聚乙交酯丙交酯纳米粒装载氨基酮戊酸光动力疗法对A431细胞的杀伤效应

【摘要】 目的 制备装载氨基酮戊酸（ALA）的聚乙交酯丙交酯纳米粒（PLGA NP）,增强ALA光动力体外杀伤人皮肤鳞癌A431细胞的效应。方法 改良复乳溶剂挥发法制备ALA PLGA NP,并对其粒径、包封率、载药量和形态进行表征。用透射电镜观察体外培养的A431细胞吸收ALA PLGA NP后的形态;用多功能酶标仪测定24 h内0.1 mmol/L ALA组、1 mmol/L ALA组、ALA PLGA NP组（含0.1 mmol/L ALA）、PLGA NP组生成的原卟啉IX（PpIX）荧光强度变化以确定最佳孵育时间。将培养A431细胞分为对照组、0.1 mmol/L ALA避光组、1 mmol/L ALA避光组、ALA PLGA NP避光组、PLGA NP避光组、单纯照光组、0.1 mmol/L ALA PDT组、1 mmol/L ALA PDT组、ALA PLGA NP PDT组、PLGA NP PDT组,对照组及各避光组严格避光,PDT组及单纯照光组用He-Ne激光照射,用噻唑蓝法测定其细胞杀伤效应。将A431细胞分为对照组、ALA PDT组、ALA PLGA NP PDT组,对照组避光,PDT组采用He-Ne激光照射,12、24 h后用流式细胞仪分析细胞凋亡情况。 结果 ALA PLGA NP呈球形,平均粒径为（65.6 ± 26.0） nm,包封率为（65.8 ± 7.2）%,载药量为（0.62 ± 0.27）%。ALA PLGA NP能被A431细胞吸收并聚集于细胞质中。PpIX荧光动力学检测显示24 h内ALA组、ALA PLGA NP组荧光强度随时间增加而上升。当孵育6 h、24 h时,ALA PLGA NP组生成的PpIX荧光强度均高于0.1 mmol/L ALA（均P < 0.01）。ALA PLGA NP PDT组对A431细胞的杀伤效应也明显强于0.1 mmol/L ALA PDT（6 h：t = 35.685,P < 0.01;24 h：t = 5.262,P < 0.01）。ALA PLGA NP PDT组细胞的凋亡率也高于ALA PDT组（12 h：t = 9.074,P < 0.01;24 h：t = 9.095,P < 0.01）。 结论 ALA PLGA NP能提高PpIX生成量,增强ALA PDT对A431细胞的体外杀伤效应以及ALA PDT诱导肿瘤细胞凋亡的效应。 【关键词】 肿瘤,鳞状细胞; 光化学疗法; 氨基酮戊酸; 纳米粒子     

