肺间质纤维化小鼠肺内T细胞γ-干扰素和转化生长因子β1的表达

目的 探讨肺组织内T细胞及其转化生长因子β1(TGF-β1)/γ-干扰素(IFN-γ)表达与肺间质纤维化的关系.方法 C57BL/6小鼠30只,随机分为5组,即正常对照组和博莱霉素1、2、3、4周组.采用气管内注射博莱霉素(5 mg/kg)建立纤维化模型,分别于造模后1、2、3、4周断头处死,留取各组小鼠肺组织,观察肺泡炎和肺纤维化程度,流式细胞仪在单个细胞水平检测CD4+、CD8+、CD3+/CD8-/IFN-γ+和CD3+/CD8-/TGF-β1+细胞的频率.结果 博莱霉素组小鼠出现明显纤维化;与正常对照组相比,博莱霉素组肺组织CD4+明显增多,CD8+显著降低(P值均<0.01);博莱霉素组肺组织CD4+T细胞来源IFN-γ水平低于正常对照组,而CD4+T细胞来源TGF-β1水平显著增高于正常对照组(P值均<0.01);CD4+TGF-β1+/CD4+IFN-γ+比值进行性增高,与肺纤维化评分呈正相关(r=0.683,P<0.01).结论 CD4+T细胞来源IFN-γ与TGF-β1分别下调与上调,参与肺纤维化.     

Th17、Treg在肺纤维化小鼠外周血、肺组织中的表达及意义

目的观察CD4+IL-17+辅助性T细胞(Th17)及Th17/CD4+CD2+5Foxp3+调节性T细胞(Treg)在博来霉素皮下注射致小鼠肺纤维化模型外周血及肺组织的表达及意义。方法 20只雌性BALB/c小鼠随机分为模型组和对照组各10只:模型组皮下注射博莱霉素4周,对照组相同条件下注射0.1 mL PBS。采用HE染色和Masson’s染色观察两组肺组织炎症和纤维化的病理改变;流式细胞术检测两组肺组织及外周血Th17、Treg及Th17/Treg的表达;应用酶联免疫吸附试验检测两组血清IL-17水平;免疫荧光定量PCR法检测两组肺实质组织中IL-17和维甲酸相关孤独受体(RORγt)的mRNA的表达,并分析上述各指标的相互关系。结果模型组肺部纤维化评分、肺组织炎症程度和羟脯氨酸的含量均显著高于对照组(P均<0.01);外周血和肺组织Th17、Th17/Treg及外周血IL-17含量较对照组均显著增高(P均<0.01);肺实质RORγt和IL-17 mRNA水平较对照组明显增高(P均<0.05)。相关性分析结果显示,外周血和肺组织Th17及Th17/Treg、外周血IL-17的水平与肺组织羟脯氨酸水平、肺部纤维化评分、肺组织炎症反应均呈显著正相关(P均<0.01)。结论肺纤维化模型Th17及Th17/Treg表达均增高;Th17可能通过分泌IL-17参与肺纤维化的发病,Th17/Treg失衡可能通过加重肺纤维化免疫炎症,促进肺部胶原纤维的沉积,在肺纤维化的发病发挥重要作用。     

Th17细胞、RORγt在肺纤维化大鼠模型中的表达及意义

目的初步探讨Thl7细胞及其维甲酸受体相关孤儿受体(retinoid-ralated orphan receptorγt,RORγt)在肺纤维化中的作用。方法 64只雄SD大鼠随机分为对照组(N)、肺纤维化模型组(B组)、地塞米松治疗组(D)。采用气管内注入博来霉素致大鼠肺纤维化模型.苏木精-依红(HE)观察肺组织病理形态学变化并测肺组织中羟脯氨酸(HYP)含量;PCR检测肺部RORγtmRNA的表达;流式细胞术计数肺组织CD4+IL-17+Th17细胞;ELISA测血清IL-17水平.结果 (1)B、D组肺组织病理呈现逐渐由肺泡炎至纤维化动态改变过程,B、D组肺组织内HYP含量在不同时间点均高于N组(P<0.05),28 d时数值最高;(2)与N组比较,B、D组在不同时间点肺组织中TH17细胞和RORγtmRNA、血清中IL-17表达均明显增高(P<0.05),以造模7d最为显著。结论 TH17细胞、RORγtmRNA和血清IL-17表达增高在肺纤维化形成过程中起重要作用。     

