＮ对酵母多糖刺激血清和组胺的趋化性，而ＩＣＡＭ－１和ＥＬＡＭ－１的表达却未改变     

NB4细胞PML—RARα融合基因表达对维甲酸诱导分化作用的影响

目的研究急性早幼粒白血病（ＡＰＬ）细胞株ＮＢ４细胞ＰＭＬ－ＲＡＲα（早幼粒细胞白血病基因－维甲酸受体基因α）融合基因的表达对维甲酸诱导分化作用的影响，探讨ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因与维甲酸治疗作用间的关系。方法用反义核酸来阻断ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因的表达并用逆转录－聚合酶链式反应检测。ＮＢ４细胞的生长、分化及功能。通过细胞生长曲线、形态学、细胞表面标志及ＮＢＴ（硝基四氮唑蓝）还原试验进行判定，细胞周期应用流式细胞仪进行分析。结果反义核酸阻断ＰＭＬ－ＲＡＲα表达后使维甲酸对ＮＢ４细胞的生长抑制作用增强，Ｓ期细胞由５２％降至２９％，同时ＮＢＴ还原能力提高，细胞表面标志变化明显，提示对维甲酸敏感性增加。结论ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因的表达不仅与ＡＰＬ的发病有关，而且钝化了维甲酸对ＡＰＬ细胞的诱导分化作用。     

急性早幼粒细胞白血病的治疗和预后分析

目的研究全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）和三氧化二砷（ＡＳ２Ｏ３）治疗急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）的长期疗效和预后相关因素。方法回顾性总结７２例经ＡＴＲＡ诱导缓解的初治ＡＰＬ患者长期无复发生存和总生存情况,并采用单因素分析对预后因素进行研究。结果７２例患者的３年和５年无复发生存率（ＲＦＳ）和总生存率（ＯＳ）分别为：３２．５％、１８．４％和７３．８％、５８．５％。初发病例在诱导缓解和缓解后治疗中,联合应用ＡＴＲＡ和化疗以及发病时ＷＢＣ计数与预后相关。ＡＳ２Ｏ３治疗复发ＡＰＬ,完全缓解和生存均高于常规化疗十维甲酸组。结论ＡＴＲＡ可作为初发病例的标准诱导治疗;缓解后联合应用化疗和ＡＴＲＡ能延缓或降低复发;在复发病例中,Ａｓ2Ｏ３治疗是首选方案。     

大剂量阿糖胞苷治疗急性白血病8例临床分析

急性白血病（ＡＬ）诱导化疗症状完全缓解后,应继续清除体内的微小残留病变（ＭＲＤ）。ＭＲＤ是白血病复发及影响预后的根本原因［１］。在延长阿糖胞各（ＡＲＡ－Ｃ）用药时间及加大剂量后可清除ＭＲＤ,达到巩固强化治疗的目的,我院于１９９５年１月～１９９８年６月共收治ＡＬ。患者８例,取得满意的效果。报告如下。１资料与方法１．１一般资料８例中。男１例,女７例,年龄２０～５３岁,中位年龄３６．３岁,体表面积１．２～１．８ｍ２。平均体表面积１．５５ｍ３。其中急性髓细胞性白血病（ＡＮＩＬ）３例,急性淋巴细胞性白血病…     

急性白血病钙素基因甲基化的PCR检测

应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了１０例急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）和２２例急性随细胞白血病（ＡＭＬ）降钙素（ＣＴ）基因的甲基化程度。结果表明，７例ＡＩＬ与１６例ＡＭＬ的ＣＴ基因都发生了高度甲基化。临床完全缓解的３例ＡＭＬ和２例ＡＩＬ中有１例ＡＬＬ为阳性，另有１例阴性的ＡＭＬ于１个月后转为阳性，随后出现临床复发。     

白血病中P16基因突变的检测

用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）、ＤＮＡ直接测序和多重ＰＣＲ法，检测了１８例慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ），１例Ｋ５６２细胞株，９例急性粒细胞性白血病（ＡＭＬ），６例急性淋巴细胞性白血病（ＡＬＬ），２例多发性骨髓瘤（ＭＭ）患者外周血／培养细胞ＤＮＡ中Ｐ１６基因的点突变和基因缺失。用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ共筛查出５例ＣＭＬ中Ｐ１６基因的异常，突变率为２７．８％（５／１８），对其中１例外显子２异常者经测序证实为第１５１密码子ＣＣＣ→ＣＧＣ的转换，导致Ｐｒｏ→Ａｒｇ的错义突变；并检出１例ＭＭ中Ｐ１６基因外显子３的异常；受检的ＡＬＬ，ＡＭＬ，Ｋ５６２细胞株中，未检出突变。各病例中均未检出Ｐ１６基因的缺失。本文探讨了白血病中Ｐ１６基因突变的意义。     

潘生丁减轻呼吸道合胞病毒肺炎的免疫损伤作用

目的：对比不同途径给予潘生丁（ＤＰＭ）对呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）肺炎的治疗作用。方法：以Ｌｏｎｇ株ＲＳＶ悬液滴鼻，引起４０只ＢＡＬＢ／ｃ小鼠严重肺炎，其中３０只经灌胃、腹腔注射、滴鼻３种途径给予ＤＰＭ５０ｍｇ．ｋｇ＾－１．ｄ＾－１治疗３display status     

