麝香酮抑制血管内皮细胞与中性粒细胞黏附及其表面ICAM-1、VCAM-1和CD44表达

目的：从中性粒细胞与血管内皮细胞黏附的角度探讨麝香对创伤愈合的作用基础。方法：以TNF处理体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）为模型，应用MTT法、虎红法、荧光免疫组化法研究麝香酮对人外周血中性粒细胞（PMN）与HUVEC黏附及HUVEC表面黏附分子表达的影响。结果：TNF处理HUVEC12小时，能明显增强PMN与HUVEC黏附（P〈0．01），并能明显促进HUVEC表面ICAM-1、VCAM-1和CIM4表达（P〈0．05）。75～150ml麝香酮作用于TNF活化的HU-VEC，明显抑制PMN与HUVEC黏附（P〈0．01），仅150μg/ml时降低HUVEC表面ICAM-1表达（P〈0．05），37．5μg/ml和150μg/ml时减少其表面VCAM．1表达（P〈0．05），75-150μg/ml时抑制其表面CD44表达（P〈0．05或P〈0．01）。结论：麝香酮通过降低HUVEC表面ICAM-1、VCAM-1和CD44表达而抑制中性粒细胞与血管内皮细胞黏附，可能是麝香促进慢性创面愈合的机制之一。     

小檗碱抑制高转移性人巨细胞肺癌PG细胞侵袭和迁移的研究

目的：研究小檗碱对高转移性人巨细胞肺癌PG细胞侵袭和迁移的作用并探讨其作用机制。方法：采用琼脂糖滴法观察PG细胞的运动能力，用下室加FN的Transwell小室法观察PG细胞的趋化运动能力，用铺Martrigel的Transwell小室观察PG细胞的侵袭能力。通过SABC免疫细胞化学法及图像分析软件，半定量PG细胞MMP2、TIMP2的表达；RT－PCR法检测PG细胞MMP2 mRNA和TIMP2 mRNA的表达。结果：小檗碱（10 mg/L）处理PG细胞 24 h 后：（1）PG细胞的迁移距离明显比对照PG短（P<0.01），趋向FN迁移的穿膜细胞数明显少于对照组（P<0.01）；（2）PG细胞与FN、Martrigel的黏附减少，与对照组比有显著差异（P<0.01）；（3）穿过铺Martrigel的Transwell小室微孔滤膜的PG细胞数明显减少，即可抑制PG细胞的侵袭能力(P<0.05)； （4）MMP2表达明显减少(P<0.05)，而TIMP－2的表达有升高趋势，与对照比无显著差异，但MMP2/TIMP2比值降低；（5） 小檗碱使PG细胞TIMP2 mRNA表达明显增加(P<0.05)，而对MMP2 mRNA表达无影响，MMP2 mRNA/TIMP2 mRNA比值降低。结论：抑制肿瘤细胞的运动能力、与细胞外基质的黏附、对细胞外基质侵袭，调节MMP2/TIMP2表达的平衡，从而维持细胞外基质的完整性，可能是小檗碱抗侵袭和转移作用的机制之一。     

小檗碱对人高转移肺癌细胞与脐静脉内皮细胞黏附的影响

目的： 探讨小檗碱对人高转移肺癌细胞株PG细胞与人脐静脉内皮细胞（HUVECs）黏附的影响及其机制。方法：用MTT法检测不同浓度（2.5-40 mg/L）的小檗碱对HUVECs增殖的影响,用2.5、5和10 mg/L小檗碱分别处理人高转移肺癌细胞株PG细胞6、12和24 h, 用虎红染色法测定小檗碱对PG细胞与HUVECs黏附能力的影响, 用荧光抗体染色法测定小檗碱对PG细胞表面黏附分子CD44s表达的影响, 用双光子各向异性度成像系统观察小檗碱对PG细胞膜流动性的影响。结果：（1）2.5、5和10 mg/L小檗碱作用HUVECs 6、12和24 h后对其生长无影响。（2）用不同浓度小檗碱处理PG细胞6、12和24 h后,与TNF-α刺激后的HUVECs相互作用后,能够显著抑制其黏附率,且呈浓度依赖性(P<0.05, P<0.01)。（3）各剂量组的小檗碱均能使PG细胞表面的CD44s分子表达增高（P<0.05或P<0.01）。（4）小檗碱作用PG细胞24 h后能够抑制PG细胞膜的流动性,且随药物浓度的升高这种抑制作用增强。结论：小檗碱对PG细胞与HUVECs的黏附具有抑制作用,可能与小檗碱增加PG细胞表面黏附分子表达、降低其细胞膜流动性有关。     

