野生型Rb基因转移预防血管成形术后再狭窄的实验研究

目的：探讨人野生型Ｒｂ基因转移对预防血管成形术后再狭窄的作用，方法；通过逆转录病毒载体介导，将野生型Ｒｂ基因的转导至大鼠球囊损伤的颈动脉再狭窄模型中，２１天后观察其对新生内膜形成的影响，并检测Ｒｂ蛋白表达水平，结果：成功地构建和包装了人野生型Ｒｂ基因的重组逆转录病毒载体，并在体外细胞中成功表达；     

野生型Rb基因转移预防血管成形术后再狭窄的实验研究

目的：探讨人野生型Rb基因转移对预防血管成形术后再狭窄的作用。方法：通过逆转录病毒载体介导，将野生型Rb基因转导至大鼠球囊损伤的颈动脉再狭窄模型中，21天后观察其对新生内膜形成的影响，并检测Rb蛋白表达水平。结果：成功地构建和包装了人野生型Rb基因的重组逆转录病毒载体，并在体外细胞中成功表达；免疫组化检测表明转导血管局部表达人野生型Rb蛋白，与对照组相比，损伤血管新生内膜／中层面积比降低了49％。结论：人野生型Rb基因治疗时血管成形术后再狭窄有一定的预防作用。     

HSV-tk基因对实验性血管成形术后再狭窄的抑制作用

为探讨转染单纯疱疹病毒胸苷激酶（ＨＳＶ ｔｋ）基因联合ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ（ＧＣＶ）治疗方案用于治疗冠状动脉成形术后再狭窄的可行性,构建了携带ＨＳＶ ｔｋ基因的复制缺陷型逆转录病毒,利用该病毒将ＨＳＶ ｔｋ基因转染至体外培养的血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）和大鼠腹主动脉再狭窄模型的损伤动脉中,并均给予ＧＣＶ,分别观察上述处理对ＶＳＭＣ的增殖和新生内膜的形成是否有抑制作用。结果：该方案使培养的ＶＳＭＣ增殖受抑制,抑制程度对ＧＣＶ有剂量依赖关系;既往在恶性肿瘤中发现的旁观者效应,在培养的ＶＳＭＣ中也存在。同时,该方案使大鼠腹主动脉再狭窄模型的新生内膜面积减少。但单纯转染ＨＳＶ ｔｋ基因或单纯应用ＧＣＶ无论在体外还是在体内均无上述抑制作用。提示本基因治疗方案对人类冠脉成形术后再狭窄有治疗价值。     

野生型p53基因转移对心肌细胞生长的抑制作用

为了探讨野生型ｐ５３基因对心肌细胞生长的抑制作用及应用于高血压和肥厚型心肌病等疾病所致心肌肥厚的基因治疗可能性,本实验将野生型ｐ５３基因重组腺病毒转染体外培养的乳兔心肌细胞。应用生化染色方法,免疫组化法及聚合酶链反应技术,检测了野生型ｐ５３基因的转染效率及表达效果。采用ＭＴＴ方法及光镜技术进一步观察了野生型ｐ５３基因对心肌细胞生长的调节作用。结果显示,腺病毒载体能有效地将外源基因导入心肌细胞中并使     

野生型p53基因转移对心肌细胞形态的影响

目的 :探讨腺病毒介导的野生型 p5 3基因转移对心肌细胞形态的影响及 p5 3基因用于心肌疾病基因治疗的可能性。方法 :将腺病毒介导的野生型 p5 3基因转入体外培养的乳兔心肌细胞 ,应用生化染色方法、Western blotting技术检测野生型 p5 3基因的转染效率及其表达效果 ,采用相差显微镜、透射电镜等实验方法观察心肌细胞的形态学改变。结果 :重组腺病毒载体有效地将 p5 3基因转入心肌细胞中并使其得以表达 ;转入的 p5 3基因可以导致心肌细胞收缩、体积变小、胞浆浓缩、核固缩、染色质边集等改变。结论 :野生型 p5 3基因转移可以影响心肌细胞的形态 ,并能导致细胞凋亡     

