基因芯片在胰腺癌相关基因筛选中的初步研究

目的探讨基因表达谱芯片技术在筛查胰腺癌相关基因群表达中的作用。方法按微矩阵排列的4096种全长基因PCR产物制成Biostar H-40s型微矩阵表达谱芯片;采用一步法抽提胰腺癌及正常胰腺组织总RNA,用Oligotex mRNA离心柱分离纯化两种组织的mRNA;经逆转录合成荧光分子(Cy3/Cy5)掺入的cDNA一链制备表达谱探针,芯片杂交和洗片后,用荧光扫描仪扫描芯片荧光信号图像,分析胰腺癌及正常胰腺组织中差异表达的基因。结果在4096种基因中,胰腺癌组织与正常胰腺组织间有949条(23.2%)存在差异表达的基因,其中我们确定了9条上调和8条下调的癌基因和抑癌基因可能与胰腺癌的发病机制存在相关性。结论基因表达谱芯片技术可以筛选出胰腺癌表达异常的相关基因群,对其进一步研究有助于认识胰腺癌的发病机制。     

中药益胃宁对胃癌MFC荷瘤小鼠的抗肿瘤作用研究

目的研究中药益胃宁对胃癌荷瘤小鼠的抗肿瘤作用.方法将荷瘤小鼠灌胃给药10天后取瘤称重,计算抑瘤率.结果给药高剂量组(16g/kg体重)、中剂量组(8g/kg体重)、低剂量组(4g/kg体重),其抑瘤率分别为43.7%,51.2%,27.6%.实验组肿瘤重量与对照组比较明显减少,P＜0.05.结论益胃宁对胃癌MFC荷瘤小鼠肿瘤的生长有明显的抑制作用.     

康莱特注射液合并健择对移植于裸鼠的人胰腺癌的疗效初步研究

目的:探讨康莱特注射液合并健择对移植于裸鼠的人胰腺癌的作用。方法:24只裸鼠皮下接种人胰腺癌细胞PANC-1,10d后随机分成4组,每组6只裸鼠。对照组给予生理盐水;康莱特组自接种第10天起连续给药10次,给药剂量为5·0g/kg,静脉推注;健择组在接种第12天给药1次,给药剂量为60mg/kg;合并给药组剂量及给药时间同单独给药组。停药后1周脱颈处死动物,解剖裸鼠,称体质量、瘤质量,测量肿块大小并计算抑瘤率。结果:单独注射康莱特及健择组的抑瘤率分别为12·24%和13·26%;合并用药组抑瘤率为40·11%,明显高于单独用药组。结论:康莱特注射液与健择对移植于裸鼠的人胰腺癌的抑制作用具有协同效应。     

中药仙龙GS对小鼠Hep-A-22 移植性肝癌的抑制作用

目的中药仙龙GS对Hep-A-22荷瘤小鼠抑瘤作用的研究.方法对Hep-A-22荷瘤小鼠进行为期10天的灌胃给药后取瘤称重,通过抑瘤率判断仙龙GS对小鼠移植瘤的抑制作用.结果当剂量为16.7g/kg和25g/kg时,其抑瘤率分别为55%和41%.结论中药仙龙GS具有一定的临床应用价值.     

西茜铂对宫颈癌HeLa细胞体内外增殖抑制作用的研究

目的:评价超分子药物西茜铂(CCP)体内外抗宫颈癌HeLa细胞的作用.方法:细胞培养测定CCP对HeLa细胞的半数抑制浓度(IC50);建立HeLa细胞移植裸鼠模型,比较CCP与卡铂(CBP)的抑瘤作用;HE染色判断肿瘤组织的坏死,CD34抗体免疫组化染色观察肿瘤组织中微血管的生长状况.结果:CCP和CBP对HeLa细胞的IC550分别是(44.4±8.5)μg/L和(103.7±8.2)/μg/L;在裸鼠移植瘤,高(20mg/kg)、中(15mg/kg)、低(10mg/kg)剂量CCP组和CBP组(20 mg/kg)的抑瘤率分别为56.1%~56.6%、37.6%~50.8%、33.0%~41.7%和21.1%~39.2%;高、中剂量CCP组的抑瘤率明显高于CBP组(20mg/kg),瘤质量低于CBP组,差异有统计学意义,t值分别为2.98和2.52,P均≤0.05.与葡萄糖组对比,CCP组的肿瘤组织血管生成受到抑制,坏死明显.结论:CCP在体内外均具有抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖作用,其作用明显高于CBP.     

