沉默信息调节因子3在呼吸系统相关疾病中的研究进展

呼吸系统相关疾病主要包括炎症性损伤和非炎症性损伤。氧化应激是炎症反应的开始阶段,氧化与抗氧化平衡的失调参与疾病的发生发展过程。近年来,越来越多的新型抗氧化剂应用于呼吸系统相关疾病的临床治疗中。沉默信息调节因子3通过去乙酰化作用,参与线粒体能量代谢,维持细胞能量供应,在抗氧化、细胞凋亡、细胞侵袭及细胞迁移中发挥作用。沉默信息调节因子3作为一种调节酶,可降低机体活性氧的水平,有望成为活性氧相关疾病的治疗靶点。本文对沉默信息调节因子3在呼吸系统相关疾病中的研究进展进行综述。     

沉默信息调节因子1在肿瘤形成中的作用机制

沉默信息调节因子1(SIRT1)是烟碱胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)依赖的组蛋白去乙酰化酶,参与细胞衰老、凋亡、分化等生理活动.近来研究表明,SIRT1通过对组蛋白及多种非组蛋白的去乙酰化修饰,调节与肿瘤凋亡、增殖等多种相关基因的表达和蛋白质的活性,参与肿瘤形成和发展.     

沉默信息调节因子3对肝癌细胞增殖的影响

目的探讨沉默信息调节因子3（SIRT3）对肝癌细胞增殖的影响。方法Western blotting检测SIRT3在正常肝组织、永生化
肝细胞及肝癌细胞系中的蛋白表达水平;在肝癌细胞中过表达SIRT3,台盼蓝排斥实验检测过表达SIRT3对肝癌细胞增殖的影
响,EdU标记实验检测SIRT3对肝癌细胞DNA合成的影响;在肝癌细胞中过表达SIRT3,平板集落实验检测SIRT3对肝癌细胞
集落形成能力的影响;qRT-PCR验证SIRT3的沉默效率,台盼蓝排斥实验检测SIRT3沉默对肝癌细胞增殖的影响,EdU标记实
验检测SIRT3沉默对肝癌细胞DNA合成的影响。结果SIRT3在肝癌细胞系中的蛋白水平较永生化肝细胞、正常肝组织降低;
SIRT3在肝癌细胞中成功过表达,过表达SIRT3使肝癌细胞增殖数目减少了约为51%~61%（P<0.001）,使肝癌细胞DNA合成下
降了约57%（P<0.05）;过表达SIRT3抑制肝癌细胞的集落形成能力;SIRT3沉默有效,SIRT3沉默使肝癌细胞的增殖增加了约
51%~61%（P<0.01）,使肝癌细胞的DNA合成能力增强了137%~149%（P<0.01）。结论SIRT3可抑制肝癌细胞的增殖。
     

沉默信息调节因子2在人骨关节炎软骨组织及细胞中的表达

目的 检测沉默信息调节因子2(SIRT2)在人软骨中的表达,探讨其在骨关节炎(OA)与正常软骨组织及细胞中表达的差异性.方法 选取临床20例骨关节炎关节软骨,为OA组;另取10例正常关节软骨,为对照组.免疫荧光染色法检测SIRT2在两组软骨组织的表达分布及表达情况.分离软骨细胞并进行细胞传代培养,甲苯胺蓝染色进行细胞鉴定,Western blot法检测软骨组织及细胞中SIRT2的表达情况.结果 免疫荧光染色结果显示SIRT2表达于软骨组织中,分布在细胞核与细胞质中,OA组SIRT2阳性细胞率较对照组明显降低(P<0.01);Western blot结果显示OA组软骨组织中SIRT2表达显著低于对照组(P<0.01),软骨细胞中SIRT2的表达亦显著低于对照组(P<0.01).结论 SIRT2在人类软骨组织中有表达,具体表达在细胞核与细胞质中,SIRT2表达降低可能导致骨关节炎的发生及进展.     

