绞股蓝总皂苷对免疫性肝纤维化大鼠肝功能和肝纤维化的影响

目的:研究绞股蓝总皂苷(GPs)对免疫性肝纤维化大鼠肝功能和肝纤维化的影响。方法:36只大鼠随机分为正常对照组、肝纤维化组和GPs组3组,每阻各12只。采用人血清白蛋白攻击注射大鼠建立免疫性肝纤维化模型,GPs治疗组大鼠则在连续30 d给予白蛋白攻击注射的同时给予0.5 mg GPs。采用全自动生化仪检测血清中谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TBIL)、总胆汁酸(TBA)水平以评价肝功能,应用放射免疫法(RIA)检测血清中透明质酸(HA)、Ⅲ型胶原(PCⅢ)和层粘蛋白(LN)含量以评价肝纤维化程度,并以大鼠肝组织切片病理变化验证。结果:白蛋白攻击注射可显著升高肝纤维化大鼠血清中ALT、TBIL、TBA水平和HA、PCⅢ、LN水平(P<0.01,P<0.05)。GPs治疗可显著降低大鼠血清中 ALT、TBIL、TBA水平和HA、PCⅢ和LN水平(P<0.01,P<0.05)。GPs还可显著减少白蛋白攻击所致的胶原纤维生成,并改善大鼠肝纤维化病理损伤。结论:GPs可保护大鼠肝功能,抑制大鼠肝纤维化形成。     

三七总皂苷对肝纤维化大鼠肝脏超微结构的影响

目的探讨三七总皂苷(PNS)对肝纤维化大鼠肝脏超微结构的影响及意义.方法通过电镜观察大鼠肝脏的超微结构,以不同剂量PNS分别对肝纤维化大鼠进行预防和治疗.结果肝纤维化大鼠可出现肝细胞胞浆内肿胀空泡和脂滴、微绒毛稀少、窦内皮细胞肥胖、细胞器增多、Disse间隙内胶原纤维增生等超微结构改变.PNS可减轻大鼠肝纤维化模型肝细胞内脂滴形成、内质网增生、线粒体肿胀及间质胶原增生.结论无论治疗和预防组,PNS均可有效减轻肝纤维化大鼠肝脏超微结构的损伤.     

环状RNA-42398在肝纤维化模型中的表达变化及功能

目的：明确环状RNA-42398（mmu_circ_42398）在肝纤维化动物模型肝组织和细胞模型中的表达变化,并初步探讨其生物学功能。方法：制备小鼠肝纤维化动物模型,复制小鼠肝星状细胞（JS1）活化模型、小鼠肝细胞（AML12）氧化应激损伤模型、小鼠巨噬细胞炎症（RAW264.7）模型,分别设立正常组,qPCR检测mmu_circ_42398在上述模型肝组织和细胞中的表达变化,进一步采用生物信息学方法预测其靶基因,分析其生物学功能,绘制其ceRNA信号通路网络图。为了验证其功能,构建mmu_circ_42398过表达载体,将其转染至JS1细胞,然后检测细胞内a-SMA、ColI蛋白的表达改变。结果：相比对照组,mmu_circ_42398在小鼠肝纤维化模型肝组织中表达显著降低（P ＜0.05）,在JS1活化、AML12氧化应激损伤、RAW264.7炎症损伤3种细胞模型中表达均显著降低（P ＜0.05）。生物信息学分析预测mmu_circ_42398可能通过结合靶基因miR-338-3p从而影响肝星状细胞的活化。在JS-1细胞中过表达mmu_circ_42398后,a-SMA、ColI蛋白表达显著降低（P ＜0.05）。结论:mmu_circ_42398表达在肝纤维化模型中发生了明显变化,其可能通过抑制肝星状细胞的活化,参与了肝纤维化的进展。     

比色法测定黄芪总皂苷的含量

目的：建立黄芪总皂苷的含量测定方法。方法：采用比色法测定黄芪总皂苷。结果：总皂苷在0.06～0.6 mg范围内具有良好的线性关系（R=0.9998）,回收率为98.25%,RSD为0.44%。结论：该方法操作简便、快速、有效、灵敏、准确、具有良好的重复性和回收率,可作为黄芪总皂苷的含量测定方法。     

黄芪与肝纤维化的研究

黄芪是豆科植物膜荚黄芪A .membranaceus(Fisch)Bge .、蒙古黄芪Astragalusmembranaceus(Fish)Bge.var.mongholicus(Bge)的干燥根,主要含三萜皂甙、黄酮类化合物以及黄芪多糖,是一种扶正补气的中药,2 0世纪80年代对黄芪免疫功能研究较多,常用于与免疫有关疾病的治疗,90年代开始黄芪各成分的研究,发现黄芪的三种提取成分具有抗氧自由基和膜脂质过氧化作用[1 ] ,黄芪总皂甙对病毒性心肌损伤有保护作用,可提高心肌肌浆网钙泵的活力,减少细胞内钙超载等[2 ] ,90年代后期王宝恩等研究了中药86 1合剂(以黄芪为主药成分之一的中药合剂)以及单味…     