氨基酮戊酸光动力疗法诱导中波紫外线应激性衰老成纤维细胞发生凋亡

目的 研究氨基酮戊酸光动力疗法（ALA-PDT）对中波紫外线（UVB）应激性衰老成纤维细胞（UVB-SIPS-FB）的氧化损伤和凋亡作用。 方法 正常成纤维细胞及UVB-SIPS-FB均分为2 h和6 h孵育组,每组内再分为7组：对照组、ALA组、100 J/cm2照光组、3组不同红光照射剂量ALA-PDT处理组（25 J/cm2组、50 J/cm2组、100 J/cm2组）及抗氧化剂NAC + 50 J/cm2红光照射ALA-PDT处理组。采用635 nm红光（能量密度50 mW/cm2）照射处理后,使用荧光显微镜、流式细胞仪检测各组细胞中活性氧及线粒体膜电位水平;Hoechst染色、流式细胞仪检测细胞凋亡率。数据用SPSS 13.0软件分析,多组间均数行单因素方差分析,结合q检验。结果 孵育2 h, 25、50、100 J/cm2 ALA-PDT组UVB-SIPS-FB凋亡率（分别为7.34% ± 0.87%、8.39% ± 1.16%、17.03% ± 1.29%）较对照组（3.81% ± 0.59%）上升（F = 102.70,均P < 0.05）,NAC + 50 J/cm2 ALA-PDT组凋亡率（5.35% ± 0.58%）下降（P < 0.05）;孵育6 h,25、50、100 J/cm2 ALA-PDT组UVB-SIPS-FB凋亡率（分别为13.85% ± 1.71%、23.40% ± 2.14%、41.02% ± 2.73%）较对照组（5.09% ± 1.64%）显著上升（F = 106.00,均P < 0.05）,NAC + 50 J/cm2 ALA-PDT组凋亡率（9.97% ± 3.23%）显著下降（P < 0.05）。单纯ALA组或照光组UVB-SIPS-FB凋亡率与对照组差异均无统计学意义。ALA-PDT处理组细胞活性氧荧光强度显著上升,线粒体去极化增强,这些现象与ALA孵育时间及红光照射剂量均呈量效依赖性关系。使用抗氧化剂NAC预处理可以减少ALA-PDT诱导的活性氧增多及线粒体去极化增强,与凋亡率变化一致。 结论 ALA-PDT可诱导UVB-SIPS-FB出现明显的细胞凋亡,其作用机制可能与ALA-PDT对细胞的氧化损伤有关。     

ALA-PDT对皮肤鳞状细胞癌A431细胞甲基化及Gadd45a表达的影响

目的探究5-氨基酮戊酸光动力疗法(ALA-PDT)对皮肤鳞状细胞癌(简称皮肤鳞癌)A431细胞甲基化及Gadd45a表达的影响。方法培养皮肤鳞癌A431细胞,将细胞分为对照组以及不同剂量的ALA-PDT处理组(ALA浓度分别为:0.1、0.5、2mmol/L),MTT检测各组细胞增殖活力。分别采用q PCR和Western blot方法检测ALA-PDT处理后A431细胞Gadd45a mRNA及Gadd45a蛋白表达。流式细胞术检测ALA-PDT处理后各组细胞凋亡率,并进一步观察经ALA-PDT处理后对A431细胞DNA总体甲基化水平的影响。结果不同ALA浓度(0.1、0.5、2mmol/L)ALA-PDT处理后,随ALA浓度上升A431细胞增殖抑制率及细胞凋亡率均呈逐渐升高的趋势(P均0.05);经不同ALA浓度(0.1、0.5、2mmol/L)ALAPDT处理后A431细胞Gadd45a蛋白表达水平随ALA浓度上升而上升,而ALAPDT组DNA总体甲基化显著下降,与对照组相比差异有统计学意义(P0.05)。结论 ALA-PDT治疗通过促进Gadd45a蛋白表达抑制皮肤鳞癌A431细胞增殖并促进凋亡,过表达的Gadd45a蛋白可抑制A431细胞DNA甲基化。     

