影响鼠L929细胞产生干扰素的因素

鼠干扰素(IFN)对开展IFN的基本理论研究具有重要意义且制备容易。关于L929细胞产生IFN的条件尚只见一些散在的报导。为满足实验室研究工作的需要,我们对影响鼠L929细胞产生IFN的因素进行初步探讨,以期建立增产IFN的方法。材料与方法细胞及培养液鼠传代细胞,L929株,中国医科院病毒研究所赠送。培养液为Eagles基础培养液(EBEM),后改用Eagles最低必须培养液(EMEM)。补充10％灭活小牛血     

西部马脑炎病毒基因组序列的RT-PCR检测

目的 :建立敏感、特异的西部马脑炎 (westernequineencephalitis,WEE)病毒RT_PCR检测方法。方法 :首先采用逆转录法将病毒基因组RNA逆转录为cDNA ,然后以此cDNA为模板 ,进行PCR扩增。并对PCR扩增过程中的模板量、循环数、Mg2 浓度、退火温度和延伸时间等条件进行优化 ,以提高检测的特异性和敏感性。结果 :采用经优化的条件进行PCR扩增获得了约 35 0bp的单一DNA片段 ,其大小与预期的相一致 ,且可自 0 .1TCID50 的病毒液中检测出WEE病毒基因组序列。结论 :所建立的RT_PCR方法可自病毒感染的小鼠脑组织和传代细胞中检测WEE病毒的基因组RNA。     

粪链球菌肽聚糖提高新城鸡瘟病毒诱导小鼠干扰素的佐剂效果

伤寒杆菌、灵杆菌和大肠杆菌等菌的内毒素能提高新城鸡瘟病毒(NDV)诱导小鼠干扰素(MuIFN)的产量。卡介苗(BCG)能提高脂多糖(LPS)诱导的MuIFN产量,今西(Imanishi,J)等(1981)初次报导BCG可提高NDV或多聚肌甙酸:多聚胞甙酸(PolyI:C)诱导小鼠干扰素产量。类似BCG的菌壁肽聚糖(PG)是一种良好的佐剂,能否提高NDV诱生小鼠干扰素产量,目前国内外尚未见到有关这方面的报导,因此我们作了这一方面的初步探索。     

抗-森林脑炎病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及实验研究

本实验研究用新疆分离之森林脑炎病毒(TBEV)为免疫原、免疫BALb/c小鼠与鼠系骨髓瘤细胞融合,以HAI试验检测获得2个抗-TBEV阳性孔,经3次有限稀释克隆化鉴定为IgGI型,与苏联TBEV-索夫株交叉阳性,而与乙型脑炎、出血热,登革热病毒均为阴性。于体外经半年60余次传代、4次反复冻融及复苏均可稳定分泌抗体,上清HAI效价为1:16～1:32,免疫鼠腹水效价为1:10240。该抗体用 辣根过氧化物酶,异硫氰酸荧光素标记后可供检测用,二者比HAI敏感性分别高62.5倍和375倍,方法简便特异性强、可供基层单位使用。 我们还对抗-TBEV单抗进行了中和实验,中和指数为2500,治疗试验小鼠存活率为60％,存活率与单抗用量呈线形关系,病理组织学有明显差异,初步探索了单抗的实验治疗方法。     

