人大肠癌不同转移潜能细胞株SW620及SW480的差异蛋白质组分析

目的 分析比较人大肠癌不同转移潜能细胞株的差异表达蛋白质图谱,筛选并探讨肿瘤转移相关蛋白与大肠癌发生发展转移的关系。方法 利用双向凝胶电泳(2-DE)和基质辅助激光解析离子化-飞行时间-质谱技术,分析高低转移性细胞株SW620和SW480蛋白质图谱的差异表达,查询数据库筛选大肠癌转移相关蛋白质。结果 MalenieⅢ软件分析3次相同条件下的2-DE图谱,结果显示重复性、匹配性较好。SW620检测到(1316±62)个蛋白点,平均匹配率82%;SW480检测到(1332±74)个蛋白点,平均匹配率80%;蛋白点分布以PI4~7、相对分子质量20000~70000范围内最多。两种细胞株25个差异蛋白点(SW62014个、SW48011个)胰酶胶内酶解、质谱分析获得23张肽质量指纹谱;数据库查询结果高度匹配已知蛋白质3个,初步匹配已知蛋白质或片段14个。在这些差异表达的蛋白质中,部分与基因转录、细胞周期、信号转导、细胞凋亡有关,可能参与大肠癌的分化、增殖、侵袭、黏附和转移等多种生物学行为。结论 人大肠癌不同转移潜能细胞株SW620和SW480的2-DE蛋白质图谱具有明显的差异表达,提示大肠癌转移过程的发生是多种蛋白质功能共同作用的结果。     

槲皮素对结肠癌SW480细胞增殖及蛋白表达的影响

目的研究槲皮素对SW480结肠癌细胞生长增殖及蛋白表达的影响。方法体外培养人结肠癌SW480细胞后,采用人工重组基膜技术监测槲皮素对肿瘤细胞体外侵袭能力和运动活性的作用。将培养成功的细胞分为空白组和其余5个不同浓度(10、20、40、80、160 mg/L)的槲皮素作用组,观察干预结果,检测人结肠癌SW480细胞的增殖抑制率,选择最佳作用浓度;并通过免疫印迹法检测人结肠癌SW480内增殖细胞核抗原(PCNA)、Ki67的表达情况。结果结肠癌SW480细胞经槲皮素处理后,体外侵袭、运动能力呈剂量依赖性下降(P<0.05);槲皮素能显著抑制结肠癌SW480细胞的增殖,浓度为10、20、40、80、160μmol/L的槲皮素作用于结肠癌SW480细胞的增殖抑制率分别为(4.1±1.2)%、(13.9±1.5)%、(38.8±2.2)%、(41.5±2.6)%、(45.3±2.6)%,与空白组对照相比差异有统计学意义(P<0.05);干预的结肠癌SW480细胞内Ki67和PCNA的表达均呈下调表现(P<0.05)。结论槲皮素可呈浓度和时间依赖性地抑制结肠癌SW480细胞的增殖,对人结肠癌SW480细胞的生长有抑制作用,并能诱导其凋亡。     

阿尔茨海默病和帕金森病患者血清代谢组学研究

目的 研究阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)和帕金森病(Parkinson's disease,PD)患者血清代谢物的变化.方法 收集正常人和临床确诊的AD和PD患者的血清,采集各组血清样品的NMR 1H谱,运用主成分分析法(principalcomponentanalysis,PCA)和正交最小偏二乘判别法(orthogonal partial leastsquares-discriminant analysis,OPLS-DA)分析.结果 PCA和OPLS-DA分析显示正常人、AD患者和PD患者的血清代谢特征存在明显差异.与正常人相比,AD患者血清中异亮氨酸和乳酸含量明显升高(P＜0.05),脂质、谷氨酰胺、肌酸和葡萄糖含量明显降低(P＜0.05);PD患者血清中乳酸和谷氨酰胺含量升高(P＜0.05,P＜0.01),葡萄糖的含量降低(P＜0.01);与AD患者相比,PD患者血清中脂质、乳酸和谷氨酰胺含量明显升高(P＜0.05,P＜0.01),而异亮氨酸、丙氨酸和葡萄糖的含量明显降低(P ＜0.05,P＜0.01).结论 AD患者与PD患者在血清代谢水平上具有明显差异,具有明显变化的代谢物(谷氨酰胺、丙氨酸、异亮氨酸、脂质、乳酸和葡萄糖)有可能作为潜在血清代谢标记物,为临床区分AD和PD提供参考.     