氨基酮戊酸光动力疗法抑制成纤维细胞生长因子10诱导的HaCaT细胞过度角化及增殖的机制研究

目的 探讨氨基酮戊酸光动力疗法（ALA-PDT）对成纤维细胞生长因子10（FGF-10）诱导的HaCaT细胞过度角化及增殖的作用及其机制。 方法 将培养的HaCaT细胞分为4组：空白对照组（无任何处理）,FGF-10组（加入FGF-10孵育24 h）,ALA-PDT组（ALA孵育24 h后红光照射）,FGF-10 + ALA-PDT组（FGF-10孵育24 h后,再加ALA孵育24 h,红光照射）。用CCK-8法检测各组细胞增殖活性,Western印迹法检测K1、K6、K16及角质形成细胞生长因子受体（KGFR）的含量,ELISA法检测各组细胞上清液中白细胞介素1α（IL-1α）蛋白表达,免疫荧光检测各组细胞KGFR和K6蛋白表达水平。统计学分析采用析因设计的方差分析和单因素方差分析。结果 析因分析显示,ALA-PDT和FGF-10对HaCaT细胞增殖无交互作用（F交互 = 1.369,P = 0.276）,FGF-10对HaCaT细胞增殖有促进作用（FFGF-10 = 20.853,P < 0.05）,而ALA-PDT有抑制作用（FALA-PDT = 24.822,P < 0.05）。与空白对照组细胞增殖活性（A值为0.924 ± 0.024）比较,FGF-10组（1.233 ± 0.099）显著升高（P < 0.05）,而ALA-PDT组（0.718 ± 0.107）显著降低（P < 0.05）,FGF-10 + ALA-PDT组（0.901 ± 0.014）较FGF-10组显著降低（P < 0.05）。Western印迹法显示,FGF-10可促进K1、K6、K16蛋白和KGFR的表达（均P < 0.05）,而ALA-PDT抑制这些蛋白的表达（均P < 0.05）,FGF-10 + ALA-PDT组K1、K6、K16和KGFR的相对表达量与FGF-10组比较均显著降低（均P < 0.05）。ELISA法显示,FGF-10会增加HaCaT细胞IL-1α蛋白分泌（P < 0.05）,但ALA-PDT对其没有影响（P = 0.467）。此外,免疫荧光检测显示,FGF-10增加HaCaT细胞K6和KGFR免疫荧光强度（P < 0.05）,而ALA-PDT降低K6和KGFR免疫荧光强度（P < 0.05）,FGF-10 + ALA-PDT组K6和KGFR免疫荧光强度显著低于FGF-10组（P < 0.05）。 结论 ALA-PDT能抑制FGF-10诱导的HaCaT细胞过度角化及增殖,其机制与下调K1、K6、K16、KGFR及IL-1α有关。     

黄芩素对A431细胞埃兹蛋白表达及侵袭力的影响

目的 探讨黄芩素是否通过抑制埃兹蛋白来实现抑制A431细胞增殖、细胞周期进程及伪足的形成。方法 采用细胞划痕、微孔滤膜法（Transwell）检测黄芩素对A431细胞爬行的影响;RT－PCR检测黄芩素对A431细胞埃兹蛋白mRNA表达量的影响;Western印迹检测黄芩素及siRNA对A431细胞埃兹蛋白表达及其磷酸化的影响;扫描电镜观察黄芩素及siRNA对A431细胞伪足形成的影响。结果 细胞划痕实验显示,培养24 h时,黄芩素 5、10、20 μmol/L组细胞闭合宽度占原宽度的比例分别为13.3% ± 1.7%、7.6% ± 1.6%和5.9% ± 1.3%,黄芩素呈浓度依赖性抑制A431细胞爬行运动,黄芩素各组与阴性对照组（16.3% ± 2.3%）比较,差异均有统计学意义。Transwell实验证实,5、10、20 μmol/L黄芩素处理A431细胞48 h后,穿过人工基底膜的细胞数量分别为（46.5 ± 3.8）、（34.3 ± 3.4）和（25.3 ± 2.3）个/Hp,各处理组与阴性对照组（56.3 ± 3.8个/Hp）经方差分析,P < 0.01;而与siRNA组（28.3 ± 2.1个/Hp）比较,P > 0.05。Western印迹及RT－PCR检测显示,0、5、10、20、40 μmol/L黄芩素处理A431细胞48 h后,黄芩素呈浓度依赖性地抑制A431细胞埃兹蛋白/磷酸化埃兹蛋白及埃兹蛋白mRNA表达,埃兹蛋白mRNA与β-肌动蛋白mRNA灰度值之比值与阴性对照组比较,P值均 < 0.01;而与siRNA组比较,P > 0.05;埃兹蛋白、磷酸化埃兹蛋白在A431细胞中的表达量（与β-肌动蛋白灰度值之比）与阴性对照组比较,P值均 < 0.01;而40 μmol/L黄芩素处理组与siRNA处理组比较,P > 0.05。扫描电镜显示,48 h后20 μmol/L黄芩素组A431细胞伪足数量为（5.3 ± 1.9）个,长度明显缩短,与阴性对照组（22.6 ± 2.8个）比较,P < 0.01;siRNA组为（4.5 ± 2.8）个,与阴性对照组比较,P > 0.05。结论 黄芩素可能通过直接或间接抑制埃兹蛋白表达及其磷酸化而抑制A431细胞的增殖、爬行,从而达到抗肿瘤增殖及浸润转移的目的。     