沉默信息调节因子2相关酶1在直肠癌中的表达及临床意义

目的：探讨沉默信息调节因子2相关酶1（SIRT1）在直肠癌中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化法检测86例直肠癌组织和30例癌旁正常直肠组织中SIRT1的表达情况,并与临床病理资料进行相关性分析。结果直肠癌组织中SIRT1的阳性表达率为88.4%,癌旁正常组织阳性率为16.6%,显著高于癌旁正常直肠组织（P<0.001）;直肠癌组织中SIRT1的表达与TNM分期（P<0.05）、淋巴结转移的有无（P<0.05）、肿瘤浸润深度（P<0.05）呈正相关;与肿瘤组织分化程度（P<0.05）呈负相关;而与性别、年龄、肿瘤直径无关（P>0.05）。结论 SIRT1在直肠癌中表达明显高于癌旁正常直肠组织,且与TNM分期、淋巴结转移、浸润深度及肿瘤分化程度密切相关。提示SIRT1在直肠癌发生发展过程中可能具有重要作用,可以作为直肠癌判断预后的重要指标之一。     

沉默信息调节因子在心血管系统作用方面的研究进展

沉默信息调节因子2（Silent Information Regulator2,SIR2）是依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（Nicotin Amide Adenine Dinucleotide,NAD）的第三类组蛋白去乙酰化酶,SIRT1是与哺乳动物Sir2同源性最高的家族成员,不仅使组蛋白去乙酰化以介导基因沉默,在心血管系统,还可能与FOXO家族、NF-κB、PARP-1、PGC-1、PPAR-γ、eNOS等多种靶基因或蛋白相互作用,对细胞生存、衰老、炎症和氧化应激等起到十分重要的调节作用。本文拟对SIRT1在心血管系统调节氧化应激、凋亡、衰老方面的主要下游作用靶基因、蛋白以及目前其在心脏/血管保护方面的研究进展进行综述。     

丹酚酸B对氧化应激损伤乳鼠心肌细胞的保护作用及其机制

目的：探讨丹酚酸B对氧化应激损伤乳鼠心肌细胞的保护作用,阐明其作用机制。方法：体外原代培养Wistar乳鼠心肌细胞,随机分为正常对照组、模型组及低和高剂量丹酚酸B组。除正常对照组外,其余各组培养基中加入终浓度为100 μmoL·L^-1的过氧化氢（H₂O₂）造成心肌细胞氧化损伤,其中低和高剂量丹酚酸B组分别加入终浓度为20和40 μmol·L^-1丹酚酸B。共同培养4 h后,光镜下观察心肌细胞形态表现,MTT法检测心肌细胞存活率;同时收集各组细胞及细胞培养液,分光光度法测定心肌细胞中还原型谷胱甘肽（GSH）水平、超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）水平,ELISA法测定细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）及肌酸磷酸激酶（CK）水平。结果：与正常对照组比较,模型组部分心肌细胞悬浮在培养液中,贴壁细胞数量减少,伪足回缩,体积变小,心肌细胞自律搏动明显缓慢。与模型组比较,20和40 μmol·L^-1丹酚酸B组心肌细胞数量明显增多,伪足回缩少,自律搏动增强。与正常对照组比较,模型组心肌细胞存活率降低（P<0.01）,心肌细胞中GSH水平降低（P<0.01）,MAD水平升高（P<0.01）,SOD活性降低（P<0.01）,细胞培养液中LDH和CK水平升高（P<0.01）。与模型组比较,20和40 μmol·L^-1丹酚酸B组心肌细胞存活率升高（P<0.05或P<0.01）,心肌细胞中GSH水平和SOD活性升高（P<0.05或P<0.01）,MDA水平降低（P<0.05或P<0.01）,细胞培养液中LDH和CK水平降低（P<0.05或P<0.01）。结论：丹酚酸B对心肌细胞氧化应激损伤有明显的保护作用,其作用机制可能与抑制过氧化反应和提高心肌细胞抗氧化能力有关。     

