管内段视神经损伤后视网膜的形态学改变

目的 观察管内段视神经损伤后视网膜的病理变化,比较视神经管减压术和激素对管内段视神经损伤的作用。方法 建立兔管内段视神经损伤的动物模型,利用免疫组织化学、图像分析等技术,观察神经损伤后,经视神经管减压术、地塞米松、视神经管减压术＋地塞米松治疗14d后,视网膜的形态学改变及GAP-43的表达。结果 视神经损伤1d后,RGCs平均记数轻度下降;损伤3,5,7d时,RGCs数分别为对照组的84.48%,72.23%,57.46%;14d时,节细胞仅有15.43%存活。损伤后3d,视网膜切片中可见GAP-43表达阳性的细胞;伤后5d阳性细胞增多;伤后7d阳性细胞数和积分光密度值达最高峰;伤后14d阳性细胞数下降。经手术减压、激素治疗、激素＋手术治疗后,RGCs存活率分别为36.01%,32.78%,56.98%.结论 管内段视神经损伤后RGCs出现渐进性退变,数量逐渐减少;视神经管减压术和激素对管内段视神经损伤有一定的治疗作用,其疗效明显优于采用单一方法。     

激肽释放酶结合蛋白对大鼠视神经不完全损伤后视网膜神经细胞的保护作用及轴突再生的研究

目的 探讨激肽释放酶结合蛋白(KBP)是否对体内视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)存在保护和促进其轴突再生的作用.方法 在距SD大鼠视神经球侧端0.5～1.0mm的地方夹持视神经,造成大鼠视神经不完全性损伤;在大鼠视神经损伤的模型中,行玻璃体腔分别注入KBP作为实验组和PBS为对照组;分别于损伤后7d,14d和21d取材,HE染色观察视网膜结构、测量视网膜厚度及RGCs的存活数量;提取术眼视神经行蛋白免疫印迹.根据统计学分析结果,明确KBP是否有视网膜神经节细胞保护和促进其轴突再生作用.结果 ①大鼠不完全视神经损伤模型建立成功.②通过HE染色,我们观察了视网膜各层结构变化,通过双肓法计数RGCs,和视网膜厚度测量,经统计学分析,组间差异具有统计学意义.③对神经再生的标记蛋白GAP-43进行Western-blot,统计学分析,组间GAP-43表达差异具有统计学意义.结论 ①KBP对视神经损伤后的RGCs具有保护作用.②KBP在视神经损伤后可能促进了视神经的轴突再生.     

兔视神经损伤后Nogo受体在视神经及视网膜的表达变化

目的研究免视神经损伤后Nogo受体在视神经及视网膜的表达变化。方法采用兔球后视神经钳夹伤模型，动物分别于损伤后3，7，14d处死。免疫组织化学染色观察Nogo受体在视神经及视网膜的表达变化。结果视神经损伤后3d，Nogo表达上调，视神经和视网膜均可见Nogo-A表达，其吸光度值分别为（45．3±1．3）×10^-3，（10．7±1．6）×10^-3，至损伤后7d，阳性反应达最高峰，吸光度值分别为（138．3±2．1）×10^-3，（29．4±3．3）×10^-3，至损伤后14d，视神经阳性反应下降，视网膜未见明显阳性表达。结论视神经损伤后，视神经及视网膜均可见Nogo-A阳性表达，且阳性表达随时间后延呈上升趋势，说明Nogo-A在抑制视．神经损伤后轴突再生的机制中可能起重要作用.     

地塞米松对兔视神经钳夹伤治疗作用的实验研究

目的：观察地塞米松对家兔视神经钳夹伤后视网膜神经节细胞存活的影响及损伤视神经、视网膜Nogo-A表达的变化。方法：建立兔球后视神经钳夹伤模型，将健康成年家兔分为正常对照组、损伤组、治疗组。分别于损伤后3、7、14d天处死动物，观察单位面积视网膜神经节细胞存活数量及损伤后Nogo-A在视神经与视网膜中的表达变化。结果：视神经损伤后，治疗组视网膜神经节细胞的存活数量高于损伤组及对照组（P〈0.01）；对照组及损伤组损伤后3、7、14d视神经与视网膜中Nogo-A表达增强，至损伤后7d达高峰；治疗组视神经与视网膜Nogo-A表达亦增强，各时间点均弱于损伤组、对照组，差异有非常显著性（P〈0.01）。结论：视神经损伤后，地塞米松能够增加视网膜神经节细胞的存活数量，并下调Nogo基因的表达，这可能是地塞米松的药理作用机制之一。     

