李斯特菌选择性增菌培养分离比较研究

近20年，单核细胞增多性李斯特菌(L．monocytogenes，Lm)被认为是危害公共卫生和食品行业一种重要的人畜均可感染的致病菌。目前Lm的快速检测方法有PCR、ELISA、核酸探针等。但当样品中的Lm数量低手10^2cfu／g，或由于受生产、包装、贮运等条件影响。导致Lm的毒力缺失或变异、核糖体退化、酶活性减弱等，均可限制快速检测食品中Lm。因此要准确检出Lm.就要有效地将样品中少量或受损的李斯特菌进行增菌复苏。本文对欧洲通用的荷兰食品监察局(NGFIS)的PALCAM肉汤方法进行改良，并与美国食品药品管理局(FDA)方法和国标法进行比较，以便于食品和环境样品中李斯特菌的增菌分离。     

克菌丹Ames试验的研究

目的研究克菌丹对Ames试验菌株的致突变性。方法取农药克菌丹,按照GB15670—1995《农药登记毒理学试验方法》中的平板掺入法进行试验和结果评价。结果在不加S-9代谢活化系统条件下,TA97、TA100试验菌株各剂量组(10～50μg/皿)回复突变菌落数随剂量增高而增多,均大于自发回复突变菌落数的2倍,存在剂量-反应关系,且有重复性,为阳性反应;在加S-9代谢活化系统条件下,TA97、TA98、TA100试验菌株中、高剂量组(25～50μg/皿)回复突变菌落数随剂量增高而增多,均大于自发回复突变菌落数的2倍,存在剂量-反应关系,且有重复性,为阳性反应。结论在本试验条件下,克菌丹对鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验(Ames试验)为阳性。     

志贺氏菌选择性增菌培养方法的研究

目的 为了提高志贺氏菌的分离率,选用硫酸丁胺卡那霉素作为抑菌剂.方法 将添加与不添加硫酸丁胺卡那霉素的肉汤,按AOAC验证体系进行比对,并增加耐药以及不同形式的染菌试验.结果 添加硫酸丁胺卡那霉素可以使志贺氏菌增菌肉汤增菌液BAX-PCR的Ct值下降1～5个值.对测试方法和参考方法进行卡方检验,x2都小于3.84(P ＞0.05),说明两方法没有显著性差异.结论 当Ct值≤25.5时,传统方法可完全分离出目的菌.相同Ct值条件下,XLD和HE平板的分离效果要高于R&F和MAC.R&F可用于可疑菌落的初步鉴定.测试方法确定的阳性样本数大于参考方法,测试方法优于参考方法.     

阴道分泌物生理盐水增菌培养念珠菌

[目的]提高阴道分泌物白念珠菌的检出率。[方法]棉拭法取阴道分泌物置生理盐水瓶中，涂片检查后室温过夜增菌培养，阳性者挑取其中生长物1环置凹玻片中央作芽管和顶端厚壁孢子形成试验。[结果]3年来从春末到冬初共检800例，涂片念珠菌检出率14.6%，增菌培养阳性率35.3%，提高近2.5倍（P＜0.01,χ^2=90.9)；增菌培养阳性的35.3%中，经血清芽管和顶端厚壁孢子鉴定为白念珠菌分别为83.7%和84.5%。[结论]该法不经纯化，大大缩短了鉴定时间。     

沙门菌增菌培养基增菌效果的探讨与分析研究

〔目的〕选择好的商品增菌培养基 ,以提高沙门菌的检出率。〔方法〕用一定数量的大肠埃希菌与不同数量种类的沙门菌混合培养 ,观察不同增菌液的增菌效果。〔结果〕目前市售的沙门增菌培养基的增菌效果差距很大 ,差的只有在 1:10状况下沙门菌呈优势生长 ,好的可达 1:1× 10 8或以上状况下仍呈优势生长。〔结论〕自配的SC和TTB增菌液增菌效果最好。     