雷公藤内酯醇对胰腺癌细胞株SW1990基因表达谱的影响

目的:应用基因表达谱芯片研究胰腺癌细胞株(SW1990)在雷公藤内酯醇作用后其基因表达的差异性。方法:用Cy5和Cy3两种荧光染料通过逆转录反应将加药组和对照组的SW1990细胞的mRNA分别标记成两种探针,并与载有一组靶基因的表达谱芯片杂交,通过扫描荧光强度,计算机软件分析,寻找经雷公藤内酯醇作用后表达有差异的基因。对芯片结果中两个表达有改变的基因行荧光定量PCR验证。结果:胰腺癌细胞SW1990受雷公藤内酯醇作用4h后,共筛选出11条差异表达基因,且全部下调。结论:雷公藤内酯醇可能部分通过下调C-MYC、ETS2、TGIF、RTP801等基因来发挥其有效的抗肿瘤特性。     

益气养阴方抑制肿瘤转移及对肿瘤相关基因表达谱的影响

背景与目的： 探讨益气养阴方抑制肿瘤转移及对肿瘤相关基因表达谱的影响。 材料与方法：制备20只小鼠肌肉移植瘤模型,随机分为对照组和实验组,每组10只。对照组小鼠按0.01 ml/g灌胃生理盐水,实验组小鼠按0.01 ml/g灌胃益气养阴方水煎液(每毫升药液含4.3 g原生药材)。35 d后处死小鼠,称取移植瘤重量,计算肺转移瘤生长指数。同时提取肿瘤组织总RNA,用RT-PCR逆转录合成cDNA并分别用Cy3-dUTP、Cy5-dUTP标记对照组和药物组cDNA,与含有140 000点的小鼠基因表达谱芯片杂交,杂交芯片扫描结果用GenePixPro 3.0软件进行分析统计。 结果： 益气养阴方明显降低小鼠肌肉移植瘤重量(与对照组比较,P<0.01),肺转移瘤生长指数也明显少于对照组(与对照组比较,P<0.05),差异基因表达谱分析表明本方对与肿瘤浸润转移、信号转导、细胞增殖、细胞凋亡及与代谢等有关的多个靶位基因进行调节。 结论： 益气养阴方具有抑制肿瘤转移的作用。     

中药苦参抗肿瘤作用的实验研究

目的　研究苦参在动物体内的抗肿瘤作用。方法　采用小鼠口服灌胃和体外培养法 ,对小鼠S180 肉瘤 ,艾氏腹水癌 (ECA)进行体内外抑瘤实验。结果　体内实验组动物肿瘤明显减小 ,在剂量为 10 g/kg时 ,抑瘤率为 42 .0 8%。体外培养在剂量为 2 0 0 μg/ml时 ,对瘤细胞生长抑制率为 66%。 结论　体内和体外实验结果均证明苦参有抗肿瘤作用。     