苦参碱对人结肠癌SW620细胞增殖及RhoA基因表达的影响

目的 研究苦参碱对人结肠癌SW620细胞增殖及Rho A基因表达的影响。方法 利用Cell Counting Kit-8检测不同浓度苦参碱对人结肠癌SW620细胞的增殖抑制作用,利用流式细胞仪检测细胞的凋亡率,RT-PCR检测SW620细胞内Rho A mRNA表达的水平。结果 苦参碱能明显抑制SW620细胞的增殖,呈现剂量和时间依赖性关系,随着浓度增加能使SW620细胞的凋亡率增加,并且使SW620细胞内Rho A mRNA表达下降。结论 苦参碱能显著抑制人结肠癌SW620细胞的增殖,其作用机制可能与诱导细胞凋亡、下调Rho A mRNA的表达有关。     

羽扇豆醇对人共刺激细胞及结肠癌细胞株 SW480的影响

目的：共刺激细胞是一种对肿瘤细胞有杀伤作用的 NK样T细胞,既往研究表明羽扇豆醇作为一种天然植物提取物,能改变NK细胞、γδT细胞的生长及其对肿瘤细胞的作用。文中主要探讨羽扇豆醇对人共刺激细胞杀伤结肠癌细胞株 SW480的影响。方法取健康人外周血单个核细胞在体外经多种细胞因子诱导为共刺激细胞;不同浓度的羽扇豆醇在作用于共刺激细胞及结肠癌细胞株不同时间段后,甲基偶唑蓝（ MTT）法检测羽扇豆醇对共刺激细胞及结肠癌细胞株 SW480生长的影响;乳酸脱氢酶（ LDH）法检测共刺激细胞对结肠癌细胞株SW480的杀伤活性。结果羽扇豆醇浓度在0．1～200．0μg/mL时对共刺激细胞的生长有促进作用,对结肠癌细胞株SW480有抑制作用;羽扇豆醇诱导后,共刺激细胞对SW480的杀伤活性增强,浓度为12．5 mg/L时与空白对照比较的差异有统计学意义（76％vs 40％, P＜0．05）。结论羽扇豆醇能促进共刺激细胞的增殖,抑制结肠癌细胞株SW480的生长,并能增加SW480对共刺激细胞的敏感性,增强共刺激细胞对SW480细胞株的杀伤能力。     

姜黄素对人结肠癌细胞SW480增殖周期及凋亡的影响

目的探讨姜黄素对人结肠癌细胞SW480细胞生长的抑制作用及其对细胞增殖周期和凋亡的影响。方法采用甲基噻唑（MTT）比色法和生长曲线测定不同浓度姜黄素在不同作用时间内对在体外培养SW480细胞增殖的影响，同时应用流式细胞术检测细胞增殖周期及凋亡率的变化。结果姜黄素可在G0／G1期阻滞人结肠癌细胞SW480的增殖，使S期细胞比率降低；在一定范围内，姜黄素的浓度越高、作用时间越长，对肿瘤细胞生长的抑制作用越强，凋亡率也越高。结论姜黄素能抑制人结肠癌细胞SW480细胞生长，并诱导细胞凋亡而阻止细胞周期。     

