MIF基因沉默对肝癌细胞系增殖凋亡及ERK/RSK2信号通路的影响

目的探讨RNA 干扰介导的巨噬细胞移动抑制因子（MIF）基因沉默对肝癌细胞系SMMC-7721与HepG2 凋亡的影响及可能的作用机制。方法将MIF-siRNA 干扰序列转染SMMC-7721 与HepG2 细胞,以Con-siRNA序列转染的细胞作为对照。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）及Western blot检测MIF沉默效果,CCK-8 法测定细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡率。采用Western blot检测MIF 沉默后凋亡相关基因BCL-2、BAX、P53 的蛋白水平及细胞外信号调节激酶（ERK）、P90 核糖体s6 激酶2（RSK2）、糖原合成激酶3β（GSK3β）、Bad 蛋白水平及其磷酸化水平。结果沉默组细胞中MIF mRNA 及蛋白表达水平与对照组比较,差异有统计学意义（p <0.05）,沉默组低于对照组;两组细胞增殖能力比较,差异有统计学意义（p < 0.05）,MIF沉默组细胞增殖能力低于对照组;两组凋亡率比较,差异有统计学意义（p <0.05）,MIF沉默组细胞凋亡率高于对照组;两组细胞BAX、P53、BCL-2 蛋白水平比较,差异有统计学意义（p <0.05）,MIF 沉默组细胞BAX、P53 的蛋白表达水平高于对照组,而BCL-2 蛋白水平低于对照组;沉默组与对照组细胞中ERK、RSK2 及Bad 蛋白水平比较,差异均无统计学意义（p >0.05）,而沉默组与对照组细胞中GSK3β、p-GSK3β、p-ERK、p-RSK2 及p-Bad 蛋白水平比较,差异均具有统计学意义（p <0.05）。结论MIF 基因沉默抑制SMMC-7721与HepG2细胞的增殖能力并促进细胞凋亡可能是通过调节ERK/RSK2信号通路实现的。     

舒尼替尼联合多西他赛对A549细胞增殖、凋亡、细胞周期及c-met、mek、erk mRNA表达的影响

目的:探讨舒尼替尼单药以及联合多西他赛不同顺序给药对A549细胞增殖、凋亡、细胞周期及c-met、mek、erkmRNA表达的影响。方法:取对数生长期的A549细胞进行以下实验。实验Ⅰ:对照组加入RPMI1640培养基;多西他赛单药组给予多西他赛(终质量浓度16mg/L,下同);舒尼替尼单药组给予舒尼替尼(终浓度7.5μmol/L,下同);舒尼替尼+多西他赛组,加入同时含两药的培养液。实验Ⅱ:多西他赛→舒尼替尼组(D→S组)先加入100μL含多西他赛的培养液培养24h,洗脱,再加入100μL含舒尼替尼的培养液继续培养24h;舒尼替尼→多西他赛组(S→D组),同上反向处理。采用MTT法检测以上各组细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期分布及细胞凋亡,RT-PCR检测A549细胞c-met、mek、erkmRNA的表达水平。结果:Ⅰ:联合用药组较单独用药组细胞增殖抑制率、晚期凋亡率和总凋亡率升高,S期细胞减少,erk表达上调(P<0.05)。Ⅱ:D→S组较S→D组细胞增殖抑制率和凋亡率升高,G0/G1期细胞减少,S期、G2/M期细胞增多,c-met、mekmRNA表达下调,erkmRNA表达上调(P<0.05)。结论:舒尼替尼和多西他赛均能抑制A549细胞的生长,联合用药优于单独用药;多西他赛后序贯舒尼替尼能产生明显的协同效应,效果优于舒尼替尼后序贯多西他赛。     

