亚砷酸对人肝癌细胞HepG2中HIF-1α表达的影响

目的 探讨亚砷酸对人肝癌细胞HepG2中HIF-1α表达的影响.方法 以0、0.25、0.5、1、2和4μmol/L的亚砷酸处理人肝癌细胞HepG2缺氧环境中培养8 h;1μmol/L的亚砷酸处理人肝癌细胞HepG2缺氧培养0-10h,WST-8法和台盼蓝染色法分析细胞增殖和活力,采用RT-PCR和Western Blot方法检测肝癌细胞中HIF-1 α的表达.结果 ①不同剂量的亚砷酸和不同缺氧时间下对肝癌细胞活力和增殖率的影响与对照组相比差异无显著性(P＞0.05).②随着亚砷酸浓度的增加,HIF-1α蛋白表达逐渐降低,与对照组相比差异呈显著性(P＜0.01).③不同剂量的亚砷酸对HIF-1α mRNA表达的影响与对照组相比无差异显著性(P＞0.05).结论 亚砷酸抑制人肝癌细胞HepG2中HIF-1α蛋白表达是通过转录后机制.     

HIF-1α516对人肝癌HepG2细胞侵袭转移能力的影响

目的观察HIF-1α516对人肝癌HepG2细胞侵袭转移能力的影响。方法人肝癌HepG2细胞分为空白组(同步培养,不做任何处理)、对照组(转染siRNA)和siRNA干扰组(转染HIF-1α516 siRNA)。siRNA和HIF-1α516 siRNA通过脂质体转染HepG2,转染18h后Western blot检测HepG2细胞中HIF-1β核蛋白和全细胞蛋白的表达、ELISA法检测细胞培养上清中MMP-2、MMP-9的含量,Transwell小室观察HepG2的转移侵袭能力。结果 HIF-1α516 siRNA能显著降低HepG2细胞HIF-1α516mRNA的表达(降低70.0%)(P<0.01);增强HepG2细胞的侵袭转移能力(增强71.10%)(P<0.01)。HIF-1α516siRNA对全细胞HIF-1β蛋白的表达无影响,但能促进HIF-1β蛋白的核转移(增强64.1%)(P<0.01)。HIF-1α516 siRNA能明显升高HepG2细胞培养上清中MMP-2、MMP-9蛋白表达,分别升高37.72%、55.46%(P<0.01)。结论 HIF-1α516能抑制HepG2的转移侵袭,其机制可能与抑制HIF-1β的核转移有关。     

HIF-1α在原发性肝癌中表达的意义

0引言研究表明，大多数肿瘤特别恶性肿瘤在发生发展过程中，其肿瘤组织内部普遍存在相对缺氧区域．缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）是细胞在缺氧条件下产生的一种核转录因子，与肿瘤生长浸润转移、血管生成密切相关．我们应用免疫组织化学（sP法）检测原发性肝癌及其相应癌旁肝组织、正常肝组织中HIF-1α的表达情况，探讨其在原发性肝癌的发生发展中的意义．     

HIF-1α在肝癌组织中表达及临床意义

目的:探讨缺氧诱导因子-1α(H IF-1α)在肝癌组织中表达的意义。方法:采用免疫组化S-P法检测75例石蜡包埋的人体肝癌组织(术前均未行放疗及化疗)H IF-1α的表达。结果:H IF-1α主要表达于肝癌细胞浆,部分于胞核,肿瘤间质细胞也可见少量表达。肿瘤坏死区周围及肿瘤浸润边缘部的癌细胞H IF-1α表达明显增多。H IF-1α的表达强度与肝癌细胞恶性程度、淋巴结转移及预后有关,而与病人年龄、性别及原发肿瘤大小均无关。其阳性强度随癌细胞分化程度的降低、淋巴结转移、术后生存期短而增高。结论:H IF-1α可作为评估肝癌淋巴结转移和预后的重要指标之一。     