外源性野生型p53基因对白血病细胞作用及对白血病细胞因子表达的调控

野生型 p5 3基因 (简称 wt- p5 3基因 )是一种重要抑癌基因 ,wt- p5 3功能失活与肿瘤的发生密不可分 ,通过重建 wt-p5 3功能治疗恶性肿瘤是近年来基因治疗热点。 p5 3基因是人类肿瘤中基因改变频率最高的一种基因 ,几乎所有组织均可发生 p5 3突变 ,血液系统的肿瘤也不例外。综合文献 ,急性髓细胞白血病 (AML)患者伴有 17号染色体异常 [i17(q) ]者p5 3基因点突变的发生率可达 40 % ,而大多数的白血病细胞系如 HL6 0、K5 6 2、CMK、U937均可检出 p5 3基因严重缺失或突变。慢性粒细胞白血病慢性期 ,p5 3基因发生重排、缺失或点突变的比率低…     

野生型p53诱导基因1研究进展

p53基因是迄今发现与人类肿瘤相关性最高的基因.过去20多年来,人们对p53基因的认识经历了癌蛋白抗原,癌基因到抑癌基因的3个认识转变,现已认识到,引起肿瘤形成或细胞转化的突变型p53蛋白是野生型p53基因突变的产物,是一种肿瘤促进因子,它可以抑制正常p53蛋白的功能,而野生型p53基因是一种抑癌基因,它的失活对肿瘤形成起重要作用[1].     

野生型p53基因对胰腺癌细胞的抑制作用

目的：观察人类野生型p53（wtp53）基因对人胰腺癌细胞的抑制作用。方法：用逆转录病毒为载体将外源性wtp53基因导入人胰腺癌细胞系PC－2，通过体外及小鼠体内实验研究转入基因的表达及对肿瘤的抑制作用，结果：p53在转染细胞PC－2／p53中表达水平提高，外源性wtp53基因的导入和表达能使PC－2细胞的生长速率减低，软琼脂集落形成能力下降，G0＋G1期细胞比例增加，凋亡指数升高，裸鼠体内成瘤能力明显下降，结论：逆转录病毒载体介导的外源性野生型P53能抑制人胰腺癌细胞生长。     

显微注射法建成野生型p53转基因小鼠

用显微注射法将野生型p53基因导入C57BL／6J×SJL杂交F1代受精卵的雄性原核中，以ICR品系小鼠为假孕母鼠。结果出生37只原代小鼠，其中有13只在检测前不明原因死亡，其余的24只原代小鼠中有2只基因组中整合有p53基因，整合率为8.3％。     

野生型p53基因诱导人肝癌细胞系HuH-7凋亡的研究

目的 通过转染野生型p53基因作用于肝癌细胞株HUH-7,来研究其诱导肿瘤细胞的凋亡作用。方法 野生型p53基因通过脂质体Lipofectamine介导转染人肝癌细胞系HUH-7,96h后,用流式细胞仪进行细胞凋亡分析。结果 流式细胞仪分析细胞凋亡结果：阴性对照组为2．8％、转染pUHD 10-3组为4．1％、转染pUHD 10-3-p53组为39．6％。结论 野生型p53基因可诱导人肝癌细胞系HuH-7发生凋亡。     

Experimental Study of Salvia Miltiorrhiza on the Prevention of Restenosis after Angioplasty

Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　Ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　Ｓａｌｖｉａ　Ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ　ｏｎ　ｔｈｅ　Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｒｅｓｔｅｎｏｓｉｓ　ａｆｔｅｒ　ＡｎｇｉｏｐｌａｓｔｙＺＨＯＵＸｉａｏ－ｍｉｎｇ，ＬＵＺａｉ－ｙｉｎｇａｎｄＷＡＮＧＤａｏ...     

The Effects of Wild-type p5 3Gene Transfection on the Growth and Chemotherapeutic Sensitivity of Human Glioma Cells

In gliomas,p5 3 mutations are among the mostfrequently observed genetic findings[1] .As a tu-mor- suppressor gene,p5 3 mutations can lead touncontrolled cell proliferation[2 ] . It was reportedthat loss of wild- type p5 3 function decreased sensi-tivity of tumor cells to chemotherapy[3 ] . In thisstudy,wild- type p5 3 gene was delivered into hu-man glioma cell line U2 5 1 by using liposome- medi-ated transfection technique to observe the effects ofp5 3 gene treatment and combined treatment of …     

Experimental study of adenovirus vector mediated-h VEGF<Subscript>165</Subscript> gene on prevention of restenosis after angioplasty