沉默脂联素受体1对脂多糖诱导的类风湿关节炎滑膜成纤维细胞MH7A增殖凋亡的影响

目的：观察脂联素受体1（adiponectin receptor1, AdipoR1）沉默对脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）诱导的人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞（MH7A）增殖、凋亡的影响。 方法： ①利用免疫荧光、Western blot鉴定并验证shRNA技术对构建的AdipoR1沉默MH7A（sh-AdipoR1组）细胞的干扰效率;②分别用CCK8试剂盒、流式细胞仪检测LPS（100 ng/mL）对sh-AdipoR1组及空载病毒对照（sh-NC组）细胞增殖及凋亡的影响;③利用实时定量聚合酶链反应法（real-time polymerase chain reaction,realtime PCR）检测LPS对sh-AdipoR1及sh-NC组细胞中凋亡相关基因BCL-2、BCL-XL、BAX、BAK表达的影响。同时设置无LPS刺激的sh-NC、sh-AdipoR1组作为对照。 结果： ①荧光显微镜下可见sh-AdipoR1组细胞荧光蛋白表达效率趋近于100%,Western blot检测结果显示：与sh-NC组相比,sh-AdipoR1组AdipoR1蛋白的表达显著下降(P＜0.05),表明AdipoR1沉默的细胞构建成功;②无LPS刺激情况下,sh-NC组与sh-AdipoR1组细胞增殖速率及凋亡细胞比例无明显差异;LPS刺激可显著增加sh-NC组和sh-AdipoR1组细胞相对增殖速率及凋亡细胞比例（P＜0.05）;在LPS作用24、48 h,sh-AdipoR1组细胞增殖速率均显著低于sh-NC组（P＜0.05）,而sh-AdipoR1组细胞凋亡率显著高于sh-NC组（P＜0.05）;③real-time PCR结果显示,无LPS刺激情况下,sh-NC组与sh-AdipoR1组抑制凋亡基因BCL-2、BCL-XL与促进凋亡基因BAK、BAX的相对表达量均无显著差异（P＞0.05）;LPS刺激可降低抑凋亡基因BCL-2、BCL-XL表达,增加促凋亡基因BAX、BAK表达（P＜0.05）;在LPS诱导下与sh-NC组相比,sh-AdipoR1组抑制凋亡基因BCL-2、BCL-XL表达下降,促凋亡基因BAX、BAK表达显著升高（P＜0.05）。 结论：AdipoR1基因的沉默可抑制LPS诱导的MH7A细胞增殖,促进细胞凋亡,并提示AdipoR1相关信号通路可能在类风湿关节炎发生发展中起到重要作用,阻断该途径可有效阻断LPS诱导的MH7A细胞炎症反应。     

多西他赛联合恩度对前列腺癌PC-3细胞的体外作用

目的探讨多西他赛联合恩度对前列腺癌PC-3细胞的作用及其可能机制。方法将体外培养的PC-3细胞随机分为恩度组、多西他赛组、恩度与多西他赛联合组、无药物干预对照组,分别采用MTT法、流式细胞术、RT-PCR和Western-Blot方法,检测各组细胞的增殖、凋亡及MMP-9、MRP、Bcl-2、Bax mRNA和Bcl-2、Bax蛋白表达。结果多西他赛与恩度对PC-3细胞增殖有呈时间依赖性的抑制作用,两药联合的抑制率高于单独用药(F=8.38～16.39,P<0.05),G2/M期细胞比例较对照组增加(F=210.60,q=4.08,P<0.05)。与恩度组、多西他赛组比较,恩度与多西他赛联合组的MMP-9、MRP、Bcl-2mRNA表达明显降低(F=48.32～201.27,q=8.47～16.87,P<0.05),Bax mRNA表达明显升高(F=101.60,q=4.46～11.29,P<0.05),Bcl-2蛋白表达明显降低(F=121.80,q=2.95～26.92,P<0.05),Bax蛋白表达明显升高(F=342.80,q=3.23～5.26,P<0.05)。结论多西他赛与恩度对PC-3细胞的生长均有一定的抑制作用,两药联合应用的效果优于单独用药,其机制与降低MMP-9、MRP、Bcl-2表达、增高Bax表达有关。     

