miR-616通过靶向TIMP-2增强肺癌细胞放射敏感性的机制研究

目的 探讨miR-616通过靶向TIMP-2增强肺癌细胞放射敏感性的机制。方法 肺癌HCC827细胞组常规培养;RI组肺癌细胞使用X射线发生器进行X射线照射,以4 Gy/min的固定剂量率发射;用于照射细胞的X射线的能量分级为8 Gy,照射孵育时间为24 h;miR-616 inhibitor组肺癌细胞用miR-616-shRNA靶向转染;miR-616 inhibitor+RI组肺癌细胞用miR-616-shRNA靶向转染,随后使用X射线发生器进行X射线照射。以上细胞培养72 h,设6个平行样,试验结束后,MTT法测定细胞增殖、吉姆萨染色测定集落百分比、流式细胞仪测定细胞凋亡及细胞周期水平、Transwell室法测定细胞侵袭水平、RT-PCR法及Western blot法测定细胞miR-616基因、TIMP-2基因和蛋白水平。结果 与HCC827细胞组比较,RI组、miR-616 inhibitor组和miR-616 inhibitor+RI组的OD值、存活率水平、克隆形成数目、穿膜数、miR-616 mRNA表达水平降低(P＜0.05);与RI组、miR-616 inhibitor组比较,miR-616 inhibitor+RI组的OD值、存活率水平、克隆形成数目、穿膜数、miR-616 mRNA表达水平降低(P＜0.05);与HCC827细胞组比较,RI组、miR-616 inhibitor组、miR-616 inhibitor+RI组的凋亡率、G₁期、TIMP-2 mRNA、蛋白表达水平升高(P＜0.05);与RI组、miR-616 inhibitor组比较,miR-616 inhibitor+RI组的凋亡率、G₁期、TIMP-2 mRNA、蛋白表达水平升高(P＜0.05)。结论 miR-616的表达下调可以在体外增强肺癌细胞放射敏感性;进而增强辐射介导的肿瘤细胞抑制;细胞凋亡和生长停滞。其机制可能与抑制miR-616可促进TIMP-2基因和蛋白的表达有关。     

沉默lncRNA HOTTIP通过上调miR-663a表达增加非小细胞肺癌细胞系放射敏感性

目的 探讨lncRNA HOTTIP通过调控miR-663a表达对4个非小细胞肺癌细胞系放射敏感性影响。方法 用0、2、4、6、8 Gy分别照射H838、H157、A549、H1299细胞系,采用克隆形成实验检测细胞存活情况。qRT-PCR检测细胞中HOTTIP和miR-663a表达水平。以A549、H1299细胞为研究对象,沉默HOTTIP表达、过表达miR-663a后用克隆形成实验检测细胞存活情况。流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测Cleaved caspase-3、Cleaved PARP和γ-H2AX表达。双荧光素酶报告基因实验和qRT-PCR检测验证HOTTIP和miR-663a的靶向关系。结果 HOTTIP在放射耐受的H157、A549、H1299细胞中表达上调,miR-663a表达下调。沉默HOTTIP或过表达miR-663a均可抑制A549、H1299细胞存活(放射增敏比分别为1.562、1.507),促进Cleaved caspase-3、Cleaved PARP和γ-H2AX表达,促进放射照射诱导细胞凋亡。miR-663a是HOTTIP的靶基因,HOTTIP可负性调控miR-663a的表达。抑制miR-663a表达可逆转沉默HOTTIP对肺癌细胞系放射敏感性的影响。结论 沉默HOTTIP通过上调miR-663a表达,抑制肺癌细胞系存活,促进其凋亡,从而提高肺癌细胞系的放射敏感性。     

