海马脑片锥体神经元钙离子通道动力学特性的盲法膜片钳研究

目的观察大鼠海马脑片盲法全细胞记录技术研究CA1区锥体神经元电压门控性Ca2+通道的动力学特征,为在海马脑片上进行神经科新药开发提供依据。方法选用出生20～30d的Wistar雄性大鼠20只,断头取脑,将海马切为厚400μm的薄片,解剖镜下选CA1区锥体神经元细胞线行盲法全细胞记录。结果大鼠海马脑片CA1区锥体神经元电压门控性Ca2+通道电流具有如下特点:①激活的阈电位偏低,为(-49±9)mV,范围为-65～-30mV(n=23)。②衰减时间常数τ值较大,且变化范围大(100～700ms)(n=12),并且衰减具有Ca2+电流幅值的依赖性。③稳态失活呈现电压依赖性,半失活电压为(-55±10)mV,斜率因子为(5.3±0.9)(n=10)。④当细胞外Ca2+浓度为2.5mmol/L时,Ca2+通道的反转电位为(55±13)mV(n=10)。⑤尾电流成分较为单一,不表现电压依赖性。另外,Ca2+电流对戊脉胺及双氢吡啶类化合物硝苯地平均不敏感。结论海马脑片CA1区锥体神经元上的Ca2+通道主要以N型为主。     

海马脑片锥体神经元钙离子通道动力学特性的盲法膜片钳研究

目的 观察大鼠海马脑片盲法全细胞记录技术研究CA1区锥体神经元电压门控性Ca^2+通道的动力学特征，为在海马脑片上进行神经科新药开发提供依据。方法 选用出生20-30d的Wistar雄性大鼠20只，断头取脑，将海马切为厚400μm的薄片，解剖镜下选CA1区锥体神经元细胞线行盲法全细胞记录。结果 大鼠海马脑片CA1区锥体神经元电压门控性Ca^2+通道电流具有如下特点：①激活的阈电位偏低，为(-49&;#177;9)mV，范围为-65～-30mV(n=23)。②衰减时间常数τ值较大，且变化范围大(100-700ms)(n=12)，并且衰减具有Ca^2+电流幅值的依赖性。③稳态失活呈现电压依赖性，半失活电压为(-55&;#177;10)mV，斜率因子为(5．3&;#177;O．9)(n=10)。④当细胞外Ca^2+浓度为2．5mmol／L时，Ca^2+通道的反转电位为(55&;#177;13)mV(n=10)。⑤尾电流成分较为单一，不表现电压依赖性。另外，Ca^2+电流对戊脉胺及双氢吡啶娄化合物硝苯地平均不敏感。结论 海马脑片CA1区锥体神经元上的Ca^2+通道主要以N型为主．     

肿瘤坏死因子-α对脊髓保护功能的电生理机制研究

目的:肿瘤坏死因子-α(TNF-α)具有脊髓保护功能,脊髓损伤后神经元Ca2+通道开放加重钙超载导致细胞损伤,而TNF-α与Ca2+通道之间的直接关系尚未明确,为此研究TNF-α对大鼠脊髓背根神经节(DRG)感觉神经元细胞膜电压门控Ca2+通道的电生理功能。方法:实验于2003-09/2004-01在华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科实验室完成。实验采用酶解获得单个DRG细胞,采用标准全细胞膜片钳技术记录单一细胞分别在无药物干预和TNF-α10ng/L与1μg/L条件下,依次给予单刺激,连续刺激和相关的双刺激时电压门控Ca2+电流(ICa-L),并分析对比电流形态、幅度、电流-电压曲线、最大电流的激活电压、反转电位和稳态灭活曲线形状的变化。结果:与用药前比较,TNF-α10ng/L和1μg/L可显著性抑制ICa-L(P<0.01),且两浓度间差异有显著性意义(P<0.01);但TNF-α对ICa-L电流-电压(I-V)曲线的形状、峰电流对应的电位和反转电位无明显影响,加速稳态灭活过程。结论:TNF-α抑制ICa-L,可能是机体通过TNF-α对损伤脊髓发挥保护功能的机制之一。     

