抗口腔支原体、精氨酸支原体单克隆抗体的制备及其应用方法的初步研究

用口腔支原体、精氨酸支原体抗原免疫ＢＡＬＧ／ｃ小鼠，取其脾细胞，与小鼠骨髓瘤细胞（Ｓｐ２／０）融合，获得了７株稳定分泌抗口腔支原体单克隆抗体（ＭｃＡｂ），２株分泌抗精氨酸支原体ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株。间接ＥＬＩＳＡ测定其抗体效价可达１：１０３～１：１０７；９株ＭｃＡｂ中１株为ＩｇＧ２ａ，其余均为ＩｇＧ１。初步建立了ＥＬＩＳＡ检测支原体的方法。     

抗口腔支原体,精氨酸支原体单克隆抗体的制备及其应用方法的初步研究

用口腔支原体，精氨酸支原体抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞，与小鼠骨髓瘤细胞（Ｓｐ２／０）融合，获得了７株稳定分泌抗口腔支原体单克隆抗体（ＭｃＡｂ），２株分泌抗精氨酸支原体ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株。间接ＥＬＩＳＡ测定其抗体效价可达１：１０＾３～１：１０＾７，９株ＭｃＡｂ中１株为ＩｇＧ２ａ，其余均为ＩｇＧ１。初步建立了ＥＬＩＳＡ检测支原体的方法。     

分泌抗登革病毒单抗独特型抗体杂交瘤细胞系的建立

将纯化的登革３型病毒（ＤＥＮ－３）单克隆抗体３Ｄ３（ＡｂＩ）连结到载体分子ＫＬＨ上，免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取其脾细胞与Ｓｐ２／０小鼠骨髓瘤细胞融合。用ＥＬＩＳＡ夹心法检测阳性克隆，融合率达１００％，阳性率为５％，经２－３次克隆化，获得了６株分泌抗登革病毒单抗的独特型抗体（ＭｃＡｂ２）的杂交瘤细胞系。在进行阳性筛选及特异鉴定时，选择了以３－５μｇ／ｍｌ的最适Ａｂ１包被浓度，并用正常小鼠Ｉｇ及ＫＬＨ分     

抗淋球菌PIA单克隆抗体的制备和应用分析

用淋球菌全菌体免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取脾细胞与Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞融合，以纯化ＰＩＡ做ＥＬＩＳＡ间接法筛选，获得５株稳定分泌抗ＰＩＡ的ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株。５株ＭｃＡｂ中３株为ＩｇＭ类（２Ｈ１１，４Ｈ８，４Ｅ１０），另２株分别为ＩｇＧ１（１Ｃ２）和ＩｇＧ２ｂ（５Ａ５）亚类。２Ｈ１１和１Ｃ２为高亲和力抗体，１Ｃ２与５Ａ５识别的抗原表位相同。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ试验表明，５株ＭｃＡｂ均能从复杂的淋球菌菌体崩解物中特异地识别分子量为３５ＫＤａ的ＰＩＡ抗原，与淋球菌ＰＩＢ无交叉反应。     

MCAb、PcAb不同标记ELISA技术对HBeAg／抗－HBe检测的评估

用单克隆抗体（ＭｃＡｂ）和多克隆抗体（ＰｃＡｂ）进行辣根过氧化物酶标记或生物素标记作酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），检测乙型肝炎病毒ＨＢｅＡｇ／抗－ＨＢｅ标志物。结果显示，ＭｃＡｂ的灵敏性高于ＰｃＡｂ，且标记用的抗体量较少，一孔一期法同时测ＨＢｅＡｇ／抗－ＨＢｅ只能使用ＭｃＡｂ。利用生物素与亲和素系统与ＭｃＡｂ建立的Ｍｃ－ＡＢＣ－ＥＬＩＳＡ技术，其灵敏性与放射免疫法（ＲＩＡ）相同，特异性好，稳定性优于ＲＩＡ。生物素标记抗体至少１年保持效价不变，是一种新的较理想的检测ｅ系统的方法之一。     

