水通道蛋白1基因敲除小鼠的饲养繁殖与基因型鉴定

目的 繁殖和基因型鉴定水通道蛋白1（aquaporin-1，AQP-1）基因敲除小鼠。方法 将所引进的杂合子小鼠进行饲养并繁殖，繁殖成功后其子代中将会出现野生型、杂合子以及纯合子3种基因型，提取每只小鼠尾部基因组DNA，用PCR法进行鉴定，一旦获得雄性纯合子，将其与雌性杂合子交配，依照孟德尔遗传定律就有可能获得较多的基因敲除纯合子小鼠。结果AQP-1基因敲除杂合子小鼠的饲养和繁殖及鉴定均获得成功，并得到较多的基因敲除纯合子小鼠。结论正确的饲养繁殖以及鉴定方法是从亲代杂合子小鼠中获得AQP-1基因敲除纯合子小鼠的有效途径。     

水通道蛋白5基因敲除纯合子小鼠的获取

水通道蛋白(aquaporins,AQPs)是表达于动植物细胞膜表面的一类蛋白质,主要调控渗透压介导的水分子运动,也部分调控其他小分子如甘油、尿素等物质的跨膜运动.目前发现人类有12种AQPs的表达,主要表达于泌尿系统、消化系统、呼吸系统等部位液体流动量较大的细胞膜上.呼吸系统中主要表达AQP1、3、4、5四种分子,其中AQP1、AQP5在急性肺损伤的发病中具有重要作用[1-2],但二者的确切作用机制尚不很清楚,对其确切机制的探讨是目前研究的热点.     

水通道蛋白3基因敲除小鼠的饲养繁殖及鉴定

目的: 繁殖和鉴定水通道蛋白3(AQP-3)基因敲除小鼠。方法: 将引进的杂合子小鼠进行饲养并繁殖,繁殖成功后其子代中将会出现野生型、杂合子以及纯合子3种基因型,提取每种基因型小鼠尾部基因组DNA,用PCR法进行鉴定,将其雄性纯合子与雌性杂合子交配,依照孟德尔遗传定律就有可能获得较多的基因敲除纯合子小鼠。结果: AQP-3杂合子小鼠的繁殖和饲养均获得成功,亦获得了较多的基因敲除纯合子小鼠。结论: 正确的饲养繁殖以及鉴定方法是从杂合子中获得AQP-3基因敲除纯合子小鼠的有效途径。     

水通道蛋白4基因敲除对老年小鼠行为和脑形态变化的影响

目的：观察AQP4基因敲除（AQP4^-/-）对老年小鼠行为学和脑形态学变化的影响,揭示AQP4在脑老化中的作用。方法：58只CD-1小鼠按基因型与月龄分为4组：年轻（2~3个月龄）AQP4-/-组、老年（17~19个月龄）AQP4^-/-组、年轻AQP4^+/+组和老年AQP4^+/+组。采用开场试验测定小鼠运动量和探究行为,脑切片进行神经元特异性染色（甲苯胺蓝染色、NeuN染色）、星形胶质细胞特异性染色（GFAP染色）和小胶质细胞特异性染色（Iba-1染色）,观察并计数皮层和海马神经元、星形胶质细胞、小胶质细胞的形态和数量。结果：与年轻小鼠比较,老年AQP4^+/+和AQP4^-/-小鼠在开场试验的总活动距离分别减少41.2%和44.1%（P<0.05）,各组小鼠在中心区域的活动距离和滞留时间无差异;老年AQP4^+/+和AQP4^-/-小鼠皮层神经元密度分别降低19.6%和15.8%（P<0.05）,各组间CA1区神经元胞体层厚度无差异;老年AQP4^+/+和AQP4^-/-小鼠海马CA3区星形胶质细胞密度分别增加57.7%和64.3%（P<0.001）,各组间星形胶质细胞的总面积无显著差异;老年AQP4^+/+和AQP4^-/-小鼠海马CA3区小胶质细胞的面积分别增加46.9%和52.0%（P<0.01）,各组间小胶质细胞密度无显著变化。与AQP4^+/+小鼠相比,AQP4^-/-小鼠在海马CA3区星形胶质细胞总面积明显减小,年轻小鼠减小18.0%（P<0.01）,老年小鼠减小23.6%（P<0.01）,其余指标均无显著差异。结论：AQP4可能影响小鼠星形胶质细胞形态及与星形胶质细胞相关的神经功能,对神经元、小胶质细胞的形态和部分相关神经行为无明显影响,AQP4基因敲除对小鼠脑老化过程发生的脑形态和神经行为变化无显著影响。     

蛋白4.1R基因敲除小鼠的引种及繁殖

目的:引种、繁殖4.1R基因敲除小鼠,用于蛋白4.1R功能的研究.方法:按照国家进出境动物检验检疫的具体要求,对引种自美国的3对4.1R基因敲除小鼠进行隔离、检疫.引进的种鼠按照SPF动物饲养标准操作规程在IVC屏障系统中进行1雄1雌长期同居方式繁殖,C57BL/6J对照组小鼠采用同样方式饲养繁殖.定期观察记录种鼠的繁...     

