碘化钾对人体皮肤成纤维细胞增殖活性的影响

目的探讨不同浓度的碘化钾（KI）对人体皮肤成纤维细胞(HSF)增殖活性的影响。方法将体外培养的ＨＳＦ分成7组含不同浓度的KI（0、1?000、3?000、5?000、7?000、9?000、11?000?μg/L）,每组含8个平行样本。完全培养基分别培养24?h后,观察HSF形态变化,用流式细胞术和酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测HSF增殖活性。结果KI的浓度在1?000、3?000、5?000?μg/L时成纤维的增殖活性随着碘浓度的增加而升高（P＜0.05）;5?000、7?000?μg/L组细胞增殖活性最高,两组间增殖活性差异无统计学意义（P＞0.05）;7?000、9?000、11?000?μg/L?时HSF增殖活性随着KI浓度的增加而降低（P＜0.05）。结论KI浓度在5?000?μg/L以下会促进HSF增殖活性,高于7?000?μg/L时反而会抑制HSF增殖活性。     

人源抗c⁃Met抗体与rAGAP偶联物对卵巢癌细胞生物学特性的影响

目的：制备人源抗c?Met的全分子抗体（c?Met?IgG1）及其与重组东亚钳蝎镇痛抗肿瘤多肽（recombinant analgesic?antitumor peptide,rAGAP）偶联的新型抗体（c?Met?IgG1?rAGAP）,分析它们的生物学特性,检测其对卵巢癌细胞生物学行为的影响。方法：以本实验室保存的人源抗c?Met抗体基因为模板,构建c?Met?IgG1?rAGAP真核表达载体并转染真核细胞,表达并纯化抗体偶联物。通过亲和力检测、免疫荧光、流式细胞术等方法,评估c?Met? IgG1和c?Met?IgG1?rAGAP的生物学特性。通过CCK?8、划痕实验、Transwell侵袭实验检测抗体对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果：成功制备出能够与c?Met蛋白特异性结合的c?Met?IgG1和c?Met?IgG1?rAGAP两种抗体;一系列实验证明了c?Met?IgG1和c?Met?IgG1?rAGAP均可抑制c?Met阳性的卵巢癌细胞HO8910的增殖、迁移、侵袭,且c?Met?IgG1?rAGAP对卵巢癌细胞的抑制作用要强于c?Met?IgG1,而在c?Met阴性的IOSE386细胞中并未观察到这些作用。结论：研究结果表明c?Met?IgG1?rAGAP可靶向作用于c?Met阳性的卵巢癌细胞并具有抗肿瘤活性,可为探索卵巢癌的分子靶向治疗奠定研究基础。     

超声造影与MRI鉴别诊断乳腺钙化性病变良恶性的对比研究

目的：比较基于超声（ultrasound,US）、超声造影（contrast?enhanced ultrasound,CEUS）和MRI的BI?RADS分类在鉴别诊断乳腺良恶性钙化性病变中的价值。方法：对60例乳腺钙化性病变患者行US、CEUS和MRI检查,分析US及MRI图像特征并根据第五版BI?RADS标准进行相应分类得到US?BI?RADS和MRI?BI?RADS,根据乳腺病变的US?BI?RADS分类结合CEUS图像特征重新分类得到CEUS?BI?RADS分类。将3种技术的3、4A类病变判定为良性,4B类及以上病变判定为恶性,以组织病理学为金标准,构建受试者工作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲线评估比较3种影像学方法对乳腺良恶性钙化性病变的诊断效能。结果：在60例乳腺钙化性病变中,良性37例（61.67%）,恶性23例（38.33%）。US?BI?RADS、MRI?US?RADS和CEUS?BI?RADS的误诊率分别为18.3%、15.0%和8.3％。CEUS?BI?RADS对4A和4B病变的诊断准确性高于US?BI?RADS和MRI?BI?RADS。CEUS?BI?RADS在鉴别乳腺良恶性钙化性病变的诊断性能方面显示：灵敏度和AUC（91.3%、0.915）高于US?BI?RADS（87.0%、0.819）和MRI?BI?RADS（87.0%、0.851）,但差异均无统计学意义（P > 0.05）;CEUS?BI?RADS的特异度和约登指数（91.9%、0.832）高于US?BI?RADS（78.4%、0.654）和MRI?BI?RADS（83.8%、0.708）,差异均有统计学意义（P < 0.05）。结论：CEUS和MRI对乳腺良恶性钙化性病变的鉴别诊断均有重要价值,CEUS的诊断效能优于MRI。     

