flavopiridol体外诱导人尤文肉瘤细胞凋亡机制的研究

目的:探讨细胞周期蛋白激酶抑制剂flavopirido(lFP)体外抑制人尤文肉瘤细胞(WE-68细胞)增殖及诱导凋亡作用机制。方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)还原法测定细胞活力;流式细胞计数法检测细胞周期和凋亡率。免疫印迹(Western blot)法检测Bcl-2、Bax、活化型多聚ADP核糖多聚酶(PARP-85)、pro-caspase-3和活性型caspase-8蛋白水平的表达。结果:FP通过诱导细胞凋亡抑制WE-68细胞生长,并呈时间和剂量依赖性,Bcl-2和Bax的蛋白表达无变化,PARP-85和活性型caspase-8的表达上调,pro-caspase-3的表达下调。结论:FP可诱导WE-68细胞发生凋亡,其机制可能与死亡受体激活信号转导途径有关。     

浅蓝菌素在诱导骨肉瘤细胞株U2-OS凋亡过程中对Bcl-2和Bax的影响

目的研究凋亡蛋白Bcl-2、Bax是否参与浅蓝菌素（Cerulenin）诱发骨肉瘤细胞株U2-OS凋亡信号传导。方法采用Western—blotting检测Cerulenin作用前、后骨肉瘤细胞株U2—OS中凋亡蛋白Bcl-2和Bax表达变化情况,了解不同的Cerulenin剂量和作用时间骨肉瘤细胞株U2-OS中凋亡蛋白Bcl-2和Bax表达变化情况。结果骨肉瘤细胞株U2-OS中Bcl-2和Bax呈阳性表达,Cerulenin作用细胞株后Bcl-2表达量随着浓度增加和作用时间延长而递减,Bax表达量随着浓度增加和作用时间延长而递增。结论Cerulenin可能通过下调Bcl-2的表达和上调Bax的表达而诱导骨肉瘤细胞凋亡。     

苦参碱诱导A549细胞凋亡的机制研究

目的:观察苦参碱抑制人肺腺癌细胞A549的增殖作用,并探讨其分子机制.方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、电子显微镜、细胞周期分析法检测A549细胞凋亡;采用流式细胞术(FCM)测定细胞Bcl-2, Bax及caspase-3蛋白表达水平.结果:苦参碱对A549细胞的增殖具有明显的抑制作用,并呈现剂量和时间依赖关系;电镜观察呈现典型的凋亡形态改变;细胞周期分析显示细胞增殖发生S/G2期阻滞;苦参碱能显著降低Bcl-2蛋白表达(P＜0.01);而显著升高Bax蛋白表达水平及caspase-3活性.结论:苦参碱可显著抑制A549细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与下调Bcl-2表达水平改变线粒体膜通透性有关.     

α干扰素增强骨肉瘤细胞对依托泊苷敏感性的实验研究

目的探讨α干扰素(IFN-α)在人骨肉瘤U2OS和MG63细胞中对依托泊苷敏感性的作用及其机制。方法采用IFN-α和依托泊苷单独或联合处理骨肉瘤U2OS和MG63细胞72 h,应用流式细胞术和DNA Ladder检测细胞凋亡的变化,Western blot法检测PARP、p53、MDM2、Bax、Bcl-2的表达。结果流式细胞术表明IFN-α在p53正常的U2OS细胞中明显增强依托泊苷诱导的凋亡(P<0.05),却对依托泊苷诱导p53突变的MG63细胞凋亡无明显影响(P>0.05);DNA Ladder表明与单药组相比,IFN-α与依托泊苷联用72 h在U2OS细胞出现明显的DNA梯形条带,而在MG63细胞中无此现象;Western blot结果表明在U2OS细胞中联合用药组出现PARP的明显裂解活化,并且IFN-α明显增强依托泊苷引起的p53信号通路p53、MDM2、Bax等凋亡基因的表达,并抑制抗凋亡基因Bcl-2的表达,而在MG63细胞中则无此现象。结论 IFN-α能够通过激活p53依赖性信号通路增强依托泊苷诱导的骨肉瘤U2OS细胞凋亡,联合应用IFN-α和传统化疗药物如依托泊苷可能成为提高骨肉瘤化疗敏感性的有效途径。     