胶质细胞源性神经营养因子对大鼠海马神经元N-甲基-D-天冬氨酸诱发电流的保护作用

目的:研究N-甲基-D-天冬氨酸N-methyl-D-asparate,NMDA在大()鼠海马神经元上诱发电流的特性以及胶质细胞源性神经营养因子(glialcellline-derivedneurotrophicfactor,GDNF)对大鼠海马神经元NMDA诱发电流(IN)的影响。MDA方法:实验于2002-10/2003-02在解放军第二军医大学膜片钳研究室进行,运用常规全细胞膜片钳技术,在原代培养第七八天的大鼠海马神经元上记录IN,以及GDNF对INMDAMDA的影响,由Clampex8.0软件采样系统获得的图形,直接进入Clampfit8.0软件处理数据。结果:NMDA可在海马神经细胞上诱发出大的内向离子流。当钳制电压为-60mV时,细胞外单独给予GDNF(0.1,1.0,10.0μg/L)对静息膜电导及电压门控离子通道无影响。但细胞外同时给予NMDA(100μmol/L)和GDNF10μg/L时,IN()MDA的峰值为(-578.238±100.493)pA,INMDA的峰值被抑制(t=-7.248,P<0.01),峰值受抑制率为(21.502±7.898)%。洗去GDNF后,抑制作用消失。结论:NMDA诱发的电流呈现出明显的内向整流特性,GDNF能抑制海马神经元NMDA通道的兴奋性,从而发挥神经保护作用。     

胶质细胞源性神经营养因子对大鼠海马神经元N-甲基-D-天冬氨酸诱发电流的保护作用

目的：研究N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-asparate，NMDA)在大鼠海马神经元上诱发电流的特性以及胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor，GDNF)对大鼠海马神经元NMDA诱发电流(INMDA)的影响。方法：实验于2002-10／2003-02在解放军第二军医大学膜片钳研究室进行，运用常规全细胞膜片钳技术，在原代培养第七八天的大鼠海马神经元上记录INMDA，以及GDNF对INMDA的影响，由Clampex 8．0软件采样系统获得的图形，直接进入Clampfit8．0软件处理数据。结果：NMDA可在海马神经细胞上诱发出大的内向离子流。当钳制电压为-60mV时，细胞外单独给予GDNF(0．1，1．0，10．0μg／L)对静息膜电导及电压门控离子通道无影响。但细胞外同时给予NMDA(100μmol／L)和GDNF(10μg／L)时，INMDA的峰值为(-578．238&;#177;100.493)pA，INDMA的峰值被抑制( t=-7．248，P&;lt;0．01)，峰值受抑制率为(21．502&;#177;7．898)％。洗去GDNF后，抑制作用消失。结论：NMDA诱发的电流呈现出明显的内向整流特性，GDNF能抑制海马神经元NMDA通道的兴奋性，从而发挥神经保护作用。     

急性缺氧对大鼠海马神经元N-甲基-D-天门冬氨酸诱发电流的影响

目的:研究N-甲基-D-天门冬氨酸(N-methyl-D-asparate,NMDA)在大鼠海马神经元上诱发电流的特性以及急性缺氧对大鼠海马神经元NMDA诱发电流(INMDA)的影响。方法:运用常规全细胞膜片钳技术,在原代培养第七八天的大鼠海马神经元上记录INMDA,并建立神经细胞体外急性缺氧模型,由Clampex8.0软件采样系统获得的图形,直接进入Clampfit8.0软件处理数据。结果:①在钳制电压为-60mV时,100μmol/LNMDA可在海马神经元上诱发出一大的内向电流,INMDA的峰值为(-745.461±123.731)pA。I-V曲线显示在钳制电压为正值时INMDA呈外向电流,而钳制电压为负值时则为内向电流。给予NMDA后,海马神经元上即刻诱发出内向电流,随后尽管持续给药20s,但INMDA开始发生衰减。②在钳制电压为-60mV时,海马神经元急性缺氧2min后,细胞外给予100μmol/LNM-DA可诱发一大而增强的INMDA,峰值为(-1670.49±202.09)pA,峰值显著增大(t=12.572,P<0.01),峰值增加率为130%。结论:NMDA诱发的电流呈现明显的内向整流性和失敏特性,急性缺氧能提高海马神经元NMDA通道的兴奋性,NMDA受体参与了兴奋毒性的产生。     

