高效液相色谱-电化学检测法测定生物样品中单胺类神经递质及其代谢产物

[目的]建立一种简单、快速、灵敏的测定生物样品中单胺类神经递质及其代谢产物的高效液相色谱方法。[方法]色谱柱采用WatersC18反相色谱柱(3.9mm×150mm,5μm),流动相为水相(每500mL中含辛烷磺酸钠1.25g,磷酸二氢钾6.8g,乙二胺四乙酸18mg,pH值3.3)∶甲醇∶乙腈=78∶19∶3,流速为0.8mL/min,柱温35℃;电化学检测器工作电极为玻璃碳电极,参比电极为银/氯化银(Ag/AgCl)电极,工作电压为0.7V。[结果]5种物质保留时间分别为:去甲肾上腺素3.6min,5-羟吲哚乙酸4.5min,高香草酸5.2min,多巴胺6.2min,5-羟色胺11.9min;线性范围均为20～1000μg/L,最低检测限为4～8μg/L。[结论]此方法测定生物样品中的单胺类神经递质及其代谢产物,简便,快速且灵敏度高。     

高效液相色谱-电化学检测法测定生物样品中单胺类神经递质及其代谢产物*

[目的]建立一种简单、快速、灵敏的测定生物样品中单胺类神经递质及其代谢产物的高效液相色谱方法.[方法]色谱柱采用Waters C18反相色谱柱(3.9 mm×150 mm,5 μm),流动相为水相(每500 mL中含辛烷磺酸钠1.25 g,磷酸二氢钾6.8 g,乙二胺四乙酸18 mg,pH值3.3)∶甲醇∶乙腈=78∶19∶3,流速为0.8 mL/min,柱温35 ℃;电化学检测器工作电极为玻璃碳电极,参比电极为银/氯化银(Ag/AgCl)电极,工作电压为0.7 V.[结果]5种物质保留时间分别为去甲肾上腺素3.6 min,5-羟吲哚乙酸4.5 min,高香草酸5.2 min,多巴胺6.2 min,5-羟色胺11.9 min;线性范围均为20-1 000 μg/L,最低检测限为4～8 μg/L.[结论]此方法测定生物样品中的单胺类神经递质及其代谢产物,简便,快速且灵敏度高.     

五味子醇甲对中枢神经系统单胺类递质的影响

本实验用高效液相色谱—电化学检测法及受体配体结合法观察五味子醇甲对大鼠脑内单胺类递质及其受体的影响,结果表明五味子醇甲可使大鼠纹状体及下丘脑多巴胺含量明显增加,提示五味子醇甲的中枢抑制作用可能与多巴胺系统有一定联系。     

黄连对甲亢大鼠中枢单胺类神经递质含量的影响

本文以龙胆草为对照，观察了黄连对甲亢大鼠中枢单胺类神经递质含量的影响。结果表明：(1)甲亢大鼠下丘脑、垂体和纹状体NE．DA、5-HT及5-HIAA含量均显著低于正常对照组，而HVA高于正常对照组；(2）泻心火药黄连可显著增高甲亢大鼠下降的下丘脑、垂体和纹状体NE、DA、5-HT及5-HIAA含量，使HVA下降；(3)泻肝火药龙胆草可使甲亢大鼠下丘脑、纹状体NE和纹状体5-HT含量显著增高，使HVA下降：(4）与龙胆草相比，黄连有较强的作用。     

培补肝肾中药对帕金森病小鼠模型纹状体某些单胺类递质的影响

目的 探讨培补肝肾中药治疗帕金森病疗效机理。方法 成年C^57BL雄性小鼠48只，随机分为6组，即正常组，中药保护组，中药治疗组，美多巴治疗组，复合治疗组，自然恢复组，采用高效液相色谱－电化学检测法，测定各组小鼠纹状体某些单胺类递质的含量。结果 自然恢复组小鼠纹状体多巴胺（DA）3，4－羟基苯乙酸（DOPAC），去甲肾上腺素（NE），3－甲氧基－4－羟基苯乙二醇（MHPG），5－羟色胺（5－HT），5－羟吲哚乙酸（5－HIAA）水平均低于正常组（P＜0．05或P＜0．01）。自然恢复组上述指标水平均低于中药保护组，中药治疗组，美多巴治疗组，复合治疗组（P＜0．05或P＜0．01）。中药治疗组，美多巴治疗组，复合治疗组上述指标与正常组差异统计学意义（P＞0．05）。结论 培补肝肾中药可提高纹状体下降的DA，DOPAC，NE，MHPG，5－HT，5－HIAA水平。     