光动力疗法对表达人乳头瘤病毒16 E7蛋白的HaCaT细胞株增殖和凋亡的影响

目的 探讨氨基酮戊酸光动力疗法（ALA-PDT）对表达人乳头瘤病毒16 E7蛋白的HaCaT细胞株（简称HaCaT/HPV16 E7）增殖和凋亡的影响。 方法 HaCaT/HPV16 E7细胞株分为4组,即空白组、单纯光敏剂组、单纯照射组（12 J/cm2）、不同光剂量（4、8、12 J/cm2）ALA-PDT组,细胞与氨基酮戊酸（ALA）共孵育5 h,采用波长630 nm、功率30 mW/cm2红光照射,CCK8法检测细胞24 h后存活率,流式细胞仪检测细胞3 h的凋亡率,显微镜观察细胞形态。 结果 空白组、单纯光敏剂组、单纯照射组（12 J/cm2）、不同光剂量（4、8、12 J/cm2）ALA-PDT照射细胞24 h,细胞生长存活率分别为99.15% ± 0.64%、98.13% ± 0.83%、96.85% ± 1.37%、68.98% ± 1.03%、46.03% ± 2.96%、23.57% ± 3.83%,后3组ALA-PDT组与其他3组比较,差异有统计学意义（均P < 0.05）。随着光剂量升高,细胞凋亡逐渐增加,细胞形态发生明显改变,细胞皱缩。 结论 ALA光动力抑制HPV感染细胞增殖并促进细胞发生凋亡,在一定光剂量范围内,呈剂量依赖性。     

生存素小分子干扰RNA对皮肤鳞状细胞癌A431细胞生存素基因表达及生物学功能的影响

目的 探讨生存素小分子干扰RNA（siRNA）对皮肤鳞状细胞癌A431细胞生存素基因表达及细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭力的影响。方法 培养的A431细胞分为3组：生存素siRNA组、阴性对照组和空白对照组,分别用50.0 nmol/L脂质体包裹的生存素基因序列特异性siRNA、无关序列siRNA阴性脂质体及预制囊泡转染。实时定量反转录-聚合酶链反应（RT?PCR）、Western印迹法分别检测A431细胞生存素mRNA及蛋白的表达。采用MTT比色法检测细胞增殖,流式细胞仪膜联蛋白Ⅴ/碘化丙锭双染法检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭力,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果 转染后48 h,生存素siRNA组、阴性对照组、空白对照组A431细胞中生存素mRNA水平分别为0.56 ± 0.15、0.88 ± 0.37、0.90 ± 0.43,蛋白表达水平分别为0.59 ± 0.04、0.86 ± 0.05、0.91 ± 0.07,差异均有统计学意义（F = 276.67、243.61,均P < 0.001）,且生存素siRNA组生存素mRNA和蛋白表达水平均显著低于阴性对照组和空白对照组,差异均有统计学意义（P < 0.05）,而阴性对照组与空白对照组间差异无统计学意义（均P > 0.05）。重复测量方差分析显示,转染生存素siRNA能抑制A431细胞增殖（F = 13.19,P = 0.004）,且生存素siRNA组A431细胞增殖抑制率明显高于阴性对照组和空白对照组（均P < 0.05）,而阴性对照组与空白对照组比较,差异无统计学意义（P > 0.05）。转染后24 h, 3组间A431细胞凋亡率差异有统计学意义（F = 83.97,P = 0.002）,且生存素siRNA组A431细胞凋亡率显著高于阴性对照组（P < 0.05）和空白对照组（P < 0.05）,而阴性对照组与空白对照组间差异无统计学意义（P > 0.05）。转染后48 h,生存素siRNA组G2/M期细胞比例显著高于阴性对照组（P < 0.05）和空白对照组（P < 0.05）,而生存素siRNA组A431细胞迁移数及侵袭数均显著低于空白对照组（均P < 0.05）和阴性对照组（均P < 0.05）。结论 生存素序列特异性siRNA能抑制A431细胞生存素基因表达和细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制细胞迁移和侵袭,提示生存素可成为皮肤鳞状细胞癌基因治疗的靶点。     