人巨细胞病毒单克隆抗体的研制检定和应用

采用人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＡＤ１６９株作为免疫原，制备出１３株鼠－鼠杂交瘤细胞系。对其中的６株进行了检定．免疫印迹试验结果表明：单克隆抗体（ＭｃＡｂ）７Ｂ４、７Ｄ７、７Ｅ１１、８Ｅ８和８Ｄ６相对应的ＨＣＭＶ多肽分子量分别为４６、１５０、３８、５１７２和６５ｋＤ．ＨＣＭＶ感染人胚肺二倍体细胞（２ＢＳ）后不同时间制成抗原片，与ＭｃＡｂ作间接免疫荧光试验。结果表明：ＭｃＡｂ８Ｂ８相应的病毒多肽为即刻早期抗原，其它５株ＭｃＡｂ相应的病毒多肽均为晚期抗原，６株ＭｃＡｂ等量混合后，标上辣根过氧化物酶，用于ＩｇＭ抗体捕获法ＥＬＩＳＡ（ＭａｃＥＬＩＳＡ）中，并与间接ＥＬＩＳＡ（ＩＥＬＩＳＡ）同时检测ＨＣＭＶ－ＩｇＭ．在未经选择的１００份脐带血中，两法均为阳性的３份，两法均为阴性的９４份；ＭａｃＥＬＩＳＡ阳性而ＩＥＬＩＳＡ阴性的２份血清的特异性试验证明，ＨＣＭＶ－ＩｇＭ确为阳性．ＩＥＬＩＳＡ阳性而ＭａｃＥＬＩＳＡ阴性的１份血清的特异性试验证明，它是由ＲＦ引起的假阳性。     

抗肾综合征出血热病毒人单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步鉴定

以亲和层析技术纯化的肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）结构蛋白（５５０００，６７０００）为特异性抗原，体外免疫正常人外周血淋巴细胞（ＰＢＬ），然后将体外免疫的淋巴细胞与人－鼠种间杂交瘤细胞（Ｋ６Ｈ６／Ｂ５）融合，经ＥＬＩＳＡ间接法筛选出２株（２Ｄ５，１Ｂ７）分泌抗－ＨＦＲＳＶ人单克隆抗体（Ｈ－ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株，４次克隆化后，１００％阳性。对２Ｄ５株初步鉴定表明，其抗体类型为ＩｇＧ１；培养上清中抗体浓度为２０～３０μｇ／ｍｌ；特异性免疫荧光反应证明２Ｄ５株Ｈ－ＭｃＡｂ是ＨＦＲＳＶ特异性；中和效价为１∶１６０；体外连续传代６个月仍稳定分泌抗体。     

抗E．coli RecA单克隆抗体的制备与鉴定

本研究用纯化Ｅ．ｃｏｌｉＲｅｃＡ蛋白免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Ｓｐ２／０融合，以粗制Ｅ．ｃｏｌｉＲｅｃＡ包被酶标反应板，间接ＥＬＩＳＡ方法筛选阳性孔，经有限稀释法４次克隆化，建立了两株分泌抗ＲｅｃＡ蛋白ＭｃＡｂ的细胞系２Ｄ６和３Ｂ１。免疫印迹表明ＭｃＡｂ只对细菌的ＲｅｃＡ有反应，不与细菌其它成分发生反应。间接ＥＬＩＳＡ进一步表明，ＭｃＡｂ２Ｄ６、３Ｄ１只对细菌ＲｅｃＡ类蛋白有反应，不与小鼠肝、心、肺、脾等和ＢＨＫ细胞的内外蛋白反应。     

抗人Ig轻链系列单抗的研制：Ⅲ抗人Ig游离λ型轻链共同抗原决定…

用多例提纯的ＢＪ－λ混合免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞Ｓｐ２／０融合，获得３株稳定分泌抗人Ｉｇ游离λ链ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株（ＡＨλＤ８、ＡＨλ１Ｃ１和ＡＨλ２Ｃｌ）。它们分泌的ＭｃＡｂ均能与我室所有１７例ＢＪ－λ起强反应，但不与结合的λ型轻链及Ｋ型轻链反应，表明这３株ＭｃＡｂ可能是抗人Ｉｇ游离λ链共同抗原决定簇的。３株ＭｃＡｂ均属小鼠ＩｇＧ１亚类。添加ＥＬＩＳＡ表明它们识别相同的表位。     

抗淋球菌PIA单克隆抗体的制备和应用分析

用淋球菌全菌体免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取脾细胞与Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞融合，以纯化ＰＩＡ做ＥＬＩＳＡ间接法筛选，获得５株稳定分泌抗ＰＩＡ的ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株。５株ＭｃＡｂ中３株为ＩｇＭ类（２Ｈ１１，４Ｈ８，４Ｅ１０），另２株分别为ＩｇＧ１（１Ｃ２）和ＩｇＧ２ｂ（５Ａ５）亚类。２Ｈ１１和１Ｃ２为高亲和力抗体，１Ｃ２与５Ａ５识别的抗原表位相同。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ试验表明，５株ＭｃＡｂ均能     

