苦参素抗大鼠肝脏缺血再灌注损伤作用的研究

目的探讨苦参素注射液对大鼠缺血再灌注肝脏细胞Bax、Bcl-2及Caspase-3蛋白表达的影响及它们与肝脏细胞凋亡的内在联系。方法健康SD大鼠30只随机分为3组,空白对照组（S组）、缺血再灌注＋生理盐水组（I/R组）、缺血再灌注＋苦参素注射液组（M组）,每组10只。免疫组化检测Bax、Bcl-2及Caspase-3蛋白的表达,每组选24个视野分别测量光密度值（OD值）。结果 I/R组BaxOD值明显高于S组（P〈0.01）,SF组BaxOD值明显低于I/R组（P〈0.01）,且低于S组（P〈0.05）。I/R组Bcl-2OD值高于S组（P〈0.05）,且SF组Bcl-2OD值高于S组（P〈0.01）,但I/R组与SF组比较差异无显著性。I/R组Caspase-3OD值明显高于S组（P〈0.01）,且明显高于SF组（P〈0.01）。结论丹参注射液增加肝脏Bcl-2蛋白的表达,降低Bax及Caspase-3蛋白的表达,抑制肝脏细胞凋亡,保护缺血再灌注肝脏。     

miR-208a通过调控QKI5表达对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

  目的   研究miR-208a调控QKI5表达对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及作用机制。  方法  将雄性SD大鼠32只随机选择分为假手术组（Sham组）、缺血再灌注组（I/R组）、I/R+antagomir阴性对照组（I/R+anta-miR-NC组）和I/R+miR-208a antagomir 组 （I/R+anta-miR-208a组）,构建大鼠心肌I/R模型后检测各组大鼠心脏左室射血分数（LVEF）、左室短轴缩短率（LVFS）和左室每搏量（SV）;ELISA法检测血清肌酐激酶同工酶（CK-MB）和心肌肌钙蛋白（cTnI）以及IL-1β、IL-6和肿瘤坏死因子（TNF-α）水平;采用HE染色观察各组心肌组织病理变化,采用TUNEL染色检测心肌组织细胞凋亡;RT-PCR检测心肌组织miR-208a和QKI5 mRNA表达,Western blot检测心肌组织QKI5蛋白和凋亡蛋白Caspase-3的相对表达水平。  结果  与Sham组比较,I/R组中LVEF、LVFS、SV值降低,心肌细胞凋亡率升高,血清中CK-MB、cTnI和IL-1β、IL-6、TNF-α水平及心肌组织中miR-208a和Caspase-3表达升高,而QKI5表达水平降低（P < 0.05）;与I/R+anta-miR-NC组比较,I/R+anta-miR-208a组中LVEF、LVFS、SV值升高,心肌细胞凋亡率降低,血清中CK-MB、cTnI和IL-1β、IL-6、TNF-α及心肌组织中miR-208a和Caspase-3表达水平降低,而QKI5表达升高（P < 0.05）。相关性分析发现miR-208a与QKI5表达呈负相关。  结论  抑制miR-208a可能通过调控QKI5表达减轻心肌缺血再灌注损伤中炎症反应,发挥心肌保护作用。     