小檗碱抑制高转移性人巨细胞肺癌PG细胞侵袭和迁移的研究

目的：研究小檗碱对高转移性人巨细胞肺癌PG细胞侵袭和迁移的作用并探讨其作用机制。方法：小檗碱（5mg／L、10mg／L）处理PG细胞24h，采用琼脂糖滴法观察PG细胞的运动能力，用下室加FN的Transwell小室法观察PC．细胞的趋化运动能力，用铺Martrigel的Transwell小室观察PG细胞的侵袭能力。通过SABC免疫细胞化学法及图像分析软件，半定量PG细胞MMP-2、TIMP-2的表达；RT-PCR法检测PG细胞MMP-2 mRNA和TIMP-2 mRNA的表达。     

登革病毒感染对血管内皮细胞ICAM-1表达的影响

目的探讨登革病毒2型（DV2）体外感染对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）表达细胞间黏附分子（intercellular adhesion molecule，ICAM-1）的影响。方法原代分离培养HUVEC，用生长良好的2、3代细胞进行实验。用CCK-8法测定DV2感染前后的细胞活性。流式细胞仪测定DV2感染组和对照组细胞在不同实验时间点细胞表面ICAM-1蛋白表达的情况。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法和图像定量分析技术分析DV2感染组和对照组在不同实验时间点HUVEC内ICAM-1 mRNA水平。结果病毒感染HUVEC对细胞活力的影响与对照组相比差异无统计学意义。DV2感染HUVEC促进ICAM-1 mRNA转录，DV2组与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。其中，正常状态下HUVEC有一定水平ICAM-1 mRNA转录，但感染后显著增加（P〈0．05），24—72h维持于高水平，与其他时间表达差异有统计学意义（P〈0．05）。DV2感染HUVEC，细胞表达ICAM-1蛋白在12～72h显著升高，与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。结论DV2感染上调HUVEC的ICAM-1 mRNA水平和蛋白表达，从而诱发并加重血管内皮局部的损伤，破坏血管的屏障功能，促进血管渗漏的形成与发展。这可能是DV2感染诱发患者血管通透性升高和血浆渗漏的重要分子机制之一。     

CD44s、纤维粘连蛋白表达与子宫内膜异位症发病关系的研究

目的：探讨细胞黏附分子（CAMS）纤维粘连蛋白（FN）、CD44s与子宫内膜异位症发病的关系.方法：S-P免疫组化法法检测子宫内膜异位症在位内膜（22例）、异位内膜（45例）、对照组子宫内膜（20例）进行病理组织化学观察和CD44s、FN表达的检测.结果：对照组相比子宫内膜CD44s主要表达于腺上皮细胞,FN表达于基质细胞,与对照组相比子宫内膜异位症在位子宫内膜CD44s、FN均表达于下降,差异有显著性（P〈0.05）,异位内膜组CD44s、FN表达明显降低,差异有显著性（P〈0.05）.结论：子宫内膜异位症患者从子宫内膜到异位病灶,CD44s、FN均有明显的变化,这可能与子宫内膜异位症的发生、发展、不孕有关.     

