IntI 1基因突变致鲍曼不动杆菌耐药性丢失

目的 探究鲍曼不动杆菌耐药性丢失与基因组序列的相关性。 方法 临床分离78株鲍曼不动杆菌，按CLSI进行药敏性实验，以PCR方法对IntI 1、ADC基因进行检测，并选择部分菌株进行测序分析。 结果 78株鲍曼不动杆菌中，有3株完全不耐药，而相关基因PCR检测的阳性率均为100%。基因测序分析表明，在3株耐药性丢失的鲍曼不动杆菌中，IntI 1基因均发生DNA突变。 结论 IntI 1基因对于鲍曼不动杆菌耐药性起着重要作用，相关位点突变将导致耐药性丢失。     

鲍曼不动杆菌在不同感染人群中的耐药谱差异与Ⅰ类整合子特点的研究

目的分析鲍曼不动杆菌在不同人群中的耐药谱,为有效治疗鲍曼不动杆菌感染提供用药指导;调查Ⅰ类整合酶(IntI 1)和Ⅰ类整合子(Int 1)在医院感染鲍曼不动杆菌中的分布及其携带的耐药信息。方法用WalkAway 96SI全自动微生物鉴定/药敏系统对473株鲍曼不动杆菌进行鉴定和药敏;用PCR方法扩增135株菌的IntⅠ1和Int 1,对Int 1扩增产物进行克隆测序,分析其携带的耐药信息。结果笔者医院儿童病区分离株的耐药率除氨曲南为37.6%外,其他抗菌药物的耐药率都在15%以下;儿童病区与成人病区分离株的耐药性有显著性差异(P<0.05)。成人ICU分离株(占55.2%)除头孢哌酮/舒巴坦耐药率稍低(6.7%)外,其他抗菌药物的耐药率均在50%以上。ICU与普通病房分离株对头孢哌酮/舒巴坦的耐药率无显著性差异(P>0.05),而对其他16种抗菌药物均存在显著性差异(P<0.05)。135株医院感染鲍曼不动杆菌中检出102株携带IntⅠ1基因,54株扩增出Int 1基因。部分扩增产物经克隆测序,共携带有8种耐药基因盒,分别为catB8,arr-3,aacA4,aadA1,aac(6’)-Ib,aac(3)-Ia,qacE和blaIMP-2。结论儿童病区与成人病区分离的鲍曼不动杆菌耐药性差异较大,临床用药不能同等对待;医院感染的鲍曼不动杆菌中IntⅠ1分布广泛,Int 1上主要携带氨基糖苷类耐药基因。     

鲍曼不动杆菌耐药性与Ⅰ类整合子关系研究

目的:了解本院鲍曼不动杆菌中I类整合子的分布与基因盒结构,并探讨整合子与鲍曼不动杆菌耐药的关系?方法:收集鲍曼不动杆菌临床株,用纸片扩散法(K-B法)测定77株鲍曼不动杆菌对18种抗生素的敏感性,采用PCR法检测鲍曼不动杆菌Ⅰ类整合酶基因(intI 1)并扩增其可变区,对PCR产物进行酶切分析,并测序分析整合子可变区携带的耐药基因盒?结果:鲍曼不动杆菌耐药现象十分严重?77株菌株中有49株含Ⅰ类整合子,阳性率63.64%,其中有45株(91.84%)整合酶阳性株扩增出可变区,共检测出4种耐药基因盒组合形式:aacA4(0.8 kb)?dfrXII-orfF-aadA2(1.8 kb)? aacA4-catB8-aadA1(2.3 kb)?aacC1-orfX-orfX-orfX’-aadA1a(3.0 kb)?整合子阳性菌株与整合子阴性菌株对多种抗生素耐药性存在差异?结论:Ⅰ类整合子与鲍曼不动杆菌耐药性密切相关,在多重耐药鲍曼不动杆菌耐药机制中起重要作用?     

鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类耐药性及耐药基因型分析

目的:了解南京地区鲍曼不动杆菌耐药特点及分析碳青霉烯酶、金属β-内酰胺酶基因型。方法:K-B法测定临床分离的73株鲍曼不动杆菌对亚胺培南、美洛培南的耐药性;PCR检测碳青霉烯酶(OXA)、金属β-内酰胺酶(IMP和VIM)耐药基因,并对OXA基因进行测序。结果:73株鲍曼不动杆菌对亚胺培南、美洛培南耐药率均为10.9%;8株耐药菌中3株是IMP型,2株是VIM型,4株是OXA型,其中有1株菌含有OXA及IMP两种基因型。4例OXA型标本经测序,在Genbank中进行同源性比对,均为OXA-23亚型。结论:目前南京地区鲍曼不动杆菌的耐药性与其携带OXA-23、IMP和VIM基因相关。     

整合子在鲍曼不动杆菌中的分布与结构分析

目的 了解我院临床分离的鲍曼不动杆菌的整合子携带情况,以及整合子与鲍曼不动杆菌的耐药相关性分析.方法 用VITEK2 Compact全自动微生物分析系统及纸片扩散法检测临床分离的鲍曼不动杆菌对常用22种抗生素的敏感性.PCR扩增整合酶基因检测鲍曼不动杆菌携带整合子情况,同时对整合子可变区进行扩增及测序以其了解整合子耐药基因盒携带耐药基因的情况.结果 鲍曼不动杆菌呈多重耐药性.鲍曼不动杆菌对CPZ/SB耐药率为1.2%,对替加环素(15.4%)、左旋氧氟沙星(34.4%)、亚胺培南(54.3%)、比阿培南(49.4%)、阿米卡星(59%),对其他抗生素均在71%以上.104株中有73株菌株含Ⅰ类整合子(阳性率为70.2%),未有Ⅱ、Ⅲ类整合子扩增阳性菌株,且Ⅰ类整合子阳性株的耐药性均高于阴性株.Ⅰ类整合子基因盒序列分析表明我院鲍曼不动杆菌Ⅰ类整合子携带aacA4、catB8和aadA1 3种耐药基因.结论 我院分离的鲍曼不动杆菌主要携带Ⅰ类整合子,且与多重耐药性密切相关.     

abeM基因与鲍曼不动杆菌多重耐药性的关系

目的:探讨abeM基因与临床分离的鲍曼不动杆菌多重耐药性的关系.方法:采用琼脂稀释法检测8种抗菌药物对37株鲍曼不动杆菌的最低抑菌浓度(MICs);以PCR和RT-PCR检测abeM基因的分布及其表达水平.结果:临床分离的鲍曼不动杆菌耐药性高,37株临床分离的鲍曼不动杆菌中,耐药菌株有21株(56.76%),且多重耐药菌株占耐药菌株总数的81%.所有临床分离株均能检测到abeM基因,但多重耐药菌株abeM基因mRNA表达水平显著高于敏感菌株(P<0.01),也明显高于仅对2类或1类抗菌药物耐药的菌株(P<0.05).结论:abeM基因的高表达与临床分离的鲍曼不动杆菌多重耐药性密切相关.     

