单纯疱疹病毒胸苷激酶基因工程化细胞和更昔洛韦系统的急慢性毒性

目的：探讨单纯疱疹病毒Ｉ型胸苷激酶基因工程化细胞（ｐＬＴＫｃＳＮ／ＶＰＣ）和更昔洛韦（ＧＣＶ）系统的动物体内急、慢性毒性。方法：将ｐＬＴＫｃＳＮ／ＶＰＣ和（或）以β－半乳糖苷酶基因为报告基因的ＰＡ３１７细胞悬液注入小鼠、大鼠和灵长类动物体内，７ｄ后部分动物再全身应用ＧＣＶ。分批处死动物，观察ｐＬＴＫｃＳＮ／ＶＰＣ和ＧＣＶ系统在不同种属动物的体内急、慢性毒性。采用ＰＣＲ和原位杂交方法直接检测胸苷激酶     

神经胶质瘤基因治疗中旁观者效应的动物试验

目的：探讨单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）Ｉ型胸苷激酶（ＴＫ）基因逆转录病毒载体生长细胞（ｐＬＴＫｃＳＮ／ＶＰＣ）和更昔洛韦（ＧＣＶ）系统杀伤大鼠脑内神经胶质瘤细胞的旁观者效应。方法：用Ｃ６，Ｃ６ＸＳＮ，Ｃ６ＴＫ及不同比例的ＴＫ（＋）和ＴＫ（－）混合细胞接种于大鼠右侧额叶脑内，５ｄ后动物腹腔内注射ＧＣＶ溶液，剂量为１５ｍｇ／ｋｇ，每日２次，共１０ｄ。细胞接种后３周，所有动物处死，测量肿瘤大小，计算各组动物的     

单纯疱疹病毒I型胸苷激酶基因及更昔洛韦系统对S—D大鼠的毒副作用

旨探讨将单纯疱疹病毒Ｉ型胸苷激酶基因载体生产细胞（ｐＬＴＫｃＳＮ／ＶＰＣ）脑内注射和腹腔注射更昔洛韦（ＧＣＶ）在大鼠体内的急性系统毒副作用，以及载体生产细胞（ＶＰＣ）在大鼠脑内的存在时间。Ｓ－Ｄ大鼠２４只，雌雄各半，随机分为２组，第１组颅内注射ｐＬＴＫｃＳＮ／ＶＰＣ。细胞总量３×１０＾６／只，７天后腹腔注射ＧＣＶ３０ｍｇ．ｋｇ＾－１．ｄ＾－１共７天，ＧＣＶ用药结束后１周处死动物，进行各脏器组织学榆     

pLTKcSN／VPC及GCV系统的旁观者效应观察

目的：探讨单纯疱疹病毒Ｉ型胸苷激酶基因（ＴＫ）逆转录病毒载体生产细菌（ｐＬＴＫｃＳＮ／ＶＰＣ）和更昔洛韦（ＧＣＶ）系统杀伤恶性胶质瘤细胞过程中的旁观者效应。方法：采用大鼠胶质瘤细胞Ｃ６、人恶性胶质瘤Ｕ８７ＭＧ和它们的转染ＴＫ阳性细胞Ｃ６ＴＫ，Ｕ８７ＴＫ，将Ｃ６与Ｃ６ＴＫ，Ｕ８７ＭＧ和Ｕ８７ＴＫ按比例（ＴＫ阳性细胞占细胞总体的０－１００％，１０％梯度）分别混合培养于９６孔板中，每种混合比例设６孔。     

单纯疱疹病毒TK基因介导GCV治疗人RB肿瘤的实验研究

为探讨ＨＳＶ－ＴＫ基因介导的ＧＣＶ系统对人视网膜母细胞瘤（ＲＢ）基因治疗的有效性,利用电穿孔技术把重组逆转录病毒载体ｐＬＸＳＮ－ＴＫ导入包装细胞ＰＡ３１７,筛选出逆转录病毒产生细胞ＰＡ３１７／ＴＫ,收获病毒。体外实验：用逆转录病毒感染ＲＢ细胞,筛选出含ＴＫ基因的ＲＢ细胞（ＲＢ／ＴＫ）,用ＧＣＶ分别处理ＲＢ,ＲＢ／ＴＫ及不同比例的混合细胞。体内实验：建立人ＲＢ裸鼠原位异种移植模型,瘤内注射病毒液后再     