甘露糖对6个人非小细胞肺癌细胞系放射敏感性影响

目的 探讨甘露糖对6个人非小细胞肺癌细胞系放射敏感性的影响及其可能机制。方法 采用Western blot检测磷酸甘露糖异构酶在6个肺癌细胞系中的表达。利用MTT法观察甘露糖对肺癌细胞系的增殖抑制作用;分别给予对照组、甘露糖组0、2、4、6、8、10Gy照射,采用平板克隆形成实验检测甘露糖对6个肺癌细胞放射敏感性的影响;流式细胞术检测对照组、甘露糖组、照射组及联合组细胞的凋亡情况。结果 6个肺癌细胞系中磷酸甘露糖异构酶表达量各不相同,其中A549细胞表达量最高,H460细胞表达量最低。11.1mmol/L甘露糖对A549、H460细胞系抑制作用相同,随着甘露糖浓度增加,对H460细胞系抑制作用更显著。采用11.1mmol/L的甘露糖可明显增加H460细胞系放射敏感性及细胞凋亡率,而对A549细胞系放射敏感性和凋亡率影响不大。结论 在磷酸甘露糖异构酶高表达的6个肺癌细胞系中,甘露糖可增强部分肿瘤细胞的放射敏感性。     

miR-362靶向Six1抑制宫颈癌细胞增殖、迁移的作用机制研究

目的 探讨miR-362靶向Six1抑制宫颈癌细胞增殖、迁移的作用机制。方法 选取本院宫颈癌患者142例,测定宫颈癌组织及癌旁组织中miR-362的表达水平;同时设Hela癌细胞组、miR-362mimics组、miR-362inhibitor组,测定各组癌细胞活力、癌细胞单克隆形成数目、癌细胞凋亡率、细胞周期、穿膜孔数以及Hela宫颈癌液miR-362、Six1 mRNA水平。结果 宫颈癌组织中miR-362 mRNA表达水平低于癌旁组织(P＜0.05)。有淋巴血管间隙浸润、病理学分期越高、TNM分期越高、有淋巴结转移、浸润深度越深,miR-362mRNA表达率越低(P＜0.05)。miR-362mimics组OD值、存活率水平低于Hela癌细胞组(P＜0.05),miR-362inhibitor组OD值、存活率水平高于Hela癌细胞组、miR-362mimics组(P＜0.05)。miR-362mimics组克隆形成数目低于Hela癌细胞组(P＜0.05),miR-362inhibitor组克隆形成数目高于Hela癌细胞组、miR-362 mimics组(P＜0.05)。miR-362mimics组细胞凋亡率高于Hela癌细胞组(P＜0.05),miR-362 inhibitor组细胞凋亡率低于Hela癌细胞组、miR-362mimics组(P＜0.05)。miR-362mimics组G₁期高于Hela癌细胞组(P＜0.05),miR-362inhibitor组G₁期低于Hela癌细胞组、miR-362 mimics组(P＜0.05)。miR-362 mimics组细胞穿膜数低于Hela癌细胞组(P＜0.05),miR-362 inhibitor组穿膜数高于Hela癌细胞组、miR-362mimics组(P＜0.05)。miR-362 mimics组miR-362 mRNA表达水平高于Hela癌细胞组(P＜0.05),miR-362 inhibitor组miR-362 mRNA表达水平低于Hela癌细胞组、miR-362mimics组(P＜0.05)。miR-362 mimics组Six1 mRNA表达水平低于Hela癌细胞组(P＜0.05),miR-362inhibitor组Six1 mRNA表达水平高于Hela癌细胞组、miR-362mimics组(P＜0.05)。结论 miR-362在宫颈癌的发生和发展过程中发挥了肿瘤抑制作用;其机制与miR-362通过负调节Six1抑制癌细胞增殖、迁移和侵袭有关。     