缺血后处理对兔缺血再灌注心肌保护作用的信号转导机制研究

目的：建立缺血再灌注模型,观察JAK-STAT信号通路是否介导了缺血后处理对兔心肌的保护作用。方法：健康新西兰大白兔随机分为3组,（l）假手术组,开胸后穿线套环,不收紧结扎线。（2）I/R组,结扎冠状动脉左前降支（LAD）30min,再灌注180min。（3）缺血后处理组,结扎LAD 24 min时,用血管夹夹闭双侧股动脉5 min,松开1 min,再灌注直至180min;再灌注结束后伊文思蓝和TTC染色法测心梗面积,用原位化学法（TUNEL）法观察各组心肌细胞凋亡,免疫印迹法（WesternBlot）测各组心肌BCL-2及P-Stat3的表达。结果：（1）心梗面积：缺血后处理组（19.9±5.4%）较I/R组（29.9±4.6%）有明显减少（P〈0.05）,（2）各组心肌细胞凋亡的变化：I/R组、缺血后处理组的心肌细胞凋亡指数均较l组明显增加（P〈0.05）,（3）组的心肌细胞凋亡指数明显低于I/R组（P〈0.05）。（4）各组的心肌BCL-2蛋白表达变化：I/R组、缺血后处理组的心肌BCL-2的表达均较假手术组明显增加（P〈0.05）,缺血后处理组的心肌BCL-2的表达明显高于I/R组（P〈0.05）。（5）各组心肌P-Stat3蛋白表达：I/R组、缺血后处理组的心肌P-Stat3蛋白表达均较假手术组明显增加（P〈0.05）,缺血后处理组的心肌P-Stat3蛋白表达明显高于I/R组（P〈0.05）。结论：缺血后处理通过JAK-STAT信号通路的介导,上调BCL-2及P-Stat3蛋白的表达,抑制心肌细胞的凋亡,对缺血再灌注兔心肌产生保护作用。     

右美托咪定通过α2AR/PI3K/Akt通路对大鼠肾缺血再灌注后心肌细胞凋亡的调控作用

目的 探讨α₂AR/PI3K/Akt通路在大鼠肾缺血再灌注后心肌细胞凋亡中的作用以及右美托咪定器官保护作用的机制。方法 选取40只雄性、10周龄,体重250～300 g, Wistar大鼠按随机数字表法分为5组：假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、右美托咪定组(Dex组)、右美托咪定+I/R组(Dex+I/R组)、阿替哌唑+右美托咪定+I/R组(Atip+Dex+I/R组),各8只,分别按相应处理方式。对大鼠采取肾缺血45 min再灌注4 h处理,留取心肌组织,采用HE染色、TUNEL染色观察各组大鼠心肌组织损伤及凋亡情况;Western Blot法检测PI3K、Akt、p-Akt、Bcl-2、Bax蛋白表达分析α₂AR/PI3K/Akt通路在心肌凋亡中的作用。结果 与Sham组比较,右美托咪定预处理组大鼠心肌纤维排列较整齐,心肌纤维间散在部分慢性炎细胞浸润;部分心肌细胞可见空泡变性;可观察到小部分心肌纤维溶解坏死;心肌的凋亡率明显降低。与Sham组比较,Akt蛋白表达水平在各组差异无统计学意义(P>0.05);I/R组P...     

二甲双胍预处理对大鼠肾缺血再灌注损伤模型的影响及机制研究

目的 探讨二甲双胍预处理对大鼠肾缺血再灌注损伤模型的影响及可能的机制。方法 健康清洁级成年雄性SD大鼠体重220~250g,共30只,采用数字表法将其随机分为3组（n=10）：假手术组（Sham组）,缺血再灌注组（I/R组）和二甲双胍组（metformin+I/R组）。metformin+I/R组在建立I/R模型前给予二甲双胍0.125mg/（kg·d）腹腔注射,共14天,Sham组和I/R组给予等容量生理盐水连续14天。给药结束后I/R组和metformin+I/R组采用切除右肾、夹闭左肾动静脉45min后恢复灌注的方法制备大鼠肾缺血再灌注模型,Sham组切除右肾、不夹闭左肾动静脉。分别于再灌注24h时抽取下腔静脉血测定血清肌酐（Cr）和尿素氮（BUN）浓度;然后处死大鼠取肾,光镜下观察肾组织形态学变化,免疫组化法测定Bcl-2、Bax、caspase-3表达,并行Tunel染色评估肾小管上皮细胞凋亡程度。结果 跟Sham组比较,I/R和metformin+I/R组的BUN、Cr均明显升高;同时,相比I/R组,metformin+I/R组的BUN和Cr均明显降低,且差异均有统计学意义（P<0.05）。免疫组化检测结果显示,跟Sham组比较,I/R组和metformin+I/R组Bcl-2、Bax、caspase-3表达明显增高;跟I/R组比较,metformin+I/R组Bax、caspase-3表达明显降低,同时Bcl-2的表达明显强于I/R组。Tunel结果显示,相比Sham组,I/R和metformin+I/R组肾小管上皮细胞凋亡数目明显增多;同时,metformin+I/R组肾小管上皮细胞凋亡数目明显少于I/R组,且差异有统计学意义（P<0.05）。结论 二甲双胍预处理能改善大鼠肾缺血再灌注损伤过程中肾功能损害,其机制可能与抑制肾小管上皮细胞凋亡有关。     

