子宫平滑肌肉瘤组织EphA2/EphrinA1表达及沉默EphA2对肿瘤细胞生长与RelA/p65磷酸化的影响

目的 探究生促红素肝细胞受体A2（EphA2）及其配体（EphrinA1）在子宫平滑肌肉瘤组织中的表达情况,通过沉默EphA2探究其对肿瘤细胞生长及RelA/p65磷酸化的影响。方法 以重庆市中医院28例子宫平滑肌肉瘤患者为研究对象,免疫组织化学染色和实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测子宫平滑肌肉瘤与瘤旁组织中EphA2、EphrinA1mRNA表达;通过脂质体介导法将EphA2-siRNA转染至SK-UT-1细胞以沉默EphA2表达,同时以正常培养的细胞作为正常组、转染NC-siRNA的细胞作为阴性对照组（NC-siRNA组）;qRT-PCR和Western blot检测细胞中EphA2表达,以确定转染效率;CCK-8法、Transwell小室实验检测细胞增殖活性、迁移与侵袭;TUNEL染色和流式细胞术检测细胞凋亡情况;免疫荧光染色检测细胞内p65表达变化;Western blot检测RelA/p65磷酸化位点蛋白表达水平。结果 子宫平滑肌肉瘤组织中EphA2、EphrinA1 mRNA与蛋白表达水平均显著高于瘤旁组织（P<0.05）;与空白对照组比较,EphA2-siRNA组细胞在转染24、48及72 h后的增殖活性下降,细胞迁移与侵袭数目均减少,TUNEL阳性染色细胞率增加,细胞凋亡率增加,p65绿色荧光强度明显减弱,同时,p53蛋白表达升高,RelA/p65 Ser536和RelA/p65 Ser276磷酸化蛋白水平降低,差异均具有统计学意义（P<0.05）。结论 EphA2与EphrinA1在子宫平滑肌肉瘤组织中呈高表达,靶向沉默EphA2表达可抑制子宫平滑肌肉瘤细胞增殖与转移,诱导细胞发生凋亡,并抑制RelA/p65的 Ser536和Ser276位点磷酸化。     

幽门螺杆菌脂多糖对胃粘膜shh信号通路相关蛋白Gli、Ptch-1表达的影响

目的：观察幽门螺杆菌（Helicobacter Pylori,Hp）脂多糖刺激下胃粘膜细胞Shh信号通路发生的变化。 方法：应用热酚水法提取Hp脂多糖,动态浊度法检测脂多糖浓度,将人胃粘膜上皮细胞系GES-1进行细胞培养后分成6组,分别以浓度为0 μg/ml、1 μg/ml、10 μg/ml、20 μg/ml、30 μg/ml、40 μg/ml的Hp脂多糖进行刺激。刺激24 h后,应用MTT法观察各组细胞活性,Western Blot法对各组细胞中Shh信号通路相关蛋白Gli、Ptch-1的表达水平进行检测。 结果：不同浓度Hp脂多糖刺激24h后,MTT法检测结果显示随着Hp脂多糖浓度增加,Hp脂多糖对GES-1细胞增殖抑制越强,分别为25.8%±2.7%,34.2%±3.1%,46.3%±3.4%,60.8%±2.1%,82.9%±2.8%（r=0.985,P<0.001）;Western Blot检测结果显示随着Hp脂多糖浓度增加,Gli、Ptch-1表达逐渐下降,Gli相对表达值分别为1.286±0.180、0.963±0.067、0.850±0.085、0.566±0.058、0.549±0.056、0.377±0.047（r=-0.945,P<0.001）;Ptch-1相对表达值分别为1.688±0.088、1.466±0.061、1.170±0.065、1.042±0.064、0.648±0.057、0.482±0.074（r=-0.985,P<0.001）。 结论：Hp脂多糖能使Shh信号通路中相关蛋白的表达明显降低,提示Hp对胃粘膜Shh信号通路的影响可能是通过脂多糖实现的。     