番茄红素对人骨肉瘤细胞生长的影响及机制研究

目的 研究番茄红素(Lycopene,LP)对人骨肉瘤MG-63细胞增殖和凋亡的影响并初步探讨其机制。方法 取处于对数生长期的人骨肉瘤MG-63细胞,设空白对照组,LP低、中、高剂量组(5、10、20μg/mL)和顺铂(40μg/mL)组;给药干预48h,观察细胞生长状况,MTT比色法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术(Flow cytometry,FCM)检测细胞周期、细胞凋亡状况并计算凋亡率,逆转录PCR(RT-PCR)法检测凋亡相关基因Bax mRNA、bcl-2 mRNA表达并计算Bax/bcl-2值,免疫蛋白印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白caspase-3表达。结果 光学显微镜下观察可见,空白对照组人骨肉瘤MG-63细胞呈贴壁生长,增殖迅速,而LP组细胞增殖受到抑制,细胞数明显减少,呈现回缩、脱落现象。与空白对照组比较发现经LP干预48h能够显著提高人骨肉瘤MG-63细胞增殖抑制率,显著延长细胞周期G₀/G₁期并缩短S期、G₂/M期,显著提高细胞凋亡率(Apoptosis index,AI),上调Bax mRNA表达并下调bcl-2 mRNA表达,显著提高Bax/bcl-2比值,显著上调caspase-3蛋白表达,差异均具有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)。结论 LP具有抑制人骨肉瘤细胞增殖并促进其凋亡的药理学作用,机制可能与阻滞细胞周期和影响凋亡调控基因、蛋白表达有关。     

lncRNA XIST通过miR-375-Notch1轴调控急性T淋巴细胞白血病细胞增殖、侵袭的实验研究

目的 探讨lncRNA XIST通过miR-375-Notch1轴调控急性淋巴细胞白血病(T-acute lymphocytic leukemia,T-ALL)细胞增殖和侵袭的影响。方法 以2018年6月—2021年3月收治的57例T-ALL患者为观察对象(T-ALL组),另选55例同期健康体检者为对照组。qRT-PCR检测T-ALL组和对照组及T-ALL T淋巴细胞CCRF-CEM细胞株中lncRNA XIST水平;对CCRF-CEM细胞转染si-lncRNA XIST以沉默lncRNA XIST、转染miR-375模拟物以过表达miR-375;采用CCK-8法、Transwell侵袭实验法及流式细胞术检测CCRF-CEM细胞的增殖、侵袭及凋亡情况;荧光素酶报告基因方法检测lncRNA XIST靶基因;Western blot检测Notch1、ADAM-17、Hes1蛋白表达。结果 与对照组比较,T-ALL组的lncRNA XIST、Notch1 mRNA表达明显增加(P＜0.05),而miR-375水平明显下降(P＜0.05),且T-ALL组患者Notch1蛋白水平明显高于对照组(P＜0.001)。转染si-lncRNA XIST沉默lncRNA XIST后,CCRF-CEM细胞增殖数量、侵袭能力明显下降(P＜0.05),细胞凋亡明显增加(P＜0.05)。荧光素酶报告基因显示miR-375是lncRNA XIST的靶点。CCRF-CEM细胞转染miR-375后,细胞增殖数量、侵袭能力明显下降(P＜0.05),细胞凋亡明显增加(P＜0.05)。转染si-lncRNA XIST可以明显上调miR-375水平、下调Notch1 mRNA水平,同时下调Notch1、ADAM-17、Hes1蛋白表达。结论 lncRNA XIST在T-ALL患者中呈高表达,可能通过miR-375-Notch1轴影响白血病细胞生物学功能。     

miR-223-3p通过调控ECT2诱导非小细胞肺癌细胞凋亡的实验研究

目的：探讨miR-223-3p对非小细胞肺癌细胞增殖与凋亡的影响及其可能的作用机制。方法：选取24例非小细胞肺癌患者的癌及癌旁组织,实时定量PCR检测miR-223-3p的相对表达水平,免疫组化检测分析上皮细胞转化序列2（ECT2）蛋白的表达水平,并对两者进行相关性分析。将人非小细胞肺癌A549细胞分为正常对照组、转染对照组、miR-223-3p过表达组,其中正常对照组细胞未作任何处理,转染对照组细胞转染空质粒载体,miR-223-3p过表达组转染miR-223-3p mimics。MTT实验和平板集落形成实验检测各组细胞的增殖率,流式细胞术检测各组细胞的凋亡率,Western blot实验检测ECT2蛋白的表达水平;采用siRNA转染法沉默A549细胞中的ECT2后,检测细胞增殖及凋亡的变化。结果：miR-223-3p在癌组织中表达显著低于癌旁组织,而癌组织中ECT2蛋白表达高于癌旁组织,二者存在负相关关系（r=-0.666,P < 0.05）;与正常对照组和转染对照组细胞相比,miR-223-3p过表达组细胞的增殖率降低（P < 0.05）,ECT2蛋白表达显著降低,而细胞凋亡率显著升高（P < 0.05）;沉默ECT2对细胞增殖和凋亡的影响与过表达miR-223-3p基本一致。结论：miR-223-3p可能通过负向调控ECT2的表达,进而抑制非小细胞肺癌细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制有待进一步研究。     