Ac-SDKP在博莱霉素诱导的肺纤维化小鼠中作用机制的探讨

目的 探讨小鼠肺间质纤维化模型中,Ac SDKP通过抑制内质网应激进而干预上皮-间质转化过程而延缓肺纤维化发展的机制.方法 将24只9周龄健康雄性C57BL/6小鼠[体质量(25±2)g]随机分为3组:对照组(N组)、肺纤维化模型组(M组)、肺纤维化+Ac-SDKP组(P组),每组8只.选取其中16只小鼠,采用气管内注入博莱霉素(5 mg/kg)法建立小鼠肺纤维化模型,21d后随机选取8只纤维化小鼠,腹腔内埋入Ac-SDKP微量注射泵,持续干预21 d.于各组造模21 d后处死小鼠,取肺组织,观察肺组织病理学变化;测定羟脯氨酸含量,判断造模是否成功并评估肺组织纤维化严重程度;Western blot、免疫组化法检测内质网应激相关蛋白GRP78、CHOP,间质组织标志物α-SMA、Vementin,上皮组织标志物E-cadherin蛋白表达水平.结果 ①肉眼观察:N组双肺表面及切面光滑,未见结节形成;M组双肺表面及切面均可见散在结节性病变;P组肺组织表面也可见小结节,但较M组稀少.②HE及Masson染色:M组出现明显的纤维化改变;P组与M组相比,肺泡炎及肺纤维化的程度均有所减轻(P＜0.05).③羟脯氨酸含量测定:M组较N组含量升高;P组较M组含量降低,P组较N组含量仍有所升高(P值均＜0.05).④免疫组化结果:N组肺组织中αSMA、Vimentin、CHOP及GRP78少量表达,M组表达较N组明显增加,P组较M组表达减少,但仍多于N组(P值均＜0.05);N组肺组织中E-cadherin表达较多,M组表达较N组减少,P组较M组表达增加,但少于N组(P值均＜0.05).⑤Western blot结果:与N组比较,M组CHOP、GRP78、Vimentin蛋白相对表达量均升高,E-cadherin蛋白相对表达量降低;而P组各蛋白相对表达量均介于N组和M组之间(P值均＜0.05).结论 在肺纤维化发病过程中,Ae-SDKP可能通过抑制内质网应激减缓上皮-间质转化,从而发挥其抗肺间质纤维化的作用.     

大麻素2型受体激动剂JWH133干预对肺纤维化小鼠的保护作用

目的探讨大麻素2型受体激动剂JWH133对肺纤维化小鼠的保护作用。方法选24只C57BL/6J雄性小鼠按随机数字法分为对照组、模型组、JWH133干预组、JWH133+大麻素2型受体拮抗剂AM630拮抗组, 每组6只。气管滴注博来霉素(5 mg/kg)制作小鼠肺纤维化模型, 造模后第1天起, 对照组小鼠腹腔注射0.9%氯化钠溶液0.1 ml, 模型组小鼠腹腔注射0.9%氯化钠溶液0.1 ml, JWH133干预组小鼠腹腔注射JWH133(2.5 mg/kg, 溶于生理盐水中)0.1 ml, JWH133+AM630拮抗组小鼠腹腔注射JWH133(2.5 mg/kg)和AM630(2.5 mg/kg)0.1 ml, 28 d后处死所有小鼠, 取肺组织, 病理观察肺组织改变, 并进行肺泡炎评分和Ashcroft评分, 采用免疫组化测4组小鼠肺组织Ⅰ型胶原含量, 酶联免疫吸附测定(ELISA)测4组小鼠血清中白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平, 测4组小鼠肺组织中羟脯氨酸含量, Western-blot测4组小鼠肺组织中Ⅲ型胶原、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、细胞...     

