自噬激动剂雷帕霉素对实验性小鼠结肠炎的影响及作用机制初探

目的 初步探讨自噬激动剂雷帕霉素(Rapamycin,RAPA)对实验性小鼠结肠炎的影响及可能的作用机制.方法 雄性C57BL/6小鼠(6～8周)分为Control组(n=10)、DSS组(n=8)、DSS+RAPA组(n=8)、RAPA组(n=7).DSS组给予葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfat...     

抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路对兔原代巨噬细胞自体吞噬的影响及机制

目的 探讨抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路对兔原代巨噬细胞自体吞噬中的影响。方法 分离培养纯种新西兰兔腹腔原代巨噬细胞并分为4组,加入磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）抑制剂LY294002（10 μmol/L）组、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）抑制剂雷帕霉素（10 nmol/L）组、蛋白激酶B（Akt）抑制剂曲西立滨组（20 μmol/L）以及空白对照组。共培养4 h、12 h后分别收集细胞,运用透射电镜观察巨噬细胞自噬体的变化,细胞免疫荧光法检测微管相关蛋白轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）分子的表达,Western blot检测 Akt、mTOR、磷酸化Akt（p-Akt）、磷酸化mTOR（p-mTOR）及自噬相关蛋白Beclin-1和自噬蛋白Atg5-Atg12连接体的表达,单丹酰尸胺（MDC）染色法观察自噬溶酶体的变化。结果 与空白对照组相比,透射电镜下LY294002组自噬体、自噬空泡、髓磷脂图像等自噬标记物明显减少,雷帕霉素组、曲西立滨组明显增多;激光共聚焦显微镜下LY294002组LC3Ⅱ表达显著减少,雷帕霉素组、曲西立滨组表达显著增多;Western blot结果显示LY294002组Beclin-1及Atg5-Atg12蛋白表达水平显著下降,p-mTOR、p-Akt蛋白表达显著减少;雷帕霉素组、曲西立滨组Beclin-1及Atg5-Atg12蛋白表达水平明显上调,共培养4 h后p-Akt表达增多,雷帕霉素组p-mTOR表达增多,曲西立滨组减少;共培养12 h后雷帕霉素组、曲西立滨组p-mTOR表达显著减少,雷帕霉素组p-Akt表达显著增多,曲西立滨组显著减少;MDC染色显示LY294002组自噬溶酶体明显减少,雷帕霉素组、曲西立滨组明显增多。结论 抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路能促进兔原代巨噬细胞自体吞噬,抑制PI3K能减少兔原代巨噬细胞自体吞噬,可能是不同类型的PI3K分子通过其他通路起作用。     

栀子苷调节PI3K/AKT/mTOR信号通路在动脉粥样硬化形成过程中对Th17/Treg功能的影响

目的:观察栀子苷对载脂蛋白E缺乏(ApoE^-/-)小鼠Th17/调节性T(Treg)细胞失衡的影响及其作用机制。方法:将50只纯合子ApoE^-/-雌性小鼠随机分为对照组、模型组和栀子苷低剂量组、栀子苷中剂量组、栀子苷高剂量组。对照组小鼠喂养普通饲料,模型组和栀子苷组小鼠喂养高脂饲料。从第8周开始,栀子苷各剂量组每日灌胃栀子苷(25、50、100 mg/kg),连续8周。试验结束时,采用油红O染色评估主动脉及其根部动脉粥样硬化(AS)病变面积比。采用定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)分析主动脉组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-17A和IL-10 mRNA表达;采用流式细胞仪分析脾脏中Th17和Treg细胞百分比;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测主动脉组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路相关蛋白表达。结果:油红O染色病变显示,栀子苷中剂量组、栀子苷高剂量组病变百分比低于模型组(P<0.05)。与对照组比较,模型组主动脉TNF-...     