瑞舒伐他汀对心肌缺血再灌注损伤大鼠 心肌凋亡及相关基因表达的影响

目的 探讨瑞舒伐他汀对心肌缺血再灌注损伤（MIRI）大鼠心肌细胞凋亡及相关基因表达的影响。 方法 雄性Wistar 大鼠随机分为假手术组（Sham 组）、心肌缺血再灌注组（MIRI 组）、心肌缺血再灌注+ 瑞 舒伐他汀组（MIRI+R 组）,每组10 只。复制大鼠MIRI 模型,观察各组大鼠左心室舒张末压（LVEDP）,左 心室内压最大上升和下降速率（±dp/dtmax）;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法检测大鼠 左心室心肌细胞的凋亡指数;免疫组织化学染色检测左心室心肌组织凋亡相关基因（Bcl-2、Bax）蛋白表达, RT-PCR 法检测Bcl-2、Bax mRNA 表达。结果 MIRI 组与Sham 组比较,大鼠LVEDP、心肌细胞凋亡指 数（AI）、Bax 蛋白及mRNA 的表达升高（P <0.05）,±dp/dtmax、Bcl-2 蛋白及mRNA 的表达、Bcl-2/Bax 比值下降（P <0.05）;与MIRI 组比较,MIRI+R 组大鼠LVEDP、AI、Bax 蛋白及mRNA 的表达降低（P <0.05）, ±dp/dtmax、Bcl-2 蛋白及mRNA 的表达、Bcl-2/Bax 比值升高（P <0.05）。结论 瑞舒伐他汀可降低心肌缺 血再灌注损伤引起的心肌细胞凋亡,具有良好的心肌保护作用。     

Klotho对缺血再灌注急性肾损伤的影响研究

目的探讨基因Klotho对缺血再灌注急性肾损伤的影响及可能的作用机制。方法60只BALB/c小鼠按随机数字表法分为假手术+0.9%氯化钠注射液组（Sham+veh组）、假手术+Klotho补充组（Sham+kl组）、缺血再灌注急性肾损伤+0.9%氯化钠注射液组（I/R+veh组）、缺血再灌注急性肾损伤+Klotho补充组（I/R+kl组）,每组各15只。各组小鼠再按不同的处死时相（术后第1、2、7天）随机分为D1（5只）、D2（5只）、D7（5只）3个亚组。采用双侧肾蒂夹闭法建立缺血再灌注急性肾损伤模型。Sham+veh组和Sham+kl组小鼠定位肾蒂但不夹闭,其余操作同上。Sham+kl组和I/R+kl组予再灌注后30min腹腔注射360ngKlotho蛋白注射液,Sham+veh组和I/R+veh组腹腔注射0.2ml0.9%氯化钠注射液。于造模术后第1、2、7天收集小鼠血、尿、肾脏标本。分别检测血肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）值,HE染色观察肾小管损伤程度,免疫组化法观察肾脏组织炎症细胞浸润情况及Klotho表达情况,ELISA法检测血Klotho和尿中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）水平,real-timePCR及Westernblot法分别检测肾脏组织Klotho、凋亡相关因子B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bax）、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、裂解的半胱氨酸蛋白酶（cleavedCaspase）-3的mRNA及蛋白表达。结果I/R+veh组小鼠遭受缺血再灌注损伤后肾功能显著下降,肾小管上皮细胞变性、坏死,至术后第7天明显好转。与Sham+veh组比较,I/R+veh组小鼠血Klotho蛋白水平于术后第1天明显降低,至术后第7天仍未能恢复正常,肾脏组织KlothomRNA及蛋白表达水平于术后第1天同样明显降低（均P＜0.05）。I/R+veh组小鼠肾脏组织Bax/Bcl-2mRNA及蛋白、cleavedCaspase-3蛋白表达水平均于术后第1天较Sham+veh组明显升高（均P＜0.05）,CD68+细胞浸润增多。外源性补充Klotho蛋白后,I/R+kl组肾脏组织Bax/Bcl-2mRNA及蛋白、cleavedCaspase-3蛋白表达水平分别较I/R+veh组下降30%、45%、62%（均P＜0.05）,CD68+细胞浸润减少。结论缺血再灌注急性肾损伤时Klotho表达下调;外源性补充Klotho蛋白可能通过抑制细胞凋亡及炎症细胞浸润等途径发挥肾脏保护作用。     

