小鼠局灶性脑缺血后原蛋白转化酶1及神经肽Y的表达

目的观察小鼠局灶性脑缺血后脑皮质神经细胞内原蛋白转化酶1(PC1)及其作用底物神经肽Y(NPY)的表达变化,探讨PC1在神经细胞缺血损伤中的作用。方法将24只雄性C57小鼠用计算机随机法分为假手术组和缺血-再灌注4、24 h组,每组各8只。采用线栓法制备小鼠大脑中动脉阻塞模型,阻塞1 h再灌注。采用Western Blot法、实时荧光定量核酸扩增检测小鼠脑皮质神经细胞中PC1及NPY蛋白、mRNA的表达变化。结果 (1)与假手术组比较,缺血侧皮质脑组织PC1mRNA缺血-再灌注4 h组表达增加(2.66±0.24),缺血-再灌注24 h组增加(2.07±0.23),差异均有统计学意义(均P0.05)。与假手术组比较,缺血-再灌注4 h组PC1前体蛋白水平明显增加(P0.05),24 h组差异无统计学意义(P0.05)。(2)与假手术组比较,缺血-再灌注4 h组前体NPY前体蛋白水平及mRNA增加(P0.05),mRNA表达为2.31±0.27;24 h组蛋白前体水平增加(P0.05),NPY mRNA表达差异无统计学意义(P0.05)。结论小鼠脑缺血-再灌注后PC1前体表达增多,从而影响PC1的加工活性,导致PC1的作用底物NPY蛋白以前体形式堆积,可能为神经细胞缺血损伤的内在机制之一。     

大鼠局灶性脑缺血模型制备方法的比较

目的比较线栓法、电凝大脑中动脉同时结扎单侧颈总动脉（简称电凝单侧结扎）和电凝大脑中动脉同时结扎双侧颈总动脉（简称电凝双侧结扎）3种方法制作局灶性大鼠脑缺血模型的优劣。方法按照动物模型制备方法的不同,将20只大鼠随机分为线栓组（6只）、电凝单侧结扎组（7只）和电凝双侧结扎组（7只）。采用三种方法制备大鼠局灶性脑缺血模型,用激光多普勒血流仪测得梗死前后的脑血流量的相对值,24h后对模型进行神经功能缺损评分,行2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色,计算脑梗死体积。结果①线栓组（9．6±0．6）和电凝双侧结扎组（9．8±0．6）大鼠的神经功能缺损评分高于电凝单侧结扎组（5．7±0．7）,差异有统计学意义,P〈0．01;②线栓组（132±16）mm3和电凝双侧结扎组（142±20）mm3大鼠的梗死体积高于电凝单侧结扎组（40±11）mm3,差异有统计学意义,P〈0．01;③电凝双侧结扎组的脑血流量相对值低于电凝单侧结扎组,差异有统计学意义,P〈0．05;再灌注后,线栓组的脑血流量相对值高于电凝双侧结扎组,差异有统计学意义,P〈0．05。结论三种方法建立大鼠局灶性脑缺血模型,各有优缺点,应根据研究目的采用不同的模型。     

人参皂苷Rg1对局灶性脑缺血大鼠iNOS和eNOS表达的影响

目的探讨人参皂苷Rg1对脑缺血大鼠诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和内皮细胞型一氧化氮合酶(eNOS)表达的影响及其作用机制。方法将60只SD大鼠随机分为假手术组、单纯缺血组、人参皂苷Rg1 10、20、40 mg.kg-1处理组(Rg1低、中、高剂量组)、尼莫地平1 mg.kg-1阳性药物处理组(control组),每组10只。采用右侧大脑中动脉阻断法制备局灶性脑缺血模型,于动物清醒后进行神经功能评分;采用免疫组化技术检测大脑皮层缺血2 h后iNOS、eNOS的表达。结果假手术组大脑皮层区偶见iNOS及少量eNOS阳性细胞;单纯缺血组可见大量iNOS阳性细胞及少量eNOS阳性细胞;与单纯缺血组比较,人参皂苷Rg1各组iNOS阳性细胞数显著降低,eNOS阳性细胞数显著增多。结论人参皂苷Rg1对大鼠局灶性脑缺血具有保护作用,其可能通过下调脑组织iN-OS、上调eNOS的表达发挥作用。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后p-JNK、Bcl-2的表达及米诺环素的保护作用

