尿液外泌体提取优化及冷冻对外泌体RNA含量的影响

目的对现有沉淀法提取尿液外泌体进行优化,并探讨不同的储存条件对尿液外泌体RNA含量的影响。方法分别用先浓缩后沉淀法和直接沉淀法提取人尿液标本中的外泌体,比较两种方法的分离效率和成本;采用ExoQuick-TC~(TM)沉淀试剂盒提取外泌体;纳米粒子跟踪分析技术(NTA)检测外泌体浓度及粒径分布;动态光散射技术(DLS)检测外泌体电位;透射电镜(TEM)观察外泌体形态;western blot检测外泌体标记分子CD63及Alix蛋白的表达;另取10例临床尿液标本验证先浓缩后沉淀的提取方法,以证实优化方法的可靠性。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测20例前列腺癌患者尿液外泌体经过反复冻融(新鲜、1、3、5次)及9例前列腺癌患者尿液外泌体在-80℃冷冻不同时间(新鲜、1周、2周、1个月)时外泌体RNA标志物let-7c和PSA mRNA的表达量,并采用Wilcoxon秩和检验进行统计学分析。结果 NTA检测两种方法提取的外泌体粒径分布为30～150 nm,均为单峰;DLS结果显示,两种方法提取的外泌体电位均呈负值;透射电镜观察两种方法提取的外泌体大小较为一致,直径分布为30～150 nm;western blot检测证实优化方法存在外泌体标记分子CD63及Alix蛋白;10例尿液标本提取的外泌体浓度约为10~9～10~(11) particles/mL。外泌体经过5次冻融后let-7c和PSA mRNA含量明显下降,Z值分别为-1.69、-1.73(P均0.05)。而外泌体在-80℃冷冻1个月后其RNA含量保持稳定。结论优化后的外泌体提取方法在保证外泌体浓度和质量的前提下极大地降低成本,分离得到的外泌体在-80℃短时间冷冻后其RNA含量保持稳定,但不能反复冻融超过5次。     

外泌体在肿瘤中的研究进展

外泌体(exosomes)是一种所有细胞都释放的胞外囊泡,其直径为30~150 nm。外泌体包含了DNA、RNA和蛋白质等内容物。外泌体可以调节细胞间通讯,活化它们所参与或相互作用的细胞内信号通路。外泌体可在肿瘤微环境中检测到,越来越多的证据表明外泌体在促进肿瘤生长中起到重要作用,其参与血管生成、免疫应答和肿瘤转移等活动。循环中的外泌体可能会成为液体活检且无创的生物学标志物应用到肿瘤患者的早期检测、诊断和治疗中。     

外泌体蛋白质组学研究进展

外泌体(exosome)是一类由体内多种活细胞分泌的纳米级的双层膜结构小囊泡,可携带包含亲代细胞信息的核酸、蛋白质和脂质等。大多数外泌体有特殊的功能,可能与细胞信号转导功能相关。现已发现外泌体参与疾病进展、肿瘤血管生成、免疫监视等多个环节。外泌体中蛋白质是参与疾病发生、发展的重要部分。该文总结外泌体蛋白质组学的研究思路及方法,综述目前外泌体蛋白质的临床作用,并对外泌体蛋白质组学研究面临的挑战和前景进行分析与评述。     

外泌体在骨肉瘤中的研究进展

外泌体是一类由细胞释放的微小囊泡，其中包含了细胞分泌的蛋白质、核酸和脂质等生物活性分子。不同细胞释放的外泌体在肿瘤发展和转移中发挥重要作用，这些外泌体可通过携带特定的蛋白质和核酸，调节肿瘤微环境，促进肿瘤生长和侵袭，并参与远处转移的过程。此外，外泌体中的某些生物标志物可作为骨肉瘤早期诊断和预后评估的潜在标志物。该文综述了外泌体在骨肉瘤中的研究进展，以期深入了解其在该疾病中的作用机制，并为开发新的治疗策略和预后评估指标提供参考。     