新生大鼠海马神经元的急性分离与膜片钳技术

目的:获得适用于膜片钳技术的单个海马神经元。方法:实验于2005-09/11在新乡医学院机能学研究室完成。应用酶消化及机械分离法,急性分离出生3～6d的SD大鼠海马神经元,在倒置显微镜下,选取已贴壁直径约10～15μm的锥体形神经元观察其急性分离效果和细胞活性状态。电生理学的鉴定采用全细胞膜片钳的模式记录电流反应,首先在大鼠海马CA1区锥体神经元诱发出内向离子流。在大鼠海马CA1锥体神经元诱发出内向离子流后,通过程控灌流系统在细胞外液中加1μmol/L的钠通道阻断剂河豚毒素灌流同一神经元,记录内向离子流的变化。结果:①该法可获得形态良好的单个海马神经元,海马锥体细胞具有锥形胞体穴10～20μm雪和厚墩的顶树突特征。活性较好的海马神经元熏胞体呈三角形或椭圆形,表面光亮,细胞膜完整、清晰的,立体感较强。一般有1个较长的顶树突和2个以上较短的基树突。②利用膜片钳技术内向电流被诱发,用1μmol/L河豚毒素完全阻断该电流,说明该内向电流为钠电流。结论:该法可获得形态和生理特性良好的单个海马神经元,证实该方法适用于海马神经元膜片钳研究,对深入探讨药物和毒物对海马离子通道及信号转导机制的作用有重要价值。     

二氧化硫衍生物对大鼠海马神经元外向钾电流特性的影响

背景二氧化硫(SO2)及其衍生物是细胞染色体断裂剂和基因毒性因子,还可引起机体组织的氧化损伤和酶活性的改变.但是,从膜损伤的角度来研究SO2及其代谢衍生物的毒作用,特别是神经毒效应,尚不十分清楚.目的研究大鼠海马神经元去极化激活的外向钾电流的特征,并在此基础上初步探讨SO2衍生物对此外向电流的影响.设计完全随机设计,自身对照实验对照.地点和材料本研究的地点为山西大学环境医学与毒理学研究所.材料为Wistar大鼠,约40只,鼠龄7 d,体重8～10 g,雌雄不限.中国辐射防护研究院动物房提供.干预利用全细胞膜片钳技术.主要观察指标短时去极化至-60 mV以上电位引发的外向电流;SO2衍生物作用前后此外向电流幅度的变化.结果短时去极化至-60 mV以上电位可引发快速上升的外向电流,之后缓慢衰减至一平台.当保持电位改变时,该峰电流与平台电流的幅度均会发生变化,但变化幅度不同,提示此外向电流包括两种成分.试验中测得峰电流与平台电流的翻转电位分别为(-76.1±5.97)mV和(-83.6±4.13)mV,与用Nerst方程计算出的本试验细胞外液与电极内液的钾离子平衡电位Ek=-88 mV接近,说明该外向电流是钾电流.SO2衍生物可剂量依赖地增大此两种成分的外向钾电流,使二者增大50%的剂量分别为26.19μmol/L和14.50 μmol/L.结论SO2代谢衍生物对大鼠海马神经元电压依赖性外向钾电流的增大作用,可导致神经元细胞内K+通过K+通道的外流,胞内K+浓度降低,造成中枢神经系统损伤.     