西罗莫司和饥饿处理对人A431细胞自噬水平的影响

目的 探讨经典自噬诱导剂西罗莫司和饥饿处理对人皮肤鳞状细胞癌细胞系A431自噬水平的影响。方法 分别将A431细胞和人宫颈癌细胞系HeLa分为对照组（单纯DMEM培养基处理）、二甲基亚砜（DMSO）组、20 nmol/L西罗莫司组、80 nmol/L西罗莫司组、平衡盐溶液（EBSS）组。作用4 h后,Western印迹检测A431细胞和HeLa细胞自噬微管相关蛋白轻链3A/3B（LC3A/B）、重组人γ?氨基丁酸受体相关蛋白（GABARAP）的表达水平。吖啶橙染色分析细胞自噬体表达水平。结果 Western印迹检测显示,对照组与DMSO组A431细胞中LC3A/B?Ⅱ与LC3 A/B?Ⅰ比值差异无统计学意义（P > 0.05）;20 nmol/L西罗莫司组、80 nmol/L西罗莫司组、EBSS组LC3 A/B?Ⅱ与LC3 A/B?Ⅰ比值较对照组均明显升高,差异均有统计学意义（P < 0.05）。HeLa细胞Western印迹检测结果与A431细胞类似。双变量相关性分析显示,HeLa细胞中LC3A/B?Ⅰ与GABARAP表达呈正相关（r = 0.869,95% CI：0.807 ~ 0.999,P = 0.051）,LC3A/B?Ⅱ与GABARAP表达呈负相关（r = -0.742,95% CI：-0.982 ~ 0.406,P = 0.042）;A431细胞中LC3A/B?Ⅰ与GABARAP表达亦呈正相关（r = 0.837,95% CI：-0.173 ~ 0.989,P = 0.037）,LC3A/B?Ⅱ与GABARAP表达呈负相关（r = -0.684,95% CI：-0.977 ~ 0.500,P = 0.047）。吖啶橙染色显示,A431细胞自噬阳性细胞比例在西罗莫司组（23.750% ± 0.260%）与EBSS组（32.450% ± 0.488%）同样高于对照组（15.987% ± 0.242%,均P < 0.05）;HeLa细胞自噬阳性细胞比例在西罗莫司组（33.307% ± 0.715%）和EBSS组（66.097% ± 1.141%）高于对照组（14.117% ± 0.295%,均P < 0.05）。结论 经典自噬诱导剂西罗莫司和饥饿能够上调A431细胞的自噬水平, GABARAP蛋白可能与LC3A/B高度相关。     

不同剂量ALA-PDT对皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖的抑制作用

目的:确定5-氨基酮戊酸-光动力疗法对皮肤鳞状细胞癌A431细胞抑制的最佳剂量。方法:体外培养人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株,应用MTT法检测不同ALA浓度(0.5、1、2 mmol/L)、不同PDT光照剂量(5、10、20、40 J/cm~2)下A431细胞的增殖水平。结果:当ALA浓度为0.5 mmol/L时,光照剂量为5、10、20、40 J/cm~2对A431细胞的抑制率分别为6%、10%、15%、18%;当ALA浓度为1mmol/L时,光照剂量为5、10、20、40 J/cm~2对A431细胞的抑制率分别为30%、52%、80%、82%;当ALA浓度为2 mmol/L时,光照剂量为5、10、20、40 J/cm~2对A431细胞的抑制率分别为31%、54%、81%、82%。结论:ALA在浓度为1 mmol/L,光照剂量为20 J/cm~2时,ALA-PDT对A431细胞增殖抑制效果达到最佳。     

