长链PCR技术评价~(60)Co-γ射线灭活病毒的研究

目的探讨用长链PCR技术评价60Co-γ射线辐照灭活伪狂犬病毒(pseudorabies virusPRV),后残余病毒感染性的可行性。方法针对PRV糖蛋白gD基因前后的保守区设计预计产物长短不一的5对引物,用PCR扩增经不同剂量60Co-γ射线照射后的PRV核酸,并同时以细胞感染法做平行对照。结果60Co-γ射线辐射对PRV核酸的破坏有剂量依赖性,随着60Co-γ射线剂量的增加,PRV核酸被破坏程度增加,剂量≥20kGy时完全被灭活。5条不同长度PCR扩增产物中,只有长片段3.9kb的检出与细胞培养结果一致。结论γ射线对PRV核酸的损伤程度随γ射线剂量增加而增大;用长链PCR(3.9kb)来评价经60Co-γ射线辐照灭活病毒后残余病毒的感染性是可行的。     

^(60)Co-γ辐照对板层人工角膜中指示病毒灭活效果的研究

目的研究^(60)Co⁃γ辐照对板层人工角膜中模拟污染指示病毒的灭活效果。方法板层人工角膜放入经预先精确测定病毒滴度的辛德毕斯病毒、脑心肌炎病毒和猪细小病毒中,4℃浸泡角膜8 h吸附病毒。经-0.75 kPa减压干燥6 h,进行5~25 kGy不同剂量的^(60)Co⁃γ辐照。辐照后每只角膜用稀释液浸泡释放病毒(4℃,5 h)、剪碎、研磨离心取上清,用蚀斑法或微量细胞病变法分别测定3种病毒的残余病毒滴度,验证^(60)Co⁃γ辐照对3种病毒的灭活效果。结果经5~25 kGy ^(60)Co⁃γ辐照,辛德毕斯病毒滴度下降对数值≥5.32~5.41 lg pfu/mL,脑心肌炎病毒下降对数值≥4.68~5.00 lg TCID_(50)/0.1 mL和猪细小病毒下降对数值≥4.06~4.44 lg TCID_(50)/0.1 mL。结论^(60)Co⁃γ辐照对板层人工角膜中的脂包膜病毒和非脂包膜病毒均有较好的灭活效果。     

~(60)Coγ-射线对冻干血浆中病毒灭活效果的研究

为提高冻干血浆临床应用的安全性,采用细胞感染法对人工污染病毒的新鲜冰冻血浆经60Co辐照灭活处理的效果进行了检测,同时用凝胶电泳和凝血因子分析仪检测60Co照射对冰冻血浆生物活性物质的影响。结果,60Coγ-射线经30 kGy的辐照剂量能完全灭活冻干血浆中的指示病毒;照射后的血浆白蛋白等成分含量略有下降,凝血因子活性减少了30%~40%。结论,60Coγ-射线辐照能有效灭活冻干血浆中的有包膜病毒和无包膜病毒,但对血浆蛋白活性有一定影响。     

不同剂量~(60)Co-γ射线辐照对三黄片中大黄粉含量及消毒效果的影响

为了解不同辐射剂量60Co-γ射线辐照灭菌对三黄片主要成分大黄素、大黄酚含量及消毒效果的影响,采用高效液相色谱法及细菌检验方法,对辐照处理的三黄片中大黄素、大黄酚和辐照消毒效果进行了检测。结果,三黄片经不同辐照剂量60Co-γ射线辐照前后,其主要成分大黄素、大黄酚的含量无明显的变化;辐照剂量为2 kGy的照度下即可以达到消毒要求。结论,三黄片用60Co-γ射线辐照消毒方法对其有效成分基本无影响,消毒效果可靠。     

钴~(60)-γ射线辐照法消毒冻干免疫球蛋白的效果观察

目的探讨钴60-γ射线辐照消毒法处理冻干免疫球蛋白的可行性。方法采用病毒定量检测方法,观察钴60-γ射线辐照法对免疫球蛋白中病毒灭活效果。结果含病毒的免疫球蛋白经30kGy剂量钴60辐照处理,对含不同蛋白保护剂的冻干IgG制品中辛德比斯病毒灭活对数值≥5.5TCID50。经30kGy剂量辐照灭菌处理,冻干IgG制品外观未见明显改变,各处理组之间的pH值与未处理组结果相近。蛋白电泳Native-PAGE分析各保护剂组之间无明显差别,保护剂浓度高低对试验结果无明显影响;SDS-PAGE分析,各处理组中的IgG经还原后其重链和轻链仍清晰可见,各保护剂组结果间无明显差别。高效液相色谱法检测结果显示,三种保护剂对IgG分子的保护效果较好,分子聚合和断裂峰明显减少。冻干IgG经辐照处理后抗原含量与对照相比均达80%以上,各保护剂组之间抗原含量基本一致。结论冻干血浆蛋白制品IgG经γ-射线照射后能够保持一定的结构和功能的完整性。     