牙周炎基因疫苗pVAX1⁃HA2⁃FimA、pVAX1⁃HA2⁃FimA/IL⁃15对大鼠实验性牙周炎保护作用研究

目的：观察牙周炎基因疫苗pVAX1?HA2?FimA、pVAX1?HA2?FimA/IL?15对SD大鼠实验性牙周炎的保护作用。方法：54只雄性SD大鼠随机分为9组,对照组：生理盐水组（A组）、空载质粒pVAX1组（B组）、牙周病组（C组）;实验组：50 μg、100 μg、150 μg pVAX1?HA2?FimA 组（D、E、F组）和50 μg、100 μg、150 μg pVAX1?HA2?FimA/IL?15组（G、H、I组）。 鼻滴免疫SD大鼠后建立实验性牙周炎模型,采用RT?qPCR法检测牙龈中炎症因子肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor?α,TNF?α）、基质金属蛋白酶8（matrix metalloproteinase?8,MMP?8）mRNA相对表达量;立体显微镜观察并测量牙槽骨吸收量。结果：①各实验组牙龈组织中TNF?α、MMP?8 mRNA低于牙周病组,且差异有统计学意义（P＜0.05）;②相同剂量的pVAX1?HA2?FimA/IL?15组较pVAX1?HA2?FimA组大鼠牙槽骨吸收量少,且差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：牙周炎基因疫苗pVAX1?HA2?FimA和 pVAX1?HA2?FimA/IL?15对SD大鼠实验性牙周炎具有保护作用。     

兰索拉唑诱导心肌细胞氧化应激损伤的机制研究

目的：探索兰索拉唑（lansoprazole,LPZ）对大鼠心肌细胞H9C2的潜在损伤效应及相关机制。方法：以10 μmol/L LPZ孵育H9C2细胞不同时间（0 h、12 h、24 h、48 h）后,采用DCFH?DA荧光探针检测细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平,Western blot检测内质网应激蛋白（GRP78、CHOP）及凋亡相关蛋白（Cleaved?Caspase?12、Cleaved?Caspase?3、Cyt C、Bax/Bcl?2）的表达。此外,兰索拉唑及ROS抑制剂N?乙酰?L?半胱氨酸（N?acetyl?L?cysteine,NAC）单独或联合孵育细胞48 h后,检测H9C2细胞内ROS水平,以及内质网应激和凋亡相关蛋白的表达情况。结果：LPZ可以时间依赖性增加ROS的水平,诱导GRP78和CHOP的表达,并进一步增加Cleaved?Caspase?12、Cleaved?Caspase?3、Cyt C、Bax/Bcl?2的表达。NAC显著降低LPZ诱导的ROS水平,降低GRP78、CHOP以及Cleaved?Caspase?12、Cleaved?Caspase?3、Cyt C、Bax/Bcl?2的表达水平。结论：LPZ可诱导心肌细胞凋亡,机制可能与氧化应激和内质网应激有关。     