不同浓度利多卡因对大鼠脑海马锥体神经元钠、钙电流的影响

目的:观察不同浓度利多卡因对大鼠海马锥体神经元N-甲基-D-天冬氨酸受体介导钙电流和钠电流的影响,初步探讨低浓度利多卡因对神经元缺氧保护的电生理基础。方法:实验于2001-06/2002-08在北大医院麻醉生理实验室进行。将已培养12～14d的Wistar大鼠海马神经元按利多卡因浓度(10-5～10-1mol/L)分成5组(n=6),以不含利多卡因组做对照,应用全细胞膜片钳方法,采用无间隙模式,采集记录各组大鼠海马神经元N-甲基-D-天冬氨酸介导钙电流、电压依赖性钠电流的变化及各组静息电位的情况。结果:①同对照组相比,利多卡因浓度为10-3,10-2,10-1mol/L时明显抑制N-甲基-D-天冬氨酸介导钙电流,电流密度依次为5.2±1.9,3.0±0.5,3.3±1.0(P<0.05或0.01),其余浓度对N-甲基天冬氨酸介导钙电流无明显作用。②利多卡因浓度为10-4,10-3mol/L时,电压依赖性钠通道电流密度依次为160.9±19.2,68.2±6.5,同对照组相比明显减少,利多卡因浓度为10-2,10-1mol/L时钠电流被完全抑制(P<0.05或0.01)。结论:利多卡因可浓度依赖性抑制N-甲基-D-天冬氨酸介导钙电流和钠电流,低浓度利多卡因的脑保护作用可能与此有关。     

银杏叶提取物对培养的海马神经元内谷氨酸诱导钙信号的影响

目的检测银杏叶提取物(ginkgobilobaextract,GBE)对谷氨酸升高培养的海马神经元内游离钙离子浓度(犤Ca2+犦i)的影响和特征。方法实验设计分3组(n=26),向细胞吹药各20s:①组1×10-5mol/L谷氨酸,②组同时1×10-5mol/L谷氨酸。25μg/mlGBE,③组即在②组回到基线后给1×10-5mol/L谷氨酸。结果①组犤Ca2+犦i明显升高,②组犤Ca2+犦i的变化明显变小,其峰值明显下降,且Phase1上升速度减慢,Phase2的时间也有所缩短,二相之间的平台期相对延长,③组出现与①组中相似的钙震荡表现,但Phase1和Phase2的时间均缩短,犤Ca2+犦i的变化稍低。结论GBE通过影响NMDA受体的活动。快速抑制谷氨酸诱导大鼠海马神经元内游离钙浓度升高。     

川芎嗪对原代培养大鼠海马神经元L型钙通道电流和胞浆内钙浓度的影响

目的研究川芎嗪(TMP)对海马神经元细胞膜L型钙通道电流(Ica.L)作用和对神经细胞内钙([Ca2 ]i)的影响.方法取新生24h内大鼠进行原代海马神经元培养,使用全细胞膜片钳技术联合激光扫描共聚焦显微镜观察TMP对神经元Ica.L和[Ca2 ]i的影响.结果①膜片钳证实, 10、30、100 μmol/L的TMP组能显著抑制Ica.L峰值,分别与对照组的(454.2±31.4)pA比较降至(276.4± 17.1、209.3±14.2和(135.8±16.0 pA,P＜0.05),使I-V曲线上移,且具有浓度依赖性,但对最大激活电位无明显影响.②激光扫描共聚焦显微镜测量发现,细胞外液有钙液时,10、30和100μmol/L TMP组能显著抑制60 mmol/L的KCL引起的细胞内钙荧光峰值(Fi)增加,与对照组的(1749.4±61.0)比较降至(1227.1±36.2、998.2±23.9和745.9±20.6,P＜0.05);在细胞外液无钙时,30 μmol/L TMP组也能显著抑制60 mmol/L KCL引起的[Ca2 ]i)库释放,与对照组(965.3±82.5)比较降至(789.6±75.6,P＜0.05).结论TMP具有对海马神经元钙通道Ica.L和[Ca2 ]i库释放的双重抑制作用,使[Ca2 ]i水平降低,这可能是其神经保护机制原因之一.     