部分理化因子对肠道病毒灭活效果的研究

目的研究部分理化因子对肠道病毒的灭活效果,为预防和控制肠道病毒性传染病传播流行选择合理有效的方法。方法采用悬液定量和载体定量试验法对热力、紫外线和部分化学消毒剂灭活脊髓灰质炎病毒的效果进行了观察。结果在恒温水浴器中加热60℃作用5 m in,对悬液内脊髓灰质炎病毒灭活对数值达到4.0以上;经辐照强度为120μW/cm2紫外线作用5 m in,对玻片上脊髓灰质炎病毒的灭活对数值达4.00以上。用含有效碘1500mg/L碘伏消毒液作用30 m in,对悬液内脊髓灰质炎病毒灭活对数值达到4.0以上;四种胍类消毒剂、季铵盐水溶液和体积分数75%乙醇对悬液内脊髓灰质炎病毒灭活对数值均小于4.00。结论普通湿热、紫外线和碘伏消毒液均可有效灭活脊髓灰质炎病毒,季铵盐类和胍类消毒剂水溶液不能灭活脊髓灰质炎病毒。     

血液制品病毒灭活因子与动力学的评价

目的分析血液制品特定灭活因子的时效动力学曲线，科学性地评价与改进不合理的病毒灭活参数。方法系统性整理针对水疱性口炎病毒、黄热病毒、脊髓灰质炎病毒、伪狂犬病毒、脑心肌炎病毒、人类免疫缺陷病毒，人血白蛋白采用巴氏消毒法，狂犬病人免疫球蛋白采用低pH常温孵放法，静注人免疫球蛋白、静注人乙肝免疫球蛋白采用低pH／巴氏消毒法；人纤维蛋白原、人凝血因子Ⅷ采用有机溶剂／去污剂与干热法灭活病毒的验证资料，统计3批样品多个取样点的残余病毒滴度均值、标准差与变异系数，制作灭活病毒动力曲线图并进行分析。结果人血白蛋白巴氏灭活VSV与Sindbis病毒，HRIG低pH灭活VSV和Sindbis病毒，HRIG低pH灭活HIV病毒，IVIG低pH／巴氏灭活HIV病毒，WIG低pH灭活HIV病毒，HBIG低pH／巴氏灭活VSV、Sindbis与Polio病毒。结论建议改进病毒灭活验证标准与不合理的灭活参数；采用终产品样品通过合适细胞或方法直接培养目标病毒来有效监测血液制品的病毒安全性。     

酸性氧化电位水对三种病毒灭活效果及有机物影响的研究

目的研究酸性氧化电位水对不同病毒的灭活效果及有机物对灭活效果的影响。方法采用载体定量及悬液定量病毒灭活试验方法对脊髓灰质炎病毒等3种病毒灭活作用进行了实验室观察。结果用含有效氯65mg/L、氧化还原电位为1 178 mV、pH值为2.3的酸性氧化电位水,对载体上脊髓灰质炎病毒作用5 min,对悬液内脊髓灰质炎病毒作用3 min,灭活对数值均达到4.0以上。对载体上与悬液内甲型流感病毒和疱疹病毒作用1 min,灭活对数值均达到4.0以上。病毒悬液内含15 g/L小牛血清白蛋白显示对酸性氧化电位水灭活病毒效果有一定影响。结论酸性氧化电位水对3种指标病毒有较好的灭活效果,但有机物对其灭活病毒的效果有一定影响。     