高糖通过调控FBW7表达影响自噬的研究

目的探索高糖调控FBW7表达对自噬的影响。方法不同浓度(10、20和30 mmol/L)葡萄糖刺激小鼠肾小球系膜细胞后,采用Western blot检测泛素连接酶FBW7、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)的表达水平,以及LC3-Ⅱ/Ⅰ比值,采用RT-PCR进一步检测FBW7的mRNA水平;采用自噬双标腺病毒检测自噬溶酶体。采用基因过表达技术过表达FBW7并检测相关蛋白水平及自噬水平。结果葡萄糖浓度越高,FBW7、LC3-Ⅱ/Ⅰ比值和自噬溶酶体水平越低,mTOR、p-mTOR的表达水平越高。基因过表达FBW7可抑制mTOR和p-mTOR(Ser2448)蛋白表达,增加LC3-Ⅱ/Ⅰ比值及自噬溶酶体数量(P0.05)。结论高糖下调FBW7表达激活mTOR信号通路,引起小鼠肾系膜细胞自噬水平的降低。     

蛇床子素通过PI3K/Akt/mTOR通路对糖尿病肾病大鼠纤维化及HSP90、SIRT1的影响

目的 研究蛇床子素对糖尿病肾病大鼠磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素蛋白(mTOR)信号通路对及热休克蛋白(Hsp)90、沉默信息调节因子(SIRT)1的影响。方法 将糖尿病肾病模型大鼠随机分为5组：模型组和灌胃蛇床子素1、10、20和50 mg/(kg·d)组,正常组和模型组分别给予相同体积的生理盐水。于给药8 w后,测定大鼠血糖变化和24 h尿微量白蛋白;取血检测大鼠血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN),并计算肌酐清除率(Ccr)。采用RT-聚合酶链反应(PCR)检测大鼠肾脏组织SIRT1、Hsp90α和Hsp90β mRNA及蛋白表达情况;观察大鼠肾脏组织病理变化;采用Western印迹法测定纤维化相关蛋白：肾脏Ⅳ型胶原蛋白、纤联蛋白(FN)和基质金属蛋白酶(MMP)抑制剂(TIMP)-1、MMP-9及PI3K、Akt蛋白表达。结果 模型组血糖、尿微量白蛋白、Scr、BUN、PI3K、Akt、肾脏Ⅳ型胶原蛋白、FN和TIMP-1水平均显著高于正常组(P<0.05),Ccr、SIRT1 mRNA、SIRT1蛋白、MMP-9水平显著低于正常组(...     

mTOR信号通路与肝星状细胞功能的关系

肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)的活化被普遍认为是形成肝纤维化的中心环节.各种因素可通过多种信号通路来调节HSCs的功能,其中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路是重要的一条通路.因此,深入研究mTOR信号通路与HSCs增殖、凋亡、自噬、衰老的关系,可为临床上肝纤维化的治疗提供新的靶点及方法.本文就mTOR信号通路与HSCs功能关系的研究进展作一综述.     

IL-27调控JAK/STAT通路在博来霉素诱导肺纤维化中的作用

目的探讨白细胞介素(IL)-27是否通过酪氨酸激酶(JAK)/信号转导与转录激活子(STAT)信号通路抑制肺纤维化。方法将40只雄性C57/BL6小鼠随机分为空白对照组(A组)、博来霉素(BLM)组(B组)、BLM+IL-27组(C组)和BLM+IL-27抗体组(D组),每组10只。于造模后第7、28天每组各处死5只小鼠,取右肺组织用Western印迹方法检测JAK2、STAT1、STAT3、STAT5及SOCS3蛋白的表达。结果 BLM诱导肺纤维化模型中,7、28 d肺组织均有p-JAK2、p-STAT1、p-STAT3、p-STAT5表达量升高,IL-27治疗后降低SOCS3的表达;D组p-JAK2、p-STAT1、p-STAT3、p-STAT5表达量在造模后7、28 d均最高,C组在造模后7 d表达量少于B组。结论外源性IL-27可能通过抑制JAK/STAT通路相关蛋白的磷酸化减轻肺纤维化。     

PI3K/Akt/mTOR信号通路与低氧性肺动脉高压研究进展

肺动脉高压是一种预后不良的疾病,在我国因各种肺部慢性疾病引起的低氧性肺动脉高压近年来呈上升发病趋势.磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylionsitol-3-kinases,PI3K)/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(protein-serine-threonine kinase,Akt)/哺乳动物雷帕霉素蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路作为细胞内重要信号转导通路之一,通过影响细胞的增殖、迁移、凋亡以及蛋白合成、细胞周期等活性参与肺动脉血管重塑以及低氧性肺动脉高压的形成.本文综述了PI3K/Akt/mTOR信号通路在低氧性肺动脉高压中的研究现状,以期为低氧性肺动脉高压的发病机制研究及治疗寻找新的思路.     

