用Bouin液固定不脱钙制作胎儿指骨整体切片

组织学观察是骨组织研究的重要手段之一[1],由于骨组织致密、坚硬,并含有骨胶等成分,所以要制作一张高质量的切片(和软组织相比)有一定的困难[2].近年来出现的塑料包埋等[3,4]不脱钙骨切片及染色技术尚不够成熟和稳定[2].我们在教学过程中用胎儿指骨的整体切片做为观察软骨内成骨和骨组织组成及细胞结构的标本,制作时采用Bouin液做为固定液,用氯仿做为透明剂,不需脱钙制作出切片的组织和细胞的形态结构完整,染色鲜明、色泽深浅适当.而将皮肤和结缔组织等一起固定包埋制作骨切片的文献极少.现将我们的经验报道如下.     

脱钙骨冷冻切片硫堇-苦味酸染色方法

传统制作骨切片的方法是采用骨组织经过脱钙后进行火棉胶包埋切片,硫堇-苦味酸染色.火棉胶切片存在程序繁琐、周期长、切片较厚等缺陷[1].笔者采用冷冻切片法对脱钙骨进行切片,然后硫堇-苦味酸染色.结果显示,冷冻骨切片制作染色方法操作程序简便,制作周期短,染色效果理想,适用于组织学实验教学中切片的大量制作.在与骨相关的科学研究领域也有一定的应用价值.     

EDTA脱钙在骨组织大切片制片中的应用效果

骨肿瘤病理大切片可以观察组织全貌,准确评估病灶大小、侵袭范围以及手术切缘,对于确定骨肿瘤的边界和临床预后非常重要。但骨组织中丰富的钙盐导致完整制片困难,尤其是大切片的制作。普通酸性脱钙液因破坏细胞及组织结构,影响染色、镜下观察和分子检测,已不适用于日常工作,而EDTA脱钙液性质温和,能有效保护组织内的核酸和组织抗原,日益成为骨标本处理的首选[1-2]。本科室将EDTA脱钙液应用于骨组织大切片制片及染色过程,总结了骨组织大切片的制作方法,以期在临床骨病变标本的处理中推广应用。     

塑料包埋技术在骨组织研究中的应用

目的 研究塑料包埋技术制作的不脱钙硬组织切片,确定制作的关键步骤及用于骨组织研究的优点.方法 选取狗胫骨节段或带有金属种植体的骨材料塑料包埋,LeicaSP1600切片机(德国)切片,用苦味酸品红染色观察,并与常规石蜡包埋相比较.结果 不脱钙骨组织经塑料包埋技术处理后,可清楚地观察类骨质形成、多孔材料及种植体周围骨组织的整合程度.与常规石蜡包埋相比,染色层次分明,组织移位形变小.结论 应用规范塑料包埋技术制作不脱钙硬组织切片,更有利于行骨形态计量分析以及材料与骨整合的研究.     

Research on plastic embedding combined with tetracycline fluorescence labeling in undecalcified bone tissue

目的 探讨塑料包埋技术结合四环素荧光标记制作不脱钙骨组织切片的关键步骤及应用.方法 选取四环素荧光标记的兔股骨进行塑料包埋,Leica SP 1600切片机切片,荧光显微镜观察后用苦味酸品红染色,并与常规石蜡包埋切片相比较.结果 四环素荧光标记不脱钙骨组织经塑料包埋技术处理后,可清楚地观察类骨质形成、植入体及周围骨组织的整合程度,与常规石蜡包埋相比,染色层次分明,组织移位形变小.结论 应用塑料包埋技术制作四环素荧光标记不脱钙骨组织切片,有利于行骨形态计量分析以及植入体与骨整合的研究.     