丹参酚酸B调控ROS抑制大肠癌细胞HCT-116增殖并促进其凋亡

目的 验证丹参酚酸B(Salvianolic acid B,SalB)抑制人大肠癌细胞HCT-116增殖并促进其凋亡,进一步通过活性氧簇(Reactive oxygen species,ROS)阐述其可能机制。方法 体外培养大肠癌细胞HCF-116,分成HCT-116组、HCT-116+H₂O₂组、HCT-116+SalB组、HCT-116+SalB+N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)组。分组干预后,采用MTT法检测细胞存活率、平板克隆实验检测细胞增殖、流式细胞术检测ROS含量、细胞周期及细胞凋亡率。结果 SalB对HCT-116细胞具有抑制作用,且在一定浓度范围内呈正相关(P＜0.01);SalB、H₂O₂促进HCT-116细胞内ROS生成(P＜0.01),ROS清除剂NAC预处理可清除由SalB产生的ROS(P＜0.01);SalB抑制HCT-116细胞增殖(P＜0.01)并促进其凋亡(P＜0.01),该作用可被NAC部分逆转(P＜0.05);SalB引起HCT-116细胞G0/G1周期阻滞(P＜0.01),NAC预处理完全逆转SalB导致的周期阻滞(P＜0.05)。结论 SalB可通过增加HCT-116细胞内ROS水平引起细胞周期阻滞,从而抑制细胞增殖,并促进其凋亡。     

Myosin X对肺癌H1975细胞系放射敏感性调节及机制探讨

目的 探讨Myosin X对肺癌H1975细胞系放射敏感性调节及相关机制。方法 蛋白免疫印迹法检测肺癌细胞系中Myosin X表达量以获取实验对象。运用CRISPR/Cas9技术建立敲除Myosin X的H1975细胞系(KO组)和感染对照病毒的H1975细胞系(NC组),并进行敲除效率验证。克隆形成实验及多靶单击模型检测两组细胞对射线敏感性差异。γ-H2AX焦点形成实验及RNAseq差异分析技术寻找可能参与Myonsin X介导的肺癌细胞系放射敏感性调节机制。结果 Myosin X在H1975细胞中表达量明显高于其他细胞系(P<0.01)。经鉴定成功构建了Myosin X sgRNA-Lenti-CRISPR v2慢病毒载体,嘌呤霉素筛选后得到Myosin X完全敲除的H1975(KO组)及对照组(NC组)细胞系。克隆形成实验证明相较于NC组,KO组对射线的敏感性更强 (D0值从1.28Gy下降至1.03Gy,SF2从0.29下降至0.21,放射敏感性比为1.24)。γ-H2AX焦点形成实验显示照后1、6h KO组形成的损伤焦点数均多于NC组(P<0.05),RNAseq差异分析技术结果显示KO组ISLR蛋白表达明显低于NC组(P<0.05)。结论 敲除Myosin X可以增强肺癌H1975细胞的放射敏感性,其机制可能与干扰DNA双链损伤修复以及降低ISLR表达有关。     