绞股蓝总甙调控mTOR/ULK1通路对ApoE－/－小鼠动脉粥样硬化的影响

目的基于mTOR/ULK1自噬信号通路探讨绞股蓝总甙改善动脉粥样硬化模型小鼠主动脉脂质沉积的作用机制。方法 30只健康ApoE~(-/-)小鼠随机分为模型对照组、绞股蓝总甙组和辛伐他汀组,每组10只。10只C57BL/6J小鼠作为正常组。模型对照组、绞股蓝总甙组和辛伐他汀组采用高脂饲料喂养4周,绞股蓝总甙组和辛伐他汀组分别采用绞股蓝总甙2.973 g/(kg·d)、辛伐他汀2.275 mg/(kg·d)灌胃8周,模型对照组、正常组予等量生理盐水灌胃。HE染色观察小鼠动脉粥样硬化斑块形成情况,全自动生化分析仪检测血脂水平,Western blot检测主动脉ULK1、Beclin1、LC3、p-mTOR的蛋白表达。结果与正常组相比,模型对照组TG、TC和LDLC水平升高(P0.05),HDLC水平降低(P0.05),主动脉管腔见较大粥样斑块,ULK1、Beclin1、LC3蛋白表达水平下调(P0.01),pmTOR蛋白表达水平上调(P0.01);与模型对照组相比,绞股蓝总甙组和辛伐他汀组TG、TC和LDLC水平降低(P0.05),HDLC水平升高(P0.05),主动脉管腔粥样斑块明显减少,ULK1、Beclin1、LC3蛋白表达水平上调(P0.01),p-mTOR蛋白表达水平呈下调趋势(P0.01或P0.05)。结论绞股蓝总甙可能通过调控自噬缓解动脉粥样硬化斑块形成,进而防治动脉粥样硬化。     

自噬相关信号通路调控骨相关疾病发生发展的作用机制研究进展

自噬是细胞内大分子物质与细胞器被次级溶酶体进行降解与消化的过程，借此维持细胞的自我稳定。自噬在维持骨骼的动态平衡中具有关键性的调控作用，其可通过磷酸酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、核因子κB(NF-κB)、Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）、腺苷单磷酸激活的蛋白激酶（AMPK）等信号通路调控成骨细胞、软骨细胞、骨髓间充质干细胞和破骨细胞的增殖、分化等生物学行为，调控骨相关疾病的发生发展。     

基于mTOR/S6K1通路探究CXCR3对糖尿病肾病足细胞损伤、凋亡、自噬的影响

目的 探究趋化因子受体(CXCR)3对糖尿病肾病足细胞损伤、凋亡、自噬的影响及其作用机制。方法 将分化成熟的小鼠肾脏足细胞MPC-5分为对照组,模型组,si-NC组和si-CXCR3组,噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞24 h、48 h和72 h细胞活力,流式细胞法检测各组细胞凋亡水平,Western印迹检测细胞凋亡关键蛋白B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱天冬氨酸蛋白酶(Caspase)3表达水平,ELISA法检测各组细胞白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8,肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,qPCR及Western印迹检测各组细胞自噬相关蛋白(beclin)1、人自噬相关蛋白(ATG)5及ATG7表达水平,同时检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/蛋白核糖体S6蛋白激酶(mTOR/S6K1)信号通路关键蛋白的蛋白表达水平及其磷酸化修饰水平。结果 与对照组相比,模型组和si-NC组细胞增殖受到显著抑制,并且随着时间增加抑制能力增强,与模型组和si-NC组相比,si-CXCR3组细胞增殖显著提高(P<0.05);与对照组相比,模型组和si-NC组细胞凋亡均...     