ASIC1基因敲除小鼠的繁殖及基因鉴定

饲养并繁殖酸敏感离子通道1(ASIC1)基因敲除杂合子小鼠,提取小鼠尾部组织DNA,采用聚合酶链反应( PCR)方法鉴定子代小鼠基因型. ASIC1 基因敲除小鼠的繁育和鉴定均获得成功,子代小鼠基因型分别为杂合子( ASIC1+/-)、纯合子( ASIC1-/ -)和野生型( ASIC1+/ +).     

香草酸瞬时受体亚型1基因敲除雌性小鼠痛阈的变化

目的探讨TRPV1基因敲除后外周痛觉的改变。方法采用甩尾热痛仪和弗莱毛测痛法测量TRPV1基因敲除型及野生型雌性小鼠的热和机械痛阈,并进行比较。结果热刺激后,TRPV1基因敲除型雌性小鼠较野生型雌性小鼠的甩尾潜伏期延长[(3.59±0.65)s vs(2.19±0.24)s,P<0.05],两组间机械痛阈值差异无统计学意义[(1.71±0.57)g vs(2.13±0.81)g,P>0.05]。结论在生理条件下,TRPV1受体介导热刺激痛,与机械刺激痛无明显相关。     

类固醇受体辅活化子-1基因敲除小鼠的繁殖与筛选

目的 繁殖和鉴定SRC-1基因敲除小鼠.方法 将所引进的雄性野生型小鼠和雌性SRC-1基因敲除小鼠进行交配繁殖,繁殖成功后其子代均为杂合子,杂合子和杂合子再交配就可以得到野生型、杂合型及纯合子3种基因型,提取每只小鼠尾部基因组DNA,用PCR法进行鉴定,一旦获得雌性和雄性纯合子,其子代就均为纯合子.结果 SRC-1小鼠的饲养和繁殖均获得成功,亦成功获得了较多的SRC-1基因敲除纯合子小鼠.结论 正确的饲养繁殖以及筛选方法,可以获得较多的SRC-1基因敲除纯合子小鼠.     

FMR1基因敲除小鼠的繁殖及基因鉴定

目的繁殖和鉴定脆性X智力低下蛋白基因敲除小鼠。方法引进FMR1基因敲除小鼠,提取每只小鼠尾部基因组DNA,用PCR法进行鉴定,获得的雄性纯合子子代小鼠与杂合子雌鼠进行交配。结果 FMR1基因敲除小鼠的饲养和繁殖获得成功,获得较多的基因敲除纯合子小鼠。结论正确的饲养繁殖以及鉴定方法是获得FMR1基因敲除纯合子小鼠的有效途径。     

支架蛋白JLP基因敲除小鼠的构建及其肾脏表型的初步观察

目的 繁殖和鉴定支架蛋白JLP基因敲除小鼠,对其肾脏表型进行初步观察。方法 将JLP基因敲除杂合小鼠进行配种繁殖,提取子代小鼠的组织DNA,用PCR技术检测小鼠的基因型,并用Western blot法验证基因敲除效果。通过PAS病理染色等观察肾脏微观结构。结果 成功繁殖并获得子代小鼠,子代小鼠有3种基因型,包括纯合子（JLP+/+、JLP-/-）和杂合子（JLP+/-）。PCR检测基因型的方法方便且结果准确。结论 笔者成功建立了JLP基因敲除小鼠模型,能够进一步探究发现JLP基因对生物体的作用及机制。     

严重烧伤后大鼠心肌组织水通道蛋白-1表达变化及其意义

目的 探讨大鼠严重烧伤后心肌组织中水通道蛋白-1(AQP-1)的表达变化及意义.方法 健康成年Wistar大鼠48只,分为正常对照组(n=6)、烫伤组(n=42);采用30%TBSAⅢ度烧伤大鼠模型,其中单纯烫伤组又分为2、4、8、12、24、48、72 h组,每个时相点为6只动物.用于湿重法和ELSIA方法 分别检测烧伤后不同时间段心肌组织含水量和AOP1的表达变化.结果 严重烧伤后2 h心肌组织含水量增加及AQP1表达增强;烧伤后12 h达到高峰,烧伤后48 h仍高于正常;统计学分析表明,AQP1的表达与心肌组织含水量呈显著正相关(r=0.844,P<0.01).结论 严重烧伤后AQP1蛋白表达明显增强可能导致心肌组织含水量的增加.试验提示AOP1可能参与介导烧伤后心肌水肿的病理进程.     