大鼠脑组织中单胺类神经递质及其代谢产物的液相色谱测定法

用高效液相色谱-电化学检测法测定大鼠6个脑区单胺类神经递质及其主要代谢产物的含量。此法可同时分离和测定10种化合物,且快速、灵敏和简便,适用于临床分析和实验研究。     

高效液相色谱-电化学法测定大鼠不同脑区单胺类神经递质及其代谢产物的方法学研究

目的:建立使用高效液相色谱-电化学法测定大鼠下丘脑、海马、皮质中单胺类神经递质及其代谢产物的方法,所测指标包括去甲肾上腺素(NE)、五羟吲哚乙酸(5-HIAA)、高香草酸(HVA)、多巴胺(DA)、和5-羟色胺(5-HT)。方法:色谱柱采用Waters C18反相色谱柱(3.9mm×150mm,5μm),流动相为水相(每1L中含辛烷磺酸钠2.5g,磷酸二氢钾13.6g,乙二胺四乙酸36mg,pH值3.3):甲醇:乙腈=78:19:3,流速为0.8mL/min,柱温35℃;电化学检测器工作电极为玻璃碳电极,参比电极为银/氯化银(Ag/AgCl)电极,工作电压为0.7V[1]。结果:脑组织中五种神经递质的保留时间分别为:去甲肾上腺素3.4min、五羟吲哚乙酸4.2min,高香草酸4.8min,多巴胺5.8min,5-羟色胺11.4min;最低检测限为4～16ng/mL。线性范围为20～320ng。脑组织样品的相对回收率为87.5%～113.9%,日内、日间精密度RSD小于7%。结论:该方法具有快速、准确、灵敏且样品制备简便等优点,可用于大鼠部分脑区内单胺类神经递质的分离测定。     

自愿转轮运动对抑郁模型大鼠学习记忆及纹状体单胺类神经递质和c-fos表达的影响

目的 探讨4周自愿转轮运动对慢性不可预知性应激致抑郁大鼠旷场行为及空间学习记忆能力、纹状体单胺类神经递质和c-fos表达的影响.方法 将30只大鼠随机分为3组:对照组、应激模型组及应激运动组.应激模型组及应激运动组大鼠,每日进行慢性不可预知性应激1次,连续28 d,同时应激运动组大鼠进行4周自愿转轮运动.结果 与应激模型组比较:应激运动组大鼠穿越格数、直立次数及修饰次数显著增多粪便颗粒显著减少;应激运动组大鼠糖水摄入量、总摄入量及糖水偏爱百分比均高于应激模型组;应激运动组大鼠完成八臂迷宫时间显著缩短、工作记忆错误次数、参考记忆错误次数均显著减少,总错误次数远远低于应激模型组;应激运动组纹状体c-fos免疫阳性细胞数量及平均光密度均显著增加.结论 长期自愿转轮运动可提高抑郁模型大鼠的学习记忆能力,机理可能与自愿转轮运动增加纹状体单胺类神经递质水平,有效调整中枢神经递质紊乱,上调纹状体c-fos的表达有关.     