东部马脑炎病毒E2基因的克隆与表达

目的 :克隆表达东部马脑炎病毒 (easternequineencephalomyelitisvirus ,EEEV)E2基因 ,研究重组蛋白的抗原性 ,为研制东部马脑炎病毒基因工程诊断试剂奠定基础。方法 :由病毒感染的鼠脑制备总RNA ,利用RT_PCR技术扩增EEEVE2基因全长序列 ,并将其克隆至pGEM_Teasy载体测序 ,再将E2基因克隆至谷胱甘肽转移酶 (GST)融合表达载体pGEX_5x_2中表达。采用免疫印迹试验 (Westernblotting)和ELISA法分析表达的重组蛋白的抗原性。结果 :经过RT_PCR扩增和测序 ,证明得到的E2基因片段的序列是正确的 ,并且在原核载体中得到表达 ,目的蛋白占总菌体蛋白的 2 4 .5 % ,主要以包涵体形式存在。Western印迹分析表明GST_E2蛋白有良好的抗原性 ;包涵体经Tri tonX_10 0 ,1mol L和 2mol L尿素洗涤 ,初步纯化后 ,用表达的E2融合蛋白作为包被抗原初步建立了间接ELISA法 ,结果表明与兔抗EEEV血清起特异反应 ,但与兔抗WEEV血清无交叉反应。结论 :东方马脑炎病毒的E2基因在大肠杆菌中得到稳定表达 ,表达的GST_E2蛋白具有良好的抗原性和特异性 ,为从分子水平上对EEEVE2蛋白的功能性研究和发展EEEV基因工程诊断试剂奠定了基础     

乙型肝炎病毒攻击肝细胞对β-干扰素表达的影响

目的探讨乙型肝炎病毒（hepatitisBvirus,HBV）攻击肝细胞对B一干扰素表达的影响。方法构建B一干扰素启动子调控的荧光素酶报告载体,与参比质粒共同转染细胞,用双荧光素酶报告系统检测poly（I：c）和血清中HBV攻击HepG2和L-O2两种肝细胞对细胞中B一干扰素转录活性的影响,并结合PCR技术检测HBV攻击肝细胞后B一干扰素的转录变化。结果血清中HBV攻击肝细胞能够引起细胞中β-干扰素的转录,但转录水平较低。此外,ItBV对肝细胞中β-千扰素的转录有促进作用。结论自然感染状态下,HBV能引起肝细胞中以β一千扰素表达为代表的天然免疫反应．．     

干扰素治疗5例丙型肝炎效果观察——附血清丙肝病毒动态观察

近年来,应用干扰素治疗丙型肝炎取得了较好的临床效果,但对血清中丙肝病毒(HCV·RNA)含量的变化,以判断干扰素治疗的效果,尚未见报道.作者应用定量PCR法检测了3例干扰素治疗的16份系列血清和2例未经干扰素治疗的8份系列血清样品,进行HCV·RNA含量动态观察,现将结果报告如下:     

雷米夫定联合干扰素-α1b抗乙肝病毒疗效观察

慢性乙型肝炎治疗的关键是抗病毒治疗,但单用一种抗HBV药物疗效往往不佳,目前国内外公认的抗乙肝病毒药物为雷米夫定和干扰素-α,国内有学者认为采用雷米夫定干扰素-α序贯疗法进行治疗,虽能减少YMDD变异,但不能提高抗乙肝病毒疗效。因此我们采取两者联合应用了解其能否提高抗病毒疗效,现总结如下。     

四逆散抗VSV病毒和诱生干扰素的实验研究

本实验研究了四逆散的抗病毒及诱生干扰素作用。结果表明,四逆散在细胞培养内具有一定的抗病毒作用。该方还显示出在小鼠体内具有对NDV诱生干扰素的促进作用和直接诱生干扰素的作用.为四逆,临床治疗病毒性疾病提供了实验依据.     

重组痘苗病毒介导的IL-2抗小鼠FBL-3细胞肿瘤的实验研究

观察了编码人白细胞介素２基因的重组痘苗病毒对小鼠接种ＦＢＬ－３红白血病细胞诱发肿瘤的治疗作用，野生型ＦＢＬ－３红白血病细胞接种Ｃ５７ＢＬ／６小鼠皮下，建立荷瘤模型，随机分组，分别局部注射ＩＬ－２ＶＶ、ＴＫＶＶ、重组ＩＬ－２、Ｈａｎｋ‘ｓ     