基于NMR代谢组学方法研究高果糖诱导大鼠肝脏组织的代谢变化

目的应用基于核磁共振氢谱代谢组学方法研究高果糖喂养大鼠肝脏组织的代谢变化。方法Wistar大鼠随机分为对照组和模型组,每组8只。对照组给予纯净水饲养;模型组给予10％果糖水饲养．制备非酒精性脂肪肝模型。实验8周后取大鼠肝脏组织,采集两组大鼠肝脏组织水溶性提取液的’HNMR谱,运用主成分分析法（principal component analysis,PCA）分析。结果与对照组相比,模型组中乳酸、肌酸和牛磺酸升高,异亮氨酸、亮氨酸、谷氨酰胺、胆碱和甜菜碱／氧化三甲胺降低,差异均有统计学意义。结论应用核磁共振和模式识别的代谢组学方法,获得高果糖喂养大鼠的肝脏组织提取液的代谢特征,为理解高果糖引起肝脏脂肪病变过程中的代谢变化提供了依据。     

二氢青蒿素对结肠癌细胞系SW480增殖凋亡的影响

目的:研究二氢青蒿素(DHA)对结肠癌细胞系SW480的增殖、凋亡的作用,初步探讨其机制。方法:采用结肠癌细胞SW480为研究对象,观测不同浓度和作用时间的DHA对细胞作用,MTT噻唑蓝比色法检测对细胞的增殖抑制作用,普通光镜观察细胞形态的变化,分别PI单染及Annexin-V双染法流式细胞术分析细胞周期分布和早期凋亡率的变化,免疫细胞化学检测凋亡抑制蛋白Survivin及效应蛋白Caspase-3表达情况。结果:DHA对SW480细胞增殖有抑制作用且呈浓度和时间依赖性。普通光镜下观察SW480呈典型的凋亡形态学改变。流式细胞仪检测细胞阻滞于G0/G1期,随药物剂量增大G0/G1期比例而逐渐增高,S期比例降低,Annexin-V双染法示早期细胞凋亡率呈明显浓度依赖性升高。免疫细胞化学结果示DHA作用48 h后Survivin表达减弱,而Caspase-3表达增强,呈剂量依赖关系。结论:DHA能显著抑制结肠癌细胞生长,影响细胞周期,诱导细胞凋亡,可能与抑制Survivin蛋白表达,促使Caspase-3表达增强有关。     

体外扩增CIK细胞对结肠癌SW480细胞株杀伤作用的研究

目的：观察细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK细胞）体外增值情况,了解其扩增后杀伤结肠癌SW480细胞株最佳比例及最有效的维持时间.方法：分离健康人外周血单个核细胞在体外诱导制备成CIK细胞,计数不同培养时间的CIK细胞,采用流式细胞仪检测其表型特征.倒置显微镜下观察CIK细胞作用与SW480结肠癌细胞的形态学变化,采用HE染色、AO/EO荧光染色和MTT法检测CIK细胞对SW480结肠癌细胞株的杀伤活性.结果：CIK细胞在体外培养14 d细胞增殖倍数为（100.22±8.68）倍,培养21 d细胞增殖倍数为（300.86±10.13）倍,两者比较差异有统计学意义（P＜0.05）;培养28 d细胞增殖倍数为（305.06±5.13）倍,与培养21 d的细胞增殖倍数比较差异无统计学意义（P＞0.05）.培养21 d的CIK细胞中CD3＋、CD56＋双阳性细胞的百分比为（45.3±5.1）％,与28 d相比较差异无统计学意义（P＞0.05）,第35天细胞增殖（212.50±4.25）倍,呈下降趋势.CIK细胞对结肠癌SW480细胞株有明显的杀伤作用,最高杀伤率为（68.21±1.31）％.结论：CIK细胞具有较强的抗结肠癌细胞活性,体外培养14～21 d具有较强的抗瘤活性,此时应用较为合适.CIK细胞作用于肿瘤细胞应达到一定数量并维持一定时间,可达到较好的抗瘤活性.     