整合子在鲍曼不动杆菌多重耐药机制分析

目的:调查我院鲍曼不动杆菌耐药性;了解整合子类型以及整合子携带耐药基因盒特征。方法:收集我院临床分离鲍曼不动杆菌。细菌鉴定及药敏由MicroScan Walk Away 40仪器完成,整合子分类检测及开放阅读框扩增由PCR法完成。开放阅读框扩增产物经琼脂糖凝胶电泳及凝胶回收试剂盒回收纯化后进行DNA测序分析,测序结果在Genebank上作比对。结果:62株鲍曼不动杆菌有11株呈多重耐药,阳性率17.7%,11株鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物阿米卡星,妥布霉素,庆大霉素均耐药,其余菌株较敏感。11株鲍曼不动杆菌中均检出整合子;进一步分类鉴定显示均为Ⅰ类整合子,未检出Ⅱ类和Ⅲ类整合子。开放阅读框可变区扩增产物为(0.3～2.5)KB不等条带,测序结果证实11株Ⅰ类整合子含有6个不同耐药基因盒:blam-1,orfX,aacA4,catB3,dfrA1,aadA1。其中7株均出现catB3,aacA4和dfrA1组合。结论:与其他报道相比较,我院鲍曼不动杆菌多重耐药率相对较低,但耐药鲍曼不动杆菌携带整合子率较高,且均为Ⅰ类整合子;其整合子基因盒含有多种耐药基因编码,其中aacA4,catB3和dfrA1耐药基因组合在本地区占优势。     

鲍曼不动杆菌OXA-23 型碳青霉烯酶相关耐药基因分析

目的:分析鲍曼不动杆菌的耐药性及其产碳青霉烯酶的类型.方法:收集南京医科大学第一附属医院对碳青霉烯类药物中介或耐药的鲍曼不动杆菌22株及敏感菌3株,用琼脂纸片扩散法(KB法)及肉汤稀释法测定最低抑菌浓度(MIC),用聚合酶链反应(PCR)检测分析其耐药基因.结果:22株细菌均为多重耐药株,PCR检出22株耐药菌株中18株携带OXA-23基因,未能检出OXA-24摹因.3株敏感株均未检出OXA-23及OXA-24基因,PCR产物纯化后测序表明与鲍曼不动杆菌(AY795964.1)blaOXA-23基因序列100%同源.结论:携带OXA-23型碳青霉烯酶基因的鲍曼不动杆菌对临床常用抗菌药的耐药率高,其编码基因为blaOXA-23.     

整合子在鲍曼不动杆菌中的分布与结构分析

目的 了解我院临床分离的鲍曼不动杆菌的整合子携带情况,以及整合子与鲍曼不动杆菌的耐药相关性分析.方法 用VITEK2 compact全自动微生物分析系统及纸片扩散法检测临床分离的鲍曼不动杆菌对常用22种抗生素的敏感性.PCR扩增整合酶基因检测鲍曼不动杆菌携带整合子情况,同时对整合子可变区进行扩增及测序以其了解整合子耐药基因盒携带耐药基因的情况.结果 鲍曼不动杆菌呈多重酎药性.鲍曼不动杆菌对CPZ/SB酎药率为7.2%,对替加环素(15.4%)、左旋氧氟沙星(34.4%)、亚胺培南(54.3%)、比阿培南(49.4%)、阿米卡星(59%).对其他抗生素均在71%以上.104株中有73株菌株含Ⅰ类整合子(阳性率为70.2%).未有Ⅱ、Ⅲ类整合子扩增阳性菌株,且Ⅰ类整合子阳性株的耐药性均高于阴性株.Ⅰ类整合子基因盒序列分析表明我院鲍曼不动杆菌Ⅰ类整合子携带aacA4、catB8和aadA1 3种耐药基因.结论 我院分离的鲍曼不动杆菌主要携带Ⅰ类整合子,且与多重耐药性密切相关.     

鲍曼不动杆菌TEM-1型ESBLs基因及其多重耐药的研究

目的分析产TEM-1型超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）鲍曼不动杆菌的耐药性及其基因序列。方法用聚合酶链式反应（PCR）扩增产ESBLs鲍曼不动杆菌的TEM-1型耐药基因，用克隆测序方法分析质粒上TEM-1型ESBLs基因。结果15株产ESBLs鲍曼不动杆菌中，TEM-1型ESBLs阳性菌株有12株，TA克隆后测序表明，与鲍曼不动杆菌（AY560328．1）bla TEM-1基因序列99％源。结论质粒上带产TEM-1型ESBLs的鲍曼不动杆菌，bla TEM-1基因与鲍曼不动杆菌多重耐药密切相关。     