四种刺激剂对日本血吸虫感染小鼠脾脏CD8~+T细胞内细胞因子及表面分子CD62L的影响

目的探讨4种常用刺激剂佛波酯(phorbol-12-myristate-13-acetate,P)、离子霉素(ionomycin,I)、布雷非德菌素A(brefeldin A,B)和莫能霉素(monensin,M)对日本血吸虫(Schistosoma japonicum)感染小鼠脾脏CD8+T细胞内细胞因子及表面分子CD62L的影响。方法 21只C57BL/6雌性小鼠腹部贴片法感染日本血吸虫尾蚴,(20±2)条/鼠。感染后第8周和第12周,分别取小鼠脾脏制备单细胞悬液,用P(50 ng/ml)+I(1μmol/L)+M(2μmol/L)体外刺激4 h,采用流式细胞术检测分泌γ干扰素(IFN-γ)的CD8+T细胞比例,同时检测细胞表面CD62L的表达情况。制备感染后4周的小鼠脾脏单细胞悬液,按I组(1μmol/L)、P组(50 ng/ml)、B组(1μg/ml)、M组(2μmol/L)、P+I组、P+I+M组、P+I+B组、P+I+M+B组分组,用对应刺激剂体外刺激4 h后,利用细胞因子微球检测法检测各组培养上清中白细胞介素4(IL-4)、IL-17A、IFN-γ、IL-10、IL-1β和集落刺激因子(G-CSF)等细胞因子水平,同时用流式细胞术检测CD8+T细胞表面CD62L的表达情况,计算平均荧光强度(MFI)。结果流式细胞术检测结果显示,小鼠感染日本血吸虫后第8周和第12周,产生IFN-γ的CD8+T细胞比例分别降至(1.3±0.8)%和(0.7±0.2)%,均低于未感染对照组的(5.6±0.8)%(P0.05),但两者差异无统计学意义(P0.05)。健康对照组和感染组小鼠CD8+T细胞表面均未检测到CD62L阳性群。不同组合刺激剂作用感染后4周,小鼠脾脏细胞培养上清细胞因子的检测结果显示,P+I组和P+I+M组的IL-4水平分别为(177.2±56.0)和(13.7±2.2)pg/ml;P+I组和P+I+M组的IL-17A浓度分别为(361.8±81.3)和(33.7±2.9)pg/ml;P+I组和P+I+M组上清中的IFN-γ浓度分别为(1 534.0±316.6)和(135.3±16.1)pg/ml;P+I组、P组和I组上清中IL-10的浓度分别为(705.5±179.6)、(34.8±13.9)和(43.1±13.9)pg/ml;P组和P+I组中G-CSF的浓度为(44.6±8.0)和(21.7±2.9)pg/ml;P组、I组和P+I+M组中IL-1β的浓度分别为(3.9±1.0)、(6.4±0.2)和(3.7±0.3)pg/ml;上述各组与其对应的对照组比较,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。流式细胞术检测结果显示,P+I组、P+I+B组、P+I+M组和P+I+B+M组中CD62L峰较对照组明显左移,MFI分别为2.7±0.1、2.6±0.2、2.5±0.1、2.5±0.1,低于对照组(P0.01)。结论日本血吸虫感染晚期,小鼠脾脏细胞产生IFN-γ的CD8+T细胞比例减少,经P+I刺激后,CD62L表达明显下调。     

病毒性心肌炎小鼠白细胞介素17和γ干扰素双阳性细胞的变化

目的 观察病毒性心肌炎(VMC)小鼠不同时间点白细胞介素17和γ干扰素双阳性细胞(IL-17 +/IFN-γ+细胞)的变化,探讨其在VMC发病中的作用.方法 雄性Balb/c小鼠腹腔注射柯萨奇病毒B3( CVB3)建立VMC小鼠模型(VMC组),对照组注射等量磷酸盐缓冲液,在注射的第0、1、2、3、4和6周苏木精-伊红染色观察心肌病理改变并计算心肌病理积分,流式细胞仪检测小鼠IL-17+/IFN-γ+细胞占CD4+T细胞的比例.结果 VMC组小鼠心肌组织病理积分于第1周升高(1.8±0.5),第2周达到最高(2.8±0.5),第3周开始逐渐降低,VMC组各时点与对照组相应时点比较差异均有统计学意义(P均＜0.05).VCM组小鼠各时点脾IL-17+/IFN-γ+细胞维持在低水平,与对照组相应时点比较差异均无统计学意义(P均＞0.05),Spearman相关性分析显示IL-17+/IFN-γ+细胞与心肌病理积分无显著相关(P＜0.05).结论 VMC小鼠中存在少量IL-17 +/IFN-γ+细胞,但可能与VMC的炎性过程无关.     