冻干辐照对猪腹膜体外稳定性的影响

背景:有实验表明80CO γ射线灭菌处理的胶原膜会促使胶原分子产生交联,影响其稳定性.目的:通过测定冻干辐照处理后猪腹膜胶原酶酶解时间,了解冻干辐照猪腹膜在体外的稳定性.设计、时间及单位:动物实验观察,于2007-07/2008-06在南昌大学烧伤研究所、南昌大学-新三思公司联合力学实验室、江西中医学院中药固体制剂国家工程研究中心与江西天兆科技发展公司完成.材料:选用健康活体猪6只,无菌条件F取新鲜猪腹膜.80Co γ射线辐照装置为江西天兆科技发展公司生产.方法:新鲜猪腹膜按照处理方式分成4组,新鲜组:将新鲜猪腹膜放入含有庆大霉素1×105U/L的生理盐水中清洗修剪平整后,冉放入保护液中浸泡约15 min,最后放入0-4℃冰箱中保存、备用.冻干组:将新鲜猪腹膜放入EMDE+10%甘油中的猪腹膜浸泡15 min后.取出放入-78℃的冰箱中,使其形成冰晶,再放入真空冷冻干燥机内冻干6 h,取出室温保存、备用.辐照组:在冻干组基础上将猪腹膜放入剂量为25 kGy的60Co γ辐照装置内,动态辐照72 h后取出,放入0-4℃冰箱中保存、备用.冻干+辐照组:在辐照组基础上将猪腹膜放入剂量为.25 kGy的80Co γ辐照装置内,动态辐照72 h后取出室温保存、备用.主要观察指标:同时取直径为5 mm各组猪腹膜圆片用胶原酶Ⅰ型酶解,计算各片材料完全酶解时间.结果:4组猪腹膜胶原酶酶解时间:(9.6±1.2),(6.1±1.6).(29.2±3.0),(23.5±2.6)min.辐照组和冻干+辐照组猪腹膜酶解时间比新鲜组和冻干组明显延长(P＜0.05),但新鲜组和冻干组之间比较及辐照组和冻干+辐照组之间比较,猪硬脑膜酶解时间无明显差别(P＞0.05).结论:经80Co γ射线照射后的猪腹膜抗酶解能力增强;辐照均能增加猪腹膜的稳定性,冻干对猪腹膜的稳定性无明显影响.     

过氧乙酸-乙醇对同种骨植入材料中病毒的灭活效果研究

目的研究过氧乙酸-乙醇对同种骨植入材料中病毒的灭活效果。方法采用细胞感染法,对过氧乙酸-乙醇灭活同种骨植入材料中病毒的效果进行了检测。结果用含10g/L过氧乙酸与体积分数24%乙醇组成的过氧乙酸-乙醇消毒液,在常温下对同种骨植入材料浸泡4h,可使骨植入材料中污染的伪狂犬病毒、牛腹泻病毒和猪细小病毒滴度下降4个对数值以上,实际上已经检测不到存活病毒。在3种指示病毒中,以猪细小病毒对过氧乙酸-乙醇抗力最强。结论过氧乙酸-乙醇对同种骨植入材料污染的3种指示病毒具有良好的灭活效果。     

不同浓度有机物对二氧化氯灭活脊髓灰质炎病毒的影响

目的研究有机物对二氧化氯灭活脊髓灰质炎病毒的影响。方法采用悬液定量灭活试验方法和细胞感染技术,对病毒悬液中小牛血清白蛋白影响二氧化氯灭活脊髓灰质炎病毒的效果进行了观察。结果用含量30 mg/L二氧化氯作用15 min,对含高浓度小牛血清白蛋白悬液中脊髓灰质炎病毒灭活对数值仅为0.22,对含低浓度小牛血清白蛋白悬液中脊髓灰质炎病毒灭活对数值为3.28。用含量为40 mg/L二氧化氯作用15 min,对含高浓度小牛血清白蛋白悬液中脊髓灰质炎病毒灭活对数值均4.00,对含低浓度小牛血清白蛋白悬液中脊髓灰质炎病毒灭活对数值均4.00。结论病毒悬液内含小牛血清白蛋白明显影响二氧化氯对病毒灭活效果,且随其浓度增加影响程度增加。     

有机物对次氯酸钠消毒液杀菌效果的影响

目的观察有机物对次氯酸钠消毒液杀菌效果的影响。方法采用悬液定量杀菌试验方法,对悬液中牛血清白蛋白影响次氯酸钠消毒液杀菌效果进行了观察。结果用含有效氯100 mg/L的该次氯酸钠消毒液作用5min,对含3 g/L牛血清白蛋白悬液中大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的杀灭对数值均﹥5.00;作用20 min,对含30 g/L牛血清白蛋白悬液中大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的杀灭对数值均﹥5.00。用含有效氯300 mg/L和500 mg/L的该次氯酸钠消毒液作用10 min,可分别对含3 g/L和30 g/L牛血清白蛋白悬液中黑曲霉菌的杀灭对数值﹥4.00。用含有效氯300 mg/L的该次氯酸钠消毒液作用10 min,对含3 g/L牛血清白蛋白悬液中脊髓灰质炎病毒灭活对数值﹥4.00;对含30 g/L牛血清白蛋白悬液中脊髓灰质炎病毒达到相同灭活效果需要用含有效氯700 mg/L的该次氯酸钠消毒液作用20 min。结论有机物对次氯酸钠消毒液杀灭细菌繁殖体、黑曲霉菌和灭活脊髓灰质炎病毒均有一定影响。     