泛耐药鲍曼不动杆菌整合子Ⅰ和ISCR1结构及基因分型研究

目的研究从临床分离的鲍曼不动杆菌的整合子Ⅰ和ISCR1的分布及结构情况,并对其进行基因分型。方法分离自临床的57株鲍曼不动杆菌,PCR检测整合酶Ⅰ、整合子Ⅰ、ISCR1以及ISCR1可变区,PCR产物进行限制性片段长度多态性(RFLP)分型并进行测序分析可变区携带的耐药基因盒,ERIC-PCR进行基因分型。结果 49株整合酶I阳性,其中47株整合子I扩增阳性,RFLP分为2型,测序结果为aacA4-catB8-aadA1和drf17-aadA5。3株ISCR1以及ISCR1可变区扩增均阳性,可变区经RFLP分为1型,测序结果为orf513-qnrA1-ampR-qacEdeltal,ISCR1阳性菌整合子I均阳性,经ERIC-PCR检测将57株鲍曼不动杆菌分为27个基因型。结论Ⅰ类整合子广泛存在于鲍曼不动杆菌中,ISCRI携带率较低,氨基糖苷类、甲氧苄啶类和β-内酰胺类耐药基因盒较常见,ERIC-PCR可用于临床鲍曼不动杆菌的分子流行病学研究。     

鲍曼不动杆菌氨基糖苷类药物修饰酶基因类型的研究

目的研究常州地区鲍曼不动杆菌氨基糖苷类药物修饰酶基因类型及其耐药特点. 方法用琼脂稀释法检测庆大霉素、阿米卡星、妥布霉素、奈替米星等4种药物对20株多重耐药性鲍曼不动杆菌的最低抑菌浓度.用PCR法检测氨基糖苷类药物修饰酶基因. 结果庆大霉素、阿米卡星对20株鲍曼不动杆菌MIC50、MIC90均>1024mg/L,耐药率分别为100%、90%.奈替米星、妥布霉素的耐药率分别为85%、80%.鲍曼不动杆菌对庆大霉素等4种抗生素为高浓度耐药.从20株菌中检出两种修饰酶基因,其中16株带有aac(3)-Ⅰ基因,3株带有aac(6＇)-Ⅰ基因;3株菌同时具有上述两种基因,未检出aph(3)-Ⅵ基因. 结论常州地区鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物耐药与aac(3)-Ⅰ、aac(6＇)-Ⅰ基因有关.     

多重耐药鲍曼不动杆菌外排泵基因的检测

目的探讨外排泵表型阳性的鲍曼不动杆菌主动外排泵在耐药方面的作用和外排泵基因表达情况。方法用PCR扩增对外排泵表型阳性的鲍曼不动杆菌34株进行外排泵蛋白基因ade B的检测和分析,并测序。结果 34株外排泵表型阳性的鲍曼不动杆菌检测到ade B基因有33株,检出阳性率为97.06%。对33株鲍曼不动杆菌的外排泵基因ade B进行测序,经比对所测序列与Genebank中序列同源性为100%。结论主动外排泵基因是鲍曼不动杆菌发生多重耐药的重要因素之一。     