抑癌基因DKK2抑制儿童肾母细胞瘤细胞增殖的机制研究

目的 探讨WNT信号通路调控因子DKK2在儿童肾母细胞瘤细胞和组织中的表达,及对儿童肾母细胞瘤细胞SK-NEP-1增殖的影响,并初步探讨其作用机制。方法 通过RT-PCR、qRT-PCR和免疫蛋白印迹实验分析DKK2在儿童肾母细胞瘤细胞系和组织中的相对表达;将DKK2过表达的SK-NEP-1细胞设定为实验组(DKK2组),空白对照质粒组设定为对照组(Vector组),分别转染pcDNA3.1(+)-Flag-DKK2质粒(实验组)和pcDNA3.1(+)-Flag-Vector质粒(对照组)至SK-NEP-1细胞系,RT-PCR和免疫蛋白印迹实验验证DKK2的过表达;通过CCK-8实验和细胞克隆实验分析DKK2对细胞增殖的影响;流式细胞周期和凋亡实验验证DKK2过表达对细胞增殖的作用机制;裸鼠成瘤实验验证DKK2体外对细胞增殖的影响;通过qRT-PCR、WB及免疫组化分析DKK2对细胞增殖抑制的作用机制。结果 与正常肾上皮组织相比,DKK2 mRNA在儿童肾母细胞瘤细胞和组织中的中表达明显下调,差异具有统计学意义(P＜0.001);与对照组相比(100%),转染后24、48、72h实验组细胞活性受到明显的抑制(P＜0.05),同时实验组细胞克隆形成明显受到抑制(31.11±2.14)%(P＜0.05);流式细胞实验发现,与对照组相比,实验组细胞明显阻滞于G₁期(P＜0.001),实验组中细胞凋亡率明显升高(P＜0.001);与对照组相比,过表达DKK2后裸鼠肿瘤和体积大小明显降低(P＜0.001);过表达DKK2后,active-β-catenin及下游的基因受到了明显抑制。结论 DKK2在人皮肤肾母细胞瘤组织中表达下调,可能通过拮抗Wnt/β-catenin信号通路参与肾母细胞瘤的机制。     

西妥昔单抗对肺腺癌A549细胞株辐射增敏作用的研究

目的探讨西妥昔单抗(Cetuximab, C225)对人肺腺癌A549细胞株的辐射增敏作用及其机制。方法 体外培养人肺腺癌A549细胞株, 经不同浓度的C225作用后, 使用CCK-8法测定细胞增殖抑制率, 计算出C225的半数抑制浓度(IC₅₀), 并将IC₅₀的1/5作为后续实验的浓度。采用克隆形成方法观察C225对细胞辐射敏感性的影响, 按多靶单击模型拟合细胞存活曲线, 计算辐射增敏比(SER)。流式细胞仪检测细胞凋亡以及细胞周期情况。结果 C225均抑制了细胞的增殖, 并呈现明显的量-效关系, 其IC₅₀为18.24μg/mL。与单独照射组相比, 加药照射组的SF₂、D₀、D_q均下降(P＜0.05), SER_D0为1.40。C225联合X线照射明显增强了辐射诱导的细胞凋亡(P＜0.05)。C225使细胞阻滞于G₀/G₁期(P＜0.05), 单独照射组G₂/M期细胞比例增加(P＜0.05), C225+照射组同时出现G₀/G₁、G₂/M期细胞阻滞(P＜0.05);与对照组相比, C225组、单独照射组以及C225+照射组S期细胞比例均下降(P＜0.05)。结论 C225对A549细胞株具有辐射增敏作用, 其机制可能与C225抑制细胞的生长增殖和受照射后亚致死性损伤的修复, 增加细胞凋亡以及诱导细胞G₀/G₁期阻滞有关。     