皮肤鳞癌组织HIF-1α和MMP-2表达及意义

目的研究缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在皮肤鳞癌组织表达及相关性。方法应用免疫组化法检测42例皮肤鳞癌、13例BOWEN病、11例正常皮肤组织中HIF-1α、MMP-2的表达。结果 HIF-1α和MMP-2在正常皮肤、BOWEN病及皮肤鳞癌组织中的表达率分别为0、61.54%、73.81%及0、38.46%、50.00%,差异有统计学意义(χ2=23.675、12.955,P<0.05)。HIF-1α、MMP-2在皮肤鳞癌和BOWEN病组织中的表达均高于正常皮肤组织,差异有统计学意义(χ2=16.638、7.139,P<0.05;P=0.02、0.04)。在皮肤鳞癌组织中HIF-1α与MMP-2的表达呈正相关(rs=0.379,P<0.05)。结论 HIF-1α、MMP-2在皮肤鳞癌组织高度表达,且两者的表达密切相关。     

妊娠期糖尿病胎盘组织中HIF-1α的表达及意义

目的探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在妊娠期糖尿病(GDM)胎盘组织中的表达及其与GDM发病的关系。方法选取妊娠36～41周行择期剖宫产的GDM孕妇44例(GDM组)和同期分娩的正常晚期妊娠孕妇37例(对照组)。采用免疫组化PV-6003两步法和逆转录-聚合酶链反应技术分别检测胎盘组织中HIF-1α蛋白和mRNA的表达。结果两组胎盘组织中均有HIF-1α蛋白的表达,GDM组HIF-1α蛋白的表达明显增强。GDM组胎盘组织HIF-1α蛋白的阳性表达率为86.4%,显著高于对照组的32.4%(χ2=22.51,P<0.05)。GDM组胎盘组织HIF-1αmRNA表达水平为0.88±0.12,显著高于对照组的0.47±0.11(t=15.91,P<0.05)。结论 GDM胎盘组织中HIF-1α蛋白和mRNA高表达可能导致胎盘组织病理形态学的异常,从而参与了GDM的发病过程。     

原发性肝癌中HIF-1α、P-gp的表达及相关性的研究

目的：观察HIF-1α和P-gp在原发性肝癌（HCC）中的表达,探讨两者相互作用的关系。方法：采用免疫组织化学法检测36例HCC及20例非肿瘤肝组织中P-gp和HIF-1α的表达,对两者均表达阳性的病例,进行免疫组织化学双标记染色。结果：36例HCC中HIF-1α和P-gp高表达,阳性率分别为58.33%和77.78%,明显高于非肿瘤肝组织（P＜0.001）。两者表达呈正相关（r=0.388,P＜0.05）。18例两者均表达阳性的病例中,免疫双标共表达率为61.1%。结论：HCC中HIF-1α和P-gp的表达密切相关,HIF-1α可通过上调P-gp的表达实现对化疗药物的耐受,HIF-1α有望成为评价及逆转肿瘤多药耐药的新指标。     

缺氧环境肝癌SMMC-7721细胞ABCG2和HIF-1α的表达及其关系

目的探讨在缺氧条件下人肝癌SMMC-7721细胞中三磷腺苷结合盒转运体G2(ABCG2)和缺氧诱导因子-1α(HIF-lα)的表达及其关系。方法将SMMC-7721细胞分为对照组、缺氧24h组、缺氧48h组及缺氧72h组,Western blot检测各组SMMC-7721细胞ABCG2和HIF-1α蛋白的表达。将缺氧72h组SMMC-7721细胞分别用终浓度为1.0、2.0、4.0μmol/L的HIF-1α抑制剂YC-1处理,Western Blot检测不同浓度YC-1处理的SMMC-7721细胞ABCG2和HIF-1α蛋白的表达。结果随缺氧时间延长,ABCG2和HIF-1α蛋白表达均逐渐增加(P<0.05),且ABCG2与HIF-1α的表达呈正相关(r=0.944,P<0.05);随YC-1浓度的增加,缺氧72h组SMMC-7721细胞ABCG2和HIF-1α蛋白表达下调(P<0.05)。结论 ABCG2和HIF-1α的表达随缺氧加重而增加,ABCG2表达上调可能是HIF-1α介导肝癌细胞缺氧环境中生存及耐药的机制之一。     