IL⁃18诱导的单核细胞THP⁃1对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的：探讨外源性白介素18（interleukin 18,IL?18）对单核细胞THP?1的活化作用以及IL?18激活诱导的THP?1对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法：通过IL?18体外诱导THP?1模拟激活体内肿瘤微环境中的肿瘤相关巨噬细胞（tumor associated macrophage,TAM）的作用。Transwell法检测IL?18对单核细胞THP?1的趋化作用;外源性IL?18刺激THP?1细胞后流式细胞术检测M1、M2型TAM的比例;IL?18激活诱导的THP?1和肺癌细胞A549共培养,分别以克隆形成实验、细胞划痕实验、细胞侵袭实验检测共培养后A549细胞增殖、迁移和侵袭的变化;扫描电镜观察共培养后A549细胞形态的变化;qRT?PCR和Western blot检测共培养后A549细胞上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition,EMT）标志蛋白E?cadherin和N?cadherin、Snail以及Slug的表达。结果：IL?18对THP?1细胞具有显著的趋化作用;外源性IL?18刺激THP?1细胞表型向M2 TAM方向分化;IL?18诱导THP?1促进了A549细胞增殖、迁移和侵袭能力;扫描电镜结果显示IL?18诱导THP?1促进A549细胞伪足生长;qRT?PCR和Western blot检测结果显示经IL?18诱导的THP?1抑制A549细胞E?cadherin的表达,促进N?cadherin、Snail以及Slug的表达,说明IL?18诱导THP?1激活A549细胞发生EMT。结论：IL?18可以诱导THP?1并促进其活化,活化后的THP?1通过激活EMT机制促进肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR⁃552⁃3p通过抑制DACH1促进肝细胞性肝癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的：探讨miR?552?3p在肝细胞性肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）中的表达及其促进细胞增殖和迁移、侵袭的机制。方法：qRT?PCR检测HCC细胞系及人正常肝细胞系中miR?552?3p的表达情况;下载TCGA数据库中HCC样本的微阵列数据,分析miR?552?3p在HCC癌组织及癌旁组织中是否存在表达差异;miR?552?3p mimics以及miR?552?3p inhibitor转染HCC细胞,荧光素酶报告基因验证miR?552?3p与DACH1是否存在靶向关系,CCK?8及Transwell实验检测miR?552?3p及其与DACH1相互作用对于HCC细胞增殖、迁移、侵袭的影响。结果：TCGA数据库中HCC样本的分析结果表明,miR?552?3p在HCC中高表达,同时qRT?PCR显示miR?552?3p在HCC细胞系中的表达水平显著高于人肝细胞系L02;miR?552?3p的高表达促进HCC细胞的增殖、迁移和侵袭,而抑制miR?552?3p表达后则相反;荧光素酶报告实验证实miR?552?3p靶向作用于DACH1的3′?UTR,上调miR?552?3p可抑制DACH1的表达,而下调miR?552?3p则增加DACH1表达;DACH1的过表达可抑制HCC细胞增殖、迁移和侵袭,但同时过表达miR?552?3p后DACH1对于HCC细胞相关功能的抑制即可解除;miR?552?3p正向调控Wnt/β?catenin信号通路的激活。结论：miR?552?3p靶向作用于DACH1促进HCC细胞增殖、迁移和侵袭,并参与调控Wnt/β?catenin信号。可能为HCC的诊疗策略提供潜在靶点。     

全人源双特异性c⁃Met/PD⁃L1 scFv⁃Fc融合蛋白的优化、制备及生物学特性鉴定

目的：通过优化设计、构建c?Met/PD?L1 scFv?Fc融合蛋白,探究重轻链不同组合形式对c?Met/PD?L1 scFv?Fc融合蛋白与肿瘤抗原结合的亲和性和特异性的影响。方法：使用生物信息学分析、基因工程抗体技术设计、优化及制备重轻链不同组合的双特异性c?Met/PD?L1 scFv?Fc融合蛋白CP1、CP2、PC1、PC2;生物分子相互作用分析仪BLItz分析融合蛋白对重组c?Met蛋白和PD?L1蛋白的亲和力,ELISA法分析其抗原结合特异性。结果：成功制备双特异性c?Met/PD?L1 scFv?Fc融合蛋白,融合蛋白CP1与重组c?Met蛋白和PD?L1蛋白的亲和力和抗原结合特异性均优于CP2、PC1和PC2。结论：重轻链不同组合形式会影响c?Met/PD?L1 scFv?Fc融合蛋白与c?Met和PD?L1蛋白的亲和力和抗原结合的特异性,融合蛋白CP1的亲和力和抗原结合的特异性最高,其对应的重轻链组合形式可用于c?Met/PD?L1 CAR表达载体的构建。     