吉西他滨对胰腺癌PC-2细胞体外生长及基因表达的影响

目的:探讨吉西他滨对胰腺癌PC-2细胞体外生长及基因表达的影响.方法:体外培养胰腺癌PC-2细胞,MTT法检测不同浓度吉西他滨(空白组,10μg/ml,20μg/ml,30μg/ml,40μg/ml,50μg/ml,60μg/ml,70μg/ml,80μg/ml,90μg/ml及100μg/ml吉西他滨组)对PC-2细胞体外生长的影响.流式细胞仪检测吉西他滨(40μg/ml组,60μg/ml组)对胰腺癌细胞周期及凋亡影响.Human 1A 基因表达谱芯片分析2组间基因谱差异表达.结果:胰腺癌PC-2细胞的凋亡分数与吉西他滨的浓度呈剂量依赖关系,加药组G1期细胞百分比与对照组相比差异具有统计学意义(P＜0.05),且随浓度增大,G1期细胞比例逐渐增多,而S期细胞则相反.40μg/ml吉西他滨组胰腺癌细胞24h凋亡率是10.86 %,且以早期凋亡细胞为主;60μg/ml吉西他滨组胰腺癌细胞24h凋亡率是32.14 %,也以早期凋亡细胞为主,但晚期凋亡细胞明显较40μg/ml组增多(P＜0.05).随时间增加细胞凋亡水平增高.细胞表达谱芯片结果显示,差异表达基因(差异表达两倍以上)共702条.其中主要包括表达上调的基因406个,下调基因296个.结论:吉西他滨通过诱导胰腺癌PC-2细胞凋亡和抑制其增殖来发挥抗肿瘤作用;吉西他滨对PC-2细胞株的作用涉及原癌基因、抑癌基因等多种相关基因的变化,吉西他滨可能主要通过上调Fas/FasL基因表达,同时通过下调bcl-2基因表达诱导PC-2细胞凋亡.     

中药天龙丹对小鼠Hep—A—22移植性肝癌的抑制作用

目的 中药天龙丹对Hep—A—22荷瘤小鼠抑瘤作用的研究。方法 对Hep—A—22荷瘤小鼠进行为期10天的灌胃给药后取瘤称重,通过抑瘤率判断天龙丹对小鼠移植瘤的抑制作用。结果 当剂量为6.250g/kg、3.125g/kg和1.563g/kg时,两次重复实验最低抑瘤率分别为40.48％、34.86％和16.70％,并存在一定的剂量效应关系,且中药组生存质量优于对照组。结论 天龙丹具有一定的临床应用价值。     

胰腺癌伴淋巴结转移的基因芯片研究

目的 利用基因芯片技术分析伴与不伴淋巴结转移胰腺癌组织中的差异表达基因。方法 将4000个人类全长基因的PCR产物点样于特殊处理后的玻片上制备基因芯片。用逆转录的方法,分别将两种荧光Cy3-dUTP和Cyt-dUTP标记正常胰腺组织和胰腺癌组织mRNA,以制备cDNA探针,并与芯片杂交。以ScanArray 3000荧光扫描仪扫描芯片上两种荧光信号,获得的荧光信号图像用计算机分析。每点上两种荧光信号的强度分别代表Cy3-dUTP和Cy5-dUTP的量。最后,计算每点的Cy5和Cy3比值。结果 在所检测的2例伴淋巴结转移和2例不伴淋巴结转移的胰腺癌标本中,56个基因（其中包括24个已知基因）有表达差异。结论 基因芯片技术为阐明人类胰腺癌伴淋巴结转移的特异性基因表达提供了有效方法。     

乳腺癌相关基因差异表达分析

目的:分析乳腺癌与正常乳腺组织中癌基因、抗癌基因的差异表达,为乳腺癌发生的分子病因学提供线索.方法:选择288条已知人肿瘤相关基因制备寡核苷酸探针芯片,提取16例乳腺癌与相应正常乳腺组织mRNA,通过逆转录制备荧光标记的cDNA探针并与芯片杂交,经扫描获取图像,计算机分析两组表达差异.Cy3/Cy5＞3.5为表达显著性增高;Cy3/Cy5＜0.25为表达显著性降低.结果:16例乳腺癌组织与对照组比较,共有84条基因表达存在差异,表达显著性上调的6条,显著性下调的4条.结论:乳腺癌组织与正常乳腺组织相比,存在部分差异表达的基因,乳腺癌的发生与这些基因表达差异密切相关.     

胃癌患者原癌基因和抑癌基因的表达谱研究

目的 :用基因表达谱芯片对人正常胃和胃癌组织原癌和抑癌基因表达的差异进行研究比较。方法 :利用胃和胃癌组织的mRNA通过逆转录方法 ,将Cy3和Cy5 2种荧光分别标记到 2组cDNA上制成探针 ,然后和表达谱芯片进行杂交后扫描 ,通过计算机分析判定 2种基因是否在上述组织中存在差异表达。结果 :在 195条原癌及抑癌基因中 ,存在差异表达的共 13条 ,表达上调的 6条 (0 0 71% ) ,表达下调的 7条 (0 0 83% )。结论 :认为应用这种方法识别出的 2种基因对胃癌的诊断和治疗具有重要的潜在价值     