耐药鲍曼不动杆菌氟喹诺酮类耐药基因研究

目的 了解耐药不动杆菌氟喹诺酮类耐药基因的存在状况.方法 GNS-448药敏卡及K-B法测定抗菌药物的敏感性,聚合酶链反应（PCR）检测靶位DNA回旋酶编码基因（gyrA）与拓扑异构酶Ⅳ编码基因（parC）之氟喹诺酮耐药决定区突变分析,以及可移动遗传元件可介导的喹诺酮类耐药基因[qnrA、qnrB、qnrS、qepA、aac（6’）-Ⅰb-cr].结果 20株不动杆菌对12种常用抗菌药物严重耐药,对左氧氟沙星耐药率85％,亚胺培南90％,美洛培南耐药率达到95％.19株耐药鲍曼不动杆菌均检出gyrA基因氟喹诺酮耐药决定区（QRDR）第83位密码子TCA→TTA有义突变（氨基酸序列Ser→ Leu）;20株不动杆菌中,parC基因均检出存在QRDR区第80位密码子TCG→TTG有义突变（氨基酸序列Ser→Leu）;没有检出耐药鲍曼不动杆菌可移动遗传元件可介导的氟喹诺酮类耐药基因qnrA、qnrB、qnrS、qepA、aac（6’）-Ⅰ b-or.结论 鲍曼不动杆菌氟喹诺酮类药物的耐药机制主要与gyrA和parC基因QRDR区突变相关.     

鲍曼不动杆菌产PER-1型ESBLs基因的克隆、测序及分析

目的分析产PER-1型超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）鲍曼不动杆菌的耐药性及其基因的核苷酸序列。方法先后用最低抑菌浓度（MIC）初筛法和纸片扩散确认法从临床分离的鲍曼不动杆菌中检测产ESBLs菌株，并用聚合酶链式反应（PCR）、克隆测序方法分析质粒上PER-1型ESBLs基因。结果93株鲍曼不动杆菌中，产ESBLs菌株有16株，占17．20％，均为多重耐药菌。其中PER-1型ESBLs阳性菌株有8株；TA克隆后测序表明与铜绿假单胞菌（AJ621265．1）blaPER-1基因序列100％同源。结论发现质粒上同时带产TEM-1、PER-1型ESBLs和OXA-23型碳青霉烯酶基因的鲍曼不动杆菌，blaPER-1基因可能来源于铜绿假单胞菌。     

宁波地区泛耐鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶基因型研究

目的 研究宁波地区5家综合性医院临床分离泛耐鲍曼不动杆菌的碳青霉烯酶基因型.方法 收集医院耐药鲍曼不动杆菌117株.琼脂稀释法测定14种抗菌药物的最小抑荫浓度值;PCR及克隆测序分析碳青霉烯酶基因型.结果 117株鲍曼小动杆菌对常见抗菌药物均耐药,其中有22株对头孢哌酮/舒巴坦中敏.菌株均产OXA-23碳青霉烯酶基因,未检测到其他碳青霉烯酶基因.结论 宁波地区泛耐鲍曼不动杆菌均产OXA-23型碳青霉烯酶.     

全耐药鲍曼不动杆菌检出β-内酰胺酶ADC耐药基因

目的研究我院临床分离的2株全耐药鲍曼不动杆菌耐药基因。方法应用MIC法检测2株不动杆菌临床分离株的耐药性，采用PCR及序列分析的方法分析2种基因，分别为β-内酰胺酶基因blaTEM和β-内酰胺酶ADC基因。结果2株鲍曼不动杆菌中2种基因blaTEM和β-内酰胺酶ADC基因呈阳性。结论2株鲍曼不动杆菌携带blaTEM和β-内酰胺酶ADC基因。经检索中文生物医学期刊文献数据库（CMCC）和medline数据库，本研究是我国第一篇从鲍曼不动杆菌检出13-内酰胺酶ADC耐药基因的报道。     