重组中国人γ干扰素对小鼠肺损伤的防治作用

目的观察重组中国人γ干扰素(INF-γ)对博莱霉素(BLM)所致小鼠肺损伤(PI)的防治作用。方法75只C57小鼠随机分为对照组、BLM组、BLM+INF-γ小剂量组(0.25μg/d)、BLM+INF-γ中剂量组(0.5μg/d)、BLM+INF-γ大剂量组(1.0μg/d),每组15只。实验组小鼠以BLM诱导PI,分别用不同剂量的INF-γ进行防治。对照组小鼠不进行任何处理。实验结束后处死小鼠分别进行肺羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)测定,用图像分析法计算Ⅰ、Ⅲ型胶原面积与切片面积,肺泡面积与肺视野面积比。结果对照组小鼠肺组织Hyp为(0.65±0.06)μg/mg、BLM组为(0.78±0.08)μg/mg,两者比较差异有统计学意义(P<0.01);对照组Ⅰ、Ⅲ型胶原为(0.004±0.001)、BLM组为(0.048±0.006),两者比较差异有统计学意义(P<0.01);BLM+INF-γ大剂量组大鼠肺组织Hyp为(0.67±0.08)、Ⅰ、Ⅲ型胶原含量为(0.008±0.001)与对照组相比差异均有统计学意义(P均<0.01);各组肺泡与肺组织面积比随着INF-γ的剂量增加而增高,分别为1.78、0.12、0.67、0.73、1.65。结论INF-γ能有效抑制成纤维细胞向肌成纤维细胞转化,减少肺内胶原合成,对PI有一定防治作用。     

老年慢性阻塞性肺疾病合并2型糖尿病患者T淋巴细胞亚群免疫失衡状态及其免疫干预探讨

目的观察老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并2型糖尿病(T2DM)患者T淋巴细胞亚群免疫失衡状态,并探讨针对性免疫干预。方法选取广西壮族自治区人民医院2011年1月—2014年6月收治的52例老年COPD患者,其中合并T2DM患者34例,随机分为COPD+T2DM未干预组16例和COPD+T2DM干预组18例;单纯COPD患者18例作为单纯COPD组;并选取同期体检健康的老年人20例作为对照组。单纯COPD组患者给予常规COPD对症治疗,COPD合并T2DM患者给予常规COPD及T2DM对症治疗;COPD+T2DM干预组在常规对症治疗基础上加用胸腺五肽免疫治疗,10 mg/d,皮下注射,连用14 d;COPD+T2DM未干预组不额外加用任何免疫制剂。记录对照组T淋巴细胞亚群(CD+4细胞分数、CD+8细胞分数、CD+4/CD+8细胞比值)和血清γ干扰素(IFN-γ)、白介素(IL-4)水平及IFN-γ/IL-4,比较治疗前后单纯COPD组、COPD+T2DM干预及为干预组患者CD+4细胞分数、CD+8细胞分数、CD+4/CD+8细胞比值和血清IFN-γ、IL-4水平及IFN-γ/IL-4变化。结果治疗前单纯COPD组、COPD+T2DM干预及未干预组患者CD+4细胞分数、CD+4/CD+8细胞比值均低于对照组,CD+8细胞分数均高于对照组,且COPD+T2DM干预及未干预组患者CD+4细胞分数、CD+4/CD+8细胞比值均低于单纯COPD组,CD+8细胞分数均高于单纯COPD组(P0.05);治疗后3组患者CD+4/CD+8细胞比值比较,差异无统计学意义(P0.05);治疗后COPD+T2DM干预组CD+4细胞分数高于单纯COPD组及COPD+T2DM未干预组,CD+8细胞分数低于单纯COPD组及COPD+T2DM未干预组(P0.05)。治疗前单纯COPD组、COPD+T2DM干预及未干预组患者血清INF-γ水平、INF-γ/IL-4均高于对照组,血清IL-4水平均低于对照组,且COPD+T2DM干预及未干预组患者血清INF-γ水平、INF-γ/IL-4均高于单纯COPD组,血清IL-4水平均低于单纯COPD组(P0.05);治疗后COPD+T2DM干预组血清INF-γ水平、INF-γ/IL-4低于单纯COPD组及COPD+T2DM未干预组,IL-4水平高于单纯COPD组及COPD+T2DM未干预组(P0.05)。结论老年COPD合并T2DM患者T淋巴细胞免疫功能低下,存在CD+4/CD+8细胞比值及Th1/Th2细胞比值失衡,Th细胞亚群向Th1细胞极化趋势明显,治疗中加用免疫调节剂胸腺五肽后可有效抑制Th1细胞极化趋势,改善T淋巴细胞免疫状态。     