小檗碱对人肺癌细胞株与人脐静脉内皮细胞粘附的影响

目的 :通过离体实验探讨小檗碱对高转移人肺癌细胞株 (PG)与人脐静脉血管内皮细胞 (HUVEC)粘附的影响及其作用机制。方法 :用虎红染色法测定PG与HUVEC的粘附率。用细胞ELISA法测定小檗碱作用HUVEC 12h、2 4h后 ,其表面粘附分子CD4 4及CD5 4的表达。小檗碱的终浓度分别为 2 5mg/L、5mg/L、10mg/L ;LPS终浓度为 1mg/L。结果 :(1)小檗碱处理HU VEC :当小檗碱作用于LPS激活的HUVEC(LPS -HUVEC) 6h、12h后 ,中、高浓度均能抑制其与PG的粘附 ,且有显著差异 (P <0 0 1或P <0 0 5 ) ;药物作用 2 4h后 ,小檗碱各浓度均能…     

CD44反义寡核苷酸对肿瘤细胞表面抗原和对CD3AK杀伤敏感性的调节作用

目的：观察CD44反义寡核苷酸调节人低分化黏液腺胃癌MCC80-3细胞Fas分子和凋亡抵抗基因bcl-2的表达水平，提高免疫效应细胞杀伤敏感性的作用和机制。方法：RT-PCR法检测CD44、bcl-2mRNA的表达水平。MTT法检测CD3AK杀伤活性。流式细胞术检测细胞表面CD44及Fas、FasL蛋白表达水平。结果：CD44反义寡核苷酸（1.6μmol／L）处理后，明显地抑制MGC80-3细胞CD44mRNA和蛋白表达水平，在CD44配体低分子量透明质酸（HA）存在下，使MCC80-3表面下调的Fas分子显著增高，表达率从6．69％提高到16．81％（P〈0．01）。CD3AK对反义寡核苷酸处理的MGC80-3细胞杀伤活性显著增高，并呈效靶比依赖效应（P〈0．01）。MGC80-3细胞bcl-2mRNA的相对表达定量值由1．06降至0．32。结论：CD44反义寡核苷酸可通过抑制MGC80-3细胞CD44mRNA和蛋白表达，上调Fas分子的表达，下调凋亡抵抗基因bcl-2的表达，并提高其对免疫效应细胞的杀伤敏感性。     

c-myc反义寡核苷酸对肿瘤细胞表面抗原和对CD3AK杀伤敏感性的调节作用

目的：观察c-myc反义寡核苷酸上调人高转移性肺巨细胞腺癌PG细胞表面抗原分子的表达水平，提高免疫效应细胞杀伤敏感性的作用和机制。方法：PT－PCR方法检测c-myc mRNA表达水平的变化。MTT法检测细胞增殖活性和CD3AK杀伤活性的变化。流式细胞术检测细胞表面抗原表达的变化以及c-myc蛋白表达水平的变化。结果：c-myc反义寡核苷酸（1μmol/L）明显地抑制PG细胞c-myc mRNA和蛋白表达水平，显著提高细胞表面HLA－ABC、ICAM－1分子的表达，其表达率分别从68．44％、38．40％增高到83．16％和42．09％（P＜0．01）。CD3AK对反义寡核苷酸处理的PG细胞的不同效靶比杀伤活性，分别从40．0％、65．0％、74．0％增高到52．0％、74．0％、91．0％（P＜0．01）。结论：c-myc反义寡核苷酸通过抑制PG细胞c-myc mRNA和蛋白表达，上调PG细胞表面HLA－ABC、ICAM－1分子的表达水平，提高其对免疫效应细胞的杀伤敏感性。     

小檗碱对人胃癌细胞增殖、细胞周期及CD44V6表达的影响

目的：研究小檗碱对人胃癌MGC-803细胞增殖、细胞周期及CD44V6分子表达的影响，探讨其抗肿瘤及抗肿瘤转移作用机制。方法：MTT法检测小檗碱对人胃癌MGC-803细胞体外增殖作用。激光共聚焦显微镜观察用药后细胞形态的改变并用流式细胞仪检测细胞周期的变化。应用免疫组化和流式细胞术技术检测药物对细胞表面CD44V6表达的影响。结果：小檗碱对MGC-803细胞有显著抑制作用，在10、20、40μg/ml浓度下，其抑制率分别为36．2％、49．7％和59．3％，有明显剂量依赖关系。激光共聚焦显微镜下细胞核固缩，并可见凋亡小体。药物可将细胞阻滞在G0-G1期，并使细胞表面的CD44V6表达降低。结论：小檗碱可通过诱导MGC-803细胞凋亡并将细胞阻滞在G0-G1期，发挥抑制瘤细胞的体外增殖作用；小檗碱可降低MGC-803细胞株CD44V6的表达，具有抗肿瘤转移作用。     