Nogo-A基因敲除鼠视神经损伤后修复的实验研究

目的评价Nogo—A基因在视神经损伤后修复机制中的作用。方法Nogo-A基因敲除联合视神经损伤鼠为实验组（20只）,C57BL／6小鼠联合视神经损伤作为对照组（20只）。制备视网膜、视神经冰冻切片,采用免疫荧光技术检测视网膜神经节细胞和视神经中生长相关蛋白（GAP）43的表达。进行视网膜神经节细胞体外培养,进行GAP-43染色,采用图像分析系统计算细胞轴突长度。结果视神经中GAP-43表达：夹伤后1、3、7d对照组中表达少量GAP-43,实验组中GAP-43表达明显高于对照组（t=2．12,3．56、2．63,均P〈0．01）。GAP-43抗体染色可见着色在体外培养RGC轴突,实验组3d有较长轴突生长,对照组3d有较短轴突生长。RGC于培养1、3及7d,经自动图像分析系统处理,得出细胞突起长度,实验组突起长度明显高于对照组（F=41．36、31．23,均P〈0．01）。结论Nogo—A基因在抑制视神经损伤后轴突再生机制中起重要作用。     

新生大鼠视神经损伤后视觉系统中GAP-43的表达

目的：研究新生大鼠视神经横断伤后视觉系统中神经生长相关蛋白质(GAP-43)的表达变化及意义。方法：新生健康SD大鼠（24 h）72 只,随机分为正常对照组和视神经横断组。采用免疫组织化学方法检测正常发育及视神经损伤后发育过程中1、3、7、14、28和56 d的SD大鼠视觉系统中GAP-43的表达。结果：正常对照组SD大鼠出生后整个发育阶段视觉系统中均可检测到GAP-43阳性细胞的表达,且随着神经元发育成熟表达逐渐下降（P< 0.05）;视神经横断组GAP-43在损伤后发育过程中可检测到阳性表达,且较正常对照组增高,1 d变化不明显,3 d开始增高, 7~14 d达峰值,之后逐渐下降至正常水平,直至56 d基本恢复正常水平（P<0.05）。结论：GAP-43在新生鼠视觉系统中随生长发育而改变,在神经横断后GAP-43表达增强,表明GAP-43在视觉系统发育和再生过程中起重要作用。     

视神经损伤后RhoA在大鼠视网膜中的分布及表达研究

目的 观察视神经损伤后RhoA在大鼠视网膜中的分布及表达变化.方法 将36只成年Long Evans大鼠随机分为正常组,视神经损伤1、3、7 d组,共4组,每组9只,通过免疫组化染色,观察RhoA在视网膜中的分布变化;用Western blot分析统计RhoA表达变化.结果 正常及视神经损伤后1 d,RhoA主要分布于视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)层;3 d分布于RGCs及内丛状层;7 d分布于RGCs、内丛状层、内核层及外丛状层.Western blot示:视神经损伤后1、3、7 d,RhoA表达均高于正常组(P＜0.01,P＜0.05),但7 d表达量最高.结论 视神经损伤可显著增加RhoA在视网膜中的表达量及分布范围,它在视神经损伤后再生过程中发挥重要的作用.     