细胞周期蛋白激酶抑制剂flavopiridol对骨肉瘤耐药细胞MG63/ADR增殖抑制的体内外实验研究

目的探讨细胞周期蛋白激酶抑制剂(flavopiridol)在体内外抑制骨肉瘤耐阿霉素细胞株MG63/ADR增殖的作用及其机制。方法四甲基偶氮唑蓝法(MTT法)测定细胞增殖抑制率。流式细胞计数法测量flavopiridol给药后MG63/ADR细胞周期的变化及凋亡率。免疫印迹法(Western-blot)检测细胞中pro-caspase-9、pro-caspase-3、caspase-8、Bcl-2、Bcl-xL、p53、Bax及活化型多聚ADP核糖多聚酶(PARP-85)蛋白的表达。采用MG63/ADR建立荷瘤裸鼠模型,FP腹腔内给药,测量肿瘤体积及裸鼠体质量变化,计算肿瘤抑制率。结果 Flavopiridol可抑制骨肉瘤耐阿霉素细胞株MG63/ADR的细胞增殖,其效果呈时间及浓度依赖性。Flavopiridol给药后,耐药细胞株MG63/ADR的细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.05)。Flavopiridol给药后,耐药细胞株中的pro-caspase-9、pro-caspase-3、Bcl-2以及Bcl-xL的表达下降,活化型caspase-8、PARP-85的表达增加。Flavopiridol可有效抑制荷瘤小鼠体内耐药骨细胞的生长。结论细胞周期蛋白激酶抑制可在体外及体内有效抑制骨肉瘤耐药细胞株的增殖,其机制可能与死亡受体介导的caspase信号传导途径及非p53介导的线粒体凋亡信号传导途径相关。     

氧化苦参碱诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的可能机制

目的:观察氧化苦参碱(OM)对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响,探讨其可能的作用机制.方法:用不同浓度的OM处理HepG-2细胞,MTT法检测OM对HepG2细胞生长增殖的抑制作用;应用Hochest荧光染色法观察OM处理后细胞形态的变化;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率;免疫印迹法检测OM处理后细胞凋亡相关蛋白磷酸化Akt、caspase-3、Bax、Bcl-2和Bcl-XL.的表达.结果:OM抑制HepG2细胞的增殖并呈一定的量效和时效关系;HepG2细胞与OM作用后出现典型的凋亡细胞形态改变,细胞凋亡率增高;OM处理HepG2细胞后,磷酸化Akt蛋白表达下降,caspase-3可被蛋白酶水解形成相对分子质量17 000活性片段,Bax蛋白表达增强,Bcl-2和Bcl-xL蛋白表达下调.结论:OM可诱导HepG2细胞凋亡,可能与其调节P13K/Akt信号通路,抑制Bcl-2和Bcl-xL的活性,激活caspase-3有关.     

芹菜素对人肺癌NCI-H460细胞增殖及凋亡的影响

目的研究芹菜素对人肺癌NCI-H460 细胞增殖及凋亡的影响。方法应用10~80 μmol/L 芹菜素处理NCI-H460 细胞,
MTT法检测细胞增殖抑制率;Hoechst 33258细胞核染色法观察细胞凋亡的形态学改变;流式细胞仪AnnexinV-FITC/PI双染色
法检测细胞凋亡率;Western blotting检测凋亡相关信号分子Bax、Bcl-2和caspase-3的蛋白表达水平。结果芹菜素对NCI-H460
细胞的增殖抑制作用呈浓度和时间依赖性;芹菜素处理组细胞出现核固缩、染色质凝集和核碎片化等典型的细胞凋亡特征;
NCI-H460细胞凋亡率随着芹菜素浓度增加逐渐增高;芹菜素处理组细胞Bax和caspase-3蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达降低。
结论芹菜素能够抑制人肺癌NCI-H460细胞的增殖,并诱导其凋亡,其机制可能与上调Bax和下调Bcl-2的表达,导致Bcl-2/Bax
比值下降,caspase-3活化有关。
     

龙葵碱调控 Bcl-2 与 Bax 蛋白表达及 caspase-3 活性诱导HepG2 细胞凋亡的研究

目的 探讨龙葵碱诱导 HepG2 细胞凋亡的作用机制。方法 透射电镜观察凋亡细胞形态变化,原位缺口末端检测法 (TUNEL 法) 检测 DNA 断裂情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,间接免疫荧光法激光共聚焦扫描显微术检测 Bcl-2 与 Bax 蛋白表达,比色法检测 caspase-3 活性的变化。结果 在透射电镜下观察,龙葵碱组细胞出现细胞固缩,染色质致密,核凝聚固缩,染色体断裂形成核碎块,凋亡小体形成等细胞凋亡特征形态。TUNEL 法发现龙葵碱高、中、低剂量组 HepG2 细胞均有绿色荧光,阴性对照组无荧光。流式细胞术分析表明 0.4、2、10 μmol/L 龙葵碱作用 HepG2 细胞 24 h 凋亡率分别为 4.0%、8.5%、20.1%。同时,龙葵碱升高 caspase-3 活性,下调 Bcl-2 蛋白表达,上调 Bax 蛋白表达。结论 龙葵碱通过降低 Bcl-2/Bax 的值,激活 caspase-3 酶活性诱导 HepG2 细胞凋亡。     