Clear cell basal cell carcinoma

We describe a case of clear cell basal cell carcinoma of the superficial type, presenting as a crusted eruption on the abdomen. Histological examination showed a solid proliferation of clear cells attached to the under-surface of an atrophied epidermis. In addition, distinct pagetoid infiltration was seen within the overlying epidermis. A focal connection between the clear cell portion and a deeper lying nodular basal cell carcinoma was demonstrated, elucidating the true nature of the lesion. Immunohistochemical studies and electronmicroscopy confirmed the epithelial derivation of the tumour. The clear cell appearance was due to multiple cytoplasmic electronlucent vacuoles which were not surrounded by membranes.     

Absolute dependence of T cell receptorhi cell generation and relative dependence of T cell receptorint cell generation on the thymus

Recent evidence indicates that conventional T cells are generated by the mainstream of T cell differentiation in the thymus and acquire a high density of T cell receptor expression (i.e. TCR^hi). In contrast, primordial T cells (or NK1.1⁺ T cells) are generated by the extrathymic pathways or an alternative intrathymic pathway and express an intermediate density of TCR (i.e. TCR^int). To obtain further evidence, it was examined how thymus grafting influenced the distribution of T cell populations in athymic nude mice. When BALB/c nu/nu mice were engrafted with thymocyte-depleted BALB/c+/+ fetal thymi, two changes emerged after grafting: nude mice generated TCR^hi cells de novo in the periphery as well as in the grafted thymi, and the absolute number of interleukin-2 receptor β chain⁺ TCR^int cells increased prominently in number in the periphery. Among thymic hormones tested, the administration of thymosin α induced a slight expansion of CD3^int cells in nude mice. To examine a possible interaction of TCR^int cells with TCR^hi cells in the periphery, B6 nu/nu mice (Ly5.2⁺) were injected with TCR^hi cells purified from the spleen of B6 Ly5.1 congenic mice. In this case, TCR^int (Ly5.2⁺) cells expanded well in all tested organs of nude mice. These results suggest that the generation of TCR^hi cells is absolutely dependent on the thymus and that TCR^int cells expand under the influence of the thymus (humoral) and due to interaction with thymus-derived conventional T cells.     

树突状细胞对调节性T细胞的调控作用

树突状细胞(DCs)是目前已知的体内功能最强大的专职性抗原提呈细胞,具有启动免疫应答和诱导免疫耐受的双重特性.近年来树突状细胞对调节性T细胞的调控作用是免疫学领域的一个研究热点.Foxp3+ Tregs是一群同时具有免疫低反应性和免疫抑制性功能两大特征的T淋巴细胞,它在维持机体内环境稳定、预防自身免疫性疾病、抑制移植排斥反应等病理生理过程中发挥着重要作用.越来越多的研究结果证实DCs和Tregs二者在维持外周免疫耐受中存在着紧密联系,DCs可以诱导抗原特异性Tregs的生成并增加后者的抑制活性,其中参与该调节机制的分子主要包括相关细胞因子、Toll样受体、共刺激分子及维甲酸等.对DCs在接触共生和致病微生物时诱导和调控Tregs细胞有了一些新发现.     