维甲酸和三氧化砷对急性早幼粒细胞性白血病细胞组织因子表 …

目的 探讨全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）和三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）在体内外对急性早幼粒细胞性白血病（ＡＰＬ）细胞组织因子（ＴＦ）表达的意义。方法 利用复钙时间测定、ＥＬＩＳＡ和ＲＴ－ＰＣＲ等方法,分别检测了ＡＴＲＡ和Ａｓ２Ｏ３治疗前后ＡＰＬ患者（２３例）骨髓单个核细胞的促凝活性、ＴＦ抗原及其ｍＲＮＡ的转录水平,同时还检测了使用ＡＴＲＡ和Ａｓ２Ｏ３处理ＡＰＬ细胞株ＮＢ４－Ｒ１细胞以及转染ＰＭＬ－ＲＡＲａ融     

DR_3基因与1型糖尿病易感性及发病年龄的关系

目的：研究主要组织相容性复合体（ＭＨＣ）Ⅱ类ＤＲ３基因与１型糖尿病（胰岛素依赖型糖尿病）易感性及其发病年龄的关系。方法：应用巢式ＰＣＲ方法扩增出６５名健康人（对照组）、６４例１型糖尿病患者的ＤＲ３基因。根据发病年龄将１型糖尿病患者分为３组（Ａ组，≤１４岁；Ｂ组，１５～３０岁；Ｃ组，≥３１岁），比较ＤＲ３基因频率在各组间的差异。结果：ＤＲ３基因频率在Ａ组为６５％，Ｂ组为４０％，Ｃ组为２６％，对照组为１５％；ＤＲ３基因频率在糖尿病３组（Ａ＋Ｂ＋Ｃ组）４４％，明显高于对照组；糖尿病组各年龄组间ＤＲ３基因频率有明显差异，χ２＝６．１６，列联系数（Ｒｐ）＝０．３１，Ｐ＜０．０５。结论：ＤＲ３基因阳性者１型糖尿病易感性明显增加、发病年龄明显提前。     

急性早幼粒细胞白血病缓解后HA,DA方案交替化疗32例随访观察

采用ＨＡ和ＤＡ方案交替化疗,对３２例经全反式维甲酸诱导分化治疗达完全缓解的急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）病人,作继续治疗。随访１４～１１４个月,中位缓解期３９个月,中位生存期４４个月;其中１６例持续完全缓解３６～９６个月,８例生存５年以上;１３例复发（４０．６％）。分析认为,ＨＡ、ＤＡ交替化疗作为ＡＰＬ缓解后的继续治疗,生存期长,复发率低,是一种比较合理的方案。     

二次PCR检测HL_（60）细胞系PML－RAR_α融合mRNA

急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）具有染色体易位ｔ（１５；１７）而产生的特异的融合基因ＰＭＬ－ＲＡＲ_α。本研究应用二次聚合酶链反应（ｂｏｏｓｔｅｒＰＣＲ）技术检测了ＡＰＬ细胞系ＨＬ_（６０）细胞中ＰＭＬ－ＲＡＲ_α融合ｍＲＮＡ。结果表明，ＨＬ_（６０）细胞系中同时具有二种ＰＭＬ－ＲＡＲ_α融合ｍＲＮＡ异构体（Ｌ型和Ｓ型）。本实验的敏感度可达１０￣（－６）个细胞水平，同时检测了结果具有高度的特异性。提示本方法可作为今后检测ＡＰＬ微量残留白血病细胞一种灵敏、有效的手段。     

原发性肝癌全基因组杂合性缺失的研究

目的 研究肝癌全基因组等位基因杂合性缺失（ＬＯＨ）及其临床意义。方法 采用３８２对微卫星标志,对６５例肝癌２２条常染色体等位基因ＬＯＨ进行检测。结果 全组平均杂合子６８．１％。ＬＯＨ〉３０％的有１ｑ、３ｑ、４ｑ、８ｐ、１３ｑ、１６ｑ和１７ｐ。ＨＢｓＡｇ阳性者Ｄ４Ｓ２９６４ ＬＯＨ（６６％）较ＨＢｓＡｇ阴性者（３０％）高（Ｐ〈０．０５）;Ｄ３Ｓ３６８１和Ｄ１７Ｓ９３８ ＬＯＨ者术后复发率（９１％、８     

急性髓性白血病降钙素基因甲基化定量研究

为探讨降钙素（ＣＴ）基因高甲基化能否作为急性髓性白血病（ＡＭＬ）微小残留病（ＭＲＤ）的检测指标。采用设有内、外参照的聚合酶链反应（ＰＣＲ），结合限制内切酶和激光扫描技术，检测了４０例ＡＭＬ患者骨髓细胞的ＣＴ基因５′端甲基化率（ＣＴＭＲ）。结果：初发ＡＭＬ患者ＣＴＭＲ为５２５％±１９３７％，显著高于对照组（８１％±３７３％；Ｐ＜００００５），部分缓解（ＰＲ）组显著高于对照组而显著低于初发组；完全缓解（ＣＲ）组显著高于对照组而与ＰＲ组差别无显著性；ＡＭＬ患者的ＣＴＭＲ与骨髓白血病细胞数呈显著正相关（ｒ＝０．７１５，Ｐ＜０００１），ＣＲ组１６例中４例ＣＴＭＲ在５０％以上，分别于２、４、４５和９个月后复发。结果提示：ＣＴＭＲ有可能成为检测ＡＭＬ微小残留病的有用指标