七氟烷预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤时 细胞凋亡以及能量代谢的影响

目的探讨七氟烷预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤时细胞凋亡以及能量代谢的影响。方法选取36只SD雄性鼠随机分为假手术组（S组）、缺血再灌注组（I/R组）和七氟烷预处理组（Sevo组）,每组各12只。I/R组制备脑缺血再灌注模型;Sevo组先连续4 d给予1.2%七氟烷60 min行预处理,24 h后制备局灶性脑缺血再灌注模型;S组仅接受手术、术中不插线栓。各组大鼠在再灌注24 h后进行神经功能缺损评估,采用TTC染色方法染色法测定脑梗死范围,TUNEL法检测凋亡脑细胞并计算凋亡指数,超微量ATP酶测试盒检测Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase活性,Westernblot法检测Caspase-3及Bcl-2的蛋白表达水平。结果 Sevo组神经功能缺损评分,脑缺血损伤面积明显小于I/R组（P <0.01）,TUNEL阳性细胞明显少于对照组（P <0.05）。Sevo组脑组织中Na+-K+-ATPase、Ca2+更多     

炎性小体在右美托咪定减轻大鼠肾缺血再灌注损伤中的作用

目的 评价炎性小体(NLRP3)在右美托咪定减轻大鼠肾缺血再灌注损伤中的作用。方法 清洁级成年雄性Sprague-Dawley 大鼠32只,采用数字表法随机分为假手术组(Sham组,n=8)、肾缺血再灌注损伤组(I/R组,n=8)、肾缺血再灌注损伤+右美托咪定预处理组(I/R+Dex预处理组,n=8)(于缺血前1h腹腔注射右美托咪定10μg/kg)和肾缺血再灌注损伤+右美托咪定后处理组(I/R+Dex后处理组,n=8),于再灌注后1h腹腔注射右美托咪定10μg/kg。肾缺血再灌注损伤模型采用夹闭双侧肾动脉45min后,恢复灌注24h。采用全自动生化分析仪测定各组血肌酐(Cr)和血尿素氮(BUN);酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清TNF-α和IL-10的水平;TUNEL法检测各组凋亡细胞的数量;Western blot法检测NLRP3、凋亡信号(caspase-1、Cleaved caspase-1、Bcl-2)的表达。结果 与Sham组比较,I/R组血清Cr和BUN、炎性标志物(TNF-α和IL-10)水平及肾组织NLRP3、caspase-1和Bcl-2表达水平明显升高(P<0.05),同时肾小管凋亡细胞显著增多(P<0.05);与I/R组比较,I/R+Dex预处理组和I/R+Dex后处理组血Cr和BUN、TNF-α和IL-10水平均明显降低(P<0.05),肾组织NLRP3、caspase-1、Cleaved caspase-1和Bcl-2表达水平显著降低;肾小管凋亡细胞显著减少(P<0.05)。结论 右美托咪定可显著减轻大鼠肾缺血再灌注损伤,其可能与抑制NLRP3,降低炎性反应和细胞凋亡有关。     