比色法测定黄芪中黄芪总皂苷含量

目的:建立黄芪中黄芪总皂苷的含量测定方法.方法:采用比色法测定黄芪中黄芪总皂苷的含量.结果:比色法测定的线性范围为43～258 μg,相关系数r=0.999 6;平均回收率为100.32%,RSD为1.34%(n=6).结论:本法简便、准确、灵敏度高、重复性好,可用于黄芪药材及含黄芪制剂的含量测定.     

黄芪总皂苷提取工艺研究

目的研究黄芪总皂苷最佳提取工艺.方法采用正交设计法优选,以黄芪甲苷、黄芪总皂苷和总提取物为检测指标.结果最佳提取条件为:70%乙醇回流提取2次,每次2小时,第1次加8倍量,第2次加6倍量.结论醇提工艺中黄芪甲苷和总皂苷的得率高于水提工艺.     

黄芪对肝纤维化的防治作用

目的：观察黄芪的抗肝纤维化作用,初步探讨黄芪抗肝纤维化的机制。方法：设立正常对照组、模型组和黄芪处理组,以四氯化碳（CCl4）皮下注射复制大鼠肝纤维化模型,黄芪处理组在造模的同时给予皮下注射黄芪注射液。常规HE染色观察肝脏病变,天狼猩红胶原染色、肝组织羟脯氨酸（HYP）含量测定观察肝纤维化程度;产色基质偶氮法鲎试剂定量测定血浆内毒素,赖氏法测定血浆丙氨酸氨基转移酶（ALT）;TBA法检测肝组织丙二醛（MDA）水平。结果：黄芪处理组与模型组比较,①肝脏的损伤性改变有所减轻,肝组织HYP及肝纤维化指数（FI）明显降低;②血浆内毒素含量、ALT及肝组织MDA均有不同程度的降低。结论：黄芪可减缓肠源性内毒素血症,可能为防治肝纤维化的作用机制之一。     

大孔吸附树脂纯化黄芪总皂苷的研究

目的研究黄芪总皂苷的大孔吸附树脂分离纯化工艺,为黄芪总皂苷的工业化生产提供参考。方法采用AB-8大孔吸附树脂对黄芪总皂苷进行吸附纯化,以黄芪总皂苷的收率、质量分数为考察指标综合评价。结果60%乙醇提取树脂吸附后用不同体积分数乙醇洗脱,黄芪总皂苷主要集中在40%～80%乙醇部位。树脂对黄芪总皂苷的动态吸附率为10.78mg/mL树脂;不同浓度NaOH溶液对杂质的洗脱效果不同,以0.1%NaOH溶液洗脱效果较好。结论黄芪提取物上AB-8树脂柱,以水和0.1%NaOH洗脱后以80%乙醇洗脱黄芪总皂苷部位可使黄芪总皂苷的收率和质量分数达到较满意效果。     

橘皮素通过抑制Notch信号通路干预小鼠肝纤维化进程

目的 探讨橘皮素对胆汁淤积性肝纤维化小鼠模型的治疗机制。方法 将45只C57BL/6J小鼠随机分为假手术组（n=10）、胆总管结扎手术（biliary duct ligation, BDL）模型组（n=15）、橘皮素治疗组（n=10）及单纯橘皮素用药组（n=10）。药物治疗组中,BDL手术10d后开始橘皮素灌胃,模型建立30d后采血处死各组小鼠并留取肝组织。通过H-E染色、Masson及天狼星红染色分析各组小鼠肝组织纤维化程度;采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测各组小鼠血清肝功能指标丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)及纤维化指标透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)水平;通过蛋白质印迹、荧光定量聚合酶链反应(PCR)、免疫组织化学方法检测各组小鼠肝组织中羟脯氨酸(Hyp)含量及Notch通路各组分表达量变化;通过免疫组化法检测肝纤维经典通路TGF-β1/smads通路各组分表达量变化。结果 造模30d后,与BDL模型组相比,橘皮素治疗组小鼠肝纤维化假小叶减少,纤维化病理评分值低（P<0.05）;胶原纤维沉积减少（P<0.05）,Ⅰ型胶原纤维总量减少（P<0.05）;小鼠肝功能指标ALT、AST明显降低（P<0.05）,纤维化指标HA、LN降低（P<0.05）;Hyp含量降低（P<0.05）,Notch信号通路组分Notch1、RBPJ、Hes1、Hey1蛋白及RNA表达量均下调（均P<0.05）;肝纤维化TGF-β1/smads经典通路组分TGF-β1、smad2及smad3表达量下调（均P<0.05）。结论 橘皮素作为Notch信号通路抑制剂可通过与TGF-β1/smads通路相互作用延缓肝纤维化进程。     