重组表达质粒pcDNA3/HIF-1α的构建及其在人肝癌细胞株HepG2的稳定表达

目的:构建缺氧诱导因子(HIF-1α)基因的表达质粒,经脂质体转染人肝癌细胞株HepG2,建立稳定表达HIF-1α基因的细胞模型,为肝癌研究提供有效工具。方法:采用RT-PCR方法扩增肝癌细胞株HepG2内HIF-1α基因功能区片段,克隆至真核表达载体pcDNA3上,转染HepG2细胞后,经G418筛选,建立稳定表达HIF-1α基因的细胞株,免疫荧光染色和Western-blot分析HIF-1α蛋白的表达。结果:通过酶切鉴定,凝胶电泳分析,两条带大小分别位于5.3kb和2.55kb,与预期结果符合,序列测定证实HIF-1α与GeneBank公布的序列一致。经脂质体包裹转染HepG2后,免疫荧光染色和Western-blot分析证实HIF-1α蛋白的表达明显上调。结论:经脂质体途径成功构建稳定表达HIF-1α的细胞模型,为肝癌研究提供了一个有效的工具。     

HIF-1α在肺癌组织中表达的意义

①目的 探讨低氧诱导因子-1α(HIF-1α)在肺癌组织中表达的意义。②方法 采用免疫组化Power Vision^TM-PV9000法，检测75例经手术切除的人体肺癌组织(术前均未行放疗及化疗)HIF-1α的表达。③结果 HIF-1α主要表达于肺癌细胞胞核及胞浆，肿瘤间质细胞也可见少量表达。肿瘤坏死区周围及肿瘤浸润边缘部的癌细胞HIF-1α表达明显增多。小细胞肺癌HIF-1α的表达强度显著高于鳞癌、腺癌(P=0．000、0．012)，而鳞癌、腺癌间的表达差异无显著意义(P=0．113)。HIF-1α的表达强度与肺癌细胞恶性程度(P=0．000)、淋巴结转移(P=0．010)及预后(P=0．000)有关，而与病人年龄、性别及原发肿瘤大小均无关。其阳性强度随癌细胞分化程度的降低、淋巴结转移、术后生存期短而增高。④结论 HIF-1α可作为评估肺癌淋巴结转移和预后的重要指标。     

低氧诱导因子-1α表达与胰腺癌增殖和凋亡的关系

①目的　研究胰腺癌组织中低氧诱导因子 1α(HIF 1α)的表达与胰腺癌增殖和凋亡的关系。②方法应用免疫组织化学方法 ,检测 4 7例胰腺癌和 1 0例正常胰腺组织中HIF 1α、增殖细胞核抗原 (PCNA)及Bcl 2蛋白的表达。③结果　 4 7例胰腺癌组织HIF 1α表达阳性率为 5 5 .3% ,1 0例正常胰腺组织均呈阴性表达。HIF 1α阳性表达率在有周围脏器浸润的胰腺癌组织中为 6 6 .7% ,无浸润者为 35 .3% ,二者间有显著性差异 (χ2 =4 .32 ,P <0 .0 5 ) ;伴淋巴结和远隔脏器转移的胰腺癌组织HIF 1α阳性表达率为 72 .0 % ,高于无转移者的 36 .4 % ,其差异有显著意义 (χ2 =6 .0 1 ,P <0 .0 1 )。HIF 1α阳性表达率与胰腺癌的大小、组织学分级和 1年生存率无关 (χ2 =2 .0 7～ 2 .5 2 ,P >0 .0 5 )。在 4 7例胰腺癌组织中高增殖活性 2 8例、低增殖活性 1 9例。 1 0例正常胰腺的腺胞均呈低增殖状态。胰腺癌细胞增殖程度与胰腺癌淋巴结或远处脏器转移及病人术后生存时间均密切相关 (χ2 =5 .98、6 .1 9,P <0 .0 5 ) ;而与胰腺癌的大小、分化程度和浸润无关 (χ2 =2 .0 1～ 3.74 ,P >0 .0 5 )。 1 0例正常胰腺癌组织Bcl 2蛋白均呈阳性表达 ,4 7例胰腺癌组织中Bcl 2蛋白的阳性表达率为 2 9.8%。Bcl 2蛋白表达与胰腺癌的大小、     