睫状神经营养因子对视神经损伤修复作用的研究

目的：观察睫状神经营养因子（CNTF）能否促进视神经（ON）损伤后在原中枢神经环境中再生,为临床救治提供理论依据和新的治疗途径。方法：选用成年日本青紫蓝兔22只,其中随机抽取两只做正常对照,不做任何处理;其余20只为实验组,构造视神经中度损伤模型（中号显微血管夹于视神经后3 mm处夹持20 s）。于损伤后即时、3 d、7 d、14 d各时间点给予右眼（实验眼）玻璃体腔内注射CNTF 2μl（1μg/μl）,左眼（对照眼）于同等时间点注射等量双蒸水。于损伤后3 d、7 d、14 d、28 d分别取实验眼和对照眼视神经行常规HE染色观察视神经组织学变化;免疫荧光检测观察生长相关蛋白-43（GAP-43）在视神经的表达;同时将动物实验眼及对照眼于损伤前、损伤后即刻及处死前进行视觉诱发电位（F-VEP）检查以观察兔视功能变化情况,采用SPSS 13.0统计学软件包对数据进行统计学分析。结果：HE及免疫荧光检测实验组组织学变化明显好于对照组;F-VEP检查可见视神经损伤后即时闪光视觉诱发电位波形几近熄灭。伤后1周,两组潜伏期基本恢复至损伤前水平,振幅恢复缓慢,组间比较差异无统计学意义（P〉0.05）;2周以后两组间比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：睫状神经营养因子对视神经损伤有修复作用,可促进视神经轴突在原中枢环境中的再生。     

大鼠坐骨神经损伤后GAP-43基因表达的变化

目的：探讨大鼠坐骨神经损伤后GAP-43基因表达的变化。方法：采用RT-PCR法，半定量分析坐骨神经横断后1d、2d、4d、1W、2W、4W远侧端组织中GAP-43m．RNA含量的变化。结果：大鼠正常坐骨神经中存在NGF mRNA，但表达量较低。坐骨神经横断后，其远侧端组织中GAP-43 mRNA表达量显著升高，1周达到高峰，两周开始下降，4周则降至一般水平。结论：坐骨神经损伤后,GAP-43基础的表达呈现出增高现象，提示OAP-43 mRNA的表达和蛋白质合成与神经损伤再生密切相关。     

睫状神经营养因子对大鼠视神经损伤后视网膜神经节细胞的保护作用

目的:探讨玻璃体腔内注射外源性睫状神经营养因子(CNTF)是否对大鼠视神经中度不全损伤视网膜神经节细胞(RGCs)具有保护作用。方法:采用无创血管钳对成年大鼠造成视神经中度不全损伤,实验组伤后即时1、2、4周分别向玻璃体腔内注射CNTF溶液2μl;同实验组操作,对照组在每个时间点向玻璃体腔内注射2μl双蒸水。在伤后1、2、4、8周时分别做生长相关蛋白-43(growth associated protein-43,GAP-43)免疫组织化学检测和光镜的组织学观察。结果:①伤后1周对照组和实验组视网膜均有水肿,RGCs肿胀。伤后2周2组视网膜神经节细胞层(GCL)均变稀疏,实验组水肿明显减轻。伤后4周水肿消退,GCL层细胞数明显下降。8周实验组视网膜厚度正常,对照组各层变薄。②伤后1周对照组和实验组GAP-43在GCL层表达呈阳性。伤后2、4、8周GAP-43在GCL层表达至高峰。实验组明显强于对照组(P<0.01)。结论:CNTF对大鼠视神经损伤后RGCs具有明显的保护作用。     

家猫视神经损伤的病理学改变

目的:动态观察视神经损伤后的病理学改变。方法:选取健康成年家猫20只,以自身左眼为对照,用自制损伤器撞击右眼视神经管,建立视神经损伤模型。在光镜与电镜下观察视神经损伤后1、3、7、14d的形态学改变。结果:光镜下视神经损伤主要表现为不同程度的神经纤维空泡样变性,电镜下视神经损伤主要表现为轴突内空泡样变性、髓鞘松解、微丝微管消失等。结论:家猫外伤性视神经损伤的动物模型与人类有很强的相似性,并有可操作性。视神经震荡伤后的病理变化以变性为主,早期施行减压手术可能挽救视力。     