雷公藤内酯醇对人绒毛膜癌细胞株JAR增殖凋亡及凋亡调控蛋白BCL-2/BAX表达的影响

目的:探讨雷公藤内酯醇(triptolide,TP)对人绒癌细胞株JAR增殖、凋亡及凋亡调控蛋白BCL-2/BAX表达的影响。方法:以体外培养的人绒癌细胞株JAR为研究对象,MTT法检测TP对细胞增殖的抑制情况;TUNEL法观察TP作用于细胞后引起细胞凋亡情况,PCR和Western blot检测TP对凋亡调控蛋白BCL-2/BAX mRNA和蛋白表达的影响。结果:随着作用浓度的增加及时间延长,TP能明显抑制JAR细胞增殖并诱导其凋亡(P<0.05);并能下调凋亡抑制蛋白BCL-2的mRNA和蛋白的表达,上调凋亡促进蛋白BAX的mRNA和蛋白表达(P均<0.05)。结论:雷公藤内酯醇在体外能抑制人绒癌细胞株JAR增殖,诱导其凋亡;凋亡调控蛋白BCL-2/BAX表达水平的变化可能是TP诱导JAR细胞凋亡的重要机制。     

脑胶质瘤和脑膜瘤的BCL-2和BAX基因表达

目的：探讨脑胶质瘤和脑膜瘤的BCL-2和BAX基因表达。方法：用免疫组化方法（SABC）测定脑胶质瘤和脑膜瘤标本BCL-2和BAX基因蛋白表达。结果：胶质瘤BCL-2表达阳性率为68%，BAX表达阳性率为36%。脑膜瘤组未见表达。结论：胶质瘤的BAX表达阳性率比BCL-2低，提示胶质瘤的细胞凋亡机能存在着某种程度的障碍。     

NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐提高胃癌细胞对多西他赛化疗的敏感性

目的探讨NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC）提高胃癌SGC-7901细胞对多西他赛化疗敏感性的作用及其可能的机制。方法体外培养SGC-7901细胞,药物作用分为空白组、PDTC组、多西他赛组和PDTC＋多西他赛联合组。各组药物处理后,MTT法检测细胞生长抑制率,FCM法检测细胞凋亡率情况,免疫细胞化学方法观察核转录因子KB（nuclearfactor-kappa B,NF-κB）p65在细胞质和细胞核中表达水平的变化。结果 MTT法检测结果显示,PDTC能够有效地抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖,呈剂量依赖关系;小剂量（10μmol/L）PDTC和多西他赛联合应用较单用多西他赛,能明显提高细胞生长抑制率（P〈0.05）。FCM法检测结果显示,各用药组较对照组以及PDTC＋多西他赛联用组与单用多西他赛组比较,胃癌SGC-7901细胞的凋亡率差异有统计学意义（P〈0.05）。免疫细胞化学法检测结果显示,NF-KBp65在胃癌SGC-7901细胞中主要表达于细胞质,多西他赛诱导24h后细胞质中NF-κBp65转移至细胞核,其活性增强,而联合使用PDTC后可抑制此现象。结论低剂量PDTC可增强胃癌SGC-7901细胞对多西他赛的敏感性,这一作用可能与PDTC降低了NF-κB表达,从而抑制其进入核内有关。     

P53在高糖诱导心肌细胞凋亡中的作用

目的 探讨P53在高糖诱导心肌细胞凋亡中的作用.方法 将培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞随机分为4组:对照组、P53抑制剂组(葡萄糖浓度为5.5mmol/L,P53抑制剂浓度为50μmol/L)、高糖组(葡萄糖浓度为25mmol/L)和高糖+P53抑制剂组(P53抑制剂浓度为50μmol/L).噻唑盐比色法(MTT法)检测心肌细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot对各组细胞P53、BAX和Caspase-3进行半定量分析.结果 与对照组相比,高糖组心肌细胞活力明显降低,凋亡率明显升高,Caspase-3、BAX和线粒体蛋白P53表达增多.与P53抑制剂组相比,高糖组心肌细胞活力明显降低,凋亡率明显升高,Caspase-3、BAX和线粒体蛋白P53表达增多;高糖+P53抑制剂组心肌细胞活力也有所降低,凋亡率升高,Caspase-3、BAX和线粒体蛋白P53表达增多.与高糖组相比,高糖+P53抑制剂组的心肌细胞活力增高,凋亡率明显降低,Caspase-3、BAX和线粒体蛋白P53表达减少.结论 高糖可能通过介导P53转位到线粒体激活凋亡通路,引起心肌细胞凋亡.     