缺氧诱导因子-1α与葡萄糖转运蛋白-3在胶质瘤中的表达

目的 通过检测缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)和葡萄糖转运蛋白-3(glucose transporter-3,GLUT-3)在人胶质瘤中的表达情况,探索其与胶质瘤病理级别之间的关系及两者在病理条件下的表达相关性.方法 采用免疫组织化学法检测52例不同级别胶质瘤标本中HIF-1α与GLUT-3的表达情况,并进行统计学分析.结果 免疫组织化学结果示HIF-1α在正常脑组织和Ⅱ～Ⅳ级胶质瘤中的阳性表达率分别为0.0%、52.6%、83.3%、100.0%;同样,GLUT-3在各组中的阳性表达率分别为0.0%、36.8%、77.8%、100.0%,各组间差异均有统计学意义(P<0.05).结论 HIF-1α与GLUT-3在胶质瘤中的表达与胶质瘤的病理分级密切相关,随着病理级别的升高,HIF-1α与GLUT-3蛋白表达均上调,并且两者间的表达具有相关性.     

FOLFOX方案联合沙利度胺体外抑制人肝癌HepG2细胞VEGF、Caspase-3基因表达的研究

目的研究沙利度胺联合FOLFOX(folinic acid fluorouracil oxaliplatin)作用肝癌细胞HepG2后VEGF、Caspase-3的表达,以及探讨沙利度胺联合FOLFOX诱导HepG2细胞凋亡的机制。方法应用MTT法和流式细胞仪体外研究沙利度胺对HepG2细胞增殖的影响;采用western blot法,观察沙利度胺联合FOLFOX作用HepG2细胞48h后VEGF、Caspase-3的表达情况。结果沙利度胺对肝癌HepG2细胞有抑制作用,且沙利度胺联合FOLFOX显著提高了对肝癌细胞生长的抑制作用,沙利度胺联合FOLFOX作用于HepG2细胞48h后,细胞表面Caspase-3的表达均增强,VEGF的表达均降低。结论沙利度胺联合FOLFOX诱导肝癌HepG2细胞凋亡的机制可能可能通过调节VEGF蛋白表达激活caspase-3,从而诱导HepG2细胞凋亡。     

CyclinE干扰RNA对肝癌HepG2细胞增殖和蛋白质组的影响

目的:研究siRNA对HepG2细胞株cyclinE表达的抑制及细胞生长的影响,并用双向凝胶电泳和质谱技术分析鉴定转染前后细胞内差异表达的蛋白质.方法:构建质粒表达载体pU6-cyclinE-shRNA,稳定转染肝癌HepG2细胞株,获得HepG2-cyclinEshRNA细胞系,RT-PCR检测cyclinE mRNA表达,MTT测定细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期.裂解、抽提HepG2-cyclinEshRNA细胞和Cl期肝癌HepG2细胞全蛋白,用双向电泳技术进行分离后.用Proxpress2D分析软件对两组细胞全蛋白质表达谱进行差异分析,并应用MALDI-TOF-MS和数据库搜索鉴定差异显著的蛋白点.结果:HepG2-cyclinE-shRNA细胞与转染空质粒HepG2细胞和未转染的HepG2细胞相比,生长速度减慢,出现G0/G1期细胞增多,C2/M和S期细胞减少.双向电泳后软件分析G1期肝癌HepG2细胞株平均检测到435±51(n=3)个蛋白点,HepG2-cyclinEshRNA细胞376±44(n=3)个,匹配分析,筛选出两组间差异6倍及以上且出现频率大于等于50%的蛋白点20个.应用质谱鉴定出角蛋白19、波形蛋白、神经多肽113等8个G1期HepG2细胞高表达蛋白点.结论:在HepG2细胞株中,导入eydinE干扰RNA,可有效抑制cyclinE的表达,进而使细胞增殖减缓,逆转其恶性表型.两组细胞蛋白质谱有明显差异,鉴定出G1期HepG2细胞高表达蛋白点8个,这些蛋白的高表达引起肿瘤的基因修饰异常、分化异常、增殖紊乱,肿瘤侵袭转移.     