土元胡对大鼠、小鼠中度造血型放射病的治疗效果

本文概述了广东阳江天然放射性高本底地区第二阶段研究的结果,并进行了讨论。本阶段高本底和对照地区调查人口已扩大到各8万人左右。几种环境辐射测量表明.高本底地区γ外照射水平与对照地区的比值约为3.综合两个阶段测量结果估算,高本底地区居民全身所受内外照射年剂量当量为247.4merem,对照地区为96.9mrem。对本底辐射以外的致癌和致突变因素的研究表明,两地区比较相似。根据目前对高卒底地区11年累积531,972人·年和对照地区563,507人·年的恶性肿瘤死亡调查,高本底地区l3,425名和对照地区l3,087名儿童遗传性疾病和先天性畸形的检查,妇女生育情况调查,以及外周血淋巴细弛染色体畸变率分析和免疫功能测定的结果,来发现该高本底地区电离辐射对居民有不良影响.文中对高本底地区恶性肿瘤死亡率低于对照地区,先天愚型患病率高于对照地区,以及染色体畸变分析相免疫功能谢定所发现的变化进行了分析,提出需在今后的研究中加以验证.对该高本底地区的特点,以及继续列这一地区开展研究的意义进行了讨论,同时提出了在今后的研究中需要进一步解决的问题.     

干扰素-β对星形胶质细胞形态学及蛋白的影响

目的观察不同含量干扰素-β(interferon-β,IFN-β)作用不同时间,对体外培养的星形胶质细胞(astrocytes,AS)的生长状态、细胞形态、细胞连接变化、细胞骨架及细胞弹性相关蛋白表达影响,从而研究内源性IFN-β对AS的免疫调节作用,探讨AS作为多发性硬化治疗新靶点的可行性。方法体外培养AS,将培养的AS分为对照组和实验组,其中实验组根据IFN-β不同的含量(102 U/mL和103 U/mL)及不同的作用时间24、48、72 h分为6组。通过免疫荧光进行AS鉴定并观察细胞形态变化。利用原子力显微镜观察细胞形态,电镜观察细胞连接,四甲基偶氮唑盐比色法检测IFN-β对细胞生长情况的影响。蛋白质印迹法观察细胞结构及细胞弹性相关蛋白,即胶质纤维酸性蛋白、β-肌动蛋白、波形蛋白、丝切蛋白-1、抑制蛋白-1的表达情况。结果在不同时间、不同含量IFN-β作用下,AS的形态及数量无明显变化。但随着作用时间延长、IFN-β含量增加,细胞连接增多,细胞骨架及细胞弹性相关蛋白表达也呈现出与IFN-β含量及作用时间的正相关。结论在IFN-β作用下AS弹性及韧性增强、细胞突触增加、细胞连接更加紧密,对调节中枢神经系统血脑屏障的通透性有着重要的意义,在防止中枢神经系统炎性脱髓鞘中起到了重要的作用。虽然IFN-β对AS增殖无明显影响,但胶质纤维酸性蛋白表达增加,提示胶质细胞增生,可能导致病理性斑块的产生,从而影响IFN-β治疗的效果。     

青蒿素对小鼠干扰素的诱生作用

通过动物实验首次发现青蒿素是一种干扰素诱生剂,诱生的最适剂量为40～60mg/kg;诱生时间呈现给药后2小时及24小时两个高峰;一次给药诱生干扰素的效价为33～67u/ml,诱生能力与黄芪相近似;每日连续给药可产生低反应期,隔日给药可消除之;所诱生的是一种耐酸、不耐热的干扰素。对青蒿素诱生干扰素的特点与规律等进行了讨论。     

东部马脑炎病毒E2基因的表达及DNA免疫的初步研究

目的：构建东部马脑炎病毒E2基因的重组真核表达载体，对其DNA免疫原性进行观察。方法：采用RT-PCR扩增东部马脑炎病毒全长E2基因，构建真核表达载体pcDNA-E2，以脂质体法转染COS7细胞，经蛋白印迹法和免疫荧光法证明E2基因可以表达后，用庐重组质粒DNA免疫Balb/c小鼠，并用免疫荧光法检测鼠血清中病毒的特异抗体。结果：免疫印迹法、免疫荧光法检测表明E2基因在COS7细胞中获得瞬时表达，pcDNA-E2基因免疫小鼠可产生抗东部脑炎病毒的特异抗体。结论：东部马脑炎病毒E2基因的重组质粒DNA可刺激小鼠产生特异性的抗东部马脑炎病毒体液免疫应答，为基因疫苗的研制奠定了基础。     