虫草素对人骨肉瘤MG-63细胞凋亡的影响及其机制研究

目的 研究虫草素对人骨肉瘤MG-63细胞凋亡的影响及其机制。方法 采用CCK-8实验检测不同浓度虫草素作用于MG-63骨肉瘤细胞24h和48h后对癌细胞增殖的抑制作用;采用流式细胞术分析虫草素对MG-63细胞周期分布及凋亡的影响;采用Western blot法检测虫草素对MG-63细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3及NICD1、Hes1蛋白表达的影响。结果 虫草素对人骨肉瘤MG-63细胞有明显的增殖抑制作用,导致MG-63细胞周期阻滞于G₀/G₁期并诱导细胞凋亡;虫草素可上调Bax、cleaved caspase-9和cleaved caspase-3蛋白的表达并下调Bcl-2,NICD1和Hes1蛋白的表达。结论 虫草素通过抑制骨肉瘤细胞增殖,诱导细胞周期阻滞于G₀/G₁期并通过线粒体凋亡途径诱导MG-63细胞凋亡从而发挥抗骨肉瘤作用,可能骨肉瘤细胞中Notch信号通路活性下调有关。     

蛴螬石油醚提取物对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响

目的研究蛴螬石油醚提取物对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法MTT法检测蛴螬石油醚提取物对体外培养的HeLa细胞株增殖抑制作用及细胞毒活性;末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的脱氧核苷酸缺口末端标记(TdT-mediateddUTPnickendlabeling,TUNEL)法检测细胞凋亡;通过免疫细胞化学S-P法测定凋亡相关基因产物Bcl-2、Bax蛋白与凋亡相关蛋白caspase-8和caspase-3的表达情况。结果蛴螬石油醚提取物对HeLa细胞的增殖抑制作用呈剂量依赖性和时间依赖性(P<0.01)。蛴螬石油醚提取物作用细胞后凋亡细胞数目随时间延长而增多;凋亡指数与药物处理呈时间依赖性和剂量依赖性。蛴螬石油醚提取物作用后Bcl-2蛋白表达均下降,Bax、caspase-8和caspase-3表达上升,4种蛋白表达各组间比较均差异显著(P<0.01)。结论蛴螬石油醚提取物对HeLa细胞具有抑制增殖及诱导凋亡作用。蛴螬石油醚提取物对HeLa细胞抑制增殖作用(50μg/mL作用48h之前)主要以诱导凋亡为主。蛴螬石油醚提取物诱导凋亡作用可能与下调Bcl-2表达,上调Bax、caspase-8和caspase-3表达有关。     

下调Notch3表达对骨肉瘤细胞生物学特性的影响

目的 观察Notch3在骨肉瘤细胞中的表达及下调Notch3表达后对骨肉瘤细胞增殖、凋亡及侵袭迁移的影响,探讨Notch3在骨肉瘤细胞生物学功能中的作用.方法 体外培养人骨肉瘤细胞MG63、Saos2、U20S,采用Real-time PCR和Western blot检测3种骨肉瘤细胞系中Notch3的mRNA和蛋白表达水平;利用siRNA敲低Notch3在骨肉瘤U20S细胞中的表达,并将细胞分为siNotch3组和阴性对照组,检测下调Notch3的表达后骨肉瘤细胞增殖、凋亡及侵袭、迁移等生物学特性的变化.结果 Notch3在骨肉瘤细胞MG63、Saos2、U20S中均呈阳性表达,并且在低级别骨肉瘤细胞系MG63中的表达明显低于高级别细胞系Saos2和U20S(P ＜0.05),下调Notch3的U20S细胞(siNotch3组)增殖、侵袭、迁移能力较阴性对照组减弱,凋亡率增加,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 在骨肉瘤细胞U20S中下调Notch3的表达可明显抑制细胞的增殖、侵袭、迁移能力,促进凋亡.Notch3可能是Notch 通路在骨肉瘤中的关键受体之一,并参与了骨肉瘤的发生、发展.     