Marcksl1基因敲除小鼠的建立及造血表型初步分析

目的 建立Marcksl1基因敲除小鼠,初步探究该基因缺失对造血系统发育的影响.方法 利用CRISPR/Cas9技术构建Marcksl1基因敲除小鼠,通过PCR技术以及Sanger测序方法鉴定小鼠基因型.通过将敲除小鼠与野生型小鼠杂交,分析敲除小鼠的传代情况.通过杂合子小鼠相互杂交,分析发育不同阶段纯合子、杂合子和野生...     

ApoE基因敲除小鼠海马神经元内β淀粉样蛋白的表达变化

目的 观察载脂蛋白E基因敲除(ApoE KO)对小鼠海马神经元内β淀粉样蛋白(Aβ)表达的影响,探讨其与神经退行性疾病的认知功能障碍之间的可能联系.方法 10只正常C57BL/6J小鼠予普通饲料喂养作为对照(C)组,10只ApoE-KO的C57BL/6J小鼠予普通饲料喂养作为KO组,10只ApoE KO的C57BL/6...     

地塞米松对小梁细胞水通道蛋白-1表达的影响

目的 观察地塞米松对培养的牛眼小梁细胞水通道蛋白-1(AQP-1)表达的影响.方法 应用含浓度为5,25,50,250μg/L的地塞米松培养液作用体外培养的第3～4代牛眼小梁细胞.7d后,免疫组织化学方法检测牛眼小梁细胞在不同浓度地塞米松作用下AQP-1的蛋白表达水平,与正常体外培养的细胞进行对照并进行定量分析.结果 正常牛眼小梁细胞可见AQP-1蛋白表达,其灰度值为184.83±1.52,在浓度为5,25,50,250μg/L地塞米松作用7d后,AQP-1蛋白表达灰度值分别为185.95±1.49,193.25±1.18,196.88±0.91,204.26±1.64.当地塞米松浓度≥25μg/L时出现抑制作用(P<0.05).结论 在体外培养条件下,地塞米松可抑制牛眼小梁细胞AQP-1的表达,这可能与糖皮质激素应用后房水流出阻力增加、眼压升高所继发的青光眼有关.     

小鼠嗅黏膜中水通道蛋白1对嗅觉形成的作用

目的 研究水通道蛋白1(aquaporin 1, AQP1)在小鼠嗅黏膜中的表达模式及其对嗅觉形成的作用.方法 应用免疫荧光和免疫印迹技术研究野生型和AQP1基因敲除小鼠嗅黏膜中AQP1的表达差异;采用埋藏食物小球实验(含对照实验)、嗅觉迷宫实验(含对照实验)2种嗅觉行为学方法以及气体刺激性嗅觉电位记录(electroolfactogram,EOG)检测2组小鼠嗅觉功能的差异.结果 免疫荧光和免疫印迹结果均证实了AQP1基因敲除小鼠嗅黏膜中没有AQP1的表达;免疫荧光结果表明AQP1主要分布于嗅黏膜的血管内皮细胞和嗅神经束膜上.行为学检测结果显示,埋藏食物小球实验中第1、2天2组寻找食物时间差异具有统计学意义(P<0.05),而第3天和对照实验之间无明显差异(P>0.05);嗅觉迷宫实验中2组除对照实验外,寻找食物时间差异具有统计学意义(P<0.05).气体刺激性诱发电位结果显示,2组小鼠嗅黏膜在不同气压强度饱和Trithylamine作用下的嗅觉电位波形相似,波幅均随气压的逐渐增加而增大;而在相同气压作用下,AQP1基因敲除小鼠嗅觉电位的波幅低于野生型小鼠,但差异无统计学意义(P>0.05).结论 AQP1主要分布在嗅黏膜的血管内皮细胞和嗅神经束膜上;AQP1基因敲除小鼠的嗅觉敏感性较野生型小鼠有一定程度的降低,但嗅神经元兴奋性没有差异.AQP1可能在嗅觉信号传递过程中发挥作用.     