EphA2和EphrinA 1在宫颈鳞癌中的表达及其与血管生成的关系

目的：探讨EphA2和EphrinA1在宫颈鳞状细胞癌变过程中的表达及其与临床病理因素间的关系。方法应用免疫组织化学方法,检测EphA2和EphrinA1在15例宫颈慢性炎症、35例宫颈上皮内瘤变（CIN）和70例宫颈鳞癌组织中的表达,并采用CD 34抗体标记微血管内皮细胞,计算微血管密度（MVD）。分析EphA 2和EphrinA1的表达与MVD之间的相关性及其与宫颈鳞癌临床病理特征的关系。结果70例宫颈鳞癌组织中,EphA2和EphrinA1阳性率分别高于CIN组和宫颈慢性炎症组织,差异均有统计学意义（P<0.05）。EphA2与EphrinA1的表达与淋巴结转移和侵润深度有关（P<0.05）;EphA2与EphrinA1的表达呈正相关（r=0.306,P<0.05）。EphA2和EphrinA1与年龄、FIGO分期及病理分级之间差异无统计学意义（P>0.05）。宫颈鳞癌的MVD与年龄无关,而与肿瘤分化程度、FI?GO分期、淋巴结转移及局部侵润深度有关（P<0.05）。经Spearman等级相关分析,EphA2与EphrinA1的表达与MVD呈显著正相关（P<0.01）。结论 EphA2和EphrinA1表达均与宫颈鳞癌的发生、发展密切相关,联合检测有助于宫颈鳞癌早期诊断和预后评价,可以为今后宫颈鳞癌的靶向治疗提供新的靶点。     

利用Tet-Off表达系统构建鞘磷脂合酶可调控高表达的Huh7肝癌细胞

 目的 利用Tet-Off表达系统构建鞘磷脂合酶（sphingomyelin synthase,SMS）可被Dox调控高表达的Huh7细胞,为进一步探讨SMS活性升高致动脉粥样硬化的机制打下基础（建立细胞模型）。方法 首先将Tet-Off调控质粒转染Huh7细胞构建Huh7-tTA细胞,然后再将含外源性人SMS基因（hSMS）的PTREE2hyg质粒转染Huh7-tTA细胞,经分离纯化成功构建可调控表达hSMS的Huh7单克隆细胞（命名为SMS细胞,SMS1和SMS2）。为了便于检测外源性hSMS,利用FLAG标记hSMS（SMS-FLAG）。结果 SMS细胞表达SMS-FLAG受不同剂量Dox调控,SMS mRNA测定结果显示: 0 ng/mL Dox剂量组较0.01 ng/mL和100 ng/mL Dox组均有显著升高（P<0.05和P<0.001）;0.01 ng/mL Dox组较100 ng/mL Dox组也有显著升高（P<0.05）。SMS蛋白测定结果相似于SMS mRNA结果。SMS酶活性测定结果显示0 ng/mL Dox组显著高于100 ng/mL Dx组（P<0.001）,而对照组（Huh7-tTA）、100 ng/mL Dox组和野生型Huh7细胞组之间差异均无统计学意义（P>0.05）。结论 利用Tet-Off体系成功构建SMS高表达可调控Huh7细胞,SMS细胞SMS高表达受Dox剂量调控。     

EphA2/EphrinA1在胃癌组织中的表达及与血管生成的关系

目的探讨EphA2与其配体EphrinA1在胃癌组织中的表达及与肿瘤血管生成的关系。方法利用免疫组织化学法检测82例胃癌手术切除标本中癌组织、癌旁组织及正常胃黏膜中EphA2、EphrinA1的表达,并采用CD34抗体标记微血管内皮细胞,计算微血管密度（MVD）。分析EphA2、EphrinA1的表达与MVD之间的相关性及其与胃癌临床病理特征的关系。结果胃癌组织中EphA2、EphrinA1的表达及MVD显著高于癌旁组织及正常胃黏膜（P〈0.01）;EphA2、Eph-rinA1表达水平及MVD值与胃癌的分化程度、浸润深度及淋巴结转移有关（P〈0.05）,MVD值还与肿瘤直径有关（P〈0.05）;Spearman等级相关分析表明,EphA2、EphrinA1表达分别与MVD呈显著正相关（r=0.485,P〈0.01;r=0.512,P〈0.01）。结论EphA2及其配体EphrinA1在胃癌组织中特异性高表达,可能参与肿瘤血管的生成,在胃癌的发病及恶性进展中发挥重要作用。     