酸性成纤维细胞生长因子对帕金森病大鼠模型脑神经递质的影响

目的：探讨酸性成纤维细胞生长因子（aFGF）对帕金森病（PD）大鼠脑神经递质的影响。方法：SD大鼠60只,随机分为3组：正常组（Sham）、模型组（PD）和aFGF给药组（AFGF）,每组20只,通过脑内立体定向术,将6-羟基多巴胺（6-OHDA）注入后2组大鼠脑右侧纹状体建立PD大鼠模型,阿扑吗啡（APO）诱导行为学来判断模型是否成功,采用高效液相色谱-电化学（HPLC-ECD）联用检测大鼠脑纹状体组织中的单胺类神经递质及其代谢产物含量。结果：aFGF给药组的去甲肾上腺素（NE）、肾上腺素（E）、3,4-二羟基苯乙酸（DOPAC）、多巴胺（DA）、高香草酸（HVA）明显高于模型组,低于正常组,差异均具有统计学意义。5-羟色胺（5-HT）和5-羟基吲哚乙酸（5-HIAA）与模型组相比含量无明显变化,但低于正常组,且差异具有统计学意义。结论：aFGF能有效提高帕金森动物模型脑内纹状体中单胺类神经递质的含量,并且在一定程度上改善了PD的症状。     

库仑电化学法快速测定单胺类神经递质的方法学研究

目的建立库仑阵列电化学高效液相色谱法快速测定大鼠脑组织中的单胺类神经递质的含量。方法采用库仑阵列电化学检测器检测去甲肾上腺素（NE）、多巴胺（DA）、5-羟色胺（5-HT）、5-羟吲哚乙酸（5-HIAA）,采用Phenomenex C18反相色谱柱（150mm×4.60mm,5μm）,流动相为缓冲液-乙腈（体积比87∶13）,流速为1mL.min^-1,柱温为35℃。结果 4种单胺类神经递质的最低检测限为0.01515～0.01815ng,回收率为85.3%～100.5%。结论该法具有快速、准确、灵敏、样品制备简便等优点,可用于大鼠脑组织中单胺类神经递质的分离检测。     

纹状体内注射6-羟基多巴胺制作帕金森病大鼠模型

[目的]研究帕金森病(PD)大鼠模型的制作方法.[方法]采用单点双注法将6-羟基多巴胺(6-OHDA)立体定向注入到大鼠右侧纹状体,观察大鼠的行为变化和中脑黑质区的形态学变化.[结果]注药后2周,大鼠经阿扑吗啡诱导出现向健侧旋转行为,在2个月的观察中见旋转行为稳定.形态学观察结果示,损伤侧黑质区致密部和中脑被盖腹侧区内酪氨酸羟化酶阳性神经元数量明显减少.[结论]6-OHDA单针道双点法是制作大鼠PD模型的可行方法.     

姜黄素及姜黄素衍生物A在大鼠血浆中含量的测定

目的：建立大鼠血浆中姜黄素及姜黄素衍生物A的高效液相色谱(HPLC)测定方法,研究其在大鼠体内的药物动力学,为姜黄素的临床应用提供参考。方法：将姜黄素及姜黄素衍生物A分别灌胃给药,采用HPLC测定其在大鼠血浆中的血药浓度,色谱柱为Hypersil ODS2 C18（5 μm×4.6 mm×200 mm）;柱温：30℃;姜黄素流动相,乙腈-水-乙酸（体积比45∶55∶1）,姜黄素检测波长为420 nm;姜黄素衍生物A流动相,乙腈-水-乙酸（体积比70∶30∶1）;体积流量为1.0 mL?min-1;姜黄素衍生物A检测波长为361 nm。结果：姜黄素及姜黄素衍生物A在0.25~100.00 mg?L-1 范围内与峰面积呈良好的线性关系,姜黄素回归方程为Y=105.90X－22.70,r=0.999 6;姜黄素衍生物A回归方程为Y=71.20X+24.62,r=0.999 4。两者日内、日间精密度RSD均小于4%,平均回收率均大于96%;大鼠灌胃给药后的药动学行为符合单室模型,姜黄素衍生物A的清除率比姜黄素显著降低,约是姜黄素清除率的3.57倍,曲线下面积是姜黄素的4.09倍,半衰期t1/2约为姜黄素的2.79倍。结论：HPLC测定姜黄素及姜黄素衍生物A在大鼠体内血药浓度的方法准确、简单可行、重复性好,为提高姜黄素在体内的稳定性,延长其在体内半衰期提供了依据。     