参附对大鼠肠缺血再灌注时肠上皮细胞Caspase-3,Bcl-2基因表达的影响

目的研究参附注射液(简称参附)对大鼠肠缺血再灌注期间黏膜上皮细胞凋亡的影响,并探讨其可能机制.方法采用大鼠肠缺血再灌注模型.24只大鼠随机分为对照组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)和参附治疗组(SF组),SF组于阻断前30 min静注SF液2 mL/100g.再灌注2 h检测回肠黏膜上皮细胞Cas-pase-3,Bcl-2蛋白的表达及细胞凋亡;同时观察小肠黏膜病理形态学改变.结果凋亡细胞检测显示I/R组凋亡细胞显著增多,SF组凋亡细胞数较I/R组显著减少而多于C组(均P＜0.05);Caspase-3,Bcl-2蛋白的表达Caspase-3表达I/R组显著多于SF组和C组(P＜0.01),SF组与C组无明显差异;Bcl-2表达SF组显著高于I/R组(P＜0.05),后者显著低于C组(P＜0.05);SF组小肠黏膜病理损伤程度明显减轻I/R组(P＜0.01).结论参附注射液通过抑制Caspase-3表达和促进Bcl-2基因表达减少缺血再灌注期间肠黏膜上皮细胞的凋亡,从而减轻肠黏膜缺血再灌注损伤.     

电针预处理对脑缺血再灌注大鼠皮质神经元TRPC6表达的影响

目的观察电针预处理对脑缺血再灌注大鼠皮质神经元TRPC6表达的影响,探讨其对神经元可能的保护机制。方法将SD大鼠随机分为假手术组、模型组和电针预处理组,每组8只。采用大脑中动脉栓塞法制备脑缺血再灌注模型。电针预处理组在造模前取"百会"和"大椎"穴给予电针刺激。造模后24h进行神经功能评分并急性分离大鼠皮质神经元,通过蛋白免疫印迹(western blot)检测神经元TRPC6和Caspase-3蛋白表达,钙影像检测细胞内相对钙离子浓度。结果与假手术组比较,模型组大鼠的神经功能评分明显增高(P0.05),大脑皮质神经细胞TRPC6和Caspase-3蛋白表达明显增高(P0.05),神经元内钙离子浓度升高(P0.01);与模型组比较,电针预处理组能明显改善脑缺血再灌注后大鼠的神经功能症状(P0.05),抑制大脑皮质神经细胞TRPC6和Caspase-3蛋白表达(P0.05),并降低细胞内钙离子浓度(P0.01)。结论电针预处理对脑缺血再灌注大鼠脑损伤有保护作用,其机制可能与TRPC6下调,减少细胞钙离子内流从而抑制神经凋亡。     

阿托伐他汀预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤Caspase-3、Bcl-2表达的影响

[目的]探讨阿托伐他汀预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制.[方法]随机将48只雄性SD大鼠分为4组:对照组、假手术组、缺血再灌注组和阿托伐他汀预处理组.阿托伐他汀预处理组在模型制备前用阿托伐他汀20mg/kg连续灌胃10d,1次/d;假手术组及缺血再灌注组用相同体积的等渗盐水连续灌胃10d.以线拴法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,于缺血2h再灌注24 h后行5分制神经功能评分,并断头取脑分别测定脑梗死体积、凋亡细胞数及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 (Caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)表达.[结果]与对照组和假手术组比较,缺血再灌注组和阿托伐他汀预处理组神经功能缺损较为严重,脑梗死体积增大,凋亡细胞数目增多,Caspase-3、Bcl-2表达显著增加(P＜0.01).与缺血再灌注组相比,阿托伐他汀预处理组神经功能有不同程度改善,脑梗死体积明显减小,凋亡细胞数及Caspase-3表达降低,Bcl-2表达增高,比较差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).[结论]阿托伐他汀预处理对大鼠脑缺血再灌注有神经保护作用,其作用机制可能与阿托伐他汀上调脑组织中Bcl-2、下调Caspase-3表达,抑制细胞凋亡有关.     