125I粒子植入小鼠肝脏对肝纤维化血清指标的影响

目的:观察不同剂量125I粒子植入小鼠肝脏后对肝纤维化血清指标的影响。方法:50只昆明小鼠随机分为正常对照组(A组)和不同剂量125I粒子(125I粒子放射性活度依次为0、18.5、37.0和74.0 MBq)植入组(依次为B、C、D、E组)共5组(n=10),30 d处死,采用ELISA法测定血清Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)、透明质酸(HA)和层粘连蛋白(LN)浓度。结果:E组PCⅢ、Ⅳ-C、HA和LN测定结果依次为(57.96±11.22)、(30.69±9.86)、(170.96±49.21)和(75.58±13.47)ng.ml-1,与A组比较P<0.05,其他各组的测定结果无明显统计学差异。结论:小鼠肝脏植入125I粒子放射性活度≤37 MBq时,对肝纤维化指标无明显影响,125I粒子放射性活度达74 MBq时会引发各项肝纤维化指标的升高。     

肝龙胶囊联合水飞蓟素体外 抗肝纤维化的实验研究

目的 观察肝龙胶囊联合水飞蓟素对人肝星状细胞系（LX-2）转化生长因子-β1（TGF-β1）、 肝纤维化指标表达的影响,以及体外抗肝纤维化作用。方法 体外培养LX-2 细胞,将对数期细胞分为水飞 蓟素用药组、肝龙胶囊联合水飞蓟素用药组、阴性组。采用酶联免疫吸附法检测TGF-β1、Ⅰ型胶原（Col- Ⅰ）、 Ⅲ型前胶原（PC Ⅲ）、Ⅳ型胶原（Ⅳ -C）、层粘连蛋白（LN）、透明质酸（HA）水平的变化;逆转录聚合 酶链反应（RT-PCR）检测Col-I、基质金属蛋白酶抑制剂1（TIMP-1）mRNA 的表达。结果 与水飞蓟 素用药组相比,肝龙胶囊联合水飞蓟素用药组TGF-β1 水平降低（P <0.05）;24 和48 h 时,LX-2 细胞LN、 HA、Col- Ⅰ水平降低（P <0.05）;24 h 时,PC Ⅲ、Ⅳ -C 水平降低（P <0.05）。与阴性组比较,肝龙胶囊联 合水飞蓟素用药组在高浓度联合时可降低LN、HA、Col- Ⅰ、Ⅳ -C 的含量（P <0.05）,在低浓度时则增加 LN、HA、Col- Ⅰ、Ⅳ -C 的含量（P <0.05）,对PC Ⅲ、TGF-β1 的水平无影响（P >0.05）。与水飞蓟素用 药组相比,肝龙胶囊联合水飞蓟素用药组降低TIMP-1 mRNA 的表达（P <0.05）,在高浓度联合并在72 h 时 降低Col- Ⅰ mRNA 的表达（P <0.05）,在低浓度联合时则增加Col- Ⅰ mRNA 的表达（P <0.05）。结论 肝 龙胶囊联合水飞蓟素可通过减少细胞外基质的生成,增强水飞蓟素体外抗肝纤维化作用。     

灵芪蠲肝液抗四氯化碳实验性大鼠肝纤维化的研究

目的研究灵芪蠲肝液对大鼠肝纤维化的防治作用。方法选用雄性Wistar大鼠，随机分为，正常对照、模型组、灵芪蠲肝液3个剂量组，肝苏颗粒阳性对照组。肝纤维化模型用40％的四氯化碳油液3mL／kg皮下注射，每周2次，连续10周。实验开始时，正常对照组除外，其余各组大鼠均皮下注射40％的四氯化碳油液3mL／kg，4周后各用药组开始给药，10周后麻醉大鼠，心脏取血，测定肝功能、血清一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和肝纤维化指标透明质酸（HA）、层粘连蛋白（LN）Ⅲ型前胶原（PCⅢ）、Ⅳ型胶原（CⅣ）；取肝制备10％肝匀浆，测定其中的丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和羟脯氨酸（HYP）水平，并取肝组织做病理检查。结果大鼠肝纤维化损伤时，ALT、AST活性及血清NO、HA、LN、PCⅢ、CⅣ和MDA含量及肝匀浆MDA、HYP明显增加。而ALB、SOD明显降低，与正常对照组比较差异有显著性（P〈0．05），与模型组比较灵芪蠲肝液可降低ALT、AST活性及血清NO、HA、LN、PCⅢ、CIV和MDA含量及肝匀浆MDA、HYP水平。而提高ALB、SOD含量，差异均有显著性（P〈0．05）。病理检查发现灵芪蠲肝液能减轻肝脂肪变性，减少纤维组织的增生。结论灵芪蠲肝液对四氯化碳实验性大鼠肝纤维化具有防治作用。     