塑料包埋技术在骨组织研究中的应用

目的研究塑料包埋技术制作的不脱钙硬组织切片,确定制作的关键步骤及用于骨组织研究的优点。方法选取狗胫骨节段或带有金属种植体的骨材料塑料包埋,LeicaSP1600切片机（德国）切片,用苦味酸品红染色观察,并与常规石蜡包埋相比较。结果不脱钙骨组织经塑料包埋技术处理后,可清楚地观察类骨质形成、多孔材料及种植体周围骨组织的整合程度。与常规石蜡包埋相比,染色层次分明,组织移位形变小。结论应用规范塑料包埋技术制作不脱钙硬组织切片,更有利于行骨形态计量分析以及材料与骨整合的研究。     

塑料包埋结合四环素荧光标记制作不脱钙骨组织切片的实验研究

目的探讨塑料包埋技术结合四环素荧光标记制作不脱钙骨组织切片的关键步骤及应用。方法选取四环素荧光标记的兔股骨进行塑料包埋,Leica SP 1600切片机切片,荧光显微镜观察后用苦味酸品红染色,并与常规石蜡包埋切片相比较。结果四环素荧光标记不脱钙骨组织经塑料包埋技术处理后,可清楚地观察类骨质形成、植入体及周围骨组织的整合程度,与常规石蜡包埋相比,染色层次分明,组织移位形变小。结论应用塑料包埋技术制作四环素荧光标记不脱钙骨组织切片,有利于行骨形态计量分析以及植入体与骨整合的研究。     

一种应用冷冻切片显示骨细胞的Schmorl氏硫堇-苦味酸染色法

骨组织切片制作方法可分为硬骨磨片、石蜡包埋切片、冷冻切片等几种方法[1].硬骨磨片由于骨质坚硬,磨制费时,不适宜大量制作教学切片,石蜡包埋切片,该法存在过程复杂、费时(1个月左右),而且切片染色背景深浅不一,从而影响结果的观察和分析.     

骨组织不脱钙大切片制作技术

正骨组织制片是常规病理学技术制片中的难点。骨组织富含钙盐和无机盐,必须先进行组织脱钙才能进行石蜡包埋、切片。并且脱钙过程中经常存在脱钙不彻底或过分脱钙的情况,导致无法制片或常规染色不佳。骨组织在制片过程中原有组织形态通常会发生改变,不能准确的评价骨的动态重建过程[1],如新骨的形成、骨样组织的矿化等。常规人体股骨头大标本制片,只是切取病变部位,无法整体观察骨小梁生长的结构、方向性等构筑学参数。为解决上述问题,本     

实验动物骨折模型不脱钙切片的制作

实验动物骨折模型不脱钙切片的制作魏典，于顺禄我们在动物骨折愈合过程的骨计量学研究中，采用了甲基丙烯酸甲丁酯进行了骨标本不脱钙包埋、切片，从而保存了骨原有矿物质及标记的四环素。因而能在荧光显微镜下进行骨组织形态计量学观察与光镜下组织学观察。１材料和方法...     

复合配方脱钙液处理兔股骨髁标本

背景：兔骨缺损修复模型被广泛应用于骨替代材料的研究中,在实验过程中经常需要对兔股骨髁标本进行脱钙制作病理切片,但普遍存在脱钙困难的问题。 目的：尝试应用一种复合脱钙液实现软骨覆盖兔股骨髁有效脱钙。 方法：取兔股骨髁标本12个,分为2组,分别用自制复合脱钙液和普通甲酸脱钙液进行常温条件下的脱钙处理,复合脱钙液的组成比例如下：盐酸8 mL,甲酸10 mL,醋酸5 mL,中性甲醛固定液100 mL。在经过1周的常规脱钙过程之后,进行标准化的脱水、包埋、切片和染色程序。统计切片的完整率,观察苏木精-伊红染色后切片的质量和细微结构,并对两种脱钙液的经济性进行比较。 结果与结论：复合脱钙液组的切片完整率显著高于甲酸组,差异有显著性意义(74% vs18%,P < 0.05)。复合脱钙液组的切片着色优良,背景清亮,微观结构清晰,细微结构保存完整,不同组织染色对比鲜明。该复合脱钙液的应用成本较常用的甲酸脱钙液降低65%。提示自制复合脱钙液可有效解决兔骨缺损修复模型实验中的脱钙困难问题,且复合脱钙液配置简便,成本低。     