蛇床子素对Ⅱ型胶原蛋白诱导的关节炎大鼠软骨损伤的改善及免疫调节作用

目的：研究蛇床子素对Ⅱ型胶原蛋白诱导的关节炎大鼠软骨损伤的改善及免疫调节作用。方法：用牛Ⅱ型胶原诱导构建类风湿性关节炎大鼠模型,在造模完成1周后以不同浓度（10、20、40 mg/kg）蛇床子素灌胃给药。每4 d测定大鼠的爪子体积并评定关节炎指数。30 d后,称重测定脾脏指数和胸腺指数,HE染色观察软骨损伤情况,ELISA检测白细胞介素（IL）?1β、IL?6和肿瘤坏死因子α（TNF?α）含量,qRT?PCR检测基质金属蛋白酶（MMP）?1、MMP?3和MMP?13 mRNA表达,Western blot检测Ki67、PCNA、Caspase?3、Caspase?9、MMP?1、MMP?3、MMP?13、Wnt1、β?catenin和LRP5表达。结果：与模型组相比,各给药组大鼠的爪子体积、关节炎指数、脾脏指数和胸腺指数均降低,软骨细胞排列紊乱程度减轻,炎性细胞数量减少,Ki67和PCNA表达均上调,Caspase?3和Caspase?9表达均下调,IL?1β、IL?6和TNF?α 含量降低,MMP?1、MMP?3、MMP?13、Wnt 1、β?catenin和LRP5表达均下调,其中以40 mg/kg组的作用最显著（P < 0.01）。结论：蛇床子素能够减轻类风湿性关节炎大鼠的软骨损伤、炎症反应及关节软骨基质胶原的破坏,该作用可能是通过抑制Wnt信号通路的激活来实现的。     

不同程度手足口病患儿脑脊液及血清细胞因子的比较

目的：探讨血清和脑脊液的几种细胞因子与手足口病的关系。方法：分别选取普通手足口病患儿、重症手足口病患儿和同期非中枢神经系统感染患儿各26例,应用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测各组患儿的血清细胞因子白细胞介素（interleukin,IL）?8、IL?12亚单位P40（IL?12P40）、IL?15、干扰素诱导蛋白（interferon?inducible protein,IP）?10和脑脊液细胞因子IL?8、IP?10水平,并分析细胞因子与病毒感染、病情轻重的关系及其在脑脊液与血液的分布。结果：①重症组血清IL?12P40、IL?15、IP?10水平较对照组显著升高,普通组血清IL?8、IP?10以及IL?12P40较对照组升高,血清IL?8、IP?10在重症组中较普通组减少,差异有统计学意义（P < 0.05）;②手足口病重症组急性期,脑脊液IL?8、IP?10较对照组及恢复期均显著增高,差异有统计学意义（P < 0.01）;③重症手足口病患儿中,EV71阳性患儿脑脊液IL?8浓度要高于EV71阴性的浓度,而血清结果相反,差异有统计学意义（P < 0.01）;④重症组急性期IL?8在脑脊液中的分布水平高于血清。结论：血清细胞因子IL?12P40、IL?15及脑脊液细胞因子IL?8、IP?10参与了重症病例的发病过程。     

人肝细胞癌HepG2细胞荷瘤裸鼠18F⁃乙基胆碱、11C⁃胆碱、18F⁃FDG生物分布和PET肿瘤显像

目的 单一18 F?FDG PET显像对高分化HCC诊断敏感低,因而探讨荷人肝细胞癌HepG2细胞裸鼠中18 F?乙基胆碱、11 C?胆碱、18 F?FDG的活体生物学分布以及18 F?乙基胆碱(18 F?FECh)、11 C?胆碱、18 F?FDG microPET显像检测荷瘤鼠肿瘤的价值. 方法 荷人肝癌细胞Hep...     