Summary This study evaluated the effects of adenovirus vector mediated human vascular endothelial growth factor-165 (hVEGF₁₆₅) gene on prevention of restenosis after angioplasty. Rabbit models of bilateral carotid artery injury were established by balloon denudation. The recombinant adenoviruses containing hVEGF₁₆₅ cDNA was directly injected into left side of the injured carotid arteries. On day 3 and week 3 after transfection the expression of VEGF was observed by RT-PCR and immunohistochemistry. The thrombokinesis, reendothelialization (rET) and intimal hyperplasia in carotid arteries were evaluated by computerized image analysis system 3 weeks after gene transfer. The changes in the VEGF gene-treated side were compared with the control side. Our results showed that 3 days and 3 weeks after hVEGF₁₆₅ gene transfer the VEGF mRNA and antigen expression were detectedin vivo. 3 weeks after the transfer, the carotid artery rET was markedly better in the VEGF gene-treated group compared with the control. The thrombokinesis, intima area/media area (I/M), maximal intimal and medial thicknesses (IT_max and MT_max) demonstrated a statistically significant decrease in arteries treated with VEGF gene as compared with the control group. It is concluded that VEGF gene transfer could be achieved by intra-arterial injection of recombinant adenoviruses. It might accelerate the restoration of endothelial integrity, inhibit thrombokinesis and attenuate intimal hyperplasia in the injured arteries after VEGF gene transfer. This procedure could be useful in preventing restenosis after angioplasty. Liu Qigong, male, born in 1968, Associate Professor This project was supported by a grant from Wuhan Chenguang Program (No. 20015005048)     

反义TR和p21双基因共表达对人主动脉平滑肌细胞增殖与凋亡的作用

目的观察携带反义凝血酶受体(ATR)或/和p21的单、双基因重组腺病毒伴随病毒(rAAV)载体对人主动脉平滑肌细胞(ASMC)增殖与凋亡的影响。方法以携带ATR或/和p21的单、双基因rAAV感染人ASMC。半定量RT-PCR检测各基因的整合与表达;MTT法测定感染不同时间点的细胞存活率;流式细胞术检测细胞周期与凋亡细胞数目的变化;吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)染色检测凋亡细胞的比率。结果单、双基因在ASMC中均获得整合,且双基因发生了共表达;病毒感染4d时,ATR组、p21组和AP双基因组的细胞存活率与对照组相比分别降低了16.7%、21.6%和29.4%;三组的G0/G1期细胞数分别为(61.8±2.9)%、(82.5±4.0)%和(80.4±6.1)%;凋亡细胞数为(4.8±0.5)%、(5.7±0.1)%和(9.2±0.9)%;AO/EB染色显示的凋亡细胞比率分别为:对照组(1.5±0.8)%、ATR组(7.2±3.3)%、p21组(10.7±5.6)%、AP组(18.3±2.7)%。结论(1)双基因共表达对抑制细胞增殖和诱导凋亡的作用均较单基因具有较强的生物学效应。(2)为再狭窄的基因治疗提示了更优化的途径。     

p53基因导致心肌细胞凋亡及其机制探讨

目的 探讨野生型ｐ５３基因与心肌细胞凋亡的关系及其可能的发生机制。方法 把野生型ｐ５３基因重组腺病毒转入体外培养的心肌细胞中,采用流式细胞计数仪（ＦＣＭ）,透射电镜等实验方法检测细胞凋亡并分析其作用机制。结果 重组腺病毒能有效地将ｐ５３基因转入心肌细胞中;转入的ｐ５３基因可以导致心肌细胞体积变小、胞浆浓缩、核固缩、染色质边集,引起细胞Ｇ１期阻滞。结论 野生型ｐ５３基因可以导致心肌细胞凋亡。并能影响细胞周期,以上结果为进一步研究心肌疾病的发病机制及其治疗提供了重要实验依据。     

Effect of Wild-type p53 Gene Transfection on the Growth and Radiotherapeutic Sensitivity of Human Glioma Cells

Ingliomas,p53mutationsareamongthemostfrequentlyobservedgeneticfindings[1].Asatumorsuppressorgene,p53mutationcanleadtouncon trolledcellproliferation[2].Itwasreportedthattransfectionofwild typep53genemayenhancetheradiosensitivityoftumorcellscontainingwild typep53[3].Inthisstudy,wild typep53genewasde liveredintohumangliomacelllineU251byusingliposome mediatedtransfectiontechniquetoob servetheeffectofp53genetreatmentandcom binedtreatmentofp53andirradiationtherapyongliomacell.1MATERIALSANDMET…