δ阿片受体激动剂DADLE对急性全脑缺血再灌注大鼠脑组织Bcl-2、Caspase-3的影响

目的研究全脑缺血再灌注给予δ阿片受体激动剂DADLE前后大鼠脑组织Bcl-2、Caspase-3的表达情况,探讨DADLE在全脑缺血再灌注损伤中对Bcl-2、Caspase-3的影响及与脑保护作用的关系。方法健康雌性SD大鼠50只(180-220g)随机分为5组:假手术组(Sham,n=10):只暴露血管而不夹闭;缺血再灌注组(I/R,n=10):采用改良的二血管阻断加低血压法建立全脑缺血再灌注模型,缺血15min后给予再灌注;DADLE处理组分为2mg/kg组(A,n=10)、DADLE 3mg/kg组(B,n=10)、DADLE 5mg/kg组(C,n=10):在I/R组的基础上于再灌注前经颈外静脉注射DADLE。各组动物再灌注120min后处死,开颅取大脑组织,采用western-bolt技术检测大鼠脑组织Bcl-2、Caspase-3的表达状况。结果 western-bolt检测结果显示,sham组Bcl-2表达水平显著低于其他各组(P<0.05),且Sham组仅少量Caspase-3表达。DADLE处理组与I/R组相比,Bcl-2表达水平上调(P<0.05)而Caspase-3表达水平下调(P<0.05)。各给药组之间Bcl-2为B组与C组的表达显著高于A组(P<0.05),B组与C组间差异无统计学意义(P>0.05);Caspase-3表达水平为B组与C组的表达显著低于A组(P<0.05),而B组与C组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论药物DADLE可能通过上调Bcl-2的表达并抑制Caspase-3的表达,抑制神经细胞的凋亡,减低全脑缺血再灌注损伤,从而对大脑起保护作用。     

硫化氢预处理晚期对大鼠缺血再灌注心肌Bcl-2、Bax蛋白表达及CK-MB水平的影响

目的研究硫化氢预处理晚期对大鼠缺血再灌注心肌的保护作用及其机制。方法将30只健康成年雄性S-D大鼠随机分为假手术组（Sham组）、缺血再灌注组（IR组）和硫化氢预处理组（HS组）,每组10只。Sham组仅分离左冠前降支,不阻断血流150 minI,R组阻断左冠前降支30 min,再灌注120 min,HS组静脉注射硫化氢供体NaHS 50μg/kg,24 h后同IR组处理。于实验结束时抽取动脉血检测肌酸激酶同工酶（CK-MB）水平;取左室免疫印迹法测Bcl-2、Bax蛋白表达水平。结果与IR组比,HS组CK-MB水平下降,Bcl-2蛋白表达增多,Bax蛋白表达减少（均P〈0.05）。结论硫化氢预处理晚期通过上调Bcl-2蛋白表达、下调Bax蛋白表达和减少CK-MB释放来减轻缺血再灌注损伤发挥心肌保护作用。     

氢气对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤内质网应激及神经细胞凋亡的影响

目的 探讨吸入高浓度氢气(H2)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤(IRI)内质网应激(ERS)相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、半胱氨酸蛋白酶12 (Caspase-12)及脑皮质神经细胞凋亡和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达的影响.方法 选取72只健康成年SPF级雄性SD大鼠,将其分为对照组(Ⅰ组:不作任何处理)、假手术组(Ⅱ组)、脑IRI组(Ⅲ组)、氢气治疗组(Ⅳ组),每组18只.采用线栓法建立大鼠局灶性脑IRI模型.于再灌注24 h后行神经功能缺损评分(NDS),采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色观察大鼠脑缺血梗死程度并计算脑梗死面积,原位末端标记法(TUNEL)技术检测各组大鼠脑皮质神经细胞凋亡并计算凋亡指数(AI),Western blot法和免疫组织化学法检测大鼠脑皮质GRP78、Caspase-12、Bcl-2及Bax蛋白表达.结果 与Ⅰ、Ⅱ组比较,Ⅲ、Ⅳ组大鼠脑IRI后NDS、脑梗死面积、AI均明显增加,GRP78、Caspase-12、Bax蛋白表达明显升高,Bcl-2蛋白表达明显下降(P＜0.05);与Ⅲ组比较,Ⅳ组大鼠NDS、脑梗死面积、AI及Caspase-12、Bax蛋白表达明显减少,GRP78、Bcl-2表达明显增加(P＜0.05).结论 再灌注同时吸入高浓度H2可通过增加脑IRI后内质网GRP78蛋白表达,并抑制Caspase-12的激活进而抑制ERS并促进内质网功能修复,对大鼠脑IRI起到一定的保护作用.     