单增李斯特菌选择性增菌培养分离的初步探讨

目的：寻找一种良好的增菌培养分离法,提高食品中单增李斯特菌（Lm）的检出率。方法：对Fraser肉汤增菌法进行改良,在自行配制的第一液Half-Fraser肉汤中添加氯霉素,观察其对Lm及蜡样芽孢杆菌（B.cereus）的影响,确定加入氯霉素的最佳适宜量。160份样品同时采用改良Fraser肉汤法、FDA法、国标法增菌培养后,用传统生化鉴定Lm,比较检出率。结果：在Half-Fraser肉汤中添加3.0μg/ml氯霉素不会对样品中的Lm产生明显的影响,但可有效抑制B.cereus的生长。3种增菌培养法以Fraser肉汤增菌法总检出率最高,尤其对速冻食品的检出率达100%,FDA法对灭菌食品的检出率达100%。结论：Half-Fraser肉汤氯霉素的最佳添加量为3.0μg/ml。不同样品类型要用不同的增菌法,必要时用2种以上方法相结合,提高食品中Lm的检出率。     

尿液中受抗生素抑制细菌增菌培养的研究

在日常工作中 ,由于尿标本内抗生素浓度较高 ,抑制细菌在培养基中的生长 ,导致增菌失败。为了解决这个问题 ,我科尝试先用 0 .5 μm孔径滤菌装置过滤全程尿 ,再将滤菌膜放入培养基增菌。现将试验结果报告如下。　　患者二联应用抗生素 2 d后 ,由医生通过严格无菌操作 ,采集患者全程尿标本。试验组通过过滤菌装置过滤全程尿后 ,于无菌操作下 ,取出滤菌膜并迅速放入增菌培养基摇匀或涂开。同时按常规进行增菌试验作为对照组。并对检出的病原菌鉴定其菌种 ,用于两组结果的对比和评价。　　结果在用药两天的 178例泌尿系感染标本中 ,试验组检出 …     

海水中副溶血性弧菌增菌培养的优化

为优化海水中副溶血性弧菌的检验方法,笔者采用碱性蛋白胨水、氯化钠多粘菌素B肉汤、3％氯化钠碱性蛋白胨水三种增菌培养基及其组合的增菌方法与用TCBS琼脂、弧菌显色培养基两种分离平板分别检验20份海水样品中的副溶血性弧菌.结果显示,采用碱性蛋白胨水+3％ NaCl的碱性蛋白胨水增菌液进行二次增菌,能获得较高的检出率;使用弧菌显色培养基的分离符合率高于TCBS琼脂;增加增菌次数通常能提高分离符合率和检出率.     

沙门-志贺菌增菌培养基的研究

目的采用分值计算法研制沙门、志贺菌增菌培养基和制订质量标准。方法分值计算法。结果大肠埃希菌菌落平均菌落直径为0.99 mm,S=0.17;生长率为15.7%,δρ=3.12;痢疾志贺菌菌落平均菌落直径为1.48mm,S=0.29;生长率为70.2%,δρ=8.98;鼠伤寒沙门菌菌落平均菌落直径为1.65 mm,生长率为99.2%δρ=3.41。三株指示菌菌悬液浓度用沙门-志贺增菌培养基稀释10-8~10-12,培养6 h后计数结果:大肠埃希菌10-10稀释度为1.0cfu/ml;痢疾志贺菌10-11稀释度为1.0 cfu/ml;鼠伤寒沙门菌10-11稀释度为3.0 cfu/ml。质量分值结果表明:大肠埃希菌质量分值≥29.9(其中:菌落直径分值≥10.00;菌落差分值≥14.90;生长率分值≥5.00)。痢疾志贺菌质量分值≥13.05(其中:菌落直径分值≥10.00;菌落差分值≥-1.95;生长率分值≥5.00)。鼠伤寒沙门菌质量分值≥11.65(其中:菌落直径分值≥10.00;菌落差分值≥-3.35;生长率分值≥5.00)。结论沙门、志贺菌增菌培养基对大肠埃希菌具有较好的抑制作用;对痢疾志贺菌达到促生长的作用;对鼠伤寒沙门菌的生长未受到不良的影响。     