白藜芦醇对人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护作用及机制研究

目的观察白藜芦醇对过氧化氢诱导的人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护作用。方法培养的人RPE细胞系分为正常对照组、过氧化氢损伤组和不同浓度白藜芦醇保护组,正常对照组不作任何处理,过氧化氢损伤组加入200mg/L过氧化氢,白藜芦醇保护组加入不同浓度(12.5mg/L、25mg/L、50mg/L、100mg/L)后加入200μmol/L过氧化氢。采用CCK-8检测细胞抑制率,SOD及MDA试剂盒检测细胞培养液中SOD与MDA含量。结果通过CCK-8法检测发现50mg/L、100mg/L白藜芦醇保护组作用2h,8h,24h可以明显降低细胞抑制率,且与氧化损伤组相比差异有统计学意义(P<0.05);白藜芦醇保护组50mg/L、100mg/L SOD活性与氧化损伤组相比明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);白藜芦醇保护组12.5mg/L、25mg/L、50mg/L、100mg/L 2h、8h、24h MDA含量与氧化损伤组相比明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论白藜芦醇对过氧化氢诱导的人RPE细胞氧化损伤有一定的保护作用,提示白藜芦醇对AMD的预防和治疗有一定的作用。     

沉默信息调节因子3对白藜芦醇诱导的人卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响

目的：检测沉默信息调节因子3（Sirt3）对白藜芦醇（Res）诱导的人卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响,探讨其促进凋亡的机制。方法：人卵巢癌SKOV3细胞加入不同浓度（0、2.5、5.0、10.0、20.0、40.0和80.0 mg·L^-1）Res培养24h,MTT法检测细胞存活率。将细胞随机分为对照组、Sirt3抑制剂3-（1H-1,2,3-三唑-4-基）吡啶（3-TYP）组、Res组和3-TYP+Res组,培养24h后,MTT法检各组细胞增殖抑制率;采用Hoechst 33342进行细胞核染色,激光共聚焦显微镜观察细胞核形态;采用活性氧（ROS）探针检测细胞中ROS水平;Western blotting法检测各组细胞中Sirt3、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（cleavedcaspase-3）蛋白表达水平。结果：MTT实验,随着Res浓度的增加,细胞存活率明显降低,Res的半数抑制浓度（IC₅₀）为42.73 mg·L^-1。与对照组比较,Res组和3-TYP+Res组细胞增殖抑制率明显升高（P<0.05）;与Res组比较,3-TYP+Res组细胞增殖抑制率明显升高（P<0.05）。与对照组比较,3-TYP+Res组细胞核出现固缩、染色增强、核碎裂增多。与对照组比较,3-TYP组细胞红色荧光无明显变化,Res组和3-TYP+Res组细胞红色荧光明显减少。Western blotting法检测,与对照组比较,3-TYP组细胞中Sirt3蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3蛋白表达水平无明显变化（P>0.05）,Res组细胞中Sirt3和Bcl-2蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,Bax和cleaved caspase-3蛋白表达水平明显升高（P<0.05）;与Res组比较,3-TYP+Res组细胞中Bax和cleaved caspase-3蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,Bcl-2和Sirt3蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。结论：Res可以诱导SKOV3细胞的凋亡,3-TYP通过抑制Sirt3表达可增强Res的作用。     

全反式维甲酸对人视网膜色素上皮细胞增生的抑制作用

目的：研究全反式维甲酸（ATRA）对体外培养人视网膜色素上皮（RPE）细胞增生的抑制作用及机制。 方法：采用传代培养的人RPE细胞,分成不同浓度（10^-9、10^-8、10^-7、10^-6和10^-5 mol•L ^-1的ATRA）和不同时间点（6、12、24、48、72和96 h）给药组,通过活细胞计数法、MTT比色法和流式细胞术分别检测ATRA对人RPE细胞增生的影响。 结果：ATRA给药组细胞生存率低于非给药组（P<0.01）。细胞增生的抑制率与药物剂量及时间呈正相关 (r₁=0.9926,P<0.05; r₂=0.9647,P<0.05)。与非给药组比较,ATRA给药组 RPE细胞周期中G₁期细胞增加（P<0.05),而G₀/G₁期细胞数明显减少(P<0.05）。结论：ATRA可能通过阻滞人RPE细胞周期对RPE细胞增生具有剂量依赖和时间依赖的抑制作用。     