外泌体在甲状腺癌诊疗中的研究进展

甲状腺癌占所有恶性肿瘤的 1％～5％,近年来,全世界人口不断增加,人们生活水平迅速提高,甲状腺癌发病率随之上升,伴有淋巴结转移的患者数量也在迅速增加[1].根据美国癌症中心发布的 2020 年肿瘤调查数据显示,预计 2020 年女性甲状腺癌新发人数在新发肿瘤总人数中的占比可上升至 4％[2].我国癌症中心最新公布的 2019 年相关数据表明,2015 年我国女性甲状腺癌发病率高达8.49％,已成为女性人群第4 大常见肿瘤.按照病理组织学分类,甲状腺癌分为甲状腺乳头状癌(PTC)、甲状腺髓样癌(MTC)、甲状腺滤泡状腺癌(FTC)和甲状腺未分化癌(ATC).PTC是最常见的类型,约占 85％,相对于其他病理类型,PTC的病灶可侵袭至甲状腺以外的组织器官并可发生局部淋巴结转移.研究显示,约有 1/3 患者会发生术后复发转移,且大部分于术后 10 年内发生.所以,必须长期随访甲状腺癌患者,实时监测肿瘤的复发和转移.     

外泌体在糖尿病肾病中的研究进展

糖尿病肾病(DN)为糖尿病常见的微血管并发症,是导致糖尿病患者终末期肾衰竭的主要原因,也是糖尿病的主要死因之一[1]。DN发病机制复杂多样,目前临床尚无有效手段能阻止DN的发生与发展。因此,深入了解其发病机制,对早期诊断和防治DN具有重要的临床意义。外泌体作为细胞与细胞间信号传递的重要载体,参与多种肾脏疾病的发生、发展,本文主要就外泌体在DN中的研究进展予以综述。     

外泌体的生物学特性及其微小RNA在脑梗死诊治中的应用

外泌体是由细胞主动分泌的胞外囊泡,内含多种细胞特异的蛋白质、脂质、核酸等。外泌体作为细胞间通讯的载体,参与了调节脑梗死后中枢神经系统修复及功能重塑的过程。随着研究深入,越来越多研究表明,外泌体来源的微小RNA(miRNA)在脑梗死诊断和治疗中扮演重要角色,现就外泌体的生物学特性及其miRNA的研究应用做一综述。     

外泌体在肿瘤发生发展中的研究进展

<正>外泌体最初被发现时,人们一直认为它是一种细胞的废弃物。直到最近几年,人们发现这种纳米级膜泡中含有大量与其来源密切相关的蛋白质、脂质和RNA分子,可以在细胞之间传递,发挥对受体细胞的调节作用。这些发现引起了人们的极大兴趣,使外泌体逐渐成为研究热点之一。随着相关技术的不断改善,越来越多的研究将目光投向了外泌体在肿瘤的发生发     

外泌体miRNA在产前诊断中的研究进展

外泌体是由活细胞分泌的一种微小囊泡,包含着蛋白质,mRNA和microRNA等多种生物活性物质,通过调控受体细胞各种生理病理功能,参与一系列的生物过程,如参与细胞免疫应答、炎症反应、细胞凋亡、指导肿瘤细胞生长发育等。外泌体miRNA作为外泌体生物活性物质在疾病的早期诊断、临床治疗及其预后发挥着重要作用,其在各领域的应用也成为研究热点。产前诊断主要针对胎儿出生前,对胎儿是否患有某种疾病的诊断,从而防止严重遗传病,先天性疾病或智力障碍患儿的出生。外泌体miRNA存在于血清和多种细胞外液中,也存在于羊水、胎盘和乳汁中。外泌体miRNA在产期诊断中的临床作用也引起越来越多研究者的关注。本文就外泌体miRNA在产前诊断中的应用前景做一综述。     

Novel approaches for scanning near-field optical microscopy imaging of oligodendrocytes in culture

Newborn rat oligodendrocyte cultures were investigated by scanning near-field optical microscope (SNOM), a versatile new tool able to map cell membranes in 3D and simultaneously obtain images of the cytoplasm. Topography, error, transmission and reflection signals were acquired to describe cell morphology with nanometer-scale resolution. Oligodendrocytes were studied as a model because their extensive membrane processes (typical of their physiological role in myelination) made them particularly suitable to test the sensitivity of the new method. Furthermore, we combined a classical histochemical method with SNOM, to identify specific intracellular proteins at high definition. In particular, with this technique, cytoskeleton elements of oligodendrocytes, such as microtubules, were observed with tubulin antibodies. Images obtained with SNOM were also compared with those from conventional scanning electron microscopy (SEM) and optical microscopy. Our results showed that SNOM allowed to observe cell nanostructures otherwise undetectable all together with other microscopies. In conclusion, SNOM, combined with rapid and non-invasive methods of specimen preparation, appears to be a powerful tool that can offer new possibilities in the field of neuroscience imaging at nano-scale level.     