新生大鼠海马神经元的急性分离与膜片钳技术

目的：获得适用于膜片钳技术的单个海马神经元。 方法：实验于2005-09／11在新乡医学院机能学研究室完成。应用酶消化及机械分离法，急性分离出生3～6d的SD大鼠海马神经元，在倒置显微镜下，选取已贴壁直径约10～15μm的锥体形神经元观察其急性分离效果和细胞活性状态。电生理学的鉴定采用全细胞膜片钳的模式记录电流反应，首先在大鼠海马CA1区锥体神经元诱发出内向离子流。在大鼠海马CA1锥体神经元诱发出内向离子流后，通过程控灌流系统在细胞外液中加1μmol／L的钠通道阻断剂河豚毒素灌流同一神经元，记录内向离子流的变化。 结果：①该法可获得形态良好的单个海马神经元，海马锥体细胞具有锥形胞体（10～20μm）和厚墩的顶树突特征。活性较好的海马神经元，胞体呈三角形或椭圆形，表面光亮，细胞膜完整、清晰的，立体感较强。一般有1个较长的顶树突和2个以上较短的基树突。②利用膜片钳技术内向电流被诱发，用1μmol／L河豚毒素完全阻断该电流，说明该内向电流为钠电流。 结论：该法可获得形态和生理特性良好的单个海马神经元，证实该方法适用于海马神经元膜片钳研究，对深入探讨药物和毒物对海马离子通道及信号转导机制的作用有重要价值。     

吗啡对大鼠海马神经元突触传递的作用及机制

目的从离子通道角度研究吗啡对中枢神经系统兴奋性及抑制性突触传递的作用,以探讨吗啡镇痛机制.方法原代培养新生Wistar大鼠的海马神经元.采用膜片钳技术研究吗啡对其兴奋性及抑制性突触后电流及谷氨酸诱发电流的影响.结果①吗啡可明显增强海马神经元兴奋性突触传递,加吗啡后自发兴奋性突触后电流发放频率增加了207.8%(t=42.182 8,P＜0.01).此作用可被阿片受体阻断剂纳洛酮阻断;②吗啡对微小兴奋性突触后电流的发放频率及谷氨酸诱发电流的幅度没有明显影响(t=0.962,t=0.791,P＞0.05);③吗啡可明显抑制神经元自发抑制性突触后电流,纳洛酮可拮抗吗啡作用(P＜0.01).结论吗啡对海马神经元的兴奋作用不是由于吗啡直接作用于兴奋性氨基酸-谷氨酸突触传递过程,而是可能由于抑制了抑制性中间神经元,间接产生的兴奋达到镇痛作用.     

海马内注射硫氮卓酮对马桑内酯诱发大鼠大脑皮层痫样放电的影响

目的 观察硫氮卓酮的抗癫痫作用.方法 采用皮层应用马桑内酯的方法致痫大鼠.电刺激一侧坐骨神经,引导对侧皮层感觉区诱发电位,观察海马CA1-CA2区注射硫氮卓酮对致痫大鼠皮层脑电图和诱发电位的影响.结果 在皮层脑电图出现高频痫样放电期间,皮层诱发电位振幅高达(1.8±0.7)mV,海马内微量注射硫氮卓酮能明显抑制动物皮层脑电图痫样波频率、振幅和皮层诱发电位的振幅.结论 硫氮卓酮的上述作用与减少马桑内酯致痫时Ca2+流人神经元内有关.     