Effects of PDTC on the Proliferation and PCNA Expression of Human Retinal Pigment Epithelial Cells

Proliferative vitreoretinopathy (PVR) is oneof the most common eye diseases that couldlead tosevere vision i mpairment and tend to cause blind-ness .It has beenfound that the abnormal prolifer-ation of retinal pigment epithelium(RPE) plays akey role in the onset and development of PVR.Under pathologic status ,such as rhegmatogenousdetachment of retina and severe ocular trauma ,RPE cells may migrate and proliferate because ofthe sti mulations of cytokines or chemokines ,thusmay lead to path…     

人参皂苷Rg3对培养人视网膜色素上皮细胞增生的抑制作用

目的 研究人参皂苷Rg3(Ginsenoside-Rg3)对体外培养视网膜色素上皮(RPE)细胞增生的直接抑制作用及可能机制。方法 通过活细胞计数法与MTT比色法分别检测不同浓度(10、20、50、80、100、150mg/L)Rg3和Rg3 80mg/L在不同作用时间(6-120h)对RPE细胞增生及代谢的影响。结果 Rg3组细胞增殖受到抑制并出现细胞脱落，Rg3 100mg/L具有最强的抑制效应，其明显抑制效应在6h即出现，96h达高峰。Rg3组A值明显低于对照组，RPE细胞生存率下降。结论 Rg3可能通过抑制钙内流促进钾外流改变细胞膜电位、干扰RPE细胞代谢，对RPE细胞增殖具有剂量依赖和时间依赖方式的抑制作用。     

激光对猪色素上皮细胞间通讯功能的影响

目的：观察激光对培养的猪色素上皮细胞的通讯功能的影响。方法：用不同输出功率的氩激光直接照射融合状态下的色素上皮细胞，然后测定光斑直径周围的胞产通讯功能。结果：设定激光光斑直径为２００μｍ，曝光时间为０．２ｓ，功率输出为０．１Ｗ时对细胞通讯功能无明显影响０．５Ｗ的激光对细胞通讯功能有轻度的抑制人艇、０．９ＥＷ、１．８Ｗ、２．７Ｗ的激光对细胞通讯功能明显的抑制作用。结论：不同功率的激光光凝对细胞胞间通     

细胞因子对视网膜色素上皮细胞CD44表达的影响

目的:探讨细胞因子对视网膜色素上皮(RPE)细胞CD44表达的影响及可能的调节机制.方法:取体外培养的第二代兔眼RPE细胞,消化接种于12孔板,分别加入不同浓度(10 μg/L、50 μg/L、100 μg/L、200 μg/L)的碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、血小板源生长因子(PDGF)和肝细胞生长因子(HGF,共同培养12 h后,用流式细胞仪观察RPE细胞膜上CD44的表达情况.以不加任何因子的培养液作阴性对照.结果:正常兔RPE细胞可表达少量CD44.经各种细胞因子诱导后, RPE细胞CD44表达均增加,尤其4种细胞因子联合作用时表达上调最明显,表达水平与细胞因子浓度呈剂量依赖关系.结论:细胞因子b-FGF、TNF-α、PDGF、HGF能诱导RPE细胞CD44表达增强,从而可能促进RPE细胞的黏附及迁移.     