氯吡格雷低反应冠心病患者血小板miRNA表达谱差异

目的：探讨氯吡格雷低反应（clopidogrel low response,CLR）与正常反应的冠心病（coronary artery disease,CAD）患者血小板miRNA表达谱的差异。方法：连续入选78例接受氯吡格雷治疗（负荷剂量300 mg,维持剂量75 mg/d）至少5 d的冠心病患者,通过光学血小板聚集仪检测所有患者二磷酸腺苷诱导的血小板聚集率（platelet aggregation induced by adenosine diphosphate,PLADP）,PLADP大于上四分位数的19例患者为CLR组,小于下四分位数的19例患者为对照组。提取所有入选患者纯化血小板中的总RNA,将上述两组患者的总RNA分别混为2个总RNA池,通过RNA变性电泳质检后,采用高通量测序筛选两组患者血小板miRNA的差异表达谱。通过靶基因预测软件TargetScan、miRanda、PITA和miRWalk对差异miRNA的功能进行预测。结果：两组患者临床基线资料无统计学意义。CLR组PLADP显著高于对照组（P < 0.000 1）。通过RNA变性电泳检测两组总RNA未见明显降解。高通量测序发现95种血小板miRNA表达上存在显著差异,其中显著性下调且差异倍数>2的拷贝数前20 位miRNA依次是hsa?miR?300、hsa?miR?151b、hsa?miR?1299等。通过至少2个靶基因预测软件印证8个miRNA（hsa?miR?188?5p、hsa?miR?6874?3p、hsa?miR?218?5p、hsa?miR?3150b?3p、hsa?miR?1288?3p、hsa?miR?1299、hsa?miR?6862?5p、hsa?miR?4421）对血小板聚集关键蛋白有调控作用。结论：CLR患者中存在血小板miRNA的显著下调,本研究筛选出8个对血小板聚集关键蛋白可能有调控作用的miRNA,可能成为个体化抗血小板治疗提供新的干预手段。     

星形胶质细胞来源的GJA1⁃20k在氧化应激后参与神经元保护作用的机制

目的：观察星形胶质细胞（astrocyte）通过上调神经元（neuron）内源性缝隙连接蛋白α1截短单体?20k（gap junction protein alpha 1 truncated monomer? 20k,GJA1?20k）参与氧化应激损伤后神经保护作用的机制。方法：采用C57BL/6胎鼠以原代培养法获取神经元及星形胶质细胞,建立共培养模型,给予神经元过氧化氢（H2O2）损伤,及星形胶质细胞胰岛素样生长因子1（insulin?like growth factor?1,IGF?1）受体阻滞剂AG1024,分别设立Neuron组、Neuron+Stress组、Neuron+Astrocyte +Stress组及Neuron+Astrocyte+Stress+AG1024组,通过Western blot测定神经元GJA1?20k、去磷酸化（non?phosphorylated,NP）?Cx43的表达,谷氨酸转运酶（glutamate transporter?1,GLT?1）、线粒体功能相关蛋白（PGC?1α、mtTFA、Tom20、CoxⅣ）、凋亡相关蛋白（Bcl?2、Bax、Caspases?9）的变化,采用酶联免疫荧光分析（ELFA）及ELISA法分别检测氧化应激因子NAPDH 氧化酶活性和白介素（interleukin,IL）?1β、IL?6、肿瘤坏死因子?α（tumor necrosis factor?α,TNF?α）等炎性因子含量的变化,采用Annexin V?FITC/PI测定神经元凋亡。结果：星形胶质细胞共培养可明显上调在神经元氧化损伤后内源性GJA1?20k和NP?Cx43表达,抑制PGC?1α、mtTFA、Tom20、CoxⅣ的下调,上调凋亡抑制因子Bcl?2表达,下调凋亡促进因子Bax、Caspase?9表达,降低NAPDH氧化酶活性,降低炎性产物IL?1β、IL?6和TNF?α的水平及抑制神经元的凋亡（P < 0.05）。在给予AG1024后,可明显抑制与以上因素相关的星形胶质细胞对神经元的保护作用（P < 0.05）。结论：与IGF?1相关的星形胶质细胞对神经元的保护机制可能与增加神经元内源性GJA1?20k的含量及线粒体功能的保护有关。     