3-甲基腺嘌呤增强ALA-PDT对皮肤鳞状细胞癌A431细胞的杀伤作用

目的探讨5-氨基酮戊酸光动力疗法(ALA-PDT)联合3-甲基腺嘌呤(3-MA)对皮肤鳞状细胞癌A431细胞的杀伤作用及其机制研究。方法体外培养人皮肤鳞状细胞癌A431细胞,设置不同的ALA浓度(0、0.20、0.40、0.80、1.60 mmol/L)及不同的培养时间(12、24、48 h),对A431细胞进行ALA-PDT处理,采用MTT法检测细胞增殖活性并计算半抑制浓度(IC_(50))值。根据实验需要将A431细胞分为空白对照组、ALA-PDT组、3-MA组和ALA-PDT+3-MA组。分组处理后,MTT法检测细胞增殖;流式细胞术分别检测细胞凋亡(Annexin V-FITC/PI双染法)以及细胞线粒体膜电位变化(JC-1染色法);单丹磺酰尸胺(MDC)染色法观察细胞自噬情况;Western blot检测凋亡和自噬相关蛋白的表达水平。结果 ALA-PDT对A431细胞的增殖活性有明显的抑制作用,且呈剂量和时间依赖性。与对照组比较,ALA-PDT组细胞增殖活性、线粒体膜电位均显著降低(P0.05),而细胞凋亡与自噬水平显著提高(P0.05),Cleaved-caspase-3、Bax、胞质Cyt C、LC-3Ⅱ、Beclin1等蛋白表达显著上调(P0.05),Bcl-2表达显著下调(P0.05)。与ALA-PDT组比较,ALA-PDT+3-MA组细胞增殖活性、线粒体膜电位以及细胞自噬水平显著降低(P0.05),细胞凋亡水平显著提高(P0.05),Cleaved-caspase-3、Bax、胞质Cyt C等蛋白表达显著上调(P0.05),而Bcl-2、LC-3Ⅱ、Beclin1等蛋白表达显著下调(P0.05)。结论 3-MA可通过抑制细胞自噬增强ALA-PDT对A431细胞产生的杀伤作用。     

氨基酮戊酸光动力疗法治疗SKH-1小鼠皮肤鳞状细胞癌作用机制研究

【摘要】 目的 探讨氨基酮戊酸光动力疗法（ALA-PDT）对小鼠皮肤鳞状细胞癌（SCC）的作用机制。 方法 先建立SKH-1无毛小鼠SCC模型,ALA-PDT治疗前即对照组3只,ALA-PDT治疗后1、3、6、12、24 h组各3只。以透射电镜及TUNEL法观察ALA-PDT治疗后1 ~ 24 h SCC组织肿瘤细胞死亡方式（坏死、凋亡、自噬）;以免疫组化技术检测治疗后7 d SCC组织细胞自噬标记物LC3B、肿瘤局部微血管CD34、肿瘤局部免疫细胞浸润包括树突细胞CD1a、CD4+ T淋巴细胞和CD8+ T淋巴细胞表达的变化。采用SPSS17.0软件进行统计学分析,两样本均数比较采用t检验。 结果 透射电镜观察发现,ALA-PDT治疗后24 h,肿瘤细胞逐渐发生坏死和凋亡,且以细胞坏死为主,巨噬细胞中可见自噬小体。TUNEL检测显示,肿瘤细胞凋亡显著增加（ALA-PDT治疗前及治疗后24 h分别为2.00 ± 0.69和7.30 ± 2.18,P < 0.05）。免疫组化显示,与治疗前比较,ALA-PDT治疗后7 d,CD34表达显著下降（分别为19.00 ± 2.66和1.33 ± 0.58,P < 0.01）,肿瘤局部CD1a表达明显增高（分别为10.33 ± 1.88和23.01 ± 2.04,P < 0.05）,CD4+ T细胞数（分别为12.40 ± 2.27和28.67 ± 1.76,P < 0.05）和CD8+ T细胞数（分别为11.67 ± 1.45和25.79 ± 2.37,P < 0.05）明显增多,同时肿瘤间质中LC3B表达明显增多（分别为21.44 ± 4.3和30.6 ± 3.21,P < 0.05）。 结论 ALA-PDT可通过细胞坏死和凋亡两种方式直接杀伤SCC细胞,未发现肿瘤细胞自噬性死亡;ALA-PDT可损伤SCC组织微血管内皮细胞,诱导局部树突细胞以及CD4+、CD8+ T细胞聚集。     