人参皂苷Rh2通过调控GSK-3β/Wnt双信号通路影响骨肉瘤细胞增殖和凋亡

目的：探讨人参皂苷Rh2（Rh2）对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响,并进一步研究Rh2在骨肉瘤中抗肿瘤作用的机制。方法：分别以不同浓度的Rh2 处理骨肉瘤细胞,用MTT法检测骨肉瘤细胞活性的变化;用基质凝胶（Matrigel）侵袭和孔膜法（Transwell）迁移实验检测骨肉瘤细胞的侵袭和迁移能力的变化;用Annexin V-FITC/PI调亡检测试剂盒及流式细胞仪检测骨肉瘤细胞的调亡变化;用Western blot法检测细胞侵袭、凋亡相关蛋白的表达情况。结果：骨肉瘤细胞经过不同浓度的Rh2处理后,MTT实验结果表明Rh2在一定浓度范围内可以显著抑制骨肉瘤细胞的生长（P ＜0.05）。Matrigel侵袭和Transwell迁移实验结果表明Rh2可以有效抑制骨肉瘤细胞的侵袭与迁移（P ＜0.05）。Annexinv-FITC/PI凋亡检测试剂盒及流式细胞仪检测结果表明,Rh2可以促进骨肉瘤细胞的凋亡反应（P ＜0.05）。Western blot实验结果则显示Rh2 可以上调Bax、E-cadherin蛋白的表达,并抑制Bcl-2、PARP、MMP2、MMP9 蛋白的表达。Rh2 还可以通过激活GSK-3β并抑制β-catenin、Cyclin D1和C-myc相关蛋白来达到调控骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭反应的作用。结论：Rh2可以抑制骨肉瘤细胞的增殖并诱导其凋亡,这种作用可能是通过激活GSK-3β并抑制Wnt/β-catenin信号通路来实现的。     

NK-104对人肝癌细胞凋亡及半胱氨酸蛋白酶3活性的影响

目的:研究日本新近研制的第三代3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A(3-hydroxy-3-methyl-glutaryl-CoA,HMG-CoA)还原酶抑制剂匹伐他汀(pitavastatin,NK-104)对人肝癌细胞凋亡及半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)活性的影响。方法:采用细胞培养技术,以肝癌细胞系HepG2为靶细胞,以不同浓度的药物处理细胞48 h后,利用WST-8法测定NK-104对细胞增殖的影响;利用荧光染料Hoechst 33258染色,荧光显微镜观察细胞核碎片;以流式细胞仪分析细胞周期的变化;采用半胱氨酸蛋白酶3比色法检测caspase-3活性。结果:NK-104(10μmol/L)对HepG2细胞有明显抑制作用,可诱导HepG2细胞凋亡,并能增强caspase-3基因的活性。结论:NK-104能够诱导HepG2细胞凋亡,其机制与caspase-3依赖性凋亡调节信号通路有关。     

3-AB对Hela细胞PARP表达及X线照射后Hela细胞凋亡和周期进程的影响

目的：研究多聚（ADP-核糖）聚合酶(PARP)特异性抑制剂3-氨基苯甲酰胺（3-AB）抑制PAR后Hela细胞凋亡和周期进程的变化及PARP对电离辐射损伤细胞的作用机制。方法：采用体外传代培养的人宫颈癌上皮细胞Hela细胞为实验材料；给予Hela细胞3-AB( 5 mmol• L¹) 0、2、4、8及12 h后，采用PARP单克隆抗体荧光标记，流式细胞术检测对照组及3-AB组经3-AB作用不同时间后Hela细胞中PARP蛋白表达；在给予3-AB 2 h后，对阴性对照组、单纯X线照射组及3-AB加X线照射组Hela细胞行2 Gy X线照射2、8、12及24 h后应用流式细胞术测定 Hela细胞凋亡和细胞周期进程。结果：给予3-AB后2、4、8及12 h PARP蛋白表达阳性的Hela细胞百分数均明显低于阴性对照组（P<0.01），其中在2 h时降低较明显，阳性细胞率为(7.60±1.36)%。进行2 Gy照射后2、8、12及24 h各时间点，3-AB加X线照射组Hela细胞凋亡率均明显高于单纯X线照射组（P<0.01或P<0.05），而G₂期细胞百分数均低于单纯X线照射组（P<0.01或P<0.05）。结论：3-AB明显抑制Hela细胞PARP表达，增加电离辐射所致细胞凋亡并减少G₂期细胞阻 滞。     