Genistein对高钾和化学缺氧所致人视网膜色素上皮细胞损伤的保护作用

目的:研究Genistein(gen)对高钾和化学缺氧所致人视网膜色素上皮(retinalpigmentepithelium,RPE)细胞损伤的保护作用。方法:采用体外培养人RPE细胞,MTT法测定细胞存活率以及在倒置相差显微镜下观察细胞形态改变。结果:200mmol/LKCl作用12h可降低细胞存活率至(43.97±3.43)%,gen50、100、200μmol/L可明显提高细胞存活率且呈浓度依赖性。相差显微镜观察细胞形态发现,200mmol/LKCl作用2h细胞膜开始皱缩,4h胞膜皱缩更加明显,胞核也开始浓缩,8h后仅见细胞核和断裂呈絮状的细胞膜,12h仅可见固缩的细胞核,而200μmol/Lgen可以减轻细胞损伤,4h后方见细胞膜开始皱缩;CoCl2损伤模型中,500μmol/LCoCl2作用12h可降低细胞存活率至(57.81±17.19)%,gen50、100、200μmol/L时也可浓度依赖性升高细胞存活率。结论:Gen对高钾和化学缺氧所致人RPE细胞损伤具有保护作用。     

柔红霉素和Bax过表达对培养人视网膜色素上皮细胞凋亡的影响

目的　观察柔红霉素 (DNR)和外源 bax基因转染对培养人视网膜色素上皮 (RPE)细胞凋亡的影响 .方法　通过脂质体法将外源 bax基因转入 RPE细胞 .采用 TUNEL荧光染色方法 ,观察 2 0 0 μg·L- 1 DNR作用 12 h对正常和转基因后 RPE细胞凋亡的影响 ;同时采用专用试剂盒 ,通过荧光比色法检测细胞碎片中半胱氨酸蛋白酶 - 3(Caspase- 3)的活性 .结果　正常 RPE细胞可见 TU NEL 阳性着色 ,经 bax基因转染和 DNR作用后阳性细胞比例增加 ,而且染色加深 .经DNR作用不同时间后 ,转基因 RPE细胞的 Caspase- 3活性升高比例均大于正常细胞 Caspase- 3活性升高的比例 (P<0 .0 1) .结论　 DNR可以诱导 RPE细胞的凋亡 . bax基因转染可以促进细胞的凋亡 ,并增加 DNR诱导凋亡的敏感性     

人参皂甙Rb2对培养人视网膜色素上皮细胞增生的抑制作用

目的：研究人参皂甙Rb2(Ginsenoside-Rb2)对体外培养视网膜色素上皮细胞增生的直接抑制作用及可能机制。方法：通过活细胞计数法与MTT比色法分别检测不同浓度（250、200、120、100、50、10μg/ml）Rb2t Rb2 150μg/ml在不同作用时间（6－120h)对RPE细胞增生及代谢的影响。结果：Rb2组细胞增殖受到抑制并出现细胞脱落，Rb2 200μg/ml具有最强的抑制效应，其明显抑制效应在6h即出现，96h达高峰。Rb2组A值明显低于对照组，RPE细胞生存率下降。结论：Rb2可能通过阻滞钙通道降低细胞内钙浓度、干扰RPE细胞代谢对RPE细胞增殖具有剂量依赖和时间依赖方式的抑制作用。     

The Effect of Zinc on the Apoptosis of Cultured Human Retinal Pigment Epithelial Cells

Age relatedmaculardegeneration (ARMD ) ,orsenilemaculardegeneration (SMD) ,hasbecomeamoreimportantsightlessdisease .The precisepathogenicmechanismofARMDiscurrentlyun known .Sotheeffectivetreatmentsand preventivemeasureshavenotbeenavailableuntilnow .Ithasbeenprovedthattheretinalpigmentepithelia (RPE)wasthemaincelltypeaffectedbyARMD .Zincdefi ciencyhasbeensuspectedasapotentialriskfactor.Inthisstudy ,theinfluenceofzincontheapoptosisofRPEwasstudied .1　MATERIALSANDMETHODS1 1　MAT…