黄连温胆汤调控PI3K/Akt/mTOR信号通路干预ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的作用机制

目的观察黄连温胆汤对载脂蛋白E(ApoE)^-/-小鼠动脉粥样硬化的干预效应,从磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物西罗莫司靶蛋白(mTOR)信号通路探讨其机制。方法采用高脂饲料饲养ApoE^-/-小鼠4周构建动脉粥样硬化模型。采用全自动生化分析仪检测小鼠血脂水平;采用苏木精-伊红(HE)染色、油红O染色、Masson染色观察主动脉斑块情况;采用免疫组化法检测小鼠主动脉根部PI3K、Akt、mTOR蛋白表达水平。结果与模型组比较,黄连温胆汤高剂量组总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)均降低(P<0.05)。HE染色显示:模型组主动脉根部斑块明显,呈易损斑块特征,各给药组斑块有不同程度减轻;油红O和Masson染色显示:与模型组比较,雷帕霉素组、黄连温胆汤高剂量组主动脉根部斑块面积减小,胶原纤维含量升高(P<0.05),易损斑块趋于稳定。蛋白免疫组化结果显示:黄连温胆汤中剂量组、黄连温胆汤高剂量组小鼠主动脉PI3K、Akt、mTOR蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论黄连温胆汤具有降脂和抗动脉粥样硬化的作用,其机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路,诱导巨噬细胞自噬有关。     

沙格列汀干预非酒精性脂肪性肝病合并2型糖尿病大鼠肝组织AMPK/mTOR-TFEB自噬信号通路蛋白表达变化

目的 探讨沙格列汀干预非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)合并2型糖尿病(T2DM)大鼠对肝组织腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)-转录因子EB(TFEB)自噬信号通路蛋白表达的影响。方法 将42只大鼠随机分为对照组、模型组和沙格列汀干预组,每组14只。采用高脂饲料喂养和链脲佐菌素腹腔注射构建NAFLD合并T2DM模型。在建模成功后,分别给予沙格列汀或生理盐水灌胃8 w。采用放射免疫法检测空腹胰岛素(INS,使用全自动生化分析仪检测空腹血糖(FPG),计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。采用Western bloting法检测肝组织p-AMPK、mTOR、TFEB和自噬标记物LC3B-II蛋白表达。结果 沙格列汀处理组大鼠体质量、肝质量和肝脏指数分别为(341.53±5.15)g、(11.06±0.49)g和(3.32±0.25)%,显著低于模型组【分别为(353.27±8.74)g、(12.77±0.84)g和(3.67±0.18)%,P<0.05】;FPG、INS和HOMA-IR水平分别为(9.45±0.71)mmol/L、(7.92±0.34)...     

PI3K/Akt/mTOR信号通路在高原缺氧所致肠黏膜损伤的自噬调节中的作用

机体急进高原时,氧分压随着海拔升高而不断降低,可出现低氧反应,导致各器官出现严重损伤和一系列病理生理改变。在急进高原的缺氧环境下,肠道损伤尤为明显,但其具体机制尚未明确。越来越多的证据表明在急进高原的缺氧环境下,细胞自噬参与了缺氧环境下肠黏膜损伤的调节。磷脂肌醇3-激酶/蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路是细胞自噬中重要的信号转导通路,参与急进高原的缺氧环境下肠黏膜上皮细胞自噬的调节过程,可能对肠黏膜有保护作用,该文就此方面作一综述。     