多西他赛和吉非替尼不同时序用药对人肺腺癌细胞株PC-9的作用机制研究

目的：观察吉非替尼与化疗药物多西他赛按不同时序用药对表皮生长因子受体（EGFR）突变的肺腺癌细胞株的作用,探索最佳时序用药模式。方法：人肺腺癌EGFR基因19号外显子天然缺失的PC-9细胞株,分别经吉非替尼和多西他赛单独或不同时序联合处理,采用CCK-8法测定各组细胞增殖抑制,FCM法检测细胞凋亡,免疫印迹法检测EGFR下游信号通路蛋白磷酸化EGFR（pEGFR）、磷酸化氨酸/苏氨酸激酶（pAkt）表达。结果：多西他赛作用24 h序贯吉非替尼作用48 h组的肿瘤细胞凋亡明显,Sub-G1期DNA达到34%±2%,同其他各组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：该序贯用药模式存在增效作用,促细胞凋亡的同时对信号通路中的pEGFR、pAkt有抑制作用。     

沙棘油抑制人胃癌细胞增殖及其机制的研究

目的:探究沙棘油对人胃癌细胞增殖的影响.方法:使用CCK-8实验筛选出沙棘油助溶剂DMSO(二甲基亚砜)的安全使用剂量,使用助溶剂DMSO溶解沙棘油后干预人胃癌BGC-823细胞,通过CCK-8实验检测细胞增殖变化水平.使用Western blot实验检测沙棘油干预人胃癌BGC-823细胞后,细胞凋亡基因P53、BCL-2、BAX蛋白表达水平.结果:细胞增殖试验显示,≤0.1％助溶剂DMSO细胞培养液对胃癌BGC-823细胞活性无影响,使用DMSO溶解沙棘油干预胃癌细胞,当沙棘油浓度为2、5、10、20μg·mL-1均能够较好的抑制BGC-823细胞的增殖(P<0.05).Western blot结果显示,当沙棘油浓度为5、10、20μg·mL-1时,P53蛋白表达量均较对照组增加,差异有统计学意义(P<0.05);当沙棘油浓度为2、5、10、20μg·mL-1时,BCL-2蛋白表达量均较对照组明显降低(P<0.05),BAX蛋白表达量均较对照组增加(P<0.05).结论:沙棘油可通过P53信号通路抑制人胃癌细胞增殖达到抗肿瘤作用.     

PLA激活JNK信号通路促进NCI-H292细胞凋亡

目的 探讨多聚左旋精氨酸(PLA)诱导NCI-H292细胞凋亡的信号通路及分子机制.方法 将加入PLA 的浓度梯度分5组:0、10、20、40、60 mg/L,作用NCI-H292细胞24 h后Western blot法检测每组c-Jun氨基末端激酶( JNK)的磷酸化水平;设对照组、PLA 组(40 mg /L)、SP组(加入特异性JNK通路抑制剂SP600125)、PLA+SP组,加药24 h后流式细胞仪检测每组NCI-H292细胞凋亡率,Western blot法检测各组NCI-H292细胞内凋亡相关蛋白 Bcl-2/Bax、Caspase-3、P-JNK/JNK和β-actin蛋白的表达水平.结果 对照组、PLA组、SP组、 PLA+ SP组 NCI-H292细胞凋亡率分别为(5.13 ±1.07)%、(22.62 ± 1.66)%、(5.69 ± 0.14)%、(8.99 ± 3.73)% ;Western blot 法检测 PLA 诱导 NCI-H292 细胞内BCL-2/Bax比值降低( P＜0. 01),Caspase 3 表达升高( P＜0. 001),PLA诱导NCI-H292 细胞JNK 磷酸化水平增加(P＜0.001 ), SP600125 抑制 PLA 诱导 JNK 磷酸化( P ＜0.001).结论 PLA可能介导JNK信号通路引起NCI-H292细胞凋亡水平增加.     