不同麻醉方式对非小细胞肺癌患者围术期免疫功能的影响

目的探讨不同麻醉方式对非小细胞肺癌(NSCLC)患者围术期T淋巴细胞亚群、自然杀伤(NK)细胞和细胞因子白细胞介素(IL)-6、IL-8、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF)-α和干扰素(INF)-γ的影响。方法 60例行肺癌根治术的NSCLC患者随机分为观察组(静脉丙泊酚复合硬膜外麻醉)和对照组(全凭静脉麻醉)。采用流式细胞仪检测两组麻醉前30 min(T0)、术毕(T1)、术后2 h(T2)、2 d(T3)和5 d(T4)外周血CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+和NK细胞表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各期血浆细胞因子IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α和INF-γ水平并进行统计分析和主成分分析(PCA)建模。结果两组CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+和NK细胞比例均在T1期显著下降、T2期降至最低(P0.05)。两组CD8~+均于T1期上升,其中对照组上升显著(P0.05)。观察组CD3~+、CD4~+和CD4~+/CD8~+在T4期显著高于对照组(P0.05)。两组INF-γ、TNF-α水平均在T1期下降,T2～T3期降至最低、T3～T4期逐渐恢复。观察组INF-γ水平在T2～T4期恢复较对照组快,而TNF-α在T2恢复较对照组慢(P0.05)。两组IL-6、IL-8和IL-10水平均在T1期显著升高,并于T3～T4期逐渐恢复正常。观察组IL-6和IL-8水平在T2期显著低于对照组,而IL-10在T1期显著高于对照组(P0.05)。PCA模型表明,两组围术期T细胞亚群、NK细胞比例和5种细胞因子的代谢均发生了显著紊乱,但观察组恢复较对照组快。结论静脉丙泊酚复合硬膜外麻醉对T淋巴细胞亚群、NK细胞和血浆细胞因子IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α和INF-γ水平的综合影响优于全凭麻醉,更有利于机体免疫功能的快速恢复。     

香烟烟雾暴露对支气管哮喘大鼠CD4+ CD25+调节性T细胞及转录因子Foxp3表达的影响

目的 探讨香烟烟雾暴露对支气管哮喘(简称哮喘)大鼠CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)数量及转录因子Foxp3表达的影响.方法 将40只雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为生理盐水组、烟雾暴露组、哮喘组和哮喘+烟雾暴露组,每组10只;哮喘组采用卵清白蛋白(OVA)致敏并吸入激发制备哮喘模型,生理盐水组雾化生理盐水,烟雾暴露组采用吸入香烟烟雾,哮喘+烟雾暴露组于每日雾化激发OVA前给予香烟烟雾吸入.流式细胞仪检测外周血CD4+ CD25+Treg细胞占CD4+T细胞的比例,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测外周血和肺组织γ干扰素(INF-γ)以及白细胞介素4(IL-4)含量;Western blot检测肺组织Foxp3蛋白表达水平.结果 (1)哮喘组大鼠CD4+CD25+Treg为(6.4±1.0)%,低于生理盐水组的(9.9±1.0)%,差异有统计学意义(F=92.59,P＜0.01);哮喘+烟雾暴露组为(3.3±0.8)%,低于生理盐水组和哮喘组,差异有统计学意义(F=92.59,P＜0.01).(2)哮喘组大鼠血浆和肺组织中IL-4含量[(22.6±4.3)ng/L、(0.8±0.1)ng/L]高于生理盐水组[(11.4±2.9)ng/L、(0.3±0.1)ng/L],差异有统计学意义(F值分别31.69和49.29,P＜0.01);哮喘+烟雾暴露组血浆和肺组织中IL-4含量[(34.1±6.1)ng/L、(1.4±0.3)ng/L]高于生理盐水组和哮喘组,差异有统计学意义(F值分别为31.69和49.29,P＜0.05);哮喘组血浆中INF-γ含量[(59±20)ng/L]低于生理盐水组[(151±56)ng/L],差异有统计学意义(F=21.83,P＜0.05),哮喘+烟雾暴露组INF-γ含量[(10±3)ng/L]低于生理盐水组和哮喘组,差异有统计学意义(F=21.83,P＜0.05).(3)哮喘组Foxp3蛋白表达为8.18±0.26,低于生理盐水组的10.27±0.33(F=43.33,P＜0.01);哮喘+烟雾暴露组为6.36±0.38,低于生理盐水组和哮喘组(F=43.33,P＜0.05).结论 香烟烟雾暴露可能通过下调CD4+CD25+Treg数量并抑制Foxp3蛋白表达,进一步加重哮喘的Th1/Th2失衡.     

地塞米松对哮喘小鼠CD4+CD25+调节性T细胞及IL-4、IL-10水平的影响

目的 探讨地塞米松对哮喘小鼠CD4+ CD25+调节性T细胞及IL-4、IL-10水平的影响.方法 30只雄性BALB/c小鼠随机分为三组:正常对照组、哮喘组和地塞米松组.利用卵清白蛋白腹腔注射和雾化吸入制备哮喘模型;通过流式细胞仪检测各组小鼠脾脏单个核细胞CD4+ CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞的百分比;使用免疫组织化学方法分析各组IL-4在小鼠肺组织中的表达情况;用酶联免疫吸附试验检测各组小鼠血清IL-10的水平.结果 哮喘组脾脏单个核细胞CD4+CD25+调节性T细胞百分比及IL-10的表达水平较正常对照组和地塞米松组降低(P＜0.05),哮喘组IL-4水平较正常对照组和地塞米松组增高(P＜0.05).结论 地塞米松的抗炎作用可能通过上调CD4+ CD25+调节性T细胞、调节性T细胞亚群失衡的途径来实现.     