大鼠口腔鳞状细胞癌组织中EphA2、EphrinA1和E-cadherin的表达

目的:检测大鼠口腔鳞状细胞癌发生及演变组织中EphA2、EphrinA1和E-cadherin的表达。方法:采用免疫组化SP法检测大鼠腭部的7例正常黏膜、14例上皮单纯性增生黏膜、6例上皮轻度异常增生黏膜、10例上皮中度异常增生黏膜、19例上皮重度异常增生黏膜和14例口腔鳞状细胞癌黏膜组织中EphA2、EphrinA1和E-cadher-in的表达。结果:随正常黏膜到口腔鳞状细胞癌的发生演变,EphA2和EphrinA1的表达呈升高的趋势,E-cadherin的表达呈降低的趋势(F=35.903、101.757和65.409,P<0.001)。口腔鳞状细胞癌组织中EphA2与EphrinA1的表达呈正相关(r=0.708,P=0.015),与E-cadherin的表达呈负相关(r=-0.531,P=0.004);EphrinA1与E-cad-herin的表达呈负相关(r=-0.596,P<0.001)。结论:EphA2、EphrinA1和E-cadherin可能共同参与了口腔鳞状细胞癌的发生演变。     

司丙红霉素胶囊的药物动力学

目的：研究司丙红霉素胶囊的药物动力学,为该药进行临床研究提供依据。方法：采用随机、开放试验设计,30名健康受试者（男女各半）,随机分为3组,每组男女各5人。各组分别单剂量口服试验制剂250,500和750mg。采用HPLC-MS法测定给药后不同时间丙酸红霉素和红霉素碱的血药浓度。结果：30例健康志愿者,全部完成试验,未发生药物不良反应。用3P87软件进行模型分析和参数计算,高、中、低3个剂量组均符合单室模型。口服司丙红霉素胶囊后,丙酸红霉素药物动力学参数为：低剂量组Ka为（2.007±1.281）/h,t max（实测值）为（1.9±0.6）h,C max为（437.0±295.0）μg/L,AUC0－14为（1840.2±1476.87）μg·h/L,Ke为（0.329±0.119）/h,T1/2为（2.45±0.9）h;中剂量组Ka为（1.451±0.380）/h,t max（实测值）为（1.7±0.3）h,C max为（923.1±217.5）μg/L,AUC0－14为（4542.4±1579.4）μg·h/L,Ke为（0.237±0.057）/h,T1/2为（3.1±1.1）h;高剂量组Ka为（2.076±1.559）/ h,t max（实测值）为（1.7±0.3）h,C max为（1336.5±366.0）μg/L,AUC0-14为（7481.5±2496.2）μg·h/L,Ke为（0.266±0.051）/h,T1/2为（2.7±0.5）h。红霉素碱的药物动力学参数为：低剂量Ka为（1.410±0.626）/h,t max（实测值）为（1.8±0.5）h,C max为（197.5±227.6）μg/L,AUC0-14为（766.4±981.0）μg·h/L,Ke为（0.519±0.240）/ h,T1/2为（1.6±0.8）h;中剂量组Ka为（1.900±1.049）/h,tmax（实测值）为（1.6±0.2）h,C max为（488.3±216.7）μg/L,AUC0-14为（2122.6±1317.8）μg·h/L,Ke为（0.329±0.057）/h,T1/2为（2.2±0.4）h;高剂量组Ka为（1.934±0.794）/h,t max（实测值）为（1.7±0.3）h,C max为（749.3±387.2）μg/L,AUC0-14为（3820.1±1966.4）μg·h/L,Ke为（0.373±0.174）/h,T1/2为（2.2±0.7）h。各剂量组丙酸红霉素和红霉素碱的AUC与剂量基本成线性关系,半衰期与剂量无线性相关,符合1级动力学。各药物动力学参数无性别差异。结论：口服司丙红霉素后,主要以丙酸红霉素形式吸收,1.6h左右达到峰浓度。消除半衰期为2.2～2.7h。丙酸红霉素在体内代谢为活性成分红霉素碱,红霉素碱的达峰时间为1.8h左右,消除半衰期为2.4～3.1h。口服剂量在250～750mg的剂量范围内,丙酸红霉素与红霉素碱均符合1级动力学,在中国成人中没有性别差异。     