一种专用黏膜消毒剂对病毒的灭活效果及安全性研究

目的观察一种专用黏膜消毒剂对病毒灭活效果及其毒性。方法采用细胞感染法和动物毒性试验方法对该消毒剂消毒相关性能进行了实验室和现场消毒试验。结果用总活性物含量为2 000 mg/L的复合季铵盐该黏膜消毒剂作用1.5 min,对悬液内脊髓灰质炎病毒Ⅰ型疫苗株、狂犬病毒、EV71型肠道病毒和单纯疱疹病毒的平均灭活对数值均>4.00。用相同浓度的该粘膜消毒剂对前臂皮肤擦拭消毒3 min,对皮肤表面的自然菌平均杀灭对数值为1.45。该消毒剂经口急性LD50值>5 000 mg/kg(体重);对小鼠骨髓嗜多染红细胞无致微核作用。该消毒剂原液对家兔破损皮肤、阴道黏膜和眼均无刺激性。结论该黏膜专用消毒剂对病毒具有较好的灭活效果,属于无毒级物质。     

AN ACQUIRED RESISTANCE OF GROWING ANIMALS TO CERTAIN NEUROTROPIC VIRUSES IN THE ABSENCE OF HUMORAL ANTIBODIES OR PREVIOUS EXPOSURE TO INFECTION

1. As mice grow older they acquire a resistance to peripheral inoculation with the Indiana and New Jersey strains of vesicular stomatitis virus and to some extent also to Western equine encephalomyelitis virus, but little or none to the Eastern strain. 2. While some mice may become resistant as early as the 30th day of life, others may still be susceptible at 1 year of age. 3. This resistance is readily demonstrable when the inoculations are made by intranasal, subcutaneous, intramuscular, intraperitoneal, and intravenous routes, but not when the virus is injected directly into the brain. 4. The resistance is not related to previous exposure to infection or to the presence of specific or nonspecific antiviral bodies in the blood. 5. No difference in susceptibility to peripheral inoculation was found in young and old guinea pigs to pseudorabies virus, and in relatively young and old Macacus rhesus monkeys to poliomyelitis virus.     

电离辐射灭菌生物指示剂对辐射耐受力的测定

用短小芽胞杆菌Ｅ６０１株芽胞制作的电离辐射灭菌生物指示剂，经测定对钴－６０照射的Ｄ１０值为１．７０ｋＧｙ，对电子直线加速器照射的Ｄ１０值为１．８５ｋＧｙ。使该生物指示剂（含芽胞１０６ｃｆｕ／片）无菌生长所需照射剂量为２０．０ｋＧｙ。     

Photosensitized inactivation of Plasmodium falciparum in human red cells by phthalocyanines

BACKGROUND: Photodynamic treatment of red cell concentrate with phthalocyanines and red light inactivates lipid-enveloped viruses such as vesicular stomatitis virus and human immunodeficiency virus. This procedure is evaluated for its ability to enhance the viral safety of red cell concentrate for transfusion. It is of interest to study whether photodynamic treatment could also inactivate parasites in blood (e.g., Plasmodium falciparum). STUDY DESIGN AND METHODS: Red cells parasitized by P. falciparum were treated with phthalocyanines and red light and then cultured in vitro for 48 hours. The percentage of parasitemia was then estimated by microscopic examination of the red cells. RESULTS: Of the phthalocyanines studied, the one that proved to be the most effective was HOSiPcOSi(CH3)2(CH2)3N(CH3)2 (Pc4). The extent of parasite inactivation increased with light dose and decreased with an increase in hematocrit. At a hematocrit of 60 percent and 2 microM Pc 4,>or= 3 log10 kill occurred at a light dose of 60 J per cm2. This is a lower dose than is required for>or= 6 log10 of vesicular stomatitis virus inactivation (90 J/cm2). CONCLUSION: Photodynamic treatment with Pc 4 could make red cell concentrate not only virally safe for transfusion but also safe with respect to transmitting malaria.