目的 研究米诺环素对局灶性脑缺血再灌注后脑组织中c-Jun氨基末端激酶 p-JNK,Bcl-2表达的影响,探讨米诺环素对缺血再灌注后神经元的作用及可能机制.方法 参照Zea Longa线栓法制作大鼠大脑中动脉阻塞模型(MCAO),72只雄性Wistar大鼠被随机分成假手术组、缺血再灌组(IR组) 和MC干预组.每组大鼠再随机分成4 组:分别在再灌注后6 h、12 h、24 h、48 h处死.HE染色观察脑组织形态病理学变化,免疫组化法检测大鼠脑缺血再灌注不同时间p-JNK、Bcl-2蛋白表达的水平.结果 ①HE染色发现米诺环素干预组在再灌注各个时间点的梗死灶与缺血组比较均减小,呈点状分布并且神经元损伤也明显减轻.②缺血再灌注时缺血侧皮层可见p-JNK阳性表达,于缺血再灌注后6 h开始出现并随着时间的延长p-JNK表达逐渐升高,持续增高至再灌注48 h (P<0.01);MC干预组的p-JNK阳性表达在各时间点均明显减(P<0.01).③与假手术组比较Bcl-2表达在缺血再灌注组明显升高,并随再灌注时间不同,其阳性表达率亦不同,于缺血1 h再灌注12 h时阳性表达达高峰(P<0.01),随灌注时间延长表达逐渐减少;MC干预组Bcl-2阳性表达在各时间点明显增加(P<0.01).结论 p-JNK和Bcl-2参与大鼠脑缺血再灌注时缺血性细胞损伤(包括细胞凋亡)的发生;米诺环素可能通过抑制p-JNK,上调Bcl-2的表达,减轻缺血再灌注对大鼠大脑皮层神经细胞的损伤.     

局灶性脑缺血小鼠皮层HSP60、HSP70表达的时序性变化

目的探讨热休克蛋白(HSP)60、HSP70在局灶性脑缺血小鼠脑缺血后不同时间点(1 h、2 h、3 h)皮层缺血核心区和半影区的蛋白表达变化。方法健康雄性BALB/c小鼠,建立脑中动脉阻塞缺血模型(MCAO),利用蛋白印迹技术分析HSP60、HSP70蛋白表达量在脑缺血1、2、3 h的时序性变化。结果与假手术组比较,MCAO小鼠脑皮层HSP60、HSP70的蛋白表达量明显升高(P<0.05),HSP60随缺血时间延长呈持续升高趋势,HSP70在缺血后1 h增加,2 h达高峰,3 h降低。结论 HSP60、HSP70是神经细胞损伤和耐受的敏感标志,局灶性脑缺血能引起HSP60、HSP70表达的时序性变化,为认识局灶性脑缺血损伤提供理论依据。     

辛伐他汀对大鼠局灶性脑缺血的线粒体保护作用

目的：探讨辛伐他汀对局部脑缺血损伤大鼠的保护作用及其线粒体机制。方法：96只大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组和辛伐他汀处理组，每组32只。建立大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）模型，观察大鼠神经功能、梗死体积、脑组织线粒体超微结构的改变；检测线粒体细胞色素c氧化酶（COX）、琥珀酸脱氢酶（SDH）活性，Ca^2＋含量，以及血清降钙素基因相关肽（CGRP）含量。结果：与假手术组相比较，缺血再灌注组各项指标均有显著改变；与缺血再灌注组比较，辛伐他汀能明显提高脑缺血大鼠的神经功能评分（P〈0．01），缩小梗死体积（P〈0．01），改善脑组织线粒体结构，并提高脑组织线粒体SDH活性（P〈0．05），提高COX活性（P〈0．01），降低脑组织线粒体Ca^2＋的含量（P〈0．01），提高血清CGRP水平（P〈0．05）。结论：辛伐他汀可能通过其抗氧化效应，提高脑组织线粒体SDH、COX活性及血清CGRP水平，减轻钙超载，缩小梗死体积，改善神经功能，从而对大鼠局灶性脑缺血起保护作用。     