p38MAPK信号通路抑制剂对NMDA诱导的体外培养的皮层神经元损伤的保护作用及机制

目的 观察MK801及SB203580对N-甲基-D-天（门）冬氨酸（NMDA）诱导的皮层神经元损伤的影响, 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK)信号通路在神经元损伤中的作用和机制。方法 培养7d的新生SD大鼠皮层神经元随机分为对照组、NMDA损伤组、MK801干预组、SB203580干预组、联合干预组（SB203580+MK801）。MTT比色实验评价细胞生存力,乳酸脱氢酶(LDH)释放率测定细胞损伤程度,吖啶橙/溴化乙锭 (AO/EB) 双重荧光染色观察细胞凋亡形态和数目,Western blotting检测大鼠皮层神经元各组p38MAPK、BCL-2和BAX表达情况。结果 与对照组比较,NMDA损伤组神经细胞存活力降低、培养上清液中LDH含量增加、凋亡细胞增多、p38MAPK和BAX表达增加(P均＜0.01),BCL-2表达降低(P＜0.05);与NMDA损伤组比较,各个干预组细胞生存力提高、LDH释放率降低、凋亡减少、p38MAPK及BAX的表达减少、BCL-2表达增多(P均＜0.01)。结论 MK801,SB203580对NMDA诱导的皮质神经元损伤具有保护作用,p38MAPK通路可能参与介导MK801的保护作用,其共同机制是通过抑制p38MAPK信号通路介导的凋亡相关蛋白实现的。     

纤维粘连蛋白EDA片段抑制P53核转位调控肠癌SW480细胞凋亡

目的 探讨P53在纤维粘连蛋白EDA片段(fibronectin extra domain A,FN-EDA)调控结肠癌细胞凋亡中的作用及机制.方法 基因集富集分析法分析结直肠癌基因芯片EDA高表达组(EDA_high)与EDA低表达组(EDA_low)基因富集情况;干扰结肠癌SW480细胞FN-EDA表达,流式细胞术检测各组凋亡,RT-PCR检测各组凋亡相关基因RNA水平,Western blot检测各组凋亡相关蛋白表达及P53蛋白磷酸化修饰,免疫荧光检测P53亚细胞分布,蛋白质免疫共沉淀检测P53与FN-EDA相互作用.结果 结肠癌FN-EDA低表达组凋亡相关基因(KEGG_APOPTOSIS)富集上调(P＜0.05);与对照组相比,FN-EDA敲低组凋亡率增加(P＜0.05),P53、BAX、P21、Cleaved Caspase-3蛋白表达上调,P53蛋白Ser15、Ser37、Ser392磷酸化水平上调,核内转位增加.FN-EDA敲低组细胞转染FN-EDA过表达慢病毒后,凋亡率降低(P＜0.05),P53蛋白Ser15、Ser37磷酸化水平下调,核内转位减少;蛋白质免疫共沉淀检测发现P53与FN-EDA具有相互作用.结论 纤维粘连蛋白EDA片段通过与P53相互作用抑制P53磷酸化和核转位,调控P53-BAX通路抑制结肠癌SW480细胞凋亡.     

二甲双胍对结肠癌细胞增殖、周期及凋亡的影响

  目的 研究二甲双胍对人结肠癌细胞株SW480增殖、周期及凋亡的影响,并初步探讨其可能的机制。方法 体外培养人结肠癌细胞株SW480,给予不同浓度二甲双胍干预,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,Real time-PCR法检测相关基因mRNA的表达。结果 二甲双胍可以抑制SW480细胞的增殖,并呈时间-剂量依赖性。20mmol/L二甲双胍干预48h后与对照组相比,细胞G0/G1期比例升高,S及G2/M期比例均降低;细胞凋亡比率增高;Real time-PCR示周期相关基因CyclinD1 mRNA表达明显下调（P0.05),凋亡相关基因BCL-2 mRNA表达明显下调,CASP3及BAX mRNA 表达明显上调(P<0.01)。结论 二甲双胍能够抑制人结肠癌细胞株SW480的增殖,G0/G1期细胞周期阻滞,促进细胞凋亡;其机制可能与上调及下调某些周期、凋亡相关基因的mRNA表达有关。     