蛋白激酶D1及其磷酸化位点在皮肤鳞状细胞癌、Bowen病及光线性角化病组织中的表达

目的 探讨蛋白激酶DI(PKD1)及其磷酸化位点pPKD1-tyr463和pPKD1-ser916在鳞状细胞癌(SCC)、Bowen病和光线性角化病(AK)中的表达及意义.方法 收集新鲜SCC、Bowen病、AK及正常皮肤组织各10份,RT-PCR法检测各组样本中PKD1在基因水平的表达,Western印迹法检测各组样本中PKD1及其磷酸化位点在蛋白水平的表达.另收集蜡块组织SCC 50份、Bowen病20份、AK 20份及正常表皮组织10份,免疫组化检测PKD1、pPKD1-tyr463及pPKD1-ser916的表达情况.结果 正常皮肤组织、SCC、Bowen病和AK组织中PRKD1 mRNA的表达量分别为0.64±0.09、5.37±1.06、2.69±0.72和2.43±0.46,4组间差异有统计学意义(F=21.37,P＜0.05),且SCC、Bowen病和AK组织的表达水平均显著高于正常组织(P＜0.05),SCC组织又显著高于AK和Bowen病组织(均P＜ 0.05),而Bowen病与AK组织的表达量差异无统计学意义(P＞0.05).PKD1总蛋白及pPKD1-tyr463在SCC和Bowen病组织中主要表达在棘层细胞及异形细胞的细胞质和细胞膜,且阳性表达率均显著高于正常皮肤组和AK组(均P＜0.01);pPKD1-ser916仅在部分高分化SCC癌巢中少量表达,而低分化鳞癌、AK、Bowen病及正常皮肤组织中均未见表达;SCC组中PKD1阳性表达率随鳞癌病理分级的提高而增加,且PKD1与pPKD1-tyr463的表达呈正相关(rcc=0.479,P＜0.05).Western印迹检测结果与免疫组化检测结果大致相符.结论 PKD1及其磷酸化位点Tyr463可能参与复层鳞状上皮来源的皮肤肿瘤的形成和进一步发展分化,在皮肤SCC形成进程中PKD1可能通过Tyr463位点活化而发挥促进作用.     

氨基酮戊酸光动力疗法对鲜红斑痣动物模型鸡冠的影响

目的 探讨外用氨基酮戊酸光动力疗法（ALA-PDT）对鲜红斑痣（PWS）动物模型鸡冠的作用和治疗鲜红斑痣的可行性。 方法 80只莱亨鸡随机分为10组：空白对照组、单纯ALA组、单纯激光75 J/cm2组、100 J/cm2组、150 J/cm2、200 J/cm2组,ALA-PDT 75 J/cm2组、100 J/cm2组、150 J/cm2组、200 J/cm2组。单纯激光组仅给予630 nm红光照射,ALA-PDT组外用ALA后给予红光照射。干预14 d、28 d分别取材,观察鸡冠形态学、组织学变化,计算毛细血管减少率和血管内皮细胞凋亡情况。 结果 外用ALA-PDT 75 J/cm2、100 J/cm2、150 J/cm2和200 J/cm2组鸡冠实验区域颜色变淡,光镜下真皮毛细血管数目减少、管径变小,部分血管内皮细胞凋亡;毛细血管减少率分别为33.53% ± 4.89%、52.02% ± 2.77%、67.48% ± 5.58%、88.96% ± 2.47%;凋亡指数分别为：63.44 ± 1.09、88.50 ± 6.11、94.32 ± 3.67、113.76 ± 10.57,与其余各组分别比较,均P < 0.01;血管内皮细胞凋亡深度分别为：201.19 μm ± 0.33 μm、266.15 μm± 1.02 μm、546.09 μm ± 2.45 μm、766.37 μm ± 1.08 μm,各组间两两比较,均P < 0.01。 结论 外用ALA-PDT对鸡冠毛细血管有明显损伤,损伤程度和深度与红光能量密度相关;诱导血管内皮细胞凋亡可能是其治疗机制之一。     