分泌抗登革病毒单抗独特型抗体杂交瘤细胞系的建立

将纯化的登革３型病毒（ＤＥＮ－３）单克隆抗体３Ｄ３（ＡｂＩ）连结到载体分子ＫＬＨ上，免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞与Ｓｐ２／０小鼠骨髓瘤细胞融合。用ＥＬＩＳＡ夹心法检测阳性克隆，融合率达１００％，阳性率为５％，经２～３次克隆化，获得了６株分泌抗登革病毒单抗的独特型抗体（ＭｃＡｂ２）的杂交瘤细胞系。在进行阳性筛选及特异性鉴定时，选择了以３～５μｇ／ｍｌ的最适Ａｂ１包被浓度，并用正常小鼠Ｉｇ及ＫＬＨ分别包被反应板作对照，以排除其抗异种免疫球蛋白的干扰。     

重组人红细胞生成素单克隆抗体的制备

本文应用常规淋巴细胞杂交瘤技术制备了４株能稳定分泌抗人重组红细胞生成素（ｒＨｕＥＰＯ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的小鼠杂交瘤细胞系ＢⅡ１Ｂ５、ＤⅡ６Ｂ９、ＭⅡ１Ｈ４和ＧＩ３Ｅ７。用鼠单克隆抗体分型试剂盒鉴定，其分泌的ＭｃＡｂ的类分别是ＩｇＭ、ＩｇＭ、ＩｇＧ１和ＩｇＧ２ａ。间接ＥＬＩＳＡ法测定细胞上清的效价为１×１０－２～１．２５×１０－４，腹水效价为１×１０－２～１×１０－８。培养上清经ＥＬＩＳＡ鉴定，与ＩＬ－２、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－α等细胞因子均无交叉反应，只与ｒＨｕＥＰＯ特异性结合。     

抗人Ig轻链系列单抗的研制Ⅲ抗人Ig游离λ型轻链共同抗原决定簇单克隆抗体的制备和初步鉴定

用多例提纯的ＢＪ－λ混合免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞Ｓｐ２／０融合，获得３株稳定分泌抗人屹游离λ链ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株（ＡＨλＤ８、ＡＨλ１Ｃ１和ＡＨλ２Ｃ１）．它们分泌的ＭｃＡｂ均能与我室所有１７例ＢＪ－λ起强反应，但不与结合的λ型轻链及Ｋ型轻链反应，表明这３株ＭｃＡｂ可能是抗人Ｉｇ游离λ链共同抗原决定簇的．３株ＭｃＡｂ均属小鼠ＩｇＧ１亚类。添加ＥＬＩＳＡ表明它们识别相同的表位。用于检测正常人血清和尿中的游离λ链及多发性骨髓瘤患者的ＢＪ－λ均具有很好的特异性和敏感性．本文还讨论了有关的免疫问题．     

抗E.coli RecA单克隆抗体的制备与鉴定

本研究用纯化Ｅ．ｃｏｌｉＲｅｃＡ蛋白免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Ｓｐ２／０融合，以粗制Ｅ．ｃｏｌｉＲｅｃＡ包被酶标反应板，间接ＥＬＩＳＡ方法筛选阳性孔，经有限稀释法４次克隆化，建立了两株分泌抗ＲｅｃＡ蛋白ＭｃＡｂ的细胞系２Ｄ６和３Ｂ１。免疫印迹表明ＭｃＡｂ只以地细菌的ＲｅｃＡ有反应，不与细菌其它成分发生反应。间接ＥＬＩＳＡ进一步表明，ＭｃＡｂ２Ｄ６，３Ｄ１只对细菌ＲｅｃＡ类蛋     

乙型肝炎病毒e抗原的纯化及其在人血清抗体检测中的应用

目的方法利用ＺｈｏｕＪｉａｎ教授提供的重组质粒ＤＮＡｐＢＶ２２０／ｅＡｇ，转染ＤＨ５α细胞，经３０℃培养３小时，４２℃培养６小时温度诱导后，提取乙型肝炎病毒ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）。经ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦａｓｔＦｌｏｗ层折纯化后免疫打点分析，收集阳性蛋白。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳，考马斯亮蓝Ｇ２５０染色，显示为单一的蛋白带，用免疫印迹法（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ）和免疫打点（ｌｍｍｕｎｏｄｏｔ）法，确定表达产物的特异性。将纯化的ＨＧｅＡｇ用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）和免疫条。方法基检测人血清中的相关抗体。结果经４９例乙型肝炎病毒ｅ抗体（ＨＢｅＡｂ）阳性病人血清检验证实了其特异性。结论免疫条方法较ＥＬＩＳＡ方法更敏感、特异。     