小RNA技术干扰p21联合环磷酰胺对HepG2细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨小RNA干扰p21表达联合环磷酰胺对HepG2细胞增殖和凋亡的影响及相关作用机制。方法将化学合成的针对p21的siRNA序列转染至HepG2细胞,将HepG2细胞分为5组：空白对照组、阴性对照组、RNA抑制组、环磷酰胺组、联合组（RNA抑制＋环磷酰胺）。采用Mrrr比色法、流式细胞术和分光光度法分别检测HepG：细胞增殖、细胞凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶家族成员caspase-9、caspase．3和caspase-6的活化程度。结果p21 siRNA转染后,相对于环磷酰胺单独处理组,联合处理组HepG,细胞增殖率显著降低,而细胞凋亡率则率明显升高（P〈0．01）;caspase-9、caspase-3和caspase-6的活化程度显著升高（P〈0．01）。结论p21靶向RNA抑制作用联合环磷酰胺处理显著促进了HepG2细胞凋亡,p21可作为肝癌基因治疗的后选新靶点。     

大蒜素诱导人膀胱癌细胞株BIU87细胞凋亡的研究

[目的]探讨大蒜素对人膀胱癌细胞株BIU87细胞凋亡的影响.[方法]MTT法检测大蒜素对BIU87细胞生长的影响;倒置显微镜、TUNEL法观察细胞形态变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期的变化;半定量RT-PCR法检测凋亡相关基因bcl-2,bax,caspase-3 mRNA表达的变化,比色法测定caspase-3活性变化.[结果]大蒜素能明显抑制BIU87细胞的生长,与大蒜素的浓度和作用时间有关,5 mg/L大蒜素作用5 d可以杀死50%以上的细胞;可诱导BIU87细胞凋亡,细胞周期阻滞在S-和G2期;凋亡相关基因bcl-2表达减少,bax无明显变化,caspase-3表达及活性增高.[结论]诱导细胞凋亡是大蒜素发挥抗瘤效果的一种重要机制;凋亡发生可能与细胞周期阻滞、bcl-2和caspase-3基因表达及活性变化有关.     

苹果多糖对SW-1116结肠癌细胞凋亡的影响及机制研究

目的观察苹果多糖（apple polysaccharides,AP）对人结肠癌SW-1116细胞凋亡的影响及其机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法观察AP对SW-1116细胞增殖的影响;以DNA ladder法和流式细胞手段研究AP对SW-1116细胞凋亡的作用;给予SW-1116细胞AP后,采用Western blot法检测凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-8、caspase-9、Bax和Bcl-2的表达变化。结果 AP可明显抑制SW-1116细胞增殖,并诱导其凋亡;AP可促进SW-1116细胞caspase-3,caspase-8,caspase-9及Bax的表达,降低其Bc1-2的表达,且均表现为剂量依赖性。结论 AP可以通过线粒体和死亡受体途径诱导SW-1116细胞凋亡。     

大麻受体激动剂WIN对白血病K562细胞增殖和诱导凋亡作用的研究

目的探讨大麻受体激动剂W／N-55,212-2（WIN）对白血病K562细胞增殖和凋亡的作用及机制。方法将细胞分成对照组和不同剂量大麻受体激动剂wIN用药组。CCK-8测定WIN对K562细胞增殖的影响;DAPI染色观察细胞核形态变化;JC-1分析线粒体膜电位变化;分光光度法检测Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的活性;流式细胞仪分析细胞凋亡率变化;Western印迹法分析Bax、Bcl-2及C-myc蛋白的表达。结果与对照组相比较,5、10、20μmol／L的WIN处理K562细胞24、48h后,增殖抑制作用明显且具有剂量依赖性,差异有统计学意义（P〈0．05）。DAPI染色和线粒体膜电位检测结果显示,K562细胞发生凋亡。流式细胞仪检测结果显示,细胞凋亡率升高。WIN处理24h后,Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9活性均增加（P〈0．05）。Western印迹法显示,Bax蛋白表达增加,C-myc、Bcl-2蛋白表达下降。结论大麻受体激动剂WIN能抑制白血病K562细胞增殖,并诱导凋亡,其机制可能通过上调Bax蛋白表达,下调C-myc、Bcl-2蛋白表达,以及促使线粒体跨膜电位下降。激活Caspase．3、Caspase-8、Caspase-9蛋白而实现。