小鼠水通道蛋白1基因慢病毒载体构建及其在神经膜细胞中的表达

目的 构建表达小鼠水通道蛋白1(AQP1)基因的慢病毒载体,体外感染原代培养的C57BL/6小鼠神经膜细胞,观察是否提高AQP1的表达,为进一步研究AQP1与周围神经系统损伤后水肿的关系奠定基础.方法 将小鼠AQP1基因克隆到慢病毒pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP载体,通过PCR和测序鉴定获得连接正确的克隆.将鉴定后的重组表达质粒pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP-AQp1与包装质粒psPAX2、pMD共转染293T细胞,制备携带AQP1基因的慢病毒lentivirus-AQP1.体外培养C57BL/6小鼠的神经膜细胞,将lentivirus-AQP1感染神经膜细胞,RT-PCR和蛋白质印迹法检测感染后神经膜细胞AQP1 mRNA和蛋白的表达情况.结果 构建的慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP-AQP1经PCR鉴定和测序正确.慢病毒lentivirus-AQP1感染神经膜细胞后AQP1表达增加(P＜0.05).结论 成功构建了小鼠AQP1基因的慢病毒表达载体,该载体能有效感染神经膜细胞,使AQP1 mRNA和蛋白表达水平增高.     

水通道蛋白-4在小鼠脑水肿早期中的表达

目的研究小鼠脑缺血性损伤后脑水肿早期水通道蛋-4(AQP-4)表达水平变化的趋势及其与脑水肿的关系。方法取健康雄性昆明小白鼠90只,随机分为实验组和对照组。用线栓法建立小鼠局灶性脑缺血损伤模型,于造模后6、12、24、48和72 h处死取脑,进行脑组织的含水量、免疫组化和Western blot检测。结果造模后12h与对照组比较,栓塞侧含水量显著增加(P<0.05)。免疫组织化学染色显示,AQP-4在脑组织水肿区域的表达增强。经Western blot分析,AQP-4的表达量在水肿脑组织中增加,造模后6h与对照组比较即有显著增加(P<0.05),72h仍然高于对照组(P<0.01),并且表达量的变化与脑组织含水量变化趋势一致。结论在小鼠脑缺血损伤后,脑水肿早期AQP-4表达量增强的区域位于水肿区。脑组织缺血缺氧损伤后AQP-4表达上调,受损神经元和胶质细胞,细胞膜上过多地表达了AQP-4,从而产生更多的水通道,促进了脑水肿的形成。     

水通道蛋白-1在急性肺损伤中的表达及意义

[目的]探讨水通道蛋白1(AQP-1)在脂多糖(LPS)所致的急性肺损伤(ALI)中的作用。[方法]根据是否腹腔注射脂多糖(LPS)将实验动物分为脂多糖组(LPS组)及生理盐水对照组(Con组),对比两组动物组织病理学改变、动脉血气、肺湿/干重比及AQP-1表达的差异。[结果]光镜下见LPS组肺组织水肿,大量炎性细胞浸润;LPS组PO2(55.07±17.02)mmHg明显低于Con组(97.35±9.37)mmHg,差异有显著性意义,P<0.05;LPS组肺湿/干重比(4.93±0.16)明显高于Con组(4.11±0.69),差异有显著性意义,P<0.05;免疫组化染色显示:LPS组的AQP-1蛋白表达减弱,荧光实时定量PCR证实LPS组的AQP-1 mRNA表达较对照组明显下降(P<0.01)。[结论]AQP-1参与了急性肺损伤的形成。     

C57BL/6J小鼠PASG基因敲除后多器官异常表型初探

目的探寻PASG基因敲除对脑等多器官发育的影响，为研究胶质瘤发生的分子病因奠定基础。方法采用经典的基因敲除法选择性缺失小鼠PASG基因第10～l2外显子，并以组织学及Western bolt法检测基因敲除鼠的中枢神经细胞形态和基因改变。结果PASG基因敲除小鼠显示出脑、肺、肾和骨等器官一系列表型变化，尤其是脑发育延缓，海马区组织结构异常，及相关基因表达水平改变等。结论PASG是调控细胞增殖发育相关基因，它的缺失可导致多器官功能异常，尤其是脑海马区细胞的变化与神经干细胞关系密切，可为进一步研究胶质瘤发生的分子病因提供线索。