罗格列酮对博来霉素诱导小鼠ARDS中PPARγ/IGF-1表达的调控

目的观察罗格列酮对博莱霉素诱导小鼠急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的干预及可能保护机制。方法 C57BL/6小鼠分为空白对照(Control)组、模型(M)组、罗格列酮治疗(M+L)组。小鼠气管内注射博莱霉素复制ARDS模型,次日灌胃14 d,第28天处死。小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)计数炎症细胞总数并分类。苏木素-伊红(HE)、Masson染色观察肺组织炎症、纤维化改变及胶原蛋白表达;SQ-PCR检测肺组织过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)γ/胰岛素样生长因子(IGF)-1 mRNA表达;免疫组化染色检测肺组织PPARγ/IGF-1阳性表达率。结果与Control组相比,M组BALF炎症细胞增加,肺组织出现炎症及纤维化改变、胶原蛋白表达增加、PPARγmRNA表达及阳性表达率降低、IGF-1 mRNA表达及IGF-1阳性表达率增加,差异均有统计学意义(均P0.05)。与M组比较,M+L组BALF炎症细胞降低,肺组织炎症细胞、炎症及纤维化改变减低、胶原蛋白表达降低、PPARγmRNA表达及阳性表达率增加、IGF-1 mRNA表达及IGF-1阳性表达率降低,差异均有统计学意义(均P0.05)。结论罗格列酮可减轻博莱霉素诱导小鼠ARDS及纤维化改变,其机制可能与激活PPARγ、抑制IGF-1表达有关。     

1型糖尿病小鼠肠道菌群与免疫状态演变的实验研究

目的探究链脲佐菌素(STZ)诱导的1型糖尿病(T1DM)小鼠在不同时期的肠道功能、血清相关抗体、脾脏细胞因子谱表达与肠道菌群的演变。方法取3～4周龄雄性C57BL/6小鼠28只, 采用随机抽样法分为对照组(NC组, 13只)和STZ组(15只)。STZ组连续5 d空腹腹腔注射STZ 50 mg·kg-1·d-1, NC组注射等体积溶剂。实验第3周测定随机血糖>16.7 mmol/L为建模成功, 定义为基线水平, 两组各取6只小鼠处死, 剩余小鼠观察4周, 即实验第7周(实验终点)处死剩余小鼠。每周测量体重、随机血糖和每日饮水量。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测脾脏细胞因子谱[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-6、IL-17、IL-4、IL-10、转化生长因子-β(TGF-β)]、血清相关抗体[胰岛细胞抗体(ICA)、胰岛素自身抗体(IAA)与谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)]和结肠紧密连接蛋白1(ZO-1)的表达;采用流式细胞术检测脾脏CD4+FoxP3+调节性T细胞(Treg)水平;对粪便进行16SrRNA菌群测序分析。组间比较采...     

趋化素在特发性肺纤维化中的表达及其保护作用研究

目的探讨趋化素在特发性肺纤维化(IPF)中的表达及其作用。方法分别使用定量PCR与蛋白质免疫印迹法测定对照与IPF患者肺部组织中趋化素的mRNA及蛋白表达水平, 通过酶联免疫吸附实验检测临床血清样本中趋化素的含量。构建肺纤维化体外模型, 将分离得到的原代成纤维细胞分成对照组、TGF-β组、TGF-β+趋化素组和趋化素组, 使用免疫荧光法检测各组成纤维细胞α-平滑肌蛋白(α-SMA)表达水平。构建肺纤维化体内模型, 采用随机分组法将C57BL/6小鼠分成对照组、博来霉素组、博来霉素+趋化素组和趋化素组, 通过肺组织病理学染色观察各组小鼠肺纤维化严重程度。通过定量PCR与免疫组化染色法分别检测肺纤维化体外与体内模型中上皮间充质转化(EMT)标记基因的表达情况。结果与对照组相比, IPF患者肺组织与血清中趋化素表达量均下调。免疫荧光结果显示, TGF-β组α-SMA表达水平较对照组明显增强, TGF-β+趋化素组中α-SMA表达水平则与对照组相仿。病理学染色结果显示, 博来霉素组小鼠较对照组肺组织纤维化病变明显, 趋化素表达量显著下调;博来霉素+趋化素组小鼠肺组织受损程度则有所缓解。定量PC...     