具有透明细胞乳头状肾细胞癌形态特征的透明细胞性肾细胞癌的临床病理特征

目的探讨具有透明细胞乳头状肾细胞癌形态特征的透明细胞性肾细胞癌(clear cell papillary renal cell carcinoma-like clear cell renal carcinoma, CCPRCC-like CCRCC)的临床和病理特征, 旨在提高对该类肿瘤的认识。方法回顾性分析浙江大学医学院附属第一医院诊断的3例CCPRCC-like CCRCC的临床资料、组织学形态及免疫表型, 随访患者预后并复习相关文献。结果男性2例, 女性1例, 平均年龄43岁。肿块最大径9 cm。镜下观察3例病例均包含透明细胞乳头状肾细胞癌样(CCPRCC-like)及透明细胞性肾细胞癌样(CCRCC-like)两种区域, 前者在整个瘤体所占比例为20%～90%。CCPRCC-like区域含有囊、乳头、腺管状结构。细胞核远离基底膜, 细胞核WHO/国际泌尿病理协会(ISUP)分级1级。在CCPRCC-like区域, 细胞角蛋白(CK)7表达范围10%～80%, 中等及以上强度表达。CD10表达均为100%, 主要为顶端胞膜表达。在CCRCC-like区域, 1例CK7阴性, 其余...     

梭形细胞间变性大细胞淋巴瘤

1.病例简介:患者男,40岁.2个月前自觉右腹股沟区疼痛,行走时加剧,于2009年6月在外院行B超检查发现腹股沟区多枚淋巴结肿大,直径约4.0～5.0 cm,胰周、腹主动脉及髂血管旁多发低回声实性结节,最大直径为4.5 cm;行CT检查,提示腹膜后、肝门部多发肿大淋巴结.血常规检查:白细胞、中性粒细胞升高,淋巴细胞减少.2009年7月23日手术切除右腹股沟淋巴结.原单位病理诊断:考虑为指状突树突状细胞肿瘤.因多家医院诊断结果存在分歧,遂来我院会诊,详细询问病史,患者既往无其他脏器肿瘤病史.     

Galectins: versatile modulators of cell adhesion, cell proliferation, and cell death

 Lectins, or carbohydrate binding proteins, recognize specific oligosaccharide structures on glycoproteins and glycolipids. Several families of animal lectins have been identified; for some of these lectins, functions such as leukocyte adhesion and microbial opsonization have been described. The galectins are a family of lectins found in species ranging from sponges and nematodes to humans. Members of the galectin family have been proposed to mediate cell adhesion, to regulate cell growth, and to trigger or inhibit apoptosis. The expression pattern of different galectins changes during development, and this pattern is also altered at sites of inflammation and in breast, colon, prostate, and thyroid carcinomas. In addition, the level of expression of some galectins by tumor cells has been shown to be correlated with metastatic potential. The mechanisms by which galectins exert these diverse effects remain largely unknown. Some glycoprotein counterreceptors recognized by certain galectins have been identified; this is an important first step in understanding the cell-type specific effects of different galectins. This review discusses the way in which the modulation of galectin activity may affect strategies for treatment of a variety of human diseases, including autoimmunity and cancer. Received: 4 April 1997 / Accepted: 24 September 1997     

Between-observer repeatability of sputum differential cell counts. Influence of cell viability and squamous cell contamination

BACKGROUND: Induced sputum differential cell counts have been advocated as a method of noninvasively assessing airway inflammation in asthma and other airway diseases. Relatively little is known about the between-observer repeatability of sputum differential cell counts and the factors that influence it. OBJECTIVE: To assess the between-observer variability of induced sputum cell counts. METHODS: Sputum was induced and processed using standard techniques. Forty-two slides from 38 patients (31 with asthma, seven normal subjects) were randomly selected. Slides were classified as good (<20% squamous cells and >50% viability; n = 24); low viability (<50% viability; n = 10) and high squamous cell contamination (>20% squamous cells; n = 8). Two blinded observers counted between 200 and 400 nonsquamous cells and agreement was assessed by the intraclass correlation coefficient (ICC) and the standard deviation of between-observer differences (SD). RESULTS: The overall ICC were 0.9, 0.89, 0.9 for eosinophils, neutrophils and macrophages and 0.29 and 0.69 for lymphocytes and epithelial cells. Repeatability was greater in slides classified as good compared with slides with low cell viability and particularly excess squamous cell contamination. CONCLUSIONS: We have shown that the overall between-observer repeatability of the differential eosinophil, neutrophil and macrophage cell counts is good. Low cell viability and particularly excess squamous cell contamination reduce between-observer repeatability suggesting that techniques that ensure high cell viability and reduce squamous contamination would be an advantage.