脑缺血再灌注损伤中FKBP51对JNK通路的影响

目的 探讨脑缺血再灌注损伤中FK506结合蛋白51（FKBP51）对c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路的影响.方法 采用四血管阻塞制作大鼠全脑缺血模型.将体质量220 ～ 250 g健康雄性清洁级SD大鼠按随机数字表法进行分组：假手术组、缺血再灌注组、FKBP51反义寡核苷酸组、FKBP51错义寡核苷酸组、溶剂对照组.假手术组仅电凝双侧椎动脉,不夹闭双侧颈总动脉;缺血再灌注组电凝双侧椎动脉,夹闭双侧颈总动脉;FKBP51反义寡核苷酸组在电凝双侧椎动脉时侧脑室注射反义寡核苷酸进行干预,连续注射3d,第4天夹闭双侧颈总动脉;FKBP51错义寡核苷酸组和溶剂对照组侧脑室分别注射等体积错义寡核苷酸和TE buffer.除假手术组外,其余各组均缺血15 min后复灌不同时间点,然后分别断头取海马用于免疫印迹和免疫沉淀,检测各组中FKBP51蛋白表达;检测FKBP51反义寡核苷酸对FKBP51蛋白表达和JNK、c-Jun磷酸化的影响.结果 （1）FKBP51反义寡核苷酸组的FKBP51蛋白表达量明显减少,与假手术组差异有统计学意义（P＜0.05）.（2）各组之间JNK总蛋白的表达差异均无统计学意义（P＞0.05）.假手术组p-JNK的表达量明显少于其他组,差异有统计学意义（P＜0.05）;缺血再灌注3h组、溶剂对照组、FKBP51错义寡核苷酸组p-JNK的表达较高,三组之间的差异无统计学意义（P＞0.05）;与FKBP51错义寡核苷酸组比较,FKBP51反义寡核苷酸组p-JNK的表达量较少,差异具有统计学意义（P＜0.05）.（3）各组之间c-Jun总蛋白的表达差异均无统计学意义（P＞0.05）.假手术组p-c-Jun的表达量明显少于其他各组,差异有统计学意义（P＜0.05）;缺血再灌注6h组、溶剂对照组、FKBP51错义寡核苷酸组p-c-Jun的表达量较高,三组之间的差异无统计学意义（P＞0.05）;与FKBP51错义寡核苷酸组比较,FKBP51反义寡核苷酸组p-c-Jun的表达量较少,差异具有统计学意义（P?     

异氟醚延迟预处理对兔心肌缺血再灌注时 Bcl-2和caspase-3蛋白表达的影响

目的：观察异氟醚延迟预处理对兔心肌缺血再灌注时Bcl-2和caspase-3蛋白表达的影响,并探讨其心肌延迟保护效应的机制。 方法：40只成年雄性新西兰大白兔随机分成4组:假手术组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)、异氟醚预处理组(S组)、异氟醚预处理+阿片类受体阻断剂组(N组)。除C组外,各组均接受左冠状动脉前降支阻断40 min,再灌注120 min。S组在缺血前24 h时吸入2.0%异氟醚2 h,N组在吸入2.0%异氟醚前10 min,静脉注入阿片类受体阻断剂纳络酮6 mg/kg。再灌注结束后,测心肌梗死面积,免疫印迹法测Bcl-2和caspase-3蛋白的表达,透视电镜下观察心肌超微结构变化。 结果：与I/R组比,S组心梗面积(19.7%±2.8% vs 37.8%±1.7%)显著降低(P＜0.05),Bcl-2蛋白表达增高,caspase-3蛋白活性降低(P＜0.05),心肌病理损伤减轻。结论：异氟醚预处理对心肌延迟保护效应可能与其上调Bcl-2蛋白表达和下调caspase-3蛋白活性,抑制心肌细胞凋亡有关。     