IFN-γ和IL-4抗卡氏肺孢子虫感染作用的研究

目的研究细胞因子IFN-γ和IL-4的抗卡氏肺孢子虫感染作用.方法分别用IFN-γ或IL-4基因敲除的C57BL/6小鼠(各15只作为动物模型)与未经基因敲除的C57BL/6小鼠(15只作感染对照组),以密切接触的方式,使小鼠自然感染卡氏肺孢子虫;同时设非感染组15只小鼠作阴性对照.分别于3、5和7 wk后观察各组小鼠肺内虫体数量、肺部CD4+、CD8+T细胞反应以及血清中卡氏肺孢子虫特异性IgG抗体滴度.分析基因敲除鼠对卡氏肺孢子虫的易感性.结果IFN-γ基因敲除小鼠肺内虫体数量明显高于IL-4基因敲除小鼠(P＜0.05)和对照组小鼠,而IL-4基因敲除小鼠肺内虫体数量与对照组无显著性差异(P＞0.05).T细胞亚群分析表明,两种基因敲除小鼠的CD4+和CD8+T细胞反应曲线与感染度呈正相关.而IgG抗体滴度,3组接触感染鼠均逐渐呈不同程度上升.结论IFN-γ在小鼠抗卡氏肺孢子虫中起重要作用,但缺少IL-4基因的小鼠对肺孢子虫感染的影响不明显.     

口腔癌患者手术前后细胞免疫功能的变化及临床意义

目的探讨口腔癌患者手术前后细胞免疫功能的变化及临床意义。方法口腔癌患者30例作为观察组,另选同期健康体检者30例作为对照组;两组在纳入研究24 h内抽取清晨空腹肘静脉血3 ml,观察组在手术结束1 w后再次抽取空腹肘静脉血3 ml,采用流式细胞仪检测血清T细胞各亚型及其细胞因子表达情况,对比手术前、后两组T细胞亚群及T细胞内细胞因子水平。结果观察组手术前CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8+水平、白介素(IL)-2阳性、IL-2、CD4双阳性及γ干扰素(INF-γ)、CD4双阳性水平显著低于对照组,CD8+、CD56+及INF-γ阳性水平均高于对照组;手术后,观察组患者CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+水平、IL-2阳性、IL-2、CD4双阳性及INF-γ、CD4双阳性水平均显著上升,CD8~+、CD56~+及INF-γ阳性水平显著降低(P<0.05),观察组患者CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+水平均低于对照组,且CD8~+、CD56~+水平均显著高于对照组(P<0.05),两组患者细胞因子表达情况差异无统计学意义(P>0.05)。结论口腔癌患者机体抵抗免疫抑制功能下降,手术治疗能够改善患者免疫水平及免疫调节功能,改善患者病情。     

布地奈德协同辛伐他汀对慢性阻塞性肺疾病大鼠并发动脉粥样硬化的治疗机制

目的:研究布地奈德联合辛伐他汀对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠并发动脉粥样硬化的影响及机制,为联合用药方案提供理论依据。方法:SD大鼠随机分为正常对照组、模型组(M组)、布地奈德组(BD组)、辛伐他汀组(SV组)和布地奈德+辛伐他汀组(BD+SV组)。以气管内滴注脂多糖和烟熏建立COPD并发动脉粥样硬化大鼠模型,采用吸入布地奈德(0.5 mg/kg,2次/d)和口服辛伐他汀(5 mg·kg-1·d-1)进行干预。实验60 d后,测定血清总胆固醇(TC)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平,计算动脉粥样硬化指数(AI),ELISA法测定各组大鼠血清C反应蛋白(CRP)、白细胞介素(IL)-6、IL-8、白三烯B4(LTB4)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平,取肺和冠状动脉组织,经HE染色后检查病变情况,同时采用免疫组织化学方法检测肺组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)的表达。结果:与正常对照组相比,其余4组大鼠的AI、血清炎性因子水平(CRP、IL-6、IL-8、LTB4和TNF-α)和肺组织MMP-9水平均明显升高(P均0.05);与M组相比,BD组、SV组和BD+SV组大鼠上述指标均明显降低(P均0.05);与BD组和SV组相比,BD+SV组仍有明显降低(P均0.05)。各组TIMP-1水平比较结果与上述指标情况相反(P均0.05)。与M组、BD组及SV组相比,BD+SV组大鼠肺组织中肺气肿形成的囊腔变小,各级支气管炎症减轻,冠状动脉内膜相对较平整,内膜增生及斑块形成程度明显降低。结论:布地奈德与辛伐他汀联合用药对COPD大鼠并发动脉粥样硬化有明显改善作用,其机制可能与降低动脉粥样硬化相关细胞因子水平、平衡基质金属蛋白酶与基质金属蛋白酶抑制剂的比例有关。     