Western blotting检测survivin封闭载体转染大肠癌SW620细胞的实验研究

【目的】探讨KNA interferenece（RNAi）对survivin在大肠癌细胞SW620表达的影响及siRNA干扰后诱导survivin蛋白表达降低的机制。【方法】构建survivin特异性的RNA封闭性载体survivin，通过培养大肠癌细胞SW620，survivin封闭性载体转染SW620细胞；Hoechest染色大肠癌细胞，通过荧光显微镜观察细胞形态变化；Western blotting分析肿瘤细胞的蛋白表达情况。【结果】DNA测序证实表达质粒构建成功；免疫荧光显微镜可见细胞凋亡小体；Western blotting显示：大肠癌survivin的蛋白表达明显弱于对照组。【结论】Survivin与大肠癌的发生存在一定的关系，RNAi能够下调survivin的表达。     

雷公藤内脂醇对SW480细胞的生长抑制作用

目的观察雷公藤内酯醇(Tritolide,TL)对体外培养的SW480细胞(人结直肠癌细胞)的诱导分化机制,为人结直肠癌的治疗提供理论依据。方法应用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度的TL对SW480细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测SW480细胞周期进程及凋亡率,相差显微镜观察不同浓度的TL对SW480细胞形态学改变,电子显微镜观察细胞超微结构的变化。结果不同浓度的TL对SW480细胞增殖均有抑制作用,具有明显的剂量依赖性,流式细胞仪结果显示,G1期细胞增多,S期细胞减少,G2/M期细胞相对增多,细胞凋亡率升高,相差显微镜下实验组细胞贴壁不佳,细胞数减少,细胞圆缩,电子显微镜下细胞高度空化,线粒体肿胀,可见凋亡小体。结论TL对SW480细胞有明显的增殖抑制作用,阻止SW480细胞G1期向S期的转化进程并诱导SW480细胞凋亡及超微结构改变。     

Trastuzumab修饰四代聚酰胺-胺型枝状聚合物纳米粒靶向结肠癌细胞SW480的研究

目的 该研究旨在探讨Trastuzumab修饰四代聚酰胺-胺型枝状聚合物纳米粒对结肠癌SW480的靶向效果,为构建新型的靶向结肠癌的纳米递送系统提供实验数据.方法 MTT法确定SW480细胞摄取PAMAM NPs和PAMAM-Trastuzumab NPs适当的浓度;通过激光共聚焦和荧光显微镜定性观察SW480对罗丹明B标记的PAMAM NPs和PAMAM-Trastuzumab NPs的摄取;并采用流式细胞计数仪定量研究SW480细胞对两者的摄取差别;尾静脉注射荷SW480瘤裸鼠研究两者体内分布情况.结果 PAMAM NPs和PAMAM-Trastuzumab NPs的浓度在0.2 mg/mL时细胞存活率较高且对SW480细胞的毒性较小.激光共聚焦断层扫描显示SW480细胞可以较好地摄取PAMAM-Trastuzumab NPs,同时流式细胞仪定量显示PAMAM-Trastuzumab NPs在SW480细胞的分布较PAMAM NPs高40％(P ＜0.05).PAMAM NPs和PAMAM-Trastuzumab NPs在移植瘤中的分布明显多于其他脏器,并且随时间的延长PAMAM-Trastuzumab NPs体现了更好的靶向效果.结论 体外与体内实验证明Trastuzumab修饰的PAMAM NPs对结肠癌细胞SW480有很好的靶向效果,可为结肠癌的靶向治疗提供较好的药物载体.     

STAT3-siRNA慢病毒表达载体的制备及其在SW480细胞中的表达

【目的】通过慢病毒感染SW480细胞观察RNAi对细胞内STAT3基因表达的影响。【方法】制备STAT3干扰质粒,与其它3种质粒共同转染至293T细胞中组装为STAT3-siRNA慢病毒表达载体。流式测定病毒滴度后选择最适滴度感染SW480细胞并进行分选。Real-time PCR及Western blotting分析该慢病毒在SW480细胞中对于STAT3基因表达的影响。【结果】测序结果说明制备的慢病毒表达载体符合实验预期。该siSTAT3慢病毒感染SW480细胞后,流式细胞仪检测发现SW480细胞凋亡比率增加,Real-time PCR检测发现慢病毒对于STAT3 mRNA表达量的干扰效率为78.68%,Western blotting检测发现STAT3蛋白表达量下降,与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.05）。【结论】本研究制备的STAT3-siRNA慢病毒表达载体,能够有效干扰结直肠癌SW480细胞株STAT3表达。     