长期高蛋白饮食对营养性肥胖大鼠胰岛的影响

目的观察长期等热量高蛋白饮食对营养性肥胖大鼠胰岛形态功能的影响。方法利用高脂饲料建立营养性肥胖大鼠模型34只,分为高蛋白饲养组（HP组,n=12）、高脂饲养组（HF组,n=11）、普通饲养组（NC组,n=11）,正常等热量饲养24周后,观察体质量、内脏脂肪及空腹血浆GLP 1的改变,行静脉葡萄糖耐量试验（IVGTT）观察胰岛分泌功能,作胰岛素免疫组化染色进行胰岛形态学分析。结果与NC组相比,HP组体质量、内脏脂肪均显著降低［分别为（490.92±39.47)g vs（545.55±31.08）g,P＜0.01,（22.42±7.04）g vs（32.33±9.27）g,P＜0.05］,HF组则均明显增加［分别为（656.01±58.49 ）g  vs （545.55±31.08）g,（55.33±17.81）g vs（32.33±9.27）g,P均＜0.01］。IVGTT结果显示,各点血糖无差异,但HP组5、10?min血清胰岛素显著降低［(91.56±21.72)mIU/L vs （121.29±34.03）mIU/L,;（58.62±15.80）mIU/L vs （81.12±24.36）mIU/L,P均＜0.05］;而HF组0、10?min显著升高［(40.21±14/12) mIU/L vs (27.48±11.31) mIU/L,(98.15±27.58) mIU/L vs (81.12±24.36) mIU/L, P均＜0.05］。空腹血浆GLP 1水平HP组显著降低［（0.52±0.13）μg/L vs （0.71±0.19）μg/L,P＜0.05］,HF组则有增加趋势［（1.03±0.28）μg/L vs （0.71±0.19）μg/L,P=0.11］。免疫组化结果显示,与NC组相比,HP组胰岛形态无改变,但HF组已出现胰岛显著增大、胰岛染色面积比率明显降低及平均灰度升高（P＜0.05）。结论高脂饮食可造成胰岛形态功能受损,而长期等热量高蛋白饮食虽能降低营养性肥胖大鼠胰岛素的第一时相分泌,但尚未引起胰岛形态变化。该组胰岛素分泌减少可能与空腹GLP 1降低、体质量减轻有关。     

人类趋化素样因子超家族2在精索静脉曲张大鼠模型中的表达

目的：通过建立精索静脉曲张大鼠模型,探讨人类趋化素样因子超家族2（chemokine like factor-like myelin and lymphocyte and related proteins for vesicle trafficking and membrane link transmembrane domain-containing protein 2, CMTM2）对精索静脉曲张大鼠生精过程的影响。方法：选取雄性SD大鼠40只（体重220~330 g,6~7周龄）,将大鼠随机分为精索静脉曲张持续4、12周后处死取样组,和相应的接受假手术处理的对照组,每组均为10只大鼠。通过手术进行左肾静脉缩窄建立左侧精索静脉曲张的大鼠模型。将实验组和对照组大鼠于4周或12周后处死,取出左侧睾丸,游离附睾中精子,观察并计算精子密度与活力,测量生精小管外径、内径及上皮直径改变,并进行免疫组织化学分析以判断CMTM2蛋白的表达状况。结果：与对照组相比,精索静脉曲张4周组中大鼠的精子密度［（63.9±7.1）×106/mL vs.（74.3±5.0）×106/mL］和活力［（58.7%±7.9%） vs. （66.1%±4.3%）］ 轻度下降（t=1.432, 1.563; P=0.076, 0.059）,精索静脉曲张12周组中大鼠的精子密度［（40.5±7.2）×106/mL vs.（71.1±4.5）×106/mL］和活力［（35.2%±8.5%） vs. (63.4%±4.1%)］显著下降（t=3.754, 3.933; P=0.004, 0.002）。此外,CMTM2蛋白的表达水平在精索静脉曲张组也出现明显下降,对照组CMTM2水平为精索静脉曲张12周组的（2.3±0.4）倍（t=1.978; P=0.039）。4周时,精索静脉曲张组生精小管外径出现轻度降低［（271.1±8.4）μm vs. （280.0±8.1）μm,t=1.361, P =0.132］,而12周组则出现明显降低［（198.2±10.2） μm vs. （255.8±12.7）μm,t=2.125, P=0.003］,此外,精索静脉曲张12周组的生精小管上皮直径出现明显下降［（54.1±1.5）μm vs.（75.5±4.1）μm,t=2.246,P=0.021］。结论：在精索静脉曲张大鼠模型中,精索静脉曲张与CMTM2蛋白水平降低相关,同时可导致睾丸生精小管直径变小及精子密度与质量受损。     