一次性增菌管剂型的增菌效果探讨

我们于 1993～ 1994年 ,开发研制肠道致病菌三线培养增菌剂 ,一次性增菌管剂型系列品种 :GN、SC、碱胨等增菌管剂型 ,用于健康体检人员分离培养 :志贺菌、沙门菌、O2 菌的增菌培养。简化肠道三线培养基的准备工作 ,提高微检效率 ,把微生物检验人员 ,从繁琐的培养基配制工作中解放出来 ,从事菌株分离鉴定技术性工作。使用一次性增菌管剂型可节省成本开支 ,使有限的资金应用更合理。同时又可使培养阳性率获得提高。一次性增菌管剂型 ,管壁原料采用无毒无害、透明度好的高压塑料 ,制成玻璃管形状 (附图 ) ,采用无菌灌封工艺 ,制成一次性增菌…     

沙门菌和志贺菌通用增菌液增菌效果实验观察

在对食品生产经营单位或公共场所从业人员作伤寒、痢疾带菌检查，对各类食品样品作沙门、志贺菌检测时，由于沙门菌和志贺菌检验所用的增菌液不同，即使是对同一份标本也只能分别增菌，分别划线分离，使实验室的工作量成倍增加，同时由于两者增菌时间不相同，（沙门菌18～24h，志贺菌6～8h），给实验测定的工作安排带来一定困难，因此，研究和选择合适的可同时用作沙门、志贺菌增菌的通用增菌液，对提高实验室的工作效率具有重要的现实意义。选择了市售的2个牌号的沙门、志贺菌增菌液与SC增菌液及GN增菌液分别进行了增菌效果的对比观察，现将结果报告如下。     

不同增/溶剂对Ames试验致突变性的影响

目的观察8种增/溶剂对Ames试验致突变性检出的影响,为合理选用增/溶剂提供参考。方法依照《化妆品卫生规范》(2007)中鼠伤寒沙门氏菌/回复突变试验方法,对95%乙醇、甲醇、丙酮、吐温-20、吐温-60、吐温-80、DMSO和乙酸乙酯8种增/溶剂进行测定和结果判定。结果吐温-20在不大于5.0mg/皿剂量下,其余7种增/溶剂在最大剂量100.0 mg/皿情况下对TA97、TA98、TA100和TA102菌株的回变菌落数对比判定均显阴性。结论 Ames试验中,95%乙醇、甲醇、丙酮、吐温-60、吐温-80、DMSO和乙酸乙酯最大使用剂量可为100.0 mg/皿;吐温-20最大使用剂量为5.0 mg/皿。     

碳纳米管的Ames试验研究

目的应用Ames试验系统观察多壁碳纳米管的诱变活性。方法选用TA97、TA98、TA100、TA102标准测试菌株,采用标准平板掺入法检测多壁碳纳米管的诱变活性。加S9混合液作为体外代谢活化系统。结果多壁碳纳米管在S9活化和非活化两种测试条件下,1～500μg/皿浓度范围,诱发TA98、TA100两种测试菌株回变菌落数与阴性对照组相比无明显增加,在1～10μg/皿浓度范围,诱发TA97和TA102产生的回变菌落数与阴性对照相比无明显增加,在10～500μg/皿测试浓度范围,对TA97和TA102产生的回变菌落数与阴性对照相比均达到阴性对照两倍以上。结论多壁碳纳米管具有碱基置换及移码型的直接诱变特性和间接诱变特性。     

增菌及增菌时间对药敏结果的影响

临床检验操作规程要求做细菌药敏前须经增菌4～6h,然后再做药敏鉴定,平时很多细菌工作者由于标本多,工作忙或为节省时间不太重视此环节,从而导致药敏结果的误差,本次对葡萄球菌、大肠肝菌、绿脓杆菌3株菌株,分别观察不增菌与增菌2、4h对药敏结果的影响。现报道如下。     