MicroRNA-7-5p 调控p53 表达对非小细胞肺癌 增殖及侵袭能力的影响

目的 探讨microRNA-7-5p（miR-7-5p）是否通过调控p53 基因的表达而影响人非小细胞肺 癌（NSCLC）细胞体外的增殖、侵袭能力。方法 通过双荧光素酶报告证明p53 为miR-7-5p 的下游靶基 因,将miR-7-5p 转染至人NSCLC 细胞株NCI-H1975,依据实验对照原则分为空白对照组、miR-7-5p 组 和miR-NC 组,观察细胞中p53 基因在转录和蛋白水平的表达变化;然后通过细胞增殖、细胞周期实验及 侵袭实验,观察NCI-H1975 细胞体外增殖和侵袭能力的变化。结果 miR-7-5p 组的p53 mRNA 相对表达 量、迁移细胞数及克隆形成数均低于miR-NC 组（P <0.05）。miR-7-5p 组3''UTR 荧光素酶的表达活性较 miR-NC 组低（P <0.05）。miR-7-5p 组p53 mRNA 和蛋白相对表达量较miR-NC 组低（P <0.05）。miR- 7-5p 组细胞增殖能力较miR-NC 组低（P <0.05）。miR-7-5p 组细胞周期G0/G1 期比例高于空白对照组 和miR-NC 组（P <0.05）。miR-7-5p 组细胞周期的G2/M 期比例低于miR-NC 组（P <0.05）。miR-7- 5p 组细胞周期的S 期比例低于空白对照组和miR-NC 组（P <0.05）。miR-7-5p 组细胞侵袭能力低于空白对 照组和miR-NC 组（P <0.05）。结论 miR-7-5p 主要是通过靶向p53 促进其mRNA 和蛋白的表达,并减弱人 NSCLC 的增殖和侵袭能力。     

鼻腔NK/T细胞淋巴瘤中P53、P21表达及其临床意义

目的 探讨P53、P21蛋白在鼻腔NK/T细胞淋巴瘤(NKTL)中的表达及其与细胞增殖、凋亡、临床分期和预后的关系.方法 收集62例NKTL患者的临床病理资料,并进行随访.取62例NKTL组织构建组织芯片,应用免疫组化方法 检测P53、P21、Ki67蛋白的表达,TUNEL法原位凋亡检测,计算增殖指数(PI)和凋亡指数(AI).结果 P53、P21蛋白在NKTL中表达的阳性率分别为79.03%、58.06%.P53和P21在Ann Arbor Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期患者中表达的阳性率分别为69.57%、75.00%、86.67%、100.00%和47.83%、56.25%、60.00%、87.50%,随着肿瘤进展,二者表达阳性率逐渐升高,差异具有统计学意义(P＜0.05).P53和P21二者表达具有明显的正相关性(r=0.467,P＜0.05),其阴性表达组预后好于阳性表达组(P＜0.05);P53蛋白表达是独立预后因素.随着P53、P21蛋白表达强度的增加,PI亦逐渐升高,它们均与PI呈正相关(r=0.177,0.184,P＜0.05),而与AI无关联性(P＞0.05).结论 P53、P21蛋白表达与NKTL的发生、发展密切相关,联合检测Ki67表达,可作为评估该病患者肿瘤细胞增殖、侵袭性等生物学行为的良好指标,为临床治疗及预后评价提供依据.     

靶向Cyclin D1基因RNA干扰对肝癌细胞增殖和Mdm2等基因表达影响的研究

目的 探讨Cyclin D1表达下调对Mdm2等基因表达及人肝癌细胞增殖的影响.方法 用脂质体将Cyclin D1-siRNA转染人肝癌细胞株Hep3B细胞.实验分为空白对照组、阴性对照siRNA组、Cyclin D1-siRNA组.采用RT-PCR和Western blot检测Cyclin D1、Mdm2、Mdm4、P53和P21表达,流式细胞仪检测细胞周期,MTT检测细胞活力,TUNEL检测细胞凋亡.结果 与空白对照组和阴性对照siRNA组相比,Cyclin D1-siRNA组P53和P21表达上调(P＜0.05),Cyclin D1、Mdm2和Mdm4表达下调(P＜0.01);3组细胞周期G1、S及G2期均无明显差异(P＞0.05);Cyclin D1-siRNA组较其他两组细胞活力明显减弱(P＜0.01),细胞凋亡明显增强(P＜0.01).结论 Cyclin D1表达下调能抑制Mdm2和Mdm4的表达,并能上调P53和P21的表达;Cyclin D1表达下调能抑制肝癌细胞的增殖并促进其凋亡.     