脑深部电刺激对帕金森大鼠模型黑质神经元形态及功能的影响

背景 帕金森病(PD)是常见的中枢神经系统退行性疾病,好发于中老年人.最近的研究表明细胞凋亡在帕金森病的发生和发展中发挥重要的作用.丘脑底核脑深部电刺激术(STN-DBS)被认为是一种有效的治疗帕金森病的方法. 近年来的理论研究、动物实验和临床观察均提示脑神部电刺激术可能具有潜在的神经保护作用,并藉此延缓帕金森病的进展。然而, 丘脑底核脑深部电刺激术的保护效果和黑质致密部(SNc)神经元凋亡进展之间的关系仍不知道.本实验的目的是研究丘脑底核电刺激对帕金森大鼠模型黑质致密部报销效应及作用机制. 方法: 建立帕金森大鼠模型,选择大鼠丘脑底核(STN)作为靶点,植入双侧大鼠脑深部刺激电极,给予高频电刺激,观察大鼠行为学改变及刺激后情况;通过尼氏染色及末端标记法,观察黑质致密部神经元的变化情况;采用多管玻璃微电极细胞外记录和微电泳的方法,分析电刺激对黑质神经元兴奋性功能改变情况,探讨电刺激对黑质神经元的作用机制. 结果: 与假刺激组相比,刺激组PD模型大鼠黑质致密部神经元凋亡显著减少(P<0.05). 正常大鼠及PD模型大鼠患侧均可观察到黑质致密部神经元自发放电,正常大鼠SNc神经元平均自发放电频率（40.65±11.08）Hz略高于PD模型大鼠患侧残存SNc神经元（36.71±9.23）Hz。电刺激PD大鼠STN时,同侧SNc神经元以兴奋性增高为主,若同时给予微电泳GABA受体阻断剂荷包牡丹碱（BIC）,SNc神经元的兴奋程度明显减少,而GLu受体阻断剂（MK-801）使SNc神经元的神经元兴奋性变化不明显。 结论: 高频刺激STN有保护帕金森老大鼠SNc神经元的作用。可能的分子机制可能与SNc区神经递质的分布和代谢的变化相关。     

3 种不同脑区定点注射 6-OHDA 单侧损伤大鼠帕金森病模型的比较研究

[摘要] 目 的 从 神 经 行 为 学、组 织 病 理 和 生 化 方 面 对 3 种 不 同 脑 区 单 侧 定 点 注 射 6- 羟 基 多 巴 胺 ( 6- hydroxydopamine , 6-OHDA )损伤大鼠帕金森病( Parkinsondisease , PD )模型进行比较研究。方法 健康雄性 SD 大 鼠随机分为 3 组( n =10 ):纹状体组、黑质组、黑质 + 中脑腹侧被盖区组。根据脑立体定位图谱,将微量 6-OHDA 单点定位注入大鼠中脑黑质区、纹状体区和双点定位注入黑质区与中脑腹侧被盖区。观察阿朴吗啡诱发大鼠旋转 行为,免疫组织化学检测大鼠黑质区酪氨酸( tyrosinehydroxy-lase , TH + )阳性神经元数目,电化学高效液相色谱法 检测纹状体中多巴胺( dopamine , DA )及其代谢产物 3 , 4- 二羟苯乙酸( dihydroxy-phenylaceticacid , DOPAC )和高香 草酸( homovanillicacid , HVA )含量。结果 纹状体组 3 周后模型稳定,黑质组与黑质 + 中脑腹侧被盖区组大鼠 2 周后稳定, 3 组 30min 内向健侧转圈数均呈升高趋势,黑质 + 中脑腹侧被盖区组高于纹状体组和黑质组,组间· 时点间交互作用差异有统计学意义( P <0.05 )。纹状体组和黑质 + 中脑腹侧被盖区组造模成功率高于黑质组 ( P <0.05 )。 3 组大鼠注射 6-OHDA 损伤侧纹状体中 DA 、 DOPAC 、 HVA 含量和 TH + 神经元数目均明显低于非 损伤侧( P <0.05 )。结论 纹状体单点注射 6-OHDA 损伤建立 PD 模型成功率高,可作为研究 PD 的一种稳定可靠 的动物模型。     