改良李斯特菌增菌液的研究

目的:研制改良李斯特菌增菌液。方法:用不同浓度的吖啶黄、萘啶酮酸、亚碲酸钾、氯霉素对单增李斯特菌、大肠杆菌及蜡样芽胞杆菌进行抑制效果试验。结果:浓度在15~10 mg/L时,吖啶黄对蜡样芽胞杆菌有较强的抑制性,对单增李斯特菌、大肠杆菌几乎不起作用;20~10 mg/L浓度的萘啶酮酸、25~15 mg/L浓度的亚碲酸钾对大肠杆菌、蜡样芽胞杆菌均有较强的抑制性,但对单增李斯特菌无抑制性;15~3 mg/L 4种浓度的氯霉素对3种菌均有较强的抑制性;用吖啶黄15 mg/L、萘啶酮酸20 mg/L、亚碲酸钾15 mg/L的李斯特菌改良增菌液增菌,单增李斯特菌检出率明显高于国标法(P<0.05)。212件样品的单增李斯特菌检出率由0.94%提高到7.08%。结论:该增菌液选择性强,检出率高,值得推广和应用。     

前增菌培养方法对热损伤单核细胞增生李斯特菌复苏效果观察及应用研究

目的：观察前增菌培养方法对热损伤LM的复苏/恢复情况以及在市售熟肉制品LM污染调查检测中的运用效果,探索受损伤LM的增菌培养方法,提高食品LM检出率。方法：LM参考菌株经61℃5 min处理,制备热损伤菌液,采用Alanin Martin等推荐的LM前增菌液和LM国标方法LB1、EB增菌液对热损伤细菌进行复苏/恢复,记录、分析细菌增殖、恢复情况。将LM前增菌培养方法与国标法结合（改良法）,用于熟肉制品LM污染调查检测,并与单纯国标法检测结果进行比较,得出结论。结果：热损伤LM经前增菌液培养4-5 h后,基本完成复苏/恢复过程,并开始明显增殖,24 h培养后,菌数较直接使用LB1、EB增菌液培养的菌数增长明显（约增加10^2倍）;热损伤LM在LB1、EB增菌液培养早期,菌数一度减少,机理尚需进一步研究。前增菌培养方法与LM国标法结合（改良法）用于熟肉制品LM污染调查,较单纯使用国标法的检出率明显提高（χ^2=4.68,P〈0.05）。结论：热损伤LM在LB1、EB增菌液中复苏/恢复比较缓慢,AlaninMartin等提出的LM前增菌方法对热损伤LM有明显的复苏/恢复效果,建议对加工食品进行LM检测时,在现行LM国标检测方法的基础上,适当增加前增菌培养过程,以提高LM的检出率。     

市售GN增菌液增菌效果观察

GN增菌液主要用于肠道带菌者与食品标本中志贺菌的增菌。我们对市售3种GN增菌液增菌效果进行了观察，发现按常规法测试GN增菌液增菌效果不明显，但纯菌种增菌后随着增菌时间的延长，增菌效果良好。     

二次增菌培养对提高阳性检出率的探讨

伤寒、副伤寒是常见的肠道传染病,也是严重危害人民身体健康的传染病.2002年3～7月,本市某乡发生一起大范围、经水传播的甲型副伤寒暴发.为了能及时、准确的分离、鉴定引起暴发的病原体,制订有效的防制措施.本实验室对提高甲型副伤寒纱门氏菌的检出率,进行了实验研究,现将结果报告如下.     

直接培养和增菌后培养分离志贺氏和沙门氏菌效果观察

直接培养和增菌后培养分离志贺氏和沙门氏菌效果观察李宝开（深圳市卫生防疫站５１８０２０）按常规方法检测志贺氏菌和沙门氏菌均需将标本先作增菌培养，再接种于选择培养基培养，才能观察报告结果。笔者长期承担饮食从业人员带菌检查，每天工作量大，为寻找既能简化操作...     

Ames试验原位测试方法初步研究

在短期致突变物和致癌物的筛选组合试验中,Ames、Test具有快速、敏感和价廉等优点,因此,此法仍为国内外首选的应用方法。但它对于气态及挥发性等化学物质的测定具有局限性,因采样、运输、样品提取等过程可使致突变物或短寿命产物造成损失或丢失。