人食管癌相关基因4在食管癌中的抑癌功能

目的 探讨人食管癌相关基因4(ECRG4)在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的抑癌功能及其机制.方法 利用DNA重组技术,构建ECRG4真核表达质粒pcDNA3.1-ECRG4,在ESCC细胞系EC9706细胞中转染表达ECRG4蛋白,检测细胞生长状态、细胞黏附、迁移、侵袭能力和裸鼠成瘤能力的改变.Western印迹检测ECRG4表达诱导P53和P21蛋白表达的变化.结果 ECRG4基因转染组裸鼠成瘤的最后体积和重量分别为(264±43)mm3和(0.39±0.09)g,对照组裸鼠分别为(464±128)mm3和(0.76±0.13)g,差异均有统计学意义(均P＜0.05).ECRG4基因转染组肿瘤细胞与基质的黏附性、迁移和侵袭能力均低于对照组,但差异均无统计学意义(均P＞0.05).ECRG4基因转染组P53和P21蛋白表达均高于对照组(100.00±3.87和35.71±2.36比16.6±1.92和1.09±0.11,均P＜0.05).结论 ECRG4是ESCC的候选抑癌基因,ECRG4可能通过参与P53通路调控P21蛋白表达来发挥其抑癌功能.     

胃肠道间质细胞瘤p53基因表达与增殖、凋亡及血管形成的关系

目的研究胃肠道间质细胞瘤(GIST)中p53基因表达与增殖、凋亡及血管形成的关系.方法我们研究了86例GIST,采用免疫组织化学法检测p53基因表达,采用胶银及免疫组织化学法检测核仁组成区嗜银蛋白(AgNORs)、增殖细胞核抗原(PCNA)、抗人增殖细胞抗体Ki-67(Ki-67)来反映细胞的增殖,采用原位末端标记法检测细胞凋亡指数(API)来反映细胞的凋亡,采用免疫组织化学法检微血管密度(MVD)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)来反映血管形成.结果 p53阳性、阴性表达组的AgNORs,pCNA和Ki-67表达分别为(5.96±2.05)、(3.35±1.48)(P＜0.01)、(24.14±6.15)、(8.11±3.12)(P＜0.01)、(8.46±2.14)、(2.36±1.12)(P＜0.01);p53阳性、阴性表达组的API分别为(5.74±3.15)、(15.12±7.89)(P＜0.01);p53阳性、阴性表达组的MVD、VEGF表达分别为(19.82±7.15)、(10.78±3.89)(P＜0.01)、68.09%、35.90%(P＜0.01).结论突变型p53基因能够促进GIST增殖、抑制凋亡、增加血管形成,与肿瘤的形成、发生与发展密切相关.     

miR-31、miR-21和miR-155在弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达及意义

目的分析mi R-31、mi R-21和mi R-155在弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)中的表达水平,并探讨其与DLBCL临床病理特征的关系。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitativepolymerase chain reaction,RT-PCR)检测92例DLBCL患者和84例对照mi R-31、mi R-21和mi R-155的表达水平,间期荧光原位杂交技术分析患者MYC和p53基因的异常情况,根据Hans的分类方法分为生发中心B细胞型(germinal center Bcell type,GCB型)和非生发中心B细胞型(non-GCB型)。结果 DLBCL组mi R-31、mi R-21及mi R-155表达水平高于对照组(P0.05),mi R-31、mi R-21及mi R-155在non-GCB型的表达高于GCB型(P0.05)。与MYC基因没有发生重排的患者相比,mi R-31、mi R-21及mi R-155在MYC重排的患者中表达下调(P0.05)。mi R-31、mi R-21及mi R-155在p53基因丢失组的表达较基因正常组下调(P0.05)。BCL-2蛋白阳性组mi R-31、mi R-21及mi R-155的表达较BCL-2蛋白阴性组下调(P0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示,mi R-31、mi R-21及mi R-155高表达的DLBCL患者生存率低于低表达的患者(P0.05)。应用单因素和多因素Cox模型分析,发现mi R-31、mi R-21及mi R-155表达水平、免疫分型、p53基因与预后差异有统计学意义(P0.05)。结论 mi R-31、mi R-21和mi R-155对DLBCL的诊断分型及预后判断有一定的参考价值,有望成为DLBCL治疗的新靶点。