精神分裂症模型鼠腹腔中的中性粒细胞趋化运动的动态可视化分析

目的：应用细胞动态可视化系统观察并分析正常鼠和精神分裂症模型鼠腹腔中的中性粒细胞趋化运动能力及其差异。方法：18只健康昆明小鼠随机分为对照组（6只）、0.3 mg/kg 5-甲基二氢二苯并环庚烯亚氨马来酸（dizocilpine maleate,MK-801）处理组（6只）、0.6 mg/kg MK 801处理组（6只）,分别提取中性粒细胞,在显微镜下观察形态并计数。将每组细胞分成两份进行趋化实验,分别为趋化剂处理组和趋化剂未处理组,即对照组 1、0.3 mg/kg MK-801处理组1、0.6 mg/kg MK-801处理组 1和对照组 2、0.3 mg/kg MK-801处理组 2、0.6 mg/kg MK-801处理组 2。使用NIS-Elements软件记录细胞动态迁移过程。使用TAXIScan Analyzer 2软件每组细胞随机选取30个细胞（即n=30）分析细胞迁移的轨迹、速度和距离,并采用配对检验和单因素方差分析进行统计学分析。结果：对照组、0.3 mg/kg MK-801处理组、0.6 mg/kg MK-801处理组的中性粒细胞的数量分别是（1.00±0.03）×104/mL、（0.05±0.02）×104/mL、（0.32±0.01）×104/mL,差异均有统计学意义（P<0.05）。在趋化剂的作用下,对照组1、0.3 mg/kg MK-801处理组1、0.6 mg/kg MK-801处理组1的中性粒细胞定向迁移能力分别是（0.85±0.11） radian、（1.00±0.11） radian、（0.96±0.10） radian,差异均有统计学意义（P<0.05）;中性粒细胞迁移速度分别是（0.09±0.02） μm/s、（0.12±0.01） μm/s、（0.14±0.01） μm/s,差异均有统计学意义（P<0.05）;中性粒细胞迁移距离分别是（94.26±0.02） μm、（134.61±0.01） μm、（156.19±0.01） μm,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：与对照组腹腔中的中性粒细胞比较,精神分裂症模型鼠腹腔中的中性粒细胞具有更强的趋化运动能力。     

受体酪氨酸激酶EphA1的研究进展

EphA1基因是受体酪氨酸激酶Eph家族中第一个成员,不仅参与胚胎发育和血管生成,而且在正常成人组织中也广泛表达。其独特的受体和配体复合物的结构特点和信号转导模式,使其在肿瘤发生、发展和转移中的作用日益受到重视。在不同器官、不同组织类型的肿瘤,甚至在同一种肿瘤发展的不同阶段,EphA1基因表达状况也有很大差异,提示该基因功能的多元性。深入研究EphA1在血管生成和肿瘤发生、发展和转移中的作用,有可能为肿瘤的早期诊断和治疗提供新的靶点。     