帕金森病大鼠模型的炎性机制

目的 :研究帕金森病 (PD)大鼠模型的炎性机制。　方法 :采用酶联免疫吸附法 (ELISA)检测PD大鼠模型黑质纹状体区肿瘤坏死因子 α(TNF α)和白细胞介素 1(IL 1)的水平。采用酪氨酸羟化酶 (TH)免疫组化法估测黑质区神经损伤的程度。　结果 :PD大鼠模型黑质纹状体区TNF α和IL 1的水平较对照组明显增高 (P <0 .0 5 ) ,环孢素 (CsA)可减轻 6 羟基多巴胺 ( 6 OHDA)对黑质多巴胺神经元的损伤 ,但对黑质纹状体区TNF α和IL 1水平无明显影响。　结论 :免疫炎性机制可能参与PD的发病过程 ,CsA可能通过与炎性因子无关的途径对黑质多巴胺神经元起保护作用     

鱼藤酮长期作用对大鼠纹状体单胺递质、NO和NOS的影响

目的观察鱼藤酮长期作用对大鼠纹状体单胺递质和NOS/NO系统的变化规律.方法 Wistar大鼠每日皮下注射鱼藤酮90 d,于第30、60、90天处死动物,分离大鼠纹状体,分别以HPLC法和生化法测定其多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NA)、3,4-二羟基苯乙酸(DOPAC)、5-羟色胺(5-HT)、一氧化氮(NO)含量和一氧化氮合酶(NOS)活性.结果在鱼藤酮中毒各时相点,大鼠纹状体单胺递质均出现不同程度的变化,以DA、DOPAC、5-HT含量改变尤为明显;纹状体NO含量和NOS活性均明显升高,且中毒剂量越大、中毒时间越长NO、NOS升高越明显.结论纹状体单胺递质代谢紊乱和NOS/NO系统改变在鱼藤酮长期作用引起的中枢DA神经损伤中起重要作用.     

姜黄素对帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元作用的研究

目的探讨姜黄素（Curcumin,Cur）对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）制备的帕金森病（PD）模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用。方法将C57BL6雄性小鼠随机分为正常对照组、MPTP模型组及姜黄素预处理组。用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）技术检测黑质酪氨酸羟化酶（TH）及多巴胺转运体（DAT）基因的表达水平。应用高效液相色谱法检测纹状体（Str）内DA及其代谢物二羟基苯乙酸（DOPAC）含量。结果MPTP模型组黑质TH和DAT基因的表达较正常对照组明显降低,姜黄素预处理组可逆转上述改变（P〈0.01）。MPTP模型组Str内DA及其代谢产物DOPAC的含量较对照组明显减少,应用姜黄素后可逆转上述改变（P〈0.01）。结论姜黄素对MPTP制备的PD模型小鼠黑质纹状体DA能神经元有明显的保护作用。     

颈上交感神经节和单涎酸神经节苷脂联合移植抗帕金森病的实验研究

目的：观察颈上交感神经节（SCG）和单涎酸神经节苷酯（GM1）联合植入帕金森病（PD）大鼠脑内的抗PD效果及移植物的存活情况。方法：将用酶消化法制成的同种大鼠SCG细胞悬液和GM1立体定向植入PD大鼠损毁侧尾壳核内,比较单纯细胞移植组,联合移植组,上清液组和非移植组间及移植前,后诱发旋转行为的变化,移植6个月后移植区行组织学检查（HE,TH染色）。结果：两个实验组中的PD大鼠移植后的旋转行为较移植前和对照组明显改善,其中尤以联合移植组的旋转行为减少最为明显,而两个对照组的改善不明显,脑切片组织学观察可见实验组移植区内有存活良好的TH阳性细胞,联合移植组中的阳性细胞数目明显多于单纯细胞移植组。结论：1．GM1可提高SCG细胞在受体脑内的存活率,2．同种成年大鼠SCG细胞植入PD大鼠脑内可以存活,并可纠正PD大鼠的异常旋转行为。