超分辨率超声微血流成像研究进展

超声超分辨率微血流成像(USRMI)基于定位追踪微泡而实现超声超分辨率微循环系统成像,近年来已用于生理和病理微循环成像研究,有助于提高对微血管系统的认识及疾病诊疗水平.本文对USRMI相关研究进展进行综述.     

基于CiteSpace软件的肿瘤外泌体研究文献计量学分析

目的探讨肿瘤领域外泌体研究的现状、热点及前沿发展趋势。方法检索Web of Science (WOS)核心数据库中2010年至2020年肿瘤相关外泌体的研究性文献,采用CiteSpace可视化分析软件对发文量、研究机构、关键词等进行分析。结果筛选后共获得2 556篇文献,总体呈逐年上升趋势。高频关键词主要有expression, microRNA, extracellular vesicle等。关键词聚类主要集中在5个方面,分别为breast cancer, biomarker, apoptosis, NK, migration。近五年的突现词分别为circulating microRNA, prostate cancer, stem cell, hepatocellular carcinoma。结论乳腺癌外泌体研究、肿瘤标志物研究、肿瘤机制研究、肿瘤免疫微环境等方面是肿瘤外泌体研究的热点。前列腺癌、肝细胞癌、干细胞相关外泌体研究以及循环系统中外泌体microRNA是研究前沿领域。     

外泌体在肾间质纤维化中作用的研究进展

慢性肾脏病（CKD）已成为全球性的公共卫生问题,CKD患者的最终结局往往会发展为终末期肾病（ESRD）。肾间质纤维化（RIF）是不同病因的CKD进展为ESRD的共同途径。因发病机制复杂,目前RIF尚无有效的治疗方法,近期研究表明外泌体在多种肾脏疾病的发生发展中发挥着重要作用。该文对外泌体在RIF发病机制中作用的最新研究...     

多发性肌炎/皮肌炎患者血清中外泌体的分离鉴定

目的从多发性肌炎/皮肌炎(polymyositis/dermatomyositis,PM/DM)患者外周血血清中分离鉴定外泌体(exosome),并进行初步的蛋白质研究。方法用Exo QuickTM试剂盒分离纯化PM/DM患者血清exosome;透射电镜观察其形态特征,Nanosight可视型纳米颗粒分析仪检测粒径大小分布情况;western blot鉴定exosome的表面标志物CD9,CD81,Flotillin-2;BCA法对其所携带的蛋白质进行定量分析;十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)初步分析其蛋白质组分。结果透射电镜下患者血清exosome呈圆形或椭圆形膜性小囊泡,直径分布范围92±67 nm;western blot结果表明,PM/DM血清来源的exosome存在表面标志物CD9、CD81、Flotillin-2;BCA法测定PM/DM患者exosome总蛋白浓度为14.68(6.00,32.55)μg/μL,健康组exosome总蛋白浓度为14.09(8.00,23.28)μg/μL,SDS-PAGE显示两组血清exosome均在Mr(×103)为55~70处有高丰度蛋白质富集,在Mr(×10~3)为40~55处存在差异条带。结论成功从PM/DM患者的外周血中分离出血清exosome,并为寻找差异蛋白质提供实验依据。     

尿沉渣倒置显微镜分析系统的实验观察

目的　探讨适于推广的标准、规范的尿沉渣检查方法。方法　将自己研制的尿沉渣倒置显微镜分析系统与FAST READR1 0 2尿沉渣定量计数板法对比观察尿液标本中的细胞及管型。结果　两种方法计数结果无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,均具有良好的重复性。结论　计数板法操作要求严格 ,程序较为繁琐 ,目前普及尚有困难 ;尿沉渣倒置显微镜分析系统操作简单、准确 ,适于临床基层推广。     

光声-超声联合图像重建方法研究进展

超声层析成像（USCT）和光声层析成像（PACT）是两种互补的成像手段。光声-超声（PAUS）联合成像将USCT与PACT结合于同一个成像系统,同时获得成像目标的结构图像和光吸收分布图像,反映生物组织声阻抗的不连续性和光吸收特性,能够准确识别病变组织,并分析其功能成分。本文就PAUS联合图像重建方法的研究进展进行综述。