中医自考生调查问卷分析及教学对策

本次问卷共有11个问题,分别是:1、性别;2、年龄;3、最羡慕的职业是什么,为什么?4、将来准备从事什么职业,为什么?5、什么时间开始接触医学?6、为什么学中医?选择答案:(1)不知道;(2)有兴趣;(3)好学,易得到结业证;(4)其它(要求具体写);7、最崇拜的医家或医生是谁,为什么?8、最喜欢的科目是什么,为什么?9、最讨厌的科目是什么,为什么?10、最喜欢听的内容是什么?11、最喜欢怎样的教学法?     

TNF⁃α预处理MC3T3⁃E1细胞后上调N⁃cadherin并影响骨髓血液生成

目的：研究肿瘤环死因子α（tumor necrosis factor α,TNF?α）处理小鼠前成骨细胞株MC3T3?E1对其血液生成能力的影响及可能机制。方法：Western blot方法检测TNF?α处理MC3T3?E1细胞后,N?cadherin、p?Erk1/2和p?Akt的表达水平;将TNF?α预处理的MC3T3?E1细胞作为饲养层细胞,联合造血生长因子SCF、TPO和Flt3?配体,体外扩增分选的小鼠Sca?1（+）细胞7 d后,检测粒?单系集落形成单位（CFU?GM）、红系形成单位（BFU?E）和前B淋系形成单位（CFU?pre?B）。并检测Erk抑制剂FR180204对MC3T3?E1细胞N?cadherin和p?Erk水平的影响。结果：MC3T3?E1细胞经TNF?α预处理后,N?cadherin和p?Erk的表达上调,p?Akt没有明显变化。饲养层细胞联合造血生长因子体外扩增Sca?1（+）细胞7 d,与对照组比较,TNF?α预处理组中的总CFU、BFU?E及CFU?GM数目下降（P < 0.05）,但CFU?pre?B数目明显升高（P < 0.05）。Erk抑制剂FR180204处理MC3T3?E1细胞可下调Erk的同时上调N?cadherin水平。结论：TNF?α可能通过影响骨髓微环境中造血支持细胞而间接影响血液生成和造血干细胞向各系列的分化;调节成骨细胞Erk1/2的磷酸化和N?cadherin的表达,可能是TNF?α影响骨髓血液生成的机制之一。     

Bmi⁃1通过下调NF⁃κB信号通路防治小鼠萎缩性胃炎

目的：明确Bmi?1是否有防治萎缩性胃炎的作用及其机制。方法：针对7周龄Bmi?1基因缺失（Bmi?1 knock out,BKO）纯合子小鼠和同窝野生型（wild type,WT）小鼠,利用组织学切片、免疫组织化学和 Western blot比较分析胃的表型差异。结果：与WT小鼠相比,BKO小鼠表现为胃壁变薄、腺体萎缩和炎症浸润的萎缩性胃炎表型。免疫组化结果显示白细胞介素6（interleukin 6,IL?6）、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor α,TNF?α）阳性细胞面积和核因子?κB?p65（nuclear factor?κB?p65,NF?κB?p65）阳性细胞数明显增加;Western blot 结果显示IL?6、TNF?α和NF?κB?p65蛋白表达水平明显升高。结论：在小鼠中,Bmi?1可通过下调NF?κB信号通路防治萎缩性胃炎。     

miR⁃588在乳腺癌中的表达及对乳腺癌细胞增殖和侵袭的作用

目的：探讨miR?588在乳腺癌中的表达及对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法：用化学合成的miR?588成熟模拟物（miR?588 mimic）过表达miR?588,并验证miR?588过表达率;采用MTT、克隆形成实验检测miR?588对乳腺癌细胞MCF7和MDA?MB?231增殖的影响;采用划痕愈合实验和Transwell侵袭实验检测miR?588对MDA?MB?231细胞迁移和侵袭的影响。结果：miR?588在乳腺癌组织及细胞中的相对表达均低于癌旁正常组织及乳腺正常上皮细胞;过表达miR?588能明显抑制MCF7和MDA?MB?231细胞的增殖;上调miR?588可显著抑制MDA?MB?231细胞的迁移和侵袭能力。结论：miR?588在乳腺癌中低表达,过表达miR?588可抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭。     