大鼠大脑中动脉区局灶性脑缺血模型

建立重复性好，梗死部位恒定，成功率主同的大脑中动脉闭塞 模型，将为研究局灶性脑缺血的病理生理机制及防治措施提供重要手段。着重介绍有关文献报道的几种大鼠ＭＣＡＯ模型的制备方法，用途及优缺点。     

注射用尼莫地平脂质体对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响

目的:探讨注射用尼莫地平脂质体对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响.方法:70只SD大鼠分为注射用尼莫地平脂质体(nimodipine liposomes for injection,NDLI)1.00mg/kg组、NDLI 0.50mg/kg组、NDLI 0.25mg/kg组、尼莫地平组(1.00 mg/kg)、溶媒组(10 mL/Kg)、假手术组和缺血模型组.复制大鼠大脑中动脉闭塞模型.对各组大鼠进行行为学评分,检测梗死灶体积、脑含水量、脑匀浆生化指标和脑组织学.结果:NDLI 1.00 mg/kg、0.50 mg/kg和0.25 mg/kg均能够显著改善局灶性脑缺血大鼠的行为学评分,缩小梗死灶体积,减少脑含水量,提高脑组织内Na+,K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶、谷胱甘肽和超氧化物歧化酶活性,降低丙二醛、乳酸和一氧化氮含量,并能改善脑组织损伤.结论:NDLI对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤有保护作用.     

局灶性脑缺血大鼠白细胞介素10的变化

探讨脑缺血后不同时间血清和局部脑缺血组织白细胞介素10的变化。采用改良zea Longa线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞模型,在缺血不同时间,应用双抗体夹心间接酶联免疫吸附法检测缺血组和假手术对照组大鼠受损脑组织及血清中白细胞介素10的浓度。结果发现,缺血组脑组织白细胞介素10含量在大脑中动脉闭塞3h处于较低水平,与假手术对照组比较无明显变化(p>0.05);6 h达最低,与假手术对照组比较变化显著(p<0.01),随后逐渐升高(p<0.05);血清中白细胞介素10含量在3 h最低,与假手术对照组比较变化显著(p<0.05),随后逐渐升高(p<0.05)。结果提示,白细胞介素10对脑缺血损伤可能有保护作用。     

大鼠局灶性脑缺血时脑微血管及组织中一氧化氮合酶的变化

目的探讨大鼠局灶性脑缺血时脑微血管、脑组织中一氧化氮合酶(NOS)的活性变化及其与脑损伤的关系。方法将Wistar雄性大鼠73只随机分为假手术组19只;缺血组54只,据缺血时间1、2、3、4h再分Ⅰ1、Ⅰ2、Ⅰ3、Ⅰ4组。用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞模型,用放射性同位素法测定脑微血管及脑组织中NOS的活性。结果局灶性脑缺血时不同部位、时间,NOS活性的变化不同。脑微血管中NOS活性在缺血4h(Ⅰ4)组为(0.104±0.035)pmol/mg蛋白,假手术组为(0.042±0.021)pmol/mg蛋白,两组比较差异有显著意义(P<0.001)。纹状体、海马的NOS活性在Ⅰ4组分别为(0.037±0.007)pmol/mg蛋白、(0.050±0.010)pmol/mg蛋白,假手术组为(0.079±0.018)pmol/mg蛋白、(0.059±0.008)pmol/mg蛋白,两组比较差异有显著意义(P<0.001,P<0.05)。结论脑微血管中NOS活性变化在局灶性脑缺血损伤中起重要作用,脑组织中NOS活性变化也参与了其病理生理过程。     