松胞素 B对白血病 K562细胞基因表达谱的影响

背景与目的：近年来兴起的DNA芯片技术能在一次杂交中同时监测数以千计的基因表达,能大大加速肿瘤药作用机制的研究和药物治疗靶点的发现。本研究的目的是利用基因表达谱芯片研究松胞素B（cytochalasinB,CB,旧称细胞松弛素B）对白血病K562细胞基因表达谱的影响。方法：利用限制性显示RCR（restriction disphalPCR,RD-PCR)技术扩增K562细胞cDNA片段。取其中277个cDNA片段按设计的矩阵打印在玻片上,制成基因芯片;用CB处理K562细胞24h,分别提取对照组和处理组细胞总RNA,将两组等量的细胞总RNA纯化为mRNA,反转录为cDNA,利用RD-PCR技术进行扩增标记;与芯片杂交后扫描分析处理前后表达差异的基因。结果：在所收集的探针中,对照组和处理组细胞间存在差异表达的基因。共筛选到CB处理后表达下调的基因18条。结论：CB诱导后的K562细胞部分基因表达呈下调趋势,其中大部分基因与细胞增殖,信号转导,转录调节相关。     

Docetaxel induced gene expression patterns in head and neck squamous cell carcinoma using cDNA microarray and PowerBlot.

PURPOSE: The purpose is to identify gene expression patterns induced by docetaxelin head and neck squamous carcinoma (HNSCC) cells using high throughput techniques. EXPERIMENTAL DESIGN: HNSCC cells were treated with docetaxel or solvent. After mRNA extraction, cDNA fluorescent (Cy3 or Cy5)-labeled probes were synthesized. Then, Cy3 and Cy5-labeled samples were hybridized onto a microarray slide. The fluorescent images were scanned and analyzed for quantification. PowerBlot immunoblotting technique was used to measure protein expression level. Using this dual approach, we focused on genes in established pathways (cell cycle, apoptosis, angiogenesis, and signal transduction) of tumorigenesis and confirmed these results with conventional techniques. RESULTS: Using cDNA microarray, we found that docetaxel altered the expression of >100 genes in HNSCC cells. A total of 153 of 1191 genes was found to have altered expression in either HN12 (n = 102), HN30 (n = 72), or both (n = 21) by docetaxel. For the PowerBlot analysis, a subset of genes (n = 46) in the cDNA microarray analysis and an additional 98 genes in the cell cycle, apoptosis, angiogenesis, and signal transduction pathways were chosen. We found that PowerBlot data agreed with cDNA microarray in 65% of genes examined. The expression of a cell cycle inhibitor (p19) and promoters (cyclin A, cyclin B1, and cyclin E2F) were increased and decreased, respectively. Apoptosis induced by docetaxel was independent of p53 and, in part, related to increased Fas expression. Both vascular endothelial growth factor secretion and basic fibroblast growth factor expression were inhibited by docetaxel, whereas thrombospondin-1 expression was increased by docetaxel. Epidermal growth factor receptor, activated epidermal growth factor receptor, and activated c-Jun NH(2)-terminal kinase expression was lowered by docetaxel. Activated extracellular signal-regulated kinase was elevated by docetaxel, but not total extracellular signal-regulated kinase levels. CONCLUSIONS: The identification of altered gene expression induced by docetaxel demonstrates additional biological activity in HNSCC cells, and the altered expression of these genes may serve as potential biomarkers to both predict clinical activity and provide information regarding potential efficacy of adding novel agents.     