LncRNA SOX2OT海绵吸附miR-34a促进SOX2表达增强大肠癌多药耐药

目的 验证长链非编码RNA SOX2OT(Long noncoding RNA SOX2OT,SOX2OT)增强大肠癌HCT-116细胞多药耐药(Multidrug resistance,MDR),并从SOX2OT/miR-34a/SOX2信号通路探讨其可能的有效机制。方法 双荧光素酶报告基因验证SOX2OT与miR-34a、miR-34a与SOX2的靶向结合;HCT-116细胞瞬时转染SOX2OT质粒、miR-34a mimic,RT-qPCR验证转染效率;RT-qPCR检测SOX2OT、miR-34a和SOX2表达水平并进行相关性分析;CCK-8检测细胞增殖,评估SOX2OT、miR-34a对HCT-116细胞5-氟尿嘧啶(5-FU)、长春新碱(VCR)、顺铂(CDDP)、紫杉醇(TAXOL)化疗敏感性的影响。结果 SOX2OT与miR-34a、miR-34a与SOX2之间存在靶向关系;SOX2OT抑制miR-34a(P＜0.05),上调SOX2(P＜0.01);miR-34下调SOX2OT(P＜0.01)和SOX2(P＜0.01);转染SOX2OT质粒后HCT-116细胞的5-FU、VCR、CDDP、TAXOL的IC₅₀值均升高(P＜0.01);HCT-116细胞共转染SOX2OT、miR-34a mimic时对四种化疗药物的IC₅₀值与转染SOX2OT组相比均明显降低(P＜0.01),其中5-FU、CDDP的IC₅₀值与对照组相比无统计学差异(P＞0.05)。结论 SOX2OT海绵吸附miR-34a促进SOX2的表达致使HCT-116细胞多药耐药。     

CDX2基因通过NF-κB信号通路抑制结肠癌细胞增殖

目的 观察过表达CDX2基因对人结肠癌细胞株增殖影响,并初步探讨其作用机制。方法 通过基因转染技术将CDX2基因转染入结肠癌HT-29细胞株,经G418筛选后获得稳定转染细胞株,RT-PCR和Western blot检测CDX2基因表达。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、流式细胞仪分析转染细胞的生物学行为。Western blot检测CDX2过表达对HT-29细胞内Cyclin D1和NF-κB磷酸化水平的影响。结果 经脂质体转染和筛选,建立了稳定过表达CDX2人结肠癌HT-29细胞株。转染CDX2组与未转染组和空白质粒组相比,细胞的生长速度减慢(P＜0.05),细胞周期中G₁/G₀期比例增加(P＜0.05),而S期比例则减少(P＜0.05);与未转染组和空白质粒组比较,转染CDX2基因组HT-29细胞的Cyclin D1和p-NF-κB活性明显降低。结论 CDX2基因可能通过抑制NF-κB通路抑制Cyclin D1活性,从而抑制人结肠癌HT-29细胞增殖。     

lncRNA H19对结肠癌预后评估及辐射抗性的调控作用研究

目的 探索lncRNA H19在结肠癌预后评估及辐射抗性调控中的作用,为结肠癌的诊疗提供新的潜在靶点。方法 基于生物信息学技术分析lncRNA H19在结肠癌临床病理参数及预后评估中的价值。通过siRNA和过表达质粒转染调节lncRNA H19在结肠癌细胞HCT116及SW620中的表达。通过CCK8、EdU、克隆存活及流式细胞术检测调节lncRNA H19表达对X线辐射后结肠癌细胞增殖、DNA合成、辐射敏感性及细胞周期的影响。结果 lncRNA H19在结肠癌组织中表达显著上调并与结肠癌患者的预后不良相关。lncRNA H19作为结肠癌的高风险因子,对于结肠癌的预后评估具有显著的优势（曲线下面积值为0.816）。进一步的实验表明,辐射可以诱导lncRNA H19在结肠癌细胞中高表达。敲低lncRNA H19（siRNA‐H19）可以明显增加HCT116细胞对X线的敏感性,而过表达lncRNA H19（H19‐OE）的SW620细胞辐射抗性增强。此外,流式分析显示敲低lncRNA H19可以增强X线诱导的G₂/M期阻滞,提示lncRNA H19可能通过参与细胞周期调控影响结肠癌细胞的辐射敏感性。结论 lncRNA H19在结肠癌预后评估及辐射抗性调控中发挥关键作用,可能作为增强放疗敏感性的潜在靶点。     