具有肝转移倾向的结肠癌细胞亚系的筛选与鉴定

目的 筛选人结肠癌SW480细胞中具有特定肝脏转移倾向的亚克隆,比较它与母系生物学特性的差异,为结肠癌肝转移机制的研究提供基本的实验材料.方法 采用外科原位接种、组织块细胞培养法从裸鼠体内获得SW480细胞系中具有肝脏转移倾向的亚克隆SW480/M5;体内体外实验验证它与母系细胞在生物学特性上的差异.结果 体内实验证明SW480具有广泛转移的潜能,而SW480/M5细胞只具有向肝脏转移的潜能;SW480/M5细胞原位瘤的质量较SW480细胞大且皮下瘤生长速度较快:体外实验证明SW480/M5细胞的克隆形成能力,体外增殖能力、体外运动及侵袭能力较SW480细胞强,而对FN的粘附能力较SW480细胞弱.结论 从结肠癌细胞系SW480中筛选出的细胞亚系SW480/M5转移方向明确,是结肠癌肝转移机制研究的理想细胞模型.     

HNF6重组慢病毒载体的构建及对大肠癌SW620细胞侵袭转移能力的影响

目的构建HNF6的慢病毒载体pLeno-DCE-HA-HNF6,建立稳定表达HNF6的大肠癌细胞系并观察HNF6对大肠癌细胞系SW620的侵袭转移能力的影响。方法构建HNF6慢病毒载体pLeno-DCE-HA-HNF6,感染293T细胞,收集上清测定病毒滴度;病毒颗粒转染SW620细胞,通过荧光显微镜及流式细胞仪观察转染效率;定量PCR(qPCR)及Western blotting检测HNF6的表达;应用Transwell和划痕试验观察SW620细胞侵袭转移能力的变化。结果通过PCR及酶切鉴定成功构建pLeno-DCE-HA-HNF6载体;包装并得到高滴度的病毒颗粒;转染SW620后,qPCR及Western blotting检测到HNF6表达明显升高;HNF6导致SW620明显的细胞形态变化,Transwell及划痕试验证明HNF6使SW620细胞迁移能力降低。结论成功构建并包装得到HNF6的慢病毒颗粒,建立稳定表达HNF6的大肠癌细胞系SW620-HNF6,证明过表达HNF6后可以抑制大肠癌侵袭转移能力。     

抗结核药物异烟肼肝毒性时效关系的代谢组学

目的研究异烟肼灌胃后不同时段大鼠尿液的代谢表型改变及其与组织病理学和血浆生化指标变化的相关性,探讨代谢组学在药物毒理学研究中的应用。方法Wistar大鼠连续经口灌胃0、50、100、200和400mg.kg-1异烟肼3、7、14d,收集给药前24h及给药期间每天24h的尿液,测定质子核磁共振(1HNMR)谱,并进行血浆生化指标测定和肝脏组织病理学检查。结果常规毒性研究方法显示异烟肼在较高剂量、较长给药时间(7d以上)时表现出肝毒性,并且有较好的时间-效应关系。对大鼠尿液进行代谢组学研究显示各组动物代谢谱各不相同,随着给药时间的变化,大鼠尿液1HNMR谱发生一定改变,代谢谱的改变与常规毒性检测指标相符且更灵敏。与正常对照组比较,给药组尿样1HNMR谱葡萄糖和牛磺酸显著增加,2-酮戊二酸和柠檬酸显著降低。结论大鼠尿液1HNMR代谢轨迹与异烟肼毒性作用时间密切相关,异烟肼引起的肝毒性与线粒体功能受损、三羧酸循环中能量代谢异常及葡萄糖代谢紊乱有关。代谢组学分析在毒理学研究中有着广泛的应用前景。