介绍一种改良脱钙液在骨组织制片中的应用

骨、含有骨质的肿瘤及钙化组织和骨髓穿刺组织很坚硬,将其制成几微米切片相当困难,常用的方法是先经脱钙处理,使其变软后再切片,所以脱钙是这类组织制作病理切片的关键技术.脱钙液和脱钙方法很多,传统方法脱钙一般用硝酸,其效果不稳定,骨组织脱钙不足,切片破碎甚至切不成片且极易脱片;骨组织脱钙过度,破坏组织的形态结构和细胞成分的性质,造成细胞核不着色或着色很浅,从而影响对病变组织的病理诊断.已有学者对此进行了改进[1~4], 但目前尚无公认的理想方法.为此我们在工作中反复摸索,结合Plank-Rycho脱钙液总结出一套改良的脱钙液并获得了满意效果,现将此方法介绍如下.     

骨切片染色方法的研究

<正>骨主要由骨组织、骨膜及骨髓构成骨组织(osseous tissue)是骨的结构主体,含有大量骨盐沉[1]积为坚硬的结缔组织。对于骨组织微细结构的了解一般通过骨磨片观察认识,在组织学实验教学中,能够观察到形态完整,结构清晰的各种骨细胞,选择良好的骨切片标本脱蜡,染色方法十分重要。笔者结合教学实践,经过长期实验探索,认为采用纸压吸附法脱蜡,Schmorl氏硫堇-苦味酸染色法制作教学骨切片,效果较为满意。     

石蜡切片显示大脑神经细胞方法探讨

以片显示大脑各种神经细胞一般都是用含有重铬酸钾的固定液固定,用硝酸银浸染的方法进行,所以要想制作大批教学标本只能用传统的方法。而大脑神经细胞的特殊染色,只能用火棉胶切片或冰冻切片制作标本,操作步骤复杂、时间长。为此我们对石蜡切片、镀银染色显示大脑神经细胞的方法进行了探讨。本实验选用小白鼠大脑,组织块大小为2×2cm,勿超过3cm;固定后入1%～1.5%硝酸银水溶液浸染5～7天;蒸馏水洗2分钟;用还原液作用24小时;组织块脱水、透明、浸蜡、包埋、切片,因低浓度酒精易使组织块退色,因此组织块经还原后在酒精内的脱水时间一定要精确。…     

简易骨切片制作法

脱灰骨切片的制作,一般采用火棉胶切片或冰冻切片,用特殊方法染色,在切片制作上都比较麻烦,而骨磨片是将未脱钙的骨,经过仔细研磨制成不染色的较薄磨片,用空气封闭法封片或用特殊染色法染色均能显示骨陷窝及骨小管.这种方法在磨片过程中比较困难,费时费力.作者从以上两种方法得到启发,用脱钙骨切片,并用空气封闭法封片,显示骨陷窝及骨小管,此法操作简便,易掌握,结果优良,与骨磨片相一致.1 材料与方法取人的新鲜肱骨一块,用10%福尔马林固定1周左右,中间换几次固定液,然后锯成1～2mm厚的骨片.流水冲洗24小时,进入100%酒精充分脱脂后,再浸入100%酒精数次,将最后一次酒精倒出50%于水中,与水充分混合,若无脂类悬浮物存在,说明脱脂充分,蒸馏水洗.入下列脱钙液快速脱钙:7.5%硝酸3小时,10%盐酸3小时,5%蚁酸5小时,三氯醋酸3小时     

介绍一种骨磨片荧光显微镜观察四环素的改进方法

骨组织质地坚硬,如不进行脱钙,要制出高质量的组织切片有一定的困难。对研究骨的生长发育、骨质疏松症、骨移植材料及内固定材料和骨愈合之间的关系,均要求在不脱钙的情况下观察。冷冻切片只能切较小的皮质骨切片,而不能做较大的切片,也不能对带金属的内固定材料的进行研究;而传统骨磨片法更费时费力。我们结合两法优点,制出较理想的切片,报道如下。1　材料与方法11　标本　实验动物为成年兔的尺桡骨,取材前2周肌注或口服四环素80ｍｇ/ｋｇ,连续(肌注或口服)3天,间隔1周后再用同法给土霉素,停药3天后处死。(1)取所需骨组织一段,固定于4%甲醛…     