分泌抗rHuIL－6McAb杂交瘤细胞系的建立及其应用研究

应用常规方法建立了４株稳定分泌抗重组人ＩＬ－６（ｒＨｕＩＬ－６）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的小鼠杂交瘤细胞系１Ｈ３、２Ａ１０、３Ａ３和４Ｂ１。其中，１Ｈ３为ＩｇＧ２ｂ（ｋ），２Ａ１０为ＩｇＧ１（ｋ），３Ａ３和４Ｂ１为ＩｇＧ２ａ（ｋ）。４株ＭｃＡｂ特异性强，与细胞因子ＩＬ－１β、ＩＬ－３、ＩＬ－８、ＴＮＦ－α、ＧＭ－ＳＣＦ、ＩＣＡＭ－１，以及受体菌菌体蛋白成分均无交叉反应。间接ＥＬＩＳＡ测定小鼠腹水ＭｃＡｂ效价为１０（－６）～１０（－８）。应用识别不同表位的ＭｃＡｂ建立了双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法检测ＩＬ－６，敏感性为１００ｐｇ／ｍｌ。初步应用表明可用于临床标本的检测。     

分泌抗rHuIL—6McAb杂交瘤细胞系的建立及其应用研究

应用常规方法建立了４株稳定分泌抗重组人ＩＬ－６（ｒＨｕＩＬ－６）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）小鼠杂交瘤细胞系１Ｈ３、２Ａ１０、３Ａ３和４Ｂ１。其中，１Ｈ３为ＩｇＧ２ｂ（Ｋ），２Ａ１０为ＩｇＧ１（Ｋ），３Ａ３和４Ｂ１为ＩｇＧ２ａ（Ｋ）。４株ＭｃＡｂ特异性强，与细胞因子ＩＬ－１β、ＩＬ－３、ＩＬ－８、ＴＮＦ－α、ＧＭ－ＳＣＦ、ＩＣＡＭ－１，以及受体菌菌体蛋白成分均无交叉反应。间接ＥＬＩＳＡ测定小鼠腹水ＭｃＡ     

分泌抗金黄色葡萄球菌C1型肠毒素杂交瘤细胞系的建立及初步应用

应用常规方法建立了３株稳定分泌抗金黄色葡萄球菌Ｃ１型肠毒素（ＳＥＣ１）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的小鼠杂交瘤细胞系Ｂ３、Ｃ４和Ｇ８。其中Ｂ３和Ｃ４均为ＩｇＧ１（ｋ），Ｇ８为ＩｇＧ２ａ（ｋ）。Ｂ３和Ｇ８与ＳＥＡ、ＳＥＢ及ＳＥＤ均无交叉反应；Ｃ４虽与ＳＥＡ和ＳＥＤ无交叉反应，但与ＳＥＢ有交叉反应。间接ＥＬＩＳＡ测定小鼠腹水效价为１０－５～１０－８。应用识别不同表位的ＭｃＡｂ建立了双ＭｃＡｂ夹心ＥＬＩＳＡ法检测ＳＥＣ１，敏感性可达１ｎｇ／ｍｌ。     

脂蛋白（a）杂交瘤细胞株的建立及鉴定

用脂蛋白（ａ）［Ｌｎ（ａ）］免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，应用淋巴细胞杂交技术，将免疫小鼠的脾细胞与ＮＳ１骨髓瘤细胞进行融合，得到６Ｇ８、９Ｆ１１２株分泌抗Ｌｐ（ａ）单克隆抗体的杂交瘤细胞株，对２株细胞进行免疫学鉴定，应用间接ＥＬＩＳＡ法证明，培养上清效价１×１０－３～２×１０－３，培养上清与Ｌｐ（ａ）呈阳性反应，而与ａｐｏＡⅠ、ＡⅡ、Ｂ、ＣⅢ、Ｅ及血浆纤溶酶原（ＰＬＣ）均无交叉反应，ＥＬＩＳＡ相加实验证明：２株杂交瘤细胞株分别识别Ｌｐ（ａ）分子上２个不同的抗原决定簇。     

分泌抗金黄色葡萄球菌C1型肠毒素杂交瘤细胞系的建立及初步应用

应用常规方法建立了３株稳定分泌抗金黄色葡萄球菌Ｃ１型肠毒素（ＳＥＣ１）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的小鼠杂交瘤细胞系Ｂ３、Ｃ４和Ｇ８。其中Ｂ３和Ｃ４均为ＩｇＧ１（ｋ），Ｇ８为ＩｇＧ２ａ（ｋ）。Ｂ３和Ｇ８与ＳＥＡ，ＳＥＢ及ＳＥＤ均无交叉反应；Ｃ４虽与ＳＥＡ和ＳＥＤ无交叉反应，但与ＳＥＢ有交叉反应。间接ＥＬＩＳＡ测定小鼠腹水效价为１０＾－５～１０＾－８。应用识别不同表位的ＭｃＡｂ建立了双ＭｃＡｂ夹心ＥＬＩＳ