氯离子通道阻断剂DCPIB抑制自噬减轻大鼠心肌缺血/再灌注损伤

目的 观察氯离子通道阻断剂茚满酮复合物(DCPIB)对在体大鼠缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)心肌损伤的机制及心脏功能的影响。方法 雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠36只随机分为6组:假手术组、I/R组、I/R+雷帕霉素(RAPA,4 mg/kg)组、I/R+DCPIB(10 mg/kg)组、I/R+3-甲基腺嘌呤(3MA,1 mg/kg)组和I/R+RAPA+DCPIB组。建立缺血30 min/再灌注24 h的大鼠I/R模型,于再灌注前10 min,经腹腔分别注射DCPIB、RAPA和3MA。检测再灌注前后血清肌酸激酶(CK)和肌酸激酶-同功酶(CK-MB)、核因子(NF)-κB和肿瘤坏死因子(TNF)-α活性,免疫组织化学检测自噬基因微管相关蛋白1的轻链3(LC3)表达,并记录心脏血流动力学指标。结果 ①与假手术组比较,I/R组自噬、炎症强度明显增加,心脏功能下降（P<0.05）,RAPA组自噬进一步增加,心肌损害加重,而自噬抑制剂3MA可明显的抑制I/R和RAPA组心肌组织的自噬水平,减轻心肌损伤（P<0.05）;②与I/R组相比, DCPIB可明显抑制心肌损伤指标CK、CK-MB水平（P<0.05）,抑制受损心肌组织中TNF-α、NF-κB活性、炎性细胞的浸润及LC3的表达（P<0.05）;DCPIB可明显改善心脏的血流动力学指标:左心室舒张末期压(LVEDP)下降,左室收缩压(LVSP)、左室内压上升的最大速率(+dp/dtmax)和左室内压下降的最大速率(-dp/dtmax)增加(P<0.05）;③与I/R+RAPA组相比,DCPIB同样抑制RAPA诱发心肌炎症和自噬水平增加,改善心脏功能。结论 DCPIB可通过抑制心肌组织的自噬和炎性反应,减轻心脏I/R损伤。     

荭草苷对脑缺血再灌注大鼠脑组织线粒体自噬的影响

目的 探讨荭草苷对脑缺血再灌注大鼠脑组织线粒体自噬的影响。方法 采用改良线栓法制备大鼠局灶性大脑中动脉缺血(MCAO)模型,将模型制备成功的大鼠随机分为3组：模型组、荭草苷组、荭草苷合用雷帕霉素组,另取不插栓线的大鼠为假手术组,每组18只。荭草苷组和荭草苷合用雷帕霉素组于术后1 h和12 h分别腹腔注射6.48μmol/kg荭草苷溶液两次,荭草苷合用雷帕霉素组于术前24 h和30 min腹腔注射2.66 mg/ml雷帕霉素溶液2次。再灌注24 h后,采用ZeaLonge评分法对各组大鼠进行神经功能损伤评分,2′3′5-氯化三苯基四氮唑(TTC)法测定MCAO大鼠脑梗死体积,分光光度法测定MCAO大鼠缺血侧脑组织线粒体中超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)和钙离子(Ca²⁺)含量,Western印迹法测定MCAO大鼠脑组织线粒体中微管相关蛋白轻链(LC)3和B细胞淋巴瘤-2基因(Bcl-2)/E1B-19K相互作用蛋白(BNIP)3表达情况。结果 与假手术组相比,模型组神经功能损伤评分和脑梗死体积均明显升高,线粒体中MDA和Ca²⁺含...     

外源性H2S对血管性痴呆大鼠缺血再灌注后神经元线粒体损伤及其相关信号通路的影响

目的 以二血管(2-VO)法制作血管性痴呆(VaD)大鼠模型，探讨神经元自噬及相关信号通路的变化及外源性硫化氢(H₂S)的神经保护作用。方法 改良2-VO结扎SD大鼠双侧颈总动脉制作VaD模型，按缺血进程急性缺血期、缺血损伤期、损伤恢复期共设置1、7、30 d 3个时间段，每个时间段各有假手术(Sham)组、模型(VaD)组、阳性对照[尼莫地平(Nimodipine)组、硫氢化钠(NaSH)低剂量(Low-NaSH)组、NaSH高剂量(High-NaSH)组。为保持药物处理时间一致，1 d及7 d,各组术前灌胃给药30 d, 30 d各组术后灌胃给药30 d, VaD组和Sham组生理盐水灌胃，Nimodipine组Nimodipine灌胃给药，Low-NaSH组、High-NaSH组NaSH灌胃给药。利用水迷宫检测30 d各组学习记忆能力。Western印迹检测海马神经元线粒体蛋白中Beclin1、P62、蛋白激酶B(Akt)、P-Akt、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、P-mTOR表达。结果 术后1 d,与Sham组比较，VaD组Beclin1、P-Akt...     