EXAKT切磨系统在带金属种植体软硬组织切片中的应用

背景：目前常用的Polycut硬组织切片机难以制作皮质骨或含坚硬植入物组织的薄层切片,近年来这些切片多用EXAKT硬组织切磨系统进行制作。 目的：实验采用EXAKT切磨系统制作含金属内植物的软、硬组织薄层切片。 方法：取大鼠股骨远端、小鼠股骨干骨折部、带有钛合金种植体的犬下颌骨和带有钴铬支架的猪冠状动脉标本,经多聚甲醛固定和丙酮脱水后用有机玻璃(甲基丙烯酸甲酯)浸透包埋。组织包埋块用EXAKT系统作厚度约300 μm的切片,然后磨片至厚5~10 μm的切片。不同切片用苏木精-伊红和甲苯胺蓝染色后在光学显微镜下观察形态。 结果与结论：甲苯胺蓝染色显示,大鼠股骨远端骨组织切片中干骺端矿化骨小梁呈浅蓝色、皮质骨结构完整,无碎裂。含带有钛合金种植体的犬下颌骨切片浅蓝色宿主骨与黑色金属种植体密切结合,形成牢固的界面。四环素标记的小鼠股骨干骨折部骨痂切片,在荧光显微镜(紫外光)下显示明显的双层荧光带。苏木精-伊红染色的包裹钴铬合金支架材料的猪冠状动脉组织切片显示,支架材料维持在原位,与血管壁无脱离或游移现象,组织无皱缩或折叠。结果提示,采用EXAKT切磨系统技术能制作出高质量的软、硬组织薄层切片,可清晰显示各种组织结构和人工植入物。     

改良快蓝焦油固紫染色法

改良快蓝焦油固紫(Luxol Fast Blue—CresylViloet)染色是根据Diamond法改良而建立的联合染色方法.可以同时在一张切片上观察神经细胞、神经胶质细胞和髓等结构.该方法具有两个突出优点:(1)使用冰冻切片法,制作时间周期短.染色方法简便,切片不易破碎.可制直径>2厘米的连续切片,对脑切片尤为适宜,便于科研工作中的连续观察.(2)集神经细胞,神经胶质细胞和髓鞘于一体.结构清晰,容易分辨.可使用于中枢神经系统的研究和教学中.1 方法1.1固定10%福尔马林液灌注或直接固定.10%盐水福尔马林用碳酸镁饱和液再固定14～20天.中间更换新固定液一次.1.2 冲洗 组织流水冲洗1小时,入20%蔗糖内至组织块下沉.1.3 切片 冰冻切片20～40μm.收集切片于20%酒精溶液中,便于展平切片.     

一种简便快捷的骨及钙化组织脱钙液

脱钙是骨组织制片染色技术的关键步骤.在实践工作中以硝酸、盐酸为主配制的脱钙液,脱钙迅速,但对组织破坏程度大,影响以后染色.螯合剂是一种缓慢的脱钙剂,脱钙后染色分化仍佳,酶也不受破坏,但脱钙需花费2周至几个月时间,不能满足病理科日常工作的需求[1].现介绍一种混合脱钙液,它既对组织损害小,又简便快捷.它可促进脱钙并加快脱钙速度,同时又防止纤维性组织过度膨胀,减少对组织的破坏及对染色的影响.经此脱钙液制成的组织切片薄厚均匀,平坦完整,组织形态和细胞清晰,着色鲜艳.     

加热式磁力搅拌器在骨组织脱钙中应用

骨组织脱钙制片是临床病理诊断中常用的一种手段 ,而选择适当的脱钙液、脱钙方法以及掌握脱钙的时间往往与骨组织的制片质量密切相关。为了了解经脱钙后的骨组织能否应用于免疫组化和特殊染色 ,进行必要的鉴别诊断 ,我们在实践工作中特对需要脱钙的骨组织进行了实验比较 ,现将结果报道如下。1　材料与方法1 1　材料和仪器　收集临床手术切除的骨肿瘤、病变骨以及钙化组织标本共 5 0例 ,不同的标本根据制片要求用骨锯或骨锉处理成薄片备用。用于脱钙的磁力加热搅拌器为江苏省金坛医疗仪器厂生产的金怡牌 78 1型。1 2　方法　将准备脱钙的标本…