γ-线对小鼠细胞遗传学的影响及重组人超氧化物歧化酶抗放作用的研究

研究γ－射线对小鼠遗传学的影响及重组人超氧化物歧化酶抗放作用。方法：实验用甲基纤维素缩集法计算淋巴细胞微核率，活体秋水内素法进行骨髓染色体畸变率分析。     

小鼠骨髓基质细胞的扫描电镜观察

光镜见小鼠骨髓细胞体外液体培养后贴壁的基质细胞呈多种形态,并有消长过程。本文以扫描电镜进一步观察骨髓基质细胞形态。实验所见支持光镜所得结果。骨髓基质细胞有多种形态,分别具有巨噬细胞样、成纤维细胞样和网状细胞样细胞的某些特征。在体外液体培养的早期,巨噬样细胞较多;而培养两周后的贴壁基质细胞中,成纤维细胞样和网状细胞样的细胞比例增多,相互交错联结成层成同,形成体外造血微环境样结构。     

聚乙二醇干扰素α-2a联合利巴韦林抗丙肝病毒治疗的严重不良反应44例

慢性丙型肝炎病毒（hepatitis c virus,HCV）感染呈世界性流行趋势,干扰素α联合利巴韦林是目前抗HCV治疗的标准方案。相当多的患者因药物不良反应导致依从性降低,治疗方案调整,甚至中断。为了寻找有效的解决方法,笔者将2009-01至2013-01我科44例慢性HCV感染者在聚乙二醇干扰素α-2a（peginterferon alfa-2α,peg IFNα-2a）,＋利巴韦林抗病毒治疗中因严重不良反应而停止或更换治疗方案现做回顾性分析。     

小鼠肿瘤对干扰素诱导剂和照射的反应

干扰素诱导剂是聚核糖肌苷酸-聚胞嘧啶核糖核苷酸、聚L-赖氨酸和羧甲基纤维素的复合物,简称Poly(ICLC),于照前6小时,以剂量1.25mg/kg 腹腔注射给荷Lewis 肺癌的C57BI 种小鼠(皮下接种瘤细胞3×10~4和3×10~5两组),小鼠肿瘤体积达450mm~3±100mm~3时进行照射,给Poly(ICLC)后6小时干扰素达血浆峰值,用~(60)Coγ线,出光率140.5CGy/分,每周照射2次,每次400CGy,总剂量1200CGy,干扰素诱导剂用3次。照后观察肿瘤体积变化及动物死亡情况,计算平均存活时间。实验分三组,给Poly(ICLC)     

鼠干扰素冷冻干燥方法的改进及其干燥制品热稳定性的初步观察

前言干扰素作为一种有希望的抗病毒和抗肿瘤的药物正在受到国内外科学工作者广泛深入的研究。为了满足实验室测定、临床试用以及日常运输和贮存的需要,通常都用真空冷冻干燥的方法稳定其活性。我们在1981年按照Jameson(1979)介绍的方法生产了本实验室第一批鼠干扰素标准品(编号810226),经一年使用,结果是稳定的。但我们考虑到该冻干方法真空度条件要求高,生产周期长,还不够理想。在实践中我们又感到鼠干扰素干燥制品的耐热性较好。为此,本实验目的在于通过改变冻干条件寻求一种快速、省时、有效和节能的真空冷冻干燥方法,同时通过     

雾化吸入干扰素α-1b对呼吸道合胞病毒治疗的实验研究

目的：探讨雾化吸入干扰素α-1b治疗小鼠呼吸道合胞病毒（RSV）肺炎的疗效。方法：BALB/c小鼠感染RSV后分4组：生理盐水组;干扰素组;利巴韦林组;干扰素＋利巴韦林组。观察肺组织病理变化;支气管肺泡灌洗液（BALF）白细胞计数及分类。结果：①治疗组肺病理变化较对照组明显减轻;②治疗组BALF白细胞计数及淋巴细胞比例低于对照组（P〈0.05）,且干扰素组低于利巴韦林组（P〈0.05）。结论：雾化吸入干扰素α-1b是治疗RSV感染的有效方法。