反转录病毒介导基因转移治疗脑肿瘤的安全性研究：Ⅰ.具有？…

目的：检测反转录病毒介导的脑肿瘤基因治疗中具有复制能力野生型反转录病毒（ＲＣＲ）。方法．；ＲＣＲ检测主要方法有：ＤＮＡ聚合酶链式反应（ＰＣＲ），反转录ＰＣＲ（ＲＴ／ＰＣＲ）。Ｓｏｕｔｈｅｍ杂交以及ｎｅｏ基因和ｌａｃＺ基因的补救分析。结果：建立了ＰＣＲ的检测系统，从ＤＮＡ水平、ＲＮＡ水平和病毒活体水平对产ＨＳＶ＿ＴＫ病毒我装细胞（ＴＫ／ＶＰＣ），Ｃ６转ＴＫ基因细胞和实验动物血液可能存在的ＲＣＲ野生型     

环丙氧苷诱导转导有外源HSV—tk基因的C6胶质瘤细胞的 …

目的 观察单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（ＨＳＶ－ｔｋ）－环丙氧苷（ＧＣＶ）系统在胶质瘤基因治疗过程中,ＧＣＶ能否诱导转导有ＨＳＶ－ｔｋ基因的胶质瘤细胞凋亡。方法 采用光镜、电镜和荧光显微镜观察转导有ＨＳＶ－ｔｋ基因的大鼠Ｃ６／ｔｋ胶质瘤细胞形态学的改变,以末转导ＨＳＶ－ｔｋ基因的Ｃ６细胞作为对照,并以流式细胞术,ＤＮＡ凝胶电流分析进一步验证细胞凋亡的发生。结果 在５μｇ／ｍｌ ＧＣＶ作用７２ｈ后,Ｃ６     

反转录病毒介导基因转移治疗脑肿瘤的安全性研究：Ⅱ.HSV—tk／A …

采用细胞接种、Ｘ－ｇａｌ染色、ＴＫ基因的ＰＣＲ和病理切片观察,分别将ＰＡ３１７／ＢＡＧ,ＰＡ３１７／ＴＫ产病毒细胞注射动物体内,结果产病毒细胞在动物体内存活期均不超过１个月;产病毒细胞在体内有形成肿瘤,也没有发现严重的炎症 反应;ＨＳＶ－ｔｋ／ＡＣＶ系统用于动物基因治疗,ＡＣＶ及其代谢物产物没有发现明显的毒副作用和病理改变。说明反转录病毒介导的ＨＳＶ－ｔｋ／ＡＶＣ系统的在动物体内取得了安全的结果。     

单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶基因 Stocker 株的分子克隆及序列分析

根据已发表的单纯疱疹病毒 Ｉ型（ Ｈ Ｓ Ｖ Ｉ） Ｃ Ｌ１０１ 株胸苷激酶（ Ｔ Ｋ） 基因的核苷酸序列,设计并合成一对引物,以 Ｈ Ｓ Ｖ Ｉ Ｓｔｏｃｋｅｒ 株核酸为模板,应用 Ｐ Ｃ Ｒ 技术扩增出１ ．４２７ Ｋｂ 大小的片段,并将此片段克隆至载体ｐ Ｕ Ｃ１１９ 中,通过酶切和序列分析证明含完整的 Ｔ Ｋ 基因序列,此序列与 Ｃ Ｌ１０１ 株 Ｔ Ｋ 基因的核苷酸序列一致性为９９０ ％ ,氨基酸的一致性为９７６ ％ ,此基因的成功克隆为进一步研究 Ｈ Ｓ Ｖ Ｔ Ｋ Ｇ Ｃ Ｖ 系统在肿瘤基因治疗中的应用打下了基础。     

HSV-TK基因逆转录病毒重组体的构建和鉴定

利用逆转录病毒载体ｐＬＮＳＸ构建了带ＨＳＶＴＫ基因的逆转录病毒重组体ｐＬＮＳＴＫ，用磷酸钙沉淀法转染ＰＡ３１７包装细胞，经Ｇ４１８筛选抗性克隆，建立了产生重组病毒的载体产生细胞系ＰＡ３１７／ＴＫ，用ＮＩＨ３Ｔ３细胞测定病毒（ＣＦＵ）滴度为３×１０８Ｌ－１。提取ＰＡ３１７／ＴＫ细胞的ＤＮＡ和细胞上清液的ＲＮＡ，在特异性引物引导下，分别用ＰＣＲ和ＲＴＰＣＲ检测证实ＰＡ３１７／ＴＫ细胞整合了ＨＳＶＴＫ基因并产生重组病毒，为ＨＳＶＴＫ基因治疗恶性肿瘤的实验研究打下了基础。