间歇性低氧预适应对力竭运动大鼠心肌自噬蛋白表达及相关通路的影响

目的 探讨间歇性低氧预适应对力竭运动大鼠心肌自噬相关蛋白表达及单磷酸激活蛋白激酶（AMPK）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/不协调51样自噬激活激酶1(ULK1)信号通路的影响。 方法 60只SD大鼠随机分为空白组（Blank组）、对照组（Control组）、EE组、EE+1wIH组和EE+3wIH组，EE+1wIH组和EE+3wIH组大鼠在构建EE模型前分别给予1w和3w的IH预处理，除空白组外其余组大鼠进行游泳训练，且EE组、EE+1wIH组和EE+3wIH组构建EE模型；ELISA法检测各组大鼠血浆心肌肌钙蛋白I (cTnI)水平，铬变素2R（C-2R）染色检测大鼠心肌缺血缺氧情况，TUNEL法检测细胞凋亡，电镜下观察心肌组织内自噬小体数量，免疫组化检测抗体微管相关蛋白1轻链3 Ⅱ (LC 3 Ⅱ)和Beclin 1蛋白表达，Western blot检测蛋白表达水平AMPK-mTOR-ULK1信号通路蛋白的表达。 结果 在Blank组中，所有心肌细胞的边界清晰，并且呈均匀的绿色染色；在Control组中，心肌细胞边界清晰，仅有少量红染散在组织中；在EE组中，部分心肌细胞的边界不清晰，心肌细胞以红色为主，少数呈绿色，说明大部分的心肌细胞都不同程度地受到缺血和缺氧的影响。EE+1wIH组和EE+3wIH组红染心肌细胞数明显低于EE组。与Blank组相比，EE组血浆cTnI水平、C-2R平均光密度（MOD）、心肌细胞凋亡率、心肌组织自噬数量、Beclin1、LC3 II、p-AMPK、ULK1蛋白明显升高，p-mTOR蛋白明显降低（P<0.05），与EE组相比，EE+1wIH组和EE+3wIH组上述指标均有明显改善（P<0.05）。 结论 EE可导致大鼠心肌自噬水平明显升高，而IH可能通过调控AMPK-mTOR-ULK1信号通路改善EE诱导的大鼠心肌细胞的自噬水平。     

雷公藤甲素调节AMPK/mTOR信号通路对葡萄糖干预的结肠癌细胞自噬和凋亡的影响

目的 探究雷公藤甲素调节AMP活化蛋白激酶(AMPK)/雷帕霉素机械靶蛋白(mTOR)信号通路对葡萄糖干预的结肠癌细胞自噬和凋亡的影响。方法 体外培养人结肠癌细胞系Caco-2,采用0、20、40、80、120、160 nmol/L雷公藤甲素处理以RPMI-1640高糖培养基(30 mmol/L葡萄糖)培养的Caco-2细胞24 h,以CCK-8法检测各处理组存活率并筛选出雷公藤甲素的合适作用浓度。将Caco-2细胞随机分为对照组、高糖组、高糖+雷公藤甲素组、高糖+Dorsomorphin(AMPK抑制剂)组、高糖+雷公藤甲素+Dorsomorphin组,除对照组外的其余各组以含30 mmol/L葡萄糖的RPMI-1640完全培养基培养细胞,同时以雷公藤甲素、Dorsomorphin分组处理后,以CCK-8法和流式细胞实验分别检测各组Caco-2细胞存活率与凋亡率;以JC-1法检测各组Caco-2细胞线粒体膜电位;以单丹磺酰戊二胺(MDC)染色法检测各组Caco-2细胞自噬情况;以免疫印迹法检测各组Caco-2细胞自噬相关蛋白(LC3II/LC3I、Beclin-1)、凋亡相关蛋白(B...     

犀草素对心力衰竭大鼠心室重构的改善和对PI3K/Akt/mTOR信号通路的调控作用

目的 研究木犀草素对心力衰竭大鼠心室重构的作用,以及对磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路的调控作用. 方法 以结扎左冠状动脉法配合节食与力竭式游泳制备慢性心力衰竭模型.SD大鼠称重后按体重编号以简单随机化法分为假手术组、模型组、木犀草素低剂量组和木犀草素高剂量组...