EphrinA1基因小干扰RNA的构建及其在Huh-7细胞中的沉默效应

目的：构建针对EphrinA1基因的发夹状RNA（ShRNA）表达载体pSilencer2.1-EphrinA1-SiRNA,观察其对人肝癌细胞Huh-7中EphrinA1基因表达的特异性抑制效应。方法：设计合成针对EphrinA1 mRNA的RNAi核苷酸片段,并定向克隆到pSilencer2.1-U6载体中,构建重组质粒pSilencer2.1-EphrinA1-SiRNA,同时构建不针对任何序列的重组质粒pSilencer2.1-EphrinA1-ScrRNA,通过脂质体介导转染入Huh-7细胞,应用逆转录聚合酶链反应检测小干扰RNA的沉默效应。结果：酶切鉴定证实pSilencer2.1-EphrinA1-SiRNA和pSilencer2.1-EphrinA1-ScrRNA重组质粒构建成功,转染Huh-7细胞后,pSilencer2.1-EphrinA1-SiRNA组EphrinA1 mRNA表达较pSilencer2.1-EphrinA1-ScrRNA组和空白对照组明显下调,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：pSilencer2.1-EphrinA1-SiRNA载体的成功构建为下一步研究以EphrinAl基因为靶位点的肝细胞癌基因治疗奠定了重要的实验基础。     

甲基化抑制剂5-杂氮胞苷对T淋巴细胞株程序性死亡受体-1基因启动子区域甲基化水平及其表达的影响

目的:以T淋巴细胞株Molt-4细胞为模型,探讨甲基化抑制剂5-杂氮胞苷(5-azacytidine,5-Zac)对淋巴细胞表面程序性死亡受体-1(programmed death receptor 1,PD-1)基因启动子的去甲基化作用及其诱导的PD-1基因表达的改变,并进一步研究去甲基化作用与PD-1基因表达之间的...     

CpG寡聚脱氧核苷酸抑制肾癌细胞增殖及肿瘤生长的体内外实验研究

目的 研究CpG寡聚脱氧核苷酸（CpG ODN）在体内外对肾癌细胞增殖及肿瘤生长的抑制作用,并探讨其可能的作用机制.方法 采用CCK-8法检测不同浓度CpG ODN1826和non-CpG ODN1982（ODN1982）干预对体外培养人肾透明细胞癌Caki-1细胞增殖的影响.24只BALB/c裸鼠皮下接种Caki-1细胞建立荷瘤裸鼠模型,4 d后根据每周1次的治疗方式随机分为对照组（PBS）、ODN1982组（50μgODN1982）、小剂量CpG ODN1826组（25 μg CpG ODN1826）和大剂量CpG ODN1826组（50 μg CpGODN1826）,每组6只.于建模后35 d处死动物,比较各组荷瘤裸鼠的肿瘤体积、质量及肿瘤组织学改变;体外分离各组荷瘤裸鼠脾淋巴细胞,乳酸脱氢酶释放法检测不同靶标比例（脾淋巴细胞：Caki-1细胞或脾淋巴细胞：小鼠淋巴瘤细胞YAC-1细胞）的荷瘤裸鼠脾淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤活性.结果 ODN1982对Caki-1细胞的体外增殖活性无显著影响;500μg/mL CpGODN1826干预可显著抑制Caki-1细胞增殖.至实验终止时点,小剂量和大剂量CpG ODN1826组荷瘤裸鼠的肿瘤体积显著小于ODN1982组和对照组（P＜0.05）;各组间肿瘤质量比较差异均具有统计学意义（P＜0.05）;组织学观察显示,小剂量和大剂量CpG 0DN1826组肿瘤组织较多炎性细胞浸润.当靶标比例为50∶1时,大剂量CpG ODN1826组裸鼠脾淋巴细胞对Caki-1细胞和YAC-1细胞的杀伤活性分别为（9.74±1.16）%和（79.65±5.23）%,显著高于对照组的（7.67±0.22）%和（10.12±3.03）%及ODN1982组的（7.66±0.93）%和（27.60±9.83）%（P＜0.05）.结论 CpG ODN对体外肾癌细胞增殖及荷瘤裸鼠肿瘤组织生长均具有明显抑制作用,其机制可能与CpG ODN增强荷瘤裸鼠的固有免疫应答有关.     