手术联合氨基酮戊酸光动力治疗乳房外Paget病对复发的影响

目的 探讨外科手术治疗联合氨基酮戊酸（ALA）光动力疗法（PDT）对乳房外Paget病预后的影响。方法 通过前瞻性、开放性、对照研究,上海市皮肤病医院病理确诊的38例乳房外Paget病患者分为两组：单纯手术治疗组21例,手术联合ALA?PDT治疗组17例。手术联合ALA?PDT治疗组术后2周1次ALA?PDT治疗,共3次。38例患者3个月随访1次,随访 ≥ 12个月。对两组的复发情况进行比较。结果 随访时间（35.45 ± 16.98）个月（12 ~ 58个月）,单纯手术治疗组7例复发,中位复发时间9个月（6 ~ 18个月）;手术联合ALA?PDT治疗组1例复发,复发时间为治疗结束后18个月。手术联合ALA?PDT治疗组较单纯手术组复发率降低,两组比较差异有统计学意义（P < 0.05）。联合治疗组复发时间较单纯手术组有所延长。手术后行光动力治疗患者对疼痛等耐受性好。结论 手术联合ALA?PDT治疗能降低乳房外Paget病的术后复发,改善患者的预后。     

siRNA干扰水通道蛋白3和磷脂酶D2表达对A431细胞株生长和凋亡的影响

目的 探讨水通道蛋白3（AQP3）和磷脂酶D2（PLD2）在人皮肤鳞状细胞癌细胞株A431细胞增殖和凋亡中的作用。 方法 针对AQP3和PLD2各设计3条siRNA,用脂质体转染法将siRNA导入A431细胞。用荧光定量PCR方法筛选出其中干扰效果最佳的AQP3-siRNA和PLD2-siRNA,Western印迹法检测转染后AQP3和PLD2蛋白的表达水平。将A431细胞分为5组：正常培养组（不加任何处理）,转染试剂组（加入转染试剂）,阴性对照组（转染阴性对照siRNA）,AQP3-siRNA组（转染AQP3-siRNA）,PLD2-siRNA组（转染PLD2-siRNA）。CCK8法检测AQP3和PLD2表达下调对A431细胞增殖的影响,膜联蛋白-V-异硫氰酸荧光素/碘化丙锭双染色后用流式细胞仪检测细胞凋亡。 结果 用脂质体转染法将siRNA导入A431细胞后,AQP3和PLD2的mRNA和蛋白表达均较阴性对照组明显下降。与阴性对照组比较,转染AQP3-siRNA后A431细胞增殖在24、48、72 h均受到明显抑制（t值分别为24.10、11.00、9.54,均P < 0.01）;转染PLD2-siRNA后,A431细胞增殖同样在24、48、72 h均受到明显抑制（t值分别为30.47、7.02、8.73,均P < 0.01）。与阴性对照组比较,转染AQP3-siRNA后,A431细胞凋亡在48 h和72 h均明显增加（t值分别为11.36、20.91,均P < 0.01）;转染PLD2-siRNA后,A431细胞凋亡在72 h明显增加（t值为4.86,P < 0.05）。 结论 siRNA下调AQP3或PLD2表达可抑制A431细胞增殖,诱导A431细胞凋亡。