异氟烷预处理对缺血再灌注损伤鼠脑组织中Bcl-2和Bax的mRNA表达的影响

目的:通过观察异氟烷(ISO)预处理对沙士鼠脑缺血再灌注(I/R)凋亡相关基因Bcl-2和Bax的mRNA在脑组织中的表达,探讨ISO预处理的作用机制。方法:50只沙士鼠随机分5组:SHAM组(假手术组),只分离双侧颈总动脉而未夹闭;I/R组,夹闭双侧颈总动5min后开放;ISO组,I/R前60min接受1.2%～1.5%的ISO预处理;5-HD ISO组,线粒体ATP敏感性钾通道(mitoKATP)阻滞剂5-HD 10mg/kg腹腔内注射30min后同ISO组;5-HD组,5-HD腹腔内注射30min后行I/R损伤。24h后取鼠前脑,采用RT-PCR检测脑组织中Bcl-2、Bax基因的mRNA表达。结果:ISO组Bcl-2的mRNA表达增高,与SHAM组和5-HD ISO组比较差异显著(P<0.05);I/R、5-HD ISO和5-HD组Bax的mRNA表达明显增高,与SHAM组比较差异显著(P<0.05)。结论:ISO预处理对沙士鼠脑I/R的保护作用可能就是通过激活mitoKATP通道,使Bcl-2结合到线粒体膜上的量增加,同时阻止Bax转录到线粒体膜上,稳定了线粒体,发挥细胞保护作用。     

缺血预处理对脑缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

目的：通过观察Toll样受体4（Toll-like receptors,TLR4）和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达变化,探讨缺血预处理对大鼠再灌注损伤的保护作用并研究其意义。方法：将36只SPF级健康雄性SD大鼠随机分为缺血预处理组（CIP组n=12）、缺血再灌注组（I/R组n=12）和假手术组（Sham组n=12）;I/R组采用线栓法阻断大脑中动脉（MCAO）2h建立模型,CIP组先给予MCAO阻断10 min,再灌注72 h后给予与I/R组相同的处理,假手术组仅分离血管。均于术后1d取材检测脑梗死体积、用 Zea Longa评分标准进行神经功能评分以及通过荧光实时定量PCR（Real-time Quantitative polymerase chain reaction）法测定TLR4和TNF-α mRNA水平的表达。结果：缺血再灌注后1 d各组大鼠比较,CIP组大鼠脑梗死体积明显低于I/R组,差异有显著统计学意义（P＜0.05）,CIP组大鼠的神经功能缺损评分明显低于I/R组,二者比较有显著性差异（P<0.05）。TLR4、TNF-α mRNA在CIP组与I/R组的表达明显高于Sham组,差异有显著统计学意义（P＜0.05,P＜0.01）,而二者在CIP组的表达明显低于I/R组（P＜0.05）。结论：缺血预处理能改善由再灌注损伤引起的功能障碍,可能通过下调促炎因子的表达来减轻脑组织缺血再灌注损伤,从而减轻炎症反应。     

参麦注射液对脓毒症模型大鼠肾脏细胞凋亡和Bcl-2/Bax蛋白表达的影响

目的:观察参麦注射液对脓毒症模型大鼠肾脏细胞凋亡及其Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法:45只SD大鼠随机分为假手术组、脓毒症模型组和参麦组,每组15只。采用盲肠结扎穿刺法(CLP)造模。脓毒症模型组术前1h腹腔内注射生理盐水10mL/kg,假手术组除不结扎和穿刺盲肠外,其余操作同脓毒症模型组。参麦组术前1h腹腔内注射参麦注射液10mL/kg。术后24h取大鼠肾脏组织,采用TUNEL法检测并计算肾脏细胞凋亡指数(AI),免疫组化检测Bcl-2和Bax蛋白表达。结果:三组大鼠体质量差异无统计学意义(P>0.05),三组大鼠均可见肾脏细胞凋亡,细胞凋亡多发生于肾小球细胞。脓毒症组和参麦组肾脏细胞AI均高于假手术组(P<0.01),参麦组肾脏细胞AI虽低于脓毒症组,但差异无统计学意义(P>0.05);与假手术组比较,脓毒症组和参麦组肾脏细胞Bcl-2表达下降(P<0.01,P<0.05),Bax表达上调(P<0.01),Bcl-2/Bax比值减小(P<0.01)。与脓毒症组比较,参麦组Bcl-2明显上调(P<0.01),Bax表达下调(P<0.05),Bcl-2/Bax比值增大(P<0.01)。结论:参麦注射液能上调脓毒症模型大鼠肾脏细胞Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,减少脓毒症大鼠肾脏细胞凋亡。