兴奋毒损伤海马神经细胞机制的研究

目的　探讨谷氨酸 (Glutamicacid ,Glu)的神经性兴奋毒损伤作用机制。方法　在体外快速剥离新生大鼠 (0 1天 )双侧海马 ,制成海马神经细胞悬液 ,用Fura 2 /AM负载 ,建立了Fura 2 /AM检测海马神经细胞胞内游离钙离子浓度 ([Ca2 + ]i)的方法 ,并检测Glu兴奋毒对海马神经细胞 [Ca2 + ]i的影响。结果　Fura 2单细胞检测表明 ,静息状态下海马神经细胞 [Ca2 + ]i=2 5 2 .6± 36 .1(nmol/L) ,Glu可使海马神经细胞 [Ca2 + ]i明显升高。大剂量Glu可使 [Ca2 + ]i升高几倍。结论　Glu导致神经细胞损伤的原因与细胞 [Ca2 + ]i超载有关。     

姜黄素对大鼠神经元凋亡和神经行为学的影响

目的探讨姜黄素对大鼠全脑缺血/再灌注损伤后海马CA1区神经元凋亡与神经行为学的影响。方法健康清洁雄性SD大鼠216只,其中108只用于细胞凋亡检测,108只用于神经行为学试验。随机均分为假手术组(SH组)、缺血再灌注组(IR组)和姜黄素干预组(CU组)。采用四血管阻塞法建立大鼠全脑缺血再灌注模型,干预组经腹腔注射姜黄素。原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡,旷场试验和高架十字迷宫试验评价神经行为学变化。结果 TUNEL法显示SH组凋亡率较低,与SH组比较,IR组凋亡率的增高差异有统计学意义(P<0.01)。CU组在6 h后各时点凋亡指数较IR组低,差异有统计学意义(P<0.01)。旷场试验和高架十字迷宫试验显示CU组大鼠和IR组相比探索能力较强,焦虑情绪较轻,差异有统计学意义(P<0.05)。结论大鼠全脑缺血/再灌注后,姜黄素能够降低海马CA1区神经元的凋亡指数,并改善大鼠全脑缺血/再灌注后的神经行为学功能,从而起到脑保护作用。     

二苯乙烯苷对谷氨酸致原代培养大鼠海马神经元损伤的保护作用

目的观察二苯乙烯苷对谷氨酸 (Glu)致原代培养大鼠海马神经元损伤的保护作用。方法原代培养大鼠海马神经元细胞与不同浓度的二苯乙烯苷 (5— 10 0 μmol/L)共同孵育 2 4h ,加入工具药Glu(终浓度为 5 0 0 μmol/L)孵育。四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞存活率 ;乳酸脱氢酶 (LDH )漏出率法测定细胞膜损伤 ;使用荧光指示试剂Fluo 3 /AM负载后 ,在激光共聚焦显微镜下观察不同细胞内Ca2 的荧光强度。结果不同浓度的二苯乙烯苷与细胞孵育 2 4h后可明显拮抗Glu介导的神经毒性作用 ,细胞存活率明显增加 ,LDH漏出减少 ,细胞死亡率降低 ,并呈明显剂量依赖关系 ;细胞内的Ca2 荧光强度降低。结论二苯乙烯苷拮抗Glu诱导的神经毒作用的机制可能为选择性抑制大剂量Glu引起的Ca2 浓度异常升高。     

二氧化硫衍生物对大鼠海马神经元外向钾电流特性的影响

背景：二氧化硫(SO2)及其衍生物是细胞染色体断裂剂和基因毒性因子，还可引起机体组织的氧化损伤和酶活性的改变。但是，从膜损伤的角度来研究SO2及其代谢衍生物的毒作用，特别是神经毒效应，尚不十分清楚。目的：研究大鼠海马神经元去极化激活的外向钾电流的特征，并在此基础上初步探讨SO2衍生物对此外向电流的影响。设计：完全随机设计，自身对照实验对照。地点和材料：本研究的地点为山西大学环境医学与毒理学研究所。材料为Wistar大鼠，约40只，鼠龄7d，体重8～10g，雌雄不限。中国辐射防护研究院动物房提供。干预：利用全细胞膜片钳技术。主要观察指标：短时去极化至-60mV以上电位引发的外向电流；SO2衍生物作用前后此外向电流幅度的变化。结果：短时去极化至-60mV以上电位可引发快速上升的外向电流，之后缓慢衰减至一平台。当保持电位改变时，该峰电流与平台电流的幅度均会发生变化，但变化幅度不同，提示此外向电流包括两种成分。试验中测得峰电流与平台电流的翻转电位分别为(-76．1&;#177;5．97)mV和(-83．6&;#177;4．13)mV，与用Nerst方程计算出的本试验细胞外液与电极内液的钾离子平衡电位Ek=-88mV接近，说明该外向电流是钾电流。SO2衍生物可剂量依赖地增大此两种成分的外向钾电流，使二者增大50％的剂量分别为26．19μmol／L和14．50μmol／L。结论：SO2代谢衍生物对大鼠海马神经元电压依赖性外向钾电流的增大作用，可导致神经元细胞内K^+通过K^+通道的外流，胞内K^+浓度降低，造成中枢神经系统损伤。     