lncRNA HAND2⁃AS1对子痫前期患者血管内皮细胞的影响

目的：探究lncRNA HAND反义RNA1（HAND2?AS1）、miRNA hsa?miR?520c?3p和整合素亚基β8（integrin subunit beta 8,ITGB8）在子痫前期患者胎盘中表达量的改变以及HAND2?AS1对血管内皮功能的影响和机制。方法：收集25例子痫前期患者胎盘样本和20例匹配的健康产妇胎盘样本,通过荧光定量PCR技术检测HAND2?AS1、hsa?miR?520c?3p和ITGB8的表达量。通过细胞活力、划痕、血管形成和荧光定量PCR实验,观察过表达和敲低HAND2?AS1对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）增殖、迁移和血管形成的影响以及对hsa?miR?520c?3p和ITGB8表达量的影响。结果：与对照组胎盘相比,子痫前期患者胎盘中HAND2?AS1和ITGB8的表达量显著升高,而hsa?miR?520c?3p表达量降低。同时,子痫前期患者的胎盘中,HAND2?AS1的表达量与hsa?miR?520c?3p呈负相关,与ITGB8呈正相关。在HUVEC中过表达HAND2?AS1,HUVEC的增殖、迁移和血管形成能力减弱,同时hsa?miR?520c?3p表达量下降,ITGB8表达增高;敲低HAND2?AS1,结果相反。结论：HAND2?AS1抑制血管内皮增殖、迁移和血管形成能力,其潜在机制可能是通过调控hsa?miR?520c?3p/ITGB8的表达,有望成为子痫前期的治疗靶点。     

GH/IGF1 轴对非酒精性脂肪肝病脂代谢的影响及可能机制研究

目的??探讨非酒精性脂肪肝病（NAFLD）中生长激素 / 胰岛素样生长因子 1（GH/IGF1）轴对肝内脂代谢的影响。方法??利用 1?nmol 的游离脂肪酸（FFA）诱导人肝细胞 HL-7702（L02）复制 NAFLD 细胞模型,检测模型中生长激素受体（GHR） 、胰岛素样生长因子 1（IGF1） 、胰岛素样生长因子结合蛋白 3（IGFBP3）基因及蛋白表达情况 ; 再将 NAFLD 细胞模型设为未加药组、25?ng/ml?rhGH 组、250?ng/ml?rhGH 组、50?ng/ml rhIGF1 组及 500?ng/ml?rhIGF1 组,分别检测各组用药 24?h 后脂肪酸合成酶（FASN） 、固醇调节元件结合蛋白 （SREBP-1C） 、 过氧化物酶体增殖剂激活受体 γ （PPAR-γ）的 mRNA 表达, 以及 GHR、 IGF1、 IGFBP3 mRNA水平 ; 同时检测 24、48 和 72?h 时模型三酰甘油（TAG）的变化。正常细胞作为各组的对照组（L02 组） 。结果?FFA 诱导 NAFLD 模型 24?h 后,各组细胞中 GHR、IGFBP3?mRNA 表达与 L02 组比较,差异有统计学意义（ P ?<0.05） ,GHR?mRNA 表达高于 L02 组,IGFBP3?mRNA 表达低于 L02 组,但 IGF1?mRNA 表达与 L02 组比较,差 异无统计学意义（ P ?>0.05） 。FFA 诱导 48?h 时 IGF1、IGFBP3 蛋白水平与 L02 组比较,差异有统计学意义（ P ?<0.05） ,IGF1、IGFBP3 蛋白水平均低于 L02 组。正常肝细胞与 NAFLD 细胞在 25?ng/ml?rhGH、250?ng/ml?rhGH、50?ng/ml?rhIGF1 及 500?ng/ml?rhIGF1?4 种干预 24?h 后,细胞内 TAG 含量与未加药组比较,差异有统计学意义（ P ?<0.05） ,TAG 含量均高于未加药组 ; 但 72?h 后细胞内 TAG 含量低于未加药组（ P ?<0.05） 。干预 24?h 时NAFLD 细胞的 PPAR-γ?mRNA 与未加药组比较, 差异有统计学意义（ P ?<0.05） , PPAR-γ?mRNA 水平低于未加药组; NAFLD 细胞中 4 种干预后 GHR、IGF1、IGFBP3?mRNA 表达与未加药组比较, 差异有统计学意义（ P ?<0.05） ,GHR、IGF1、IGFBP3?mRNA 表达高于未加药组,但 NAFLD 细胞组 GHR、IGF1、IGFBP3?mRNA 表达低于 L02 组（ P ?<0.05） 。结论??NAFLD 中 GH/IGF1 轴表达抑制 ; GH/IGF1 轴参与调控肝内 TAG 代谢,并通过抑制 PPAR-γ 参与调控 NAFLD 中脂代谢 ; GH/IGF1 轴与 FFA 之间可能存在负反馈调节。     