橙皮素对舌癌细胞的生长抑制作用及其机制

目的:检测橙皮素对舌癌细胞生长及Notch1活化的影响,探讨橙皮素抑癌作用机制。方法:将培养的Tca8113细胞分为DMSO对照组和25、50、75、100和125 μmol·L^-1橙皮素处理组。MTT法检测不同浓度橙皮素作用后Tca8113细胞增殖抑制率,流式细胞术检测各组细胞凋亡率和细胞周期分布,定量PCR和免疫印迹分别用于分析橙皮素作用前后Tca8113细胞中Notch1和Hes-1 mRNA及蛋白表达。结果:与DMSO对照组比较,125 μmol·L^-1橙皮素处理组24、48和72 h Tca8113细胞增殖抑制率明显升高(7.88%±1.90%、26.28%±2.2%和47.05%±1.90%)(P<0.05);在橙皮素处理72 h后,25、50、75、100 和125 μmol·L^-1橙皮素处理组细胞增殖抑制率分别为(6.14±1.20)%、(28.69±2.10)%、(28.33±2.60)%、(45.26±3.00)%和(47.05±1.90)%,橙皮素对Tca8113细胞的增殖抑制作用呈现时间剂量依赖性。流式细胞术,橙皮素作用72 h后, 0、50和100 μmol·L^-1橙皮素处理组细胞凋亡百分率从 2.9%±0.5%升高至23.4%±1.7%和 35.1%± 1.9%(P<0.05);G₀/G₁期细胞由(18.6±1.3)%升高至(33.4±1.5)%和(40.5±1.9)%(P<0.05), S期细胞百分率由(70.3±2.5)%下降至(56.8±2.0)%和(48.7±1.8)%(P<0.05)。定量PCR和免疫印迹分析,与DMSO对照组比较,橙皮素作用后Tca8113细胞中Notch1和Hes-1 mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论:橙皮素能够抑制Tca8113细胞增殖并诱导其发生细胞凋亡和细胞周期G₀/G₁期阻滞,其机制可能与活化Notch1有关联。     

Angiogenesis effect of Astragalus polysaccharide combined with endothelial progenitor cells therapy in diabetic male rat following experimental hind limb ischemia

Background Diabetes mellitus （DM） is a common disease accompanied with a high incidence of hind limb ischemia （HLI）.In recent years,numerous studies demonstrated that endothelial progenitor cells （EPCs） are involved in angiogenesis and maintenance of vascular integrity following HLI.On the other side,it has been proved that Astragalus polysaccharide （APS） could promote angiogenesis.In the present study,we aimed to evaluate the effect of APS and EPCs on enhancing angiogenesis after experimental HLI caused by femoral artery ligation in rats with streptozotocin （STZ）-induced diabetes.Methods Rats （n=110） were randomly assigned to the following groups：sham group,ischemia group,APS group,EPCs group and APS＋EPCs group.APS,EPCs or an equal volume of vehicle was administered intramuscularly after HLI induction,and 6 rats were assessed by angiography at 28 days after induction of HLI,6 rats were sacrificed at the same time point to take histological studies,biochemical tests were also performed at that point in the rest rats.Results APS or EPCs treatment induced an increase,respectively,in the protein expression of vascular endothelial growth factor （VEGF） （36.61%,61.59%）,VEGF receptor-1 （VEGFR-1） （35.50%,57.33%）,VEGFR-2 （31.75%,41.89%）,Angiopoietin-1 （Ang-1） （37.57%,64.66%） and Tie-2 （42.55%,76.94%） （P 〈0.05）,after HLI injury.And combined therapy of APS and EPCs enhanced the effort of angiogenesis after HLI induction in diabetic rats,through elevating protein expression of VEGF （99.67%）,VEGFR-1 （105.33%）,VEGFR2 （72.05%）,Ang-1 （114.30%） and Tie-2 （111.87%） （P〈0.05）.Similarly,mRNA expression of VEGF,VEGFR-1,VEGFR2,Ang-1,Tie-2 also show similar trends as well as protein expression （P〈0.05）.Conclusion APS or EPCs could enhance angiogenesis,and the combined treatment leads to better effort,at least,partially via VEGFNEGFR and Ang-1/Tie-2 signaling pathway.