白花蛇舌草体外诱导人肝癌HEPG2细胞凋亡的初步研究

目的：初步探讨白花蛇舌草对人肝癌HEPG2细胞的增殖抑制作用。方法：制备白花蛇舌草水提取液,体外培养人肝癌HEPG2细胞,MTT法体外细胞毒实验,琼脂糖凝胶电泳方法检测细胞凋亡。结果：白花蛇舌草浓度在10-80mg／mL时,抑制人肝癌HEPG2细胞生长,且随着剂量的增加抑制作用增强,电泳图片显示DNA梯形降解带纹。结论：白花蛇舌草通过诱导细胞凋亡对人肝癌HEPG2细胞具有增殖抑制作用。     

树舌多糖GF对siRNA干扰沉默CDK2基因表达的辅助作用

目的：探讨树舌多糖GF辅助siRNA干扰沉默CDK2基因表达的作用。方法：本实验采用人肝癌细胞SMMC7721为研究对象，将中药树舌多糖GF2．5μg·mL-1与siRNA干扰序列191联合应用，采用Real-timePCR方法检测CDK2基因mRNA水平表达情况。结果：树舌多糖GF2．5μg·mL-1与191序列合用比单纯应用191序列抑制率提高3％。结论：树舌多糖GF2．5μg·mL-1与191序列合用比单纯应用191序列抑制率提高3％，表明树舌多糖GF对RNAi技术沉寂肝癌CDK2基因有一定的辅助作用。     

谷胱甘肽S-转移酶在原发性肝癌中的表达

目的：为了解谷胱甘肽S－转移酶及其同工酶在原发性肝癌患者中的表达情况。方法：采用免疫组化方法对不同分化程度肝癌组织32例和肝硬化组织11例行GSTs和GST－π表达的研究，并以γ-GT作为对照；同时对128例不同肝病患者血清中GSTs活性作检测。结果：GSTs、GST－π及γ－GT的表达与肿瘤的分化程度有关，分化越差，阳性率越低，反之亦然；GST－π在分化良好组阳性表达率明显高于肝为后肝硬化组（P＜0．05）；血清GSTs活性检测肝癌组与正常对照组相比没有显著性差异（P＞0．05）。结论：GST－π是优于γ-GT的肝癌标志酶，尤其在分化程度良好的肝癌，对临床区分肝癌的分化程度有一定的意义。     

HIF-1α在宫颈鳞癌组织中的表达及其与淋巴道转移的关系

目的：研究HIF-1α在宫颈鳞癌中的表达及与淋巴道转移的关系。方法：采用免疫组化法检测10例正常宫颈、55例宫颈上皮内瘤变（CIN）及75例宫颈鳞癌组织中HIF-1α及VEGF-C的表达,采用VEGFR-3免疫组织化学法标记组织标本中的淋巴管并测定微淋巴管密度（LMVD）,并分析其与临床病理特征的关系。结果：HIF-1α及VEGF-C在宫颈鳞癌组织中的表达水平明显高于正常宫颈及CIN（P〈0.05）;微淋巴管主要集中在癌周组织,LMVD的高低与淋巴结转移相关（P〈0.05）;HIF-1α的表达水平与VEGF-C表达水平及癌周组织LMVD呈正相关（r=0.269,P〈0.05;r=0.407,P〈0.05）,VEGF-C的表达与癌周组织LMVD呈正相关（r=0.431,P〈0.05）。结论：HIF-1α在宫颈鳞癌组织中的表达与淋巴结转移显著相关。HIF-1α可能通过上调VEGF-C的表达影响微淋巴管的形成,从而参与宫颈癌的淋巴道转移过程。