NF⁃κB p65调控IRF⁃8基因启动子活性及其启动子结合元件的初步鉴定

目的：探讨大鼠核因子?κB（nuclear factor?κB,NF?κB）p65亚基在细胞内过表达和其活性变化对干扰素调节因子?8（interferon regulatory factor?8,IRF?8）基因启动的影响,并初步筛查IRF?8启动子上可能的p65结合元件。方法：采用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）技术扩增大鼠p65基因蛋白编码区（complete sequence coding,CDS）序列,将其插入到空载pIRES2?EGFP质粒中,构建大鼠野生型（wild type,WT）p65过表达质粒（pIRES2?p65 WT）。在此基础上,将p65第535位丝氨酸（serine,S）突变为天冬氨酸（aspartic,D）或丙氨酸（alanine,A）,分别构建p65持续活化突变型质粒（pIRES2?p65 S535D）和p65显性负性突变型质粒（pIRES2?p65 S535A）。之后应用生物信息学软件预测IRF?8基因启动子区p65的结合元件,并据此构建IRF?8启动子全长（full?length,FL）和3个截短的荧光素酶报告质粒,即pGL3?IRF?8?FL（-1 892 ~ +174 nt）、pGL3?IRF?8?1（-1 360 ~ +174 nt）、pGL3?IRF?8?2（-752 ~ +174 nt）和pGL3?IRF?8?3（-68 ~ +174 nt）。将上述质粒行不同组合共转染人胚肾293T（human embryonic kidney 293T,HEK?293T）细胞,Western blot和荧光素酶实验分别检查p65的表达和IRF?8的启动子活性,并分析IRF?8启动子区可能的p65结合元件。结果：菌液PCR及测序证实上述质粒构建成功。分别将pIRES2?p65 WT、pIRES2?p65 S535D、pIRES2?p65 S535A和pGL3?IRF?8?FL共转染HEK?293T,发现过表达pIRES2?p65 WT或pIRES2?p65 S535D均可明显增加IRF?8启动子活性,且以pIRES2?p65 S535D更为显著;而过表达pIRES2?p65 S535A后,IRF?8启动子活性无明显变化。将pGL3?IRF?8?FL、pGL3?IRF?8?1~3和pIRES2?p65 S535D共转染HEK?293T后发现,pGL3?IRF?8?3的启动子活性显著低于pGL3?IRF?8?FL、pGL3?IRF?8?1和pGL3?IRF?8?2,提示大鼠IRF?8启动子-752~68 nt区域可能存在p65结合元件。结论：在HEK?293T细胞内过表达野生型或持续活化突变型p65可显著促进IRF?8基因的启动,且p65与IRF?8启动子的结合元件可能位于-752~-68 nt部位。