脑梗死后脑红蛋白的表达及其保护机制

目的探讨脑梗死后缺血半暗带脑组织中脑红蛋白（NGB）表达与caspase-3、谷氨酸表达的关系及NGB在脑缺血中的表达规律和保护作用的机制。方法制作大鼠局灶性脑缺血模型（MCAO）,随机分为假手术对照组、脑缺血组和单克隆NGB抗体干预组、干预对照组、正常干预对照组,分别在不同时间点断头取脑,制作标本,作脑红蛋白、caspase-3和谷氨酸免疫组化染色。结果（1）与假手术对照组比较,缺血5min亚组可见NGB阳性细胞数开始上升,0.5h达到高峰（P〈0.01）,随后下降,至6h接近假手术组。缺血各组（除24h、72h外）之间两两比较,差异均有统计学意义（P〈0.01）;（2）与假手术对照组比较,缺血0.5h亚组大脑皮质与豆状核区细胞caspase-3阳性表达增多,6～24h达到高峰（P〈0.01）,72h时仍高于假手术对照组,缺血各亚组之间两两比较,差异均有统计学意义（P〈0.01）;（3）与假手术对照组比较,缺血各亚组大脑皮质与豆状核区细胞谷氨酸阳性表达缺血0.5h就已增多,且随时间的变化呈逐步增高的趋势,24～72h达到高峰（P〈0.01）,缺血各亚组之间两两比较,差异均有统计学意义（P〈0.01）;（4）NGB表达与caspase-3、谷氨酸表达均呈负相关关系（分别为r=-0.953,P〈0.01;r=-0.973,P〈0.01）;（5）干预对照组caspase-3、谷氨酸表达均上调（P〈0.01）。结论脑缺血后NGB在缺血周围半暗带区早期表达升高,随后下降,于6h后降至正常,具有调节caspase-3、谷氨酸表达的作用,这是NGB脑保护作用的可能机制。     

Inducible NOS-induced chloride intracellular channel 4 (CLIC4) nuclear translocation regulates macrophage deactivation

Nuclear translocation of cytosolic CLIC4 is an essential feature of its proapoptotic and prodifferentiation functions. Here we demonstrate that CLIC4 is induced concurrently with inducible nitric oxide synthase (iNOS) and S-nitrosylated in proinflammatory peritoneal macrophages. Chemical inhibition or genetic ablation of iNOS inhibits S-nitrosylation and nuclear translocation of CLIC4. In macrophages, iNOS-induced nuclear CLIC4 coincides with the pro- to anti-inflammatory transition of the cells because IL-1β and CXCL1 mRNA remain elevated in CLIC4 and iNOS knockout macrophages at late time points, whereas TNFα mRNA is elevated only in the iNOS knockout macrophages. Active IL-1β remains elevated in CLIC4 knockout macrophages and in macrophages in which CLIC4 nuclear translocation is prevented by the NOS inhibitor l-NAME. Moreover, overexpression of nuclear-targeted CLIC4 down-regulates IL-1β in stimulated macrophages. In mice, genetically null for CLIC4, the number of phagocytosing macrophages stimulated by LPS is reduced. Thus, iNOS-induced nuclear CLIC4 is an essential part of the macrophage deactivation program.     

Pretreatment with melatonin reduces volume of cerebral infarction in a rat middle cerebral artery occlusion stroke model