不同浓度利多卡因对大鼠脑海马锥体神经元钠、钙电流的影响

目的：观察不同浓度利多卡因对大鼠海马锥体神经元N-甲基-D-天冬氨酸受体介导钙电流和钠电流的影响。初步探讨低浓度利多卡因对神经元缺氧保护的电生理基础。 方法：实验于2001-06／2002-08在北大医院麻醉生理实验室进行。将已培养12-14d的Wistar大鼠海马神经元按利多卡因浓度（10^-5-10^-1mol／L）分成5组（n=6），以不含利多卡因组做对照，应用全细胞膜片钳方法。采用无间隙模式，采集记录各组大鼠海马神经元N-甲基-D-天冬氨酸介导钙电流、电压依赖性钠电流的变化及各组静息电位的情况。 结果：①同对照组相比，利多卡因浓度为10^-3，10^-2，10^-1mol几时明显抑制N-甲基-D-天冬氨酸介导钙电流，电流密度依次为5．2&;#177;1．9，3．0&;#177;0．5，3．3&;#177;1．0（P〈0．05或0．01），其余浓度对N-甲基天冬氨酸介导钙电流无明显作用。②利多卡因浓度为10^-4，10^-3mol／L时，电压依赖性钠通道电流密度依次为160．9&;#177;19．2，68．2&;#177;6．5，同对照组相比明显减少，利多卡因浓度为10^-2，10^-1mol／L时钠电流被完全抑制（P〈0．05或0．01）。 结论：利多卡因可浓度依赖性抑制N-甲基-D-天冬氨酸介导钙电流和钠电流，低浓度利多卡因的脑保护作用可能与此有关。     

急性缺氧对大鼠海马神经元N-甲基-D-天门冬氨酸诱发电流的影响

目的：研究N-甲基-D-天门冬氨酸(N—methyl—D—asparate，NMDA)在大鼠海马神经元上诱发电流的特性以及急性缺氧对大鼠海马神经元NMDA诱发电流(INMDA)的影响。方法：运用常规全细胞膜片钳技术，在原代培养第七八天的大鼠海马神经元上记录INMDA。并建立神经细胞体外急性缺氧模型，由Clampex 8．0软件采样系统获得的图形，直接进入Clampfit 8．0软件处理数据。结果：①在钳制电压为-60mV时，100μmol／L NMDA可在海马神经元上诱发出一大的内向电流，INMDA的峰值为(-745．461&;#177;123．731)pA。I—V曲线显示在钳制电压为正值时INMDA呈外向电流，而钳制电压为负值时则为内向电流。给予NMDA后，海马神经元上即刻诱发出内向电流，随后尽管持续给药20s，但INMDA开始发生衰减。②在钳制电压为-60mV时，海马神经元急性缺氧2min后，细胞外给予100μmol／L NMDA可诱发一大而增强的INMDA峰值为(-1670．49&;#177;202．09)pA，峰值显著增大(t=12．572，P&;lt;0．01)，峰值增加率为130％。结论：NMDA诱发的电流呈现明显的内向整流性和失敏特性，急性缺氧能提高海马神经元NMDA通道的兴奋性，NMDA受体参与了兴奋毒性的产生。