整合子介导的鲍曼不动杆菌耐药机制研究

目的：了解鲍曼不动杆菌临床分离株的耐药性及整合子的携带情况。方法：收集温州医学院附属第一医院住院患者标本中分离的鲍曼不动杆菌54株,用K-B法进行耐药性表型检测,使用聚合酶链反应（PCR）及核酸克隆测序等方法分析I类整合子的携带率及其基因盒类型。结果：药敏试验结果显示,我院鲍曼不动杆菌临床分离株对单酰胺类和三、四代头孢菌素表现为高度耐药（〉90%）,氨基糖苷类和氟喹诺酮类抗菌药物耐药性次之（〉85%）,硝基呋喃类抗菌药物的耐药率最低（约为55%）;有40株鲍曼不动杆菌用PCR方法扩增出I类整合子基因,扩增阳性率为74.1%,产物长度多为2 200 bp;测序结果表明在I类整合子中多携带有氨基糖苷乙酰转移酶或氨基糖苷腺苷转移酶基因,部分菌株检测出插入序列及金属β内酰胺酶基因。结论：本地区鲍曼不动杆菌流行株多携带有I类整合子,耐药机制已出现新的进化方式。     

鲍曼不动杆菌耐药性与β-内酰胺酶基因研究

目的：了解临床分离鲍曼不动杆菌的耐药性和β-内酰胺酶基因分布情况。方法：采用VITEK-60全自动细菌分析仪对215株鲍曼不动杆菌临床分离株进行药敏检测,并通过特异性的PCR和DNA序列测定方法检测试验菌的β-内酰胺酶相关基因。结果：鲍曼不动杆菌对酶抑制剂复合制剂头孢哌酮/舒巴坦的敏感率最高,为54.1%,对亚胺培南、美洛培南的敏感率分别为46.4%、39.3%,对其他药物的敏感率均很低,对三代头孢的敏感率均低于20%;215株鲍曼不动杆菌中,27株扩增到超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）基因,占12.6%,包括TEM 16株,占7.4%,SHV 4株,占1.9%,CTX-M-1 4株,占1.9%,OXAⅡ3株,占1.4%,经测序分型分别为TEM-1型、SHV-1型、OXA-21型、CTX-M-15型和CTX-M-22型,未检测到VEB、GES、CTX-M-2、CTX-M-8、CTX-M-9、TLA、IBC、OXA-10、OXAⅠ、OXAⅢ、OXAⅣ、OXAⅤ等基因。129株扩增到头孢菌素酶（AmpC）基因,占60.0%,其中ADC阳性82株,占38.1%,DHA、EBC、ACC、CIT基因阳性株分别为35株（占16.3%）、8株（占3.7%）、3株（占1.4%）和1株（占0.5%）,未检测到MOX、FOX、CARB基因;215株菌株中检出OXA-23阳性98株,占45.6%。结论：临床分离鲍曼不动杆菌耐药严重,其携带TEM、ADC、DHA、OXA-23等多种β-内酰胺酶相关基因。     

临床分离多重耐药鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌Ⅰ类整合子与ISCR1研究

目的 了解临床分离多重耐药鲍曼不动杆菌和铜绿假单保菌Ⅰ类整合子与插入序列共同区1(ISCR1)的分布情况.方法 2010年1月至2013年12月共收集我院126株多重耐药鲍曼不动杆菌和89株多重耐药铜绿假单胞菌,采用PCR法扩增Ⅰ类整合酶、Ⅰ类整合子基因盒、ISCR1、ISCR1可变区.Ⅰ类整合基因盒和ISCR1可变区的PCR产物分别用HinfⅠ、RasⅠ进行酶切,相同类型酶切图谱的PCR产物随机挑取一例进行测序,测序结果在GenBank中用BlastN进行核酸序列同源性搜索.结果 在多重耐药鲍曼不动杆菌中,检出79例Ⅰ类整合酶,67例Ⅰ类整合子基因盒阳性,含有6种类型;59例ISCR1阳性,其中9例ISCR1可变区阳性.在89株多重耐药铜绿中,检出41例Ⅰ类整合酶,36例Ⅰ类整合子基因盒阳性,含有10种类型;9例ISCR1阳性,其中4例ISCR1可变区阳性.有8株鲍曼不动杆菌和2株铜绿假单胞菌同时携带Ⅰ类整合子和ISCR1可变区结构.结论 在多重耐药铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌中,Ⅰ类整合子和ISCR1分布较广.