Melatonin is a potent scavenger of free radicals and an indirect antioxidant. Recent studies have shown that melatonin possesses beneficial effects in experimental models of brain trauma and global cerebral ischemia. The effects of pretreatment with melatonin on volume of cerebral infarction were investigated in the present study. Adult male Sprague-Dawley rats were anesthetized with sodium pentobarbital to undergo right-sided endovascular middle cerebral artery occlusion (MCAO) for 3 hr. A single dose of melatonin (1.5, 5, 15, or 50 mg/kg in 1 mL normal saline) or its vehicle was given via an intraperitoneal injection at 0.5 hr before MCAO. Relative infarction volumes on day 3 after MCAO were significantly reduced in the groups treated with melatonin at 5 (mean +/- S.E.M., 15.7 +/- 2.5%) or 15 (21.4 +/- 3.1 %) mg/kg but not at 1.5 (30.6 +/- 3.5%) or 50 (26.7 +/- 2.8%) mg/ kg when compared with the vehicle group (33.9 +/- 3.5%). There was no significant difference in the arterial blood pressure (BP), heart rate (HR) and relative cerebral blood flow among the experimental groups. These results indicate that pretreatment with melatonin at a dose between 5 and 15 mg/kg protects against focal cerebral ischemia.     

小鼠大脑中动脉梗死模型VERGE 蛋白表达的变化及其机制

;两组MCAO模型非梗死侧的VERGE、p-JNK2、p-ERK1/2、P-38蛋白表达均无变化.结论 VERGE 蛋白表达在小鼠MCAO的早期明显升高可能与JNK2通路有关而与ERK、P38通路无关.     

改良大鼠大脑中动脉阻塞模型的建立

目的建立稳定、可靠的大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)改良模型。方法将60只SD雄性大鼠随机分为实验组和对照组,每组30只。实验组采用改良方法制作MCAO模型;对照组采用Longa传统方法制作模型。比较两组模型制作的成功率、脑梗死体积及模型稳定性。结果改良后的大鼠MCAO模型制作成功率和脑梗死体积分别为82·8%、(46±7)%,与对照组的89·3%、(48±7)%比较,差异无显著性(P>0·05)。实验组脑梗死体积变异系数为15·94%,对照组为16·21%,两组的模型稳定性相近。结论改良的大鼠MCAO模型是一种稳定性好、成功率高的脑缺血-再灌注模型。     

Effect of age in rats following middle cerebral artery occlusion

BACKGROUND: Despite the impressive increased understanding of the ischemic brain damage in general, the study of effects on different age groups, young versus old, using comparable ischemic insults is clearly lacking. OBJECTIVES: To investigate the mortality rate and neurological outcome among young and old rats, through a model of cerebral ischemia by middle cerebral artery occlusion (MCAO). METHODS: Twenty-three old (22-24 months of age) and 16 young (3-4 months of age) male rats underwent a MCAO procedure for 60 min. Surviving rats were randomly assigned to the 24-hour or 28-day resting group. The mortality rate and neurological outcome in different recovery time periods were determined for comparison between the young and old rats. RESULTS: The overall mortality rate in old rats (43.5%) was significantly higher than that of the young rats (6.3%) (p = 0.01). The infarct volume for the 24-hour post-MCAO was 181.86 +/- 11.87 mm(3) for the young rats, and 204.64 +/- 27.18 mm(3) for the old rats. For the 28-day post-MCAO, the value was 91.16 +/- 3.59 mm(3) for the young rats, and 103.38 +/- 26.43 mm(3) for the old rats. A significant reduction in infarct volume is noted in both young (p < 0.01) and old (p < 0.05) rats after 28 days of recovery compared to that after 24 h of recovery. There was no meaningful difference in infarct volume between the young and old rats measured at 24 h or 28 days after the ischemic procedure. The right volume was larger than the left volume at 24 h post-MCAO for both the young and the old rats, whereas the quotient approached unity for the young rats at 28 days post-MCAO. For the old rats, the quotient was negative at 28 days post-MCAO, representing the ipsilateral hemisphere was smaller than the contralateral hemisphere. CONCLUSION: The mortality risk to ischemic damage is greater for old rats. If an old rat survives the high-risk mortality in a short period after the MCAO procedure, the recovery would be of no difference to that of a young rat.     

Percutaneous transluminal angioplasty in an embolic middle cerebral artery occlusion

A young lady developed left middle cerebral artery embolism after percutaneous transseptal mitral commissurotomy. She was successfully treated with immediate percutaneous transluminal angioplasty. There was complete recovery of neurological deficit.