丝氨酸/精氨酸蛋白激酶1在放射性肺纤维化中的作用及其机制研究

目的 分析丝氨酸/精氨酸蛋白激酶1(SRPK1)在放射性肺纤维化(RIPF)中的作用及其机制。方法2021年3月至2022年2月,将30只2月龄C57BL/6J雌性小鼠随机分为对照组、模型组和干预组,各10只。对照组小鼠不进行干预;模型组和干预组小鼠均构建RIPF模型,建模成功后干预组小鼠腹腔注射SRPK1抑制剂——SRPIN340,模型组小鼠给予相同剂量的PBS;两组均干预16周,其中模型组小鼠死亡5只,干预组死亡3只。干预结束后收集各组小鼠全肺组织及肺泡灌洗液,采用HE染色观察小鼠肺组织结构,Masson染色观察小鼠肺组织细胞外基质(ECM)沉积情况,羟脯氨酸试剂盒检测小鼠肺组织羟脯氨酸水平,ELISA检测小鼠肺泡灌洗液中IL-6、IL-8、IL-13、转化生长因子β(TGF-β)1水平,免疫荧光法检测小鼠肺组织CD₄₅⁺T淋巴细胞计数,免疫组化法检测小鼠肺组织精氨酸酶1(Arg-1)、SRPK1、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平。结果 HE染色结果显示,模型组小鼠肺组织出现明显的损伤和结构紊乱,肺泡壁增厚扭曲,可见大量病灶形成;干...     

PD-1阻断对伯氏疟原虫感染小鼠免疫应答的影响

目的探讨程序性死亡受体-1 (PD-1)阻断对小鼠抗伯氏疟原虫ANKA (Plasmodium berghei ANKA, Pb A)感染免疫应答的影响。方法将BALB/c小鼠按照随机数字表法分为健康组、感染组和PD-1组,每组8只。感染组和PD-1组小鼠经腹腔注射1×106个Pb A感染红细胞,健康组小鼠不作任何处理。感染当天和感染后3、 5、 7 d, PD-1组每鼠腹腔注射200μg PD-1单抗,感染组注射等剂量PD-1同型对照单抗。感染后4 d起隔天检测小鼠红细胞感染情况并记录小鼠生存情况。感染后5 d每组各处死4只小鼠,取脾组织,制备脾细胞悬液,流式细胞术检测脾细胞中髓样树突状细胞(mDCs)及PD-1配体(PD-L1)的表达水平、骨髓来源抑制性细胞(MDSCs)和Th1细胞的百分率和绝对数,ELISA检测脾细胞培养上清中细胞因子IFN-γ、 IL-10和IL-6分泌水平。结果感染组小鼠在感染后5～6d外周血开始出现疟原虫感染红细胞,随后红细胞感染率快速升高,在感染后16d达到40%左右,PD-1组小鼠红细胞感染率与感染组的相比差异无统计学意义(P0.05)。感染组小鼠在感染后15d出现死亡,23d全部死亡;PD-1组小鼠在13 d出现死亡,18 d全部死亡,差异有统计学意义(P 0.05)。流式细胞术检测结果显示,PD-1组脾细胞中CD11c+CD11b+m DCs百分率为(2.21±0.10)%,明显低于感染组的(4.51±0.21)%(P 0.05); PD-1组CD4+T-bet+IFN-γ+Th1百分率为(3.38±0.54)%,低于对照组的(5.85±0.42)%(P0.05); mDCs上PD-L1的表达水平,PD-1组为(55.67±6.35)%,高于感染组的(21.35±4.45)%(P0.05); Gr-1+CD11b+MDSCs的百分率,PD-1组为(9.03±0.62)%,高于感染组的(3.58±0.16)%(P 0.05)。脾细胞培养上清中,感染组IFN-γ、 IL-6和IL-10的分泌水平分别为(901.69±73.37)、(200.94±4.97)和(551.95±121.71) pg/ml, PD-1组分别为(231.17±57.69)、(86.16±3.93)和(101.72±20.73) pg/ml, PD-1组均低于感染组(P0.05)。结论 PD-1阻断可削弱小鼠对Pb A感染的保护性免疫应答。