兔外伤性视神经损伤后不同时期减压的视功能动态检测

目的:观察视神经损伤动物模型在损伤后不同时期视神经管减压后视觉诱发电位的变化,了解外伤性视神经损伤的手术时机与疗效间的关系。方法:建立家兔外伤性视神经损伤及不同时间减压的模型,随机分为A、B、C、D、E共五组,分别为正常对照组、损伤48 h减压组、1周减压组、2周减压组以及损伤不减压组。采用图形翻转视觉诱发电位(P-VEP)检测A组视功能,B、C、D组在损伤前、后1 h,减压前1 h、减压后2周以及E组相应时间的视功能变化。结果:①每只健康家兔P-VEP检查均引出典型NPN曲线,视神经挤压伤后1 h NPN波形低阔扁平,P波潜伏期延长,波幅降低,与自身损伤前及正常对照组相比有显著性差异(P<0.05)。②减压前后各组自身对照:B组减压前后的P波潜伏期和波幅有显著性差异(P<0.05);C组无显著性差异(P>0.05);D组波幅无显著性差异(P>0.05),而减压后2周潜伏期明显延长(P<0.05)。③减压后2周B、C、D组两两比较,三组之间潜伏期均差异有显著性意义(P<0.01),B组与C、D组波幅比较均有极显著差异(P<0.01),C、D组之间波幅有显著性差异(P<0.05)。B、C与E组之间潜伏期和波幅均有极显著性差异(P<0.01),而D、E组之间均无明显差异(P>0.05)。B组与A组的潜伏期和波幅无显著差异(P>0.05),C、D、E组与A组之间均有极显著差异(P<0.01)。结论:神经元继发性损伤是视功能进行性下降的重要原因,视神经减压术有利于减轻视神经间接损伤,损伤后较早期(48 h以内)减压可阻止轴突继发性损伤,避免视功能进一步下降,并可在一定程度上逆转视功能的损害。     

经鼻内镜视神经减压术治疗外伤性视神经损伤15例临床分析

目的:观察经鼻内镜视神经减压术治疗外伤性视神经损伤的临床效果。方法:对15例(16眼)外伤性视神经损伤的患者经鼻内镜视神经减压术。结果:随访3~6个月,16眼中12眼视力有不同程度的提高,总有效率为74.9%。有光感以上的10眼中9眼视力有提高;无光感的6眼中3眼视力有提高(P=0.118)。伤后3~7天手术12眼,术后视力有改善的10眼;伤后>7~16天手术4眼,术后视力改善的1眼,两者差异无统计学意义(P=0.063)。结论:经鼻内镜视神经减压术具有视野清晰,无需开颅,侵袭性小,头面部不遗留瘢痕,并发症少等优点。手术前无光感或伤后较长时间者,也不应该放弃手术治疗。     

经颅视神经减压开放术治疗视神经损伤

目的比较不同受力部位对颅底骨折导致视神经损伤的临床情况进行视神经损伤分型,讨论手术适应证和经颅入路视神经减压开放术的优越性.方法 1997年9月至2002年5月经颅手术治疗118例视神经损伤病人,回顾分析了受伤部位、CT影像特点、手术减压范围及术后6个月视力的随访结果.评价方法为视力完全丧失、眼前手动、眼前指数、光感和视力>0.05 5个级别.提高一个级别者为有效,视野缺损的改善也为有效.视力恢复大于0.1为显效.结果视神经损伤类型为眉弓外侧型87例,眉弓内侧型18例,颧骨型13例.术后6个月随访,术前视力完全丧失72例,术后有效35例,有效率为48.6%;术前视力残存者46例,术后均有效,有效率为100%;各型总有效率为68.6%.视神经损伤眉弓外侧型术后有效率为64.4%,眉弓内侧型83.3%;颧骨型为76.9%;可见眉弓内侧型和颧骨型视神经损伤的手术效果较好.结论经颅手术减压范围充分,疗效明确.手术适应证为(1)伤后有残存视力,视力下降者;(2)双侧视神经损伤;(3)完全失明未超过3 d者.     

神经生长因子对兔视神经挫伤修复的影响

目的:研究神经生长因子(NGF)对成年兔视神经(ON)挫伤后修复的影响。方法:通过逐级暴露钝性分离钳夹视神经法建立兔视神经挫伤模型,并向玻璃体腔内注入NGF-β1μg(右眼,治疗组),或磷酸盐缓冲液(PBS)0.1m l(左眼,对照组)。挫伤后2周、4周时分别用光镜、电镜和TUNEL技术观察视网膜神经节细胞(RGC s)、视网膜神经纤维层和视神经的改变并作视神经纤维计数。结果:兔视神经挫伤可使RGC s数量减少,表现出细胞坏死、凋亡的特征。视神经病理改变主要是轴突较正常稀疏,部分轴突明显肿胀、空泡变性,轴突与髓鞘间有腔隙形成,髓鞘结构紊乱,出现板层分离。NGF治疗组与对照组相比,前者RGC s、视神经纤维的退变较轻,数量较多,神经纤维有再生现象。同时发现治疗组4周比2周的神经纤维计数明显减少。结论:NGF能够在一定程度上防止轴突的变性坏死,从而阻断因轴突变性而激发RGC s死亡,并促进视神经纤维的再生。     