血清中microRNA-127对鼻咽癌患者化疗抗性的预测价值

目的 探讨血清微小RNA(micro RNA)在预测鼻咽癌患者化疗有效性方面的临床价值。方法 纳入2010年1月—2016年12月我院收治的187例接受顺铂联合化疗的鼻咽癌患者,其中化疗敏感患者123例,化疗抵抗患者64例。检测所有初次化疗前血清中miRNA的表达水平,并以健康体检人群为对照,评估血清miRNA与鼻咽癌患者化疗有效性的关系及其预测价值。结果 鼻咽癌患者血清miR-127水平显著高于健康对照组(4.3±1.6 vs. 1.4±0.5)(P＜0.001),化疗抵抗患者的血清miR-127水平显著高于化疗敏感患者(4.5±1.3 vs. 3.8±1.7)(P＜0.001)。ROC曲线显示血清miR-127对鼻咽癌患者化疗抵抗的预测价值较好(AUC=0.702,P＜0.001),最佳阈值为4.2,灵敏度82.3%,特异度76.3%。与化疗敏感组相比,化疗抵抗组患者的T_3-4期、N₃期和TNM Ⅲ~Ⅳ期患者比例均明显升高(P＜0.01),且miR-127≥4.2的比例也升高(P＜0.001)。多因素Logistics回归分析显示TNM分期(OR=1.655,95% CI:1.142~2.584,P=0.016)和血清miR-127≥4.2(OR=2.231,95% CI:1.762~4.503,P=0.001)是影响鼻咽癌患者化疗抵抗的独立危险因素。结论 血清miR-127水平的升高可能是预测鼻咽癌患者化疗抵抗的重要危险因素。     

胃癌组织中miR-320a和CYLD的表达及与临床病理特征及预后的关系

目的 研究miR-320a和头帕肿瘤综合征蛋白(CYLD)在胃癌患者中的表达及其与临床病理特征及预后的关系。方法 选取2013年3月—2014年11月在我院行肿瘤切除术的460例胃癌患者作为研究对象, 分别收集患者肿瘤组织及癌旁非肿瘤胃粘膜组织, 采用荧光定量PCR检测miR-320a和CYLD mRNA表达水平, 采用免疫组织化学染色法检测CYLD蛋白表达, 分析miR-320a和CYLD表达水平及其与临床病理特征及预后的关系。结果 miR-320a和CYLD mRNA在肿瘤组织中的相对表达量为(0.37±0.09)、(0.91±0.23), 在癌旁非肿瘤组织中的相对表达量为(0.86±0.15), (1.56±0.42), miR-320a和CYLD mRNA在肿瘤组织中的相对表达量与非肿瘤组织比较, 差异具有统计学意义(t=60.078, 29.113, P＜0.001);CYLD蛋白在肿瘤组织中的阳性表达率43.48%与癌旁非肿瘤组织73.91%比较, 差异具有统计学意义(χ²=86.624, P=0.003);miR-320a表达水平与患者肿瘤直径和淋巴结转移有关(χ²=25.859, 13.742, P＜0.05);YLD表达水平与患者TNM分期和肿瘤分化程度有关(χ²=37.725, 59.323, P＜0.05)。miR-320a低表达患者中位生存期(20.36±0.56)(95% CI:19.252~21.462)与miR-320a高表达患者中位生存期(28.29个月95% CI:27.158~29.412个月)比较, 差异具有统计学意义(χ²=87.967, P＜0.001);CYLD阴性表达患者中位生存期(17.70个月95% CI:16.599~18.796个月)与CYLD阳性表达患者中位生存期(26.74个月95% CI:25.474~27.997个月)比较, 差异具有统计学意义(χ²=109.887, P＜0.001);miR-320a和CYLD共表达患者中位生存期(29.01个月95% CI:26.831~28.946个月)与非共表达患者中位生存期(17.13个月95% CI:17.214~19.568个月)比较, 差异具有统计学意义(χ²=117.680, P＜0.001)。肿瘤组织miR-320a与CYLD mRNA表达水平呈正相关(r=0.607, P＜0.001);miR-320a低表达、CYLD阴性表达、TNM分期、淋巴结转移及肿瘤分化程度是影响胃癌患者预后的独立危险因素(HR=1.939、2.180、1.561、1.719、1.608, 95% CI:1.141~3.295, 1.252~3.796, 1.014~2.403, 1.115~2.650, 1.097~2.357, P＜0.05)。结论 miR-320a和CYLD在胃癌患者肿瘤组织中表达量明显降低, 与疾病发生发展及不良预后有关, 是潜在的胃癌诊断及治疗新靶点。     