肝纤维化的SPIO增强磁共振成像研究

目的旨在通过动物肝纤维化模型的超顺磁性氧化铁（SPIO）增强磁共振（MR）研究,分析不同程度肝纤维化对SPIO增强效应的影响。方法肝纤维化大鼠21只及正常大鼠8只于注射SPIO前及60min后行T2加权MR扫描。测量图像的信号强度（SI）,计算信噪比（SNR）和信号强度变化百分比。肝脏标本行组织学检查,根据Scheuer的肝纤维化分期标准将大鼠分为4组。结果正常及肝纤维化组的SI及SNR于增强前后差异有显著性（P〈0.01）。肝纤维化分期与信号强度变化百分比的Spearman相关分析显示无相关性存在（P=0.212,r=0.239）。结论SPIO在肝纤维化与正常肝脏具有同样有效的增强作用。SPIO对肝脏增强效果的降低与慢性肝脏疾病的损害程度无显著相关。     

中和白细胞介素 17 对博来霉素诱导小鼠肺纤维化的干预作用

目的??初步探讨中和白细胞介素 17（IL-17）对博来霉素（BLM）诱导小鼠肺纤维化形成过程的 干预作用及其机制。方法??96 只小鼠随机分为 4 组,即抗体干预组、同型抗体对照组（IgG2A 组） 、博来霉素 组（BLM 组） 、正常对照组（NC 组） 。气管内注射 BLM 使小鼠急性肺损伤诱导肺纤维化形成, NC 组则给予 等量生理盐水。复制模型后第 4、9、14、19 和 22 天抗体干预组小鼠尾静脉注射 IL-17A 中和抗体, IgG2A 组 注射同型抗体 IgG2A; BLM 组和 NC 组则注射等量生理盐水。在培养的第 7、 14 和 28 天将 4 组小鼠分批处死, 取气管肺泡灌洗液（BALF）涂片进行细胞计数, ELISA 法检测 IL-1β、 IL-10、 IL-17A、 IFN-γ 含量的变化; 检测小鼠肺组织羟脯氨酸（HYP） 、丙二醛（MDA）及活性氧（ROS）等生化指标,并评价各组小鼠肺组织 的纤维化程度。结果??抗体干预组与 BLM 组比较,BALF 中细胞总数、淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞的 个数, IL-1β、IL-10、IFN-γ 的含量, 以及 HYP、MDA、ROS 的含量在各个时间点均降低（ P <0.05） ; 而 IgG2A 组上述指标在各个时间点与 BLM 组比较,差异无统计学意义（ P >0.05） 。结论??中和 IL-17A 对 BLM 所致的实验性小鼠肺纤维化模型具有一定的防治作用, 有利于延缓肺纤维化的进程。     

认识肝纤维化

了解肝纤维化的历史。从形态学、生化学、细胞学、免疫学和基因水平全面认识肝纤维化,并研究其重要性。     

Study on the anti-liver fibrosis effect of benefit liver granule and its mechanism in rats

Objective

To explore the effect of Benefit Liver Granule (BLG), a traditional Chinese medical preparation, in antagonizing liver fibrosis and its possible mechanism.

Methods

Carbon tetrachloride was used to establish the experimental liver fibrosis model of rat. The model rats were randomly divided into 4 groups and BLG, Astragalus (As), Salvia (Sa) and normal saline (for control) respectively were given to them by gastrogavage. Changes of serum alanine transaminase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), transforming growth factor α(TGF-α), interleukine-6 (IL-6), liver content of hydroxyproline (Hyp), superoxide dismutase (SOD), malonyldialdehyde (MDA) as well as liver pathology after treatment were observed. A normal control group was also established for control.

Results

Pathological examination showed that in the saline group, the structure of normal hepatic lobuli was destroyed with swelled liver cells, focal necrosis, extensive fatty degeneration, and focal inflammatory cell infiltration. Small amounts of proliferated fiber tissue were found in the intra-lobular area, peri-central vein area, portal area and limiting plate area, and formation of pseudolobuli was also seen. In the 3 treated groups, the serum ALT, AST, TGF-α and IL-6 as well as liver content of Hyp, and MDA were lower and SOD were higher than those in the control group significantly,P<0.05 orP<0.01.

Conclusion

BLG, As and Sa have the action of anti-liver fibrosis, while BLG has the best effect. The mechanisms are probably related to their effects in regulating TGF-α and IL-6, reducing collagen fiber synthesis, promoting free radical scavenge and anti-lipid peroxidation.