重组腺相关病毒介导NgRDN基因促进损伤后视神经轴突再生的实验研究

目的探讨大鼠视网膜神经节细胞（RGC）内转染含NgR^DN的重组腺相关病毒（AAV）后对视神经损伤后再生的影响,并观察其与晶状体损伤及巨噬细胞激活之间的关系。方法将45只Wistar大鼠随机分为3组,A组为玻璃体注射携带绿色荧光蛋白（EGFP）的AAV—EGFP组,B组为玻璃体注射AAV—NgR—EGFP组,C组为玻璃体注射AAV—NgR^DN-EGFP组,3种病毒滴度均为5×10^11v．g/ml。每组又分3个亚组,各亚组5只大鼠,1组为玻璃体内注射rAAV组,2组为玻璃体内注射rAAV＋晶状体损伤组,3组为玻璃体内注射rAAV＋酵母多糖组。于玻璃体内注射rAAV后3周进行视神经夹伤,并于夹伤后4d取右眼视网膜进行植片培养,通过βⅢ微管蛋白染色检测视网膜植块边缘的轴突生长情况;于夹伤后2周进行视神经生长相关蛋白（GAP）-43染色,观察视神经轴突再生情况。结果视网膜植片βⅢ-微管蛋白染色表明,在无髓磷脂培养条件下,AAV—NgR—EGFP、AAV—NgR^DN-EGFP对RGC的轴突再生无影响：而在含髓磷脂培养条件下,即模拟体内RGC的轴突生长环境,B组的轴突再生数量（13个4个）还是长度（36μm±4μm）均低于A组（均P〈0．01）;C1组与A1组比较差异无统计学意义,C2和C3组轴突再生的数量及长度均分别高于A2和A3组,C2组（317个±45个、508μm±44μm）更高于C3组（238个±30个、365μm±48μm,均P〈0．01）;视神经GAP-43染色表明,B组视神经轴突再生明显低于A组,c1组轴突再生与A1组差异无统计学意义．而C2和C3组轴突再生显著高于A2和A3组。结论玻璃体内转染AAV—NgR^DN-EGFP同时使RGC处于激活状态可以促进视神经的轴突再生,NgR^DN可以有效拮抗NgR的作用。     

缓慢牵伸肢体延长时周围神经损害及修复过程中生长相关蛋白-43mRNA表达的实验研究

目的：观察缓慢牵伸肢体延长时周围神经相应的脊髓及背根神经节（ＤＲＧ）中生长相关蛋白－４３（ＧＡＰ－４３）ｍＲＮＡ表达。方法：２９只日本大耳白兔胫骨以１ｍｍ／ｄ的速度缓慢牵伸延长至２０％、４０％,停止延长后２、４周,用原位杂交技术观察坐骨神经相应背根神经节及脊髓中ＧＡＰ－４３ｍＲＮＡ的表达及定位,以图像分析仪进行半定量分析。结果：缓慢牵伸至２０％时相应脊髓及神经节呈阳性表达,延长４０％时呈强阳性表达     

神经损伤与再生中GAP-43mRNA表达和蛋白合成的实验研究

目的：研究周围神经损伤与再生过程中生长相关蛋白（Growth-associated protein,GAP-43)mRNA表达和蛋白质合成的变化规律。方法：建立大鼠坐骨神经中段钳夹损伤模型，用原位杂交和免疫组化技术观察大鼠腰髓和背根神经节的GAP－43mRNA表达和蛋白质合成变化。结果：大鼠坐骨神经损伤后，腰髓腹角运动神经元和感觉神经元GAP－43mRNA表达和蛋白质合成增强。结论：周围神经损伤与再生中GAP-43mRNA表达显著增强，神经再生完成后表达减弱，表明GAP－43在神经再生过程中起重要作用。