miR-765靶向ARID1A对结直肠癌细胞侵袭及迁移的影响

目的 探讨微小核糖核酸-765(miR-765)靶向AT丰富结合域蛋白1A(ARID1A)对结直肠癌细胞侵袭及迁移的影响。方法 收集35例结直肠癌患者的结直肠癌组织及癌旁组织,体外培养结直肠癌SW480细胞并分为对照组、siRNA NC组、miR-765 siRNA组、mimic NC组和miR-765 mimic组。qRT-PCR法检测miR-765、ARID1A mRNA表达,Transwell法检测SW480细胞迁移和侵袭情况,蛋白印迹法检测ARID1A、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达,双荧光素酶实验检测miR-765与ARID1A的靶向关系。结果 与癌旁组织相比,结直肠癌组织中miR-765水平显著升高,ARID1A mRNA及蛋白水平显著降低(P＜0.001),且结直肠癌组织中miR-765与ARID1A mRNA呈显著负相关(r=-0.768,P＜0.001);与TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期的患者相比,Ⅲ~Ⅳ期的患者结直肠癌组织中miR-765水平显著升高(P＜0.01),ARID1A蛋白水平显著降低(P＜0.001)。敲减miR-765表达后SW480细胞迁移数、侵袭数、miR-765水平及MMP-9、VEGF蛋白水平显著降低,ARID1A水平显著升高(P＜0.05);过表达miR-765后SW480细胞迁移数、侵袭数、miR-765水平及MMP-9、VEGF蛋白水平显著升高,ARID1A水平显著降低(P＜0.05)。miR-765靶向调控ARID1A表达。结论 miR-765可能通过靶向抑制ARID1A表达,促进结直肠癌SW480细胞的侵袭和迁移过程。     

miR-182对直肠癌细胞增殖、侵袭及Foxo3a/Wnt/β-catenin通路的调节作用

目的 研究miR-182对直肠癌细胞增殖、侵袭及Foxo3a/Wnt/β-catenin通路的调节作用。方法 收集2016年6月—2019年7月手术切除的直肠癌组织及癌旁组织,培养直肠癌细胞株HT29、SW620、HCT-116及正常肠上皮细胞HIEC,检测miR-182的表达量。将SW620细胞进行分组处理,对照组用不含药物的RPMI-1640培养基处理,NC组转染NC模拟物、miR-182组转染miR-182模拟物。采用MTS法检测各组细胞增殖活力,采用Transwell检测侵袭活力,采用Western blot检测Foxo3a/Wnt/β-catenin通路分子的表达。结果 直肠癌组织中miR-182的表达量(2.14±0.55)明显高于癌旁组织(1.06±0.24)(P＜0.05);HT29、SW620、HCT-116细胞中miR-182的表达量明显高于HIEC(P＜0.05),且SW620细胞中miR-182表达增加最显著;miR-182组细胞的增殖活力(0.92±0.15)明显高于对照组(0.52±0.08)和NC组(0.55±0.07)(P＜0.05),侵袭数目(39.49±7.61)明显多于对照组(23.25±5.85)和NC组(21.84±4.77)(P＜0.05),迁移数目(44.12±9.29)明显多于对照组(29.39±6.18)和NC组(32.83±6.68)(P＜0.05);Foxo3a的表达水平(0.36±0.07)明显低于对照组(0.83±0.15)和NC组(0.86±0.12)(P＜0.05);Wnt2的表达水平(0.86±0.15)明显高于对照组(0.62±0.09)和NC组(0.58±0.07)(P＜0.05);β-catenin的表达水平(0.79±0.15)明显高于对照组(0.41±0.07)和NC组(0.45±0.08)(P＜0.05)。结论 miR-182能够促进直肠癌细胞的增殖和侵袭,其机制可能与靶向Foxo3a/Wnt/β-catenin通路相关。