抗癌生物活性肽对BGC-823 细胞基因表达的影响*

目的:利用基因芯片技术分析一种新型抗癌生物制剂- 抗癌生物活性肽对人胃癌BGC-823 细胞的基因表达谱调控的影响,并对部分差异表达基因进行RT-PCR 检测,从而验证芯片的有效性。方法:订制表达谱芯片,分别将400 条和648 条人类基因的PCR 产物点样于特殊处理后的玻璃片上制备基因表达谱芯片。以加入不同浓度抗癌生物活性肽及处理不同时间的BGC-823 细胞为实验组,以生理盐水处理的BGC-823 细胞作为对照组,当确定最佳作用时间及抗癌生物活性肽有效作用浓度后,分别提取实验组与对照组细胞的总RNA,反转录成cDNA ,以两种荧光素Cy5 和Cy3 标记后作为探针,与制备好的表达谱芯片进行杂交,以生物信息学方法进行数据的处理和分析,并将其中的差异表达基因p15和HSP 701B 进行RT-PCR 的验证。结果:两张芯片上差异表达的基因共47个,其中上调27个,下调20个。这些基因按照功能分类涉及细胞周期、代谢酶、免疫相关、细胞凋亡、抑癌基因等类别,包括HSP 701B、HSP 75、HSP 90、磷脂酶D2（PLD 2）、凋亡抑制基因（IEX-1L）、人类杆状病毒IAP 重复序列3、E2 泛素耦联酶Ubch5c、人类缺氧诱导因子1 α 亚基、γ- 干扰素、TNF 诱导因子、人类黑色素瘤抗原p15基因等。同时RT-PCR 结果验证了芯片的检测的有效性。结论:抗癌生物活性肽具有调控人胃癌BGC-823 细胞基因表达的作用,其中对抑癌基因、热休克蛋白家族基因等有较明显的影响;基因芯片可以为阐明抗癌药物的作用机制提供有力的分子基础。      

cDNA芯片检测STAT5诱骗核苷酸对K562细胞凋亡相关基因的影响

目的：转录因子STAT5在慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)中组成性激活,并与CML细胞恶性表型密切相关,本研究用cDNA芯片检测方法探讨诱骗核苷酸(decoy ODNs)抑制STAT5对白血病K562细胞株凋亡相关基因的影响。方法：分别提取decoy ODNs处理前后的K562细胞总RNA,逆转录合成Cy3、Cy5标记的cDNA探针,与人14K基因表达谱cDNA芯片(V2.0)杂交,扫描获得数据后,用Genespring软件分析对照组和实验组的差异表达基因,半定量RT- PCR验证cDNA芯片结果。结果：2张cDNA芯片检测重复性良好(R=0.9799)。在13824个标记的基因中,检出413个上调基因,其中包括：TIAF1、GAB1、GYPA、DAPK3、TNFRSF1B、IRF1和PML等在内的18个凋亡相关基因；在检出的332个下调基因中,发现PIM1、CCND2、CCND1、MYC和BCL2L1等在内的11个凋亡相关基因；部分基因经半定量RT-PCR证实与cDNA芯片结果一致。结论：Decoy ODNs抑制STAT5信号通路后可引起K562细胞多种凋亡相关基因的变化,本实验为进一步研究STAT5信号通路所调控的凋亡相关基因提供了依据。     

cDNA微阵列对22例弥漫型胃癌基因的检测

目的从转录组水平识别弥漫型胃癌与正常胃黏膜间的基因表达差异,探讨胃癌分子发生发展机制。方法收集22例弥漫型胃癌患者的新鲜冻存胃癌组织及同例相应正常胃黏膜。杂交芯片采用含14592个点的cDNA表达谱芯片。差异表达基因的筛选标准为该基因在50％以上样本中的肿瘤与正常组织荧光强度比（ratio比值）〉2或〈0．5。采用系统聚类法进行基因表达的相似性分析,标本组间比较采用方差分析。应用实时定量RT—PCR方法对芯片结果进行验证。结果胃癌组织与正常胃黏膜间的差异表达基因共357个,其中表达上调者153个,下调者204个。上调基因功能主要与细胞骨架运动、基质重建、细胞增殖及信号传导等相关;下调基因功能则主要与细胞免疫防御、毒理代谢、功能分化、核一浆转运及凋亡抑制等相关。TNM分期的Ⅰ＋Ⅱ期组与Ⅲ＋Ⅳ期组间,有7个基因的表达差异有统计学意义（P〈0．05）。RT—PCR验证结果与芯片表达结果一致。结论运用cDNA芯片进行弥漫型胃癌基因表达谱分析,有助于从分子水平全方位阐明弥漫型胃癌的发病机制及生物学特性,也有助于进一步发现新的分子诊断指标和基因治疗靶标。