慢性低氧大鼠肺动脉内皮素mRNA的表达及定位

目的；探讨慢性低氧大鼠肺动脉内皮素－１基因表达及分布。方法；采用生物素标记ｃＤＮＡ探针，对Ｗｉｓｔａｒ大鼠肺动脉进行原位杂交。结果：低氧１周组及２周组大鼠大部分肺动脉内皮细胞ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达呈阳性信号，面对照组大鼠仅极少数性信号（Ｐ〈０．０１）；低氧１周组大鼠部分显示强阳性信号。低氧１周组及低氧２周组大鼠部分肺产滑肌细胞呈现ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达阳性信号，而对照组大鼠则无阳性信号表达（Ｐ〈０．０     

低氧对大鼠不同节段肺动脉一氧化氮合酶mRNA表达的影响

目的探讨正常状态下肺动脉结构型一氧化氮合酶（ｃＮＯＳ）基因表达的定位及慢性低氧对不同节段肺动脉ｃＮＯＳ基因表达的影响。方法应用原位杂交技术,采用ｃＮＯＳｃＲＮＡ探针,观察低氧１周组、低氧２周组及对照组大鼠肺动脉ｃＮＯＳｍＲＮＡ的表达与分布。结果对照组大鼠与细支气管伴行的肺动脉内皮细胞ｃＮＯＳｍＲＮＡ的表达明显高于与呼吸细支气管及终末细支气管伴行的肺动脉（ｑ＝８１３,５４９;Ｐ均＜００１）。低氧１周及２周组大鼠与终末细支气管及细支气管伴行之肺动脉内皮细胞ｃＮＯＳｍＲＮＡ表达较对照组大鼠均明显降低。对照组大鼠各级肺动脉平滑肌细胞ｃＮＯＳｍＲＮＡ表达差异无显著意义（Ｆ＝２２６,Ｐ＞００５）;低氧１周及２周组大鼠与呼吸细支气管及终末细支气管伴行之肺动脉平滑肌细胞ｃＮＯＳｍＲＮＡ表达较对照组大鼠均明显降低。结论正常大鼠近端肺动脉内皮细胞ｃＮＯＳｍＲＮＡ表达强度最高;慢性缺氧主要抑制近端肺动脉内皮细胞及远端肺动脉平滑肌细胞ｃＮＯＳｍＲＮＡ的表达。     

氧疗对慢性低氧高二氧化碳性肺动脉高压大鼠肺血管重构及血浆内皮素的影响

目的：探讨长期氧疗对慢性低氧高二氧化碳性肺动物高压大鼠肺动脉压，肺血管重构及血浆内皮素变化的影响。方法：将SD大鼠分4组：正常对照组（NC），慢性低氧4w后伴高二氧化碳2w组（HH），HH后吸空气3w组（HC）与HH后氧疗3w组（HO）。观察各组大鼠平均肺动脉压（mPAP),右心室，左心室＋空间隔重量比（RV／LV＋S），血浆内皮素－1（ET－1）浓度及肺细小动脉显微结构变化。结果：（1）mPAP,RV/V S及血浆ET－1浓度：HO组比HC组明显降低（P＜0．01）。(2)mPAP与血浆ET－1呈良好的相关性。（3）光镜下HH组肺细小动脉内弹力板扭曲，中膜平滑肌细胞增生，管腔明显狭窄，HO组肺细小动脉内弹力板扭曲明显减轻，中膜平滑肌层变薄，管壁较均匀一致。结论：长期氧疗可明显降低慢性低氧高二氧化碳肺动脉高压大鼠血浆ET－1的浓度及肺动脉压，减轻肺血管的重构。     

健肾冲剂对慢性肾衰竭大鼠肾TGF—β1、ET—1mRNA表达的影响

目的：观察健肾冲剂对慢性肾衰竭（CRF）大鼠残肾组织中TGF－β1、ET－1mRNA表达的影响。方法：采用5／6肾切除法复制大鼠CRF模型,将50只wistar大鼠随机分成病理对照组、保肾康组、洛汀新组、健肾冲剂组、正常组,用RT－PCR技术检测各组大鼠残肾组织中TGF－β1、ET－1mRNA表达水平。结果：正常组肾组织中TGF－β1、ET－1mRNA表达最弱（P＜0．01）,病理对照组肾组织中TGF－β1、ET－1mRNA表达最明显（P＜0．01）,健肾冲剂组肾组织中TGF－β1、ET－1mRNA表达较保肾康组及洛汀新组有明显下降（P＜0．01）。结论：健肾冲剂可能是通过下调肾脏组织中TGF－β1、ET－1mRNA表达而改善CRF大鼠肾功能。     

低氧对肺血管周细胞转化生长因子TGF-β1 mRNA及蛋白表达的影响

应用细胞培养、核酸分子原位杂交、免疫细胞化学、图像分析技术研究低氧对肺血管周细胞转化生长因子TGF－β1mRNA及蛋白表达的影响,探讨低氧条件下肺血管周细胞增殖、向平滑肌样细胞分化的机制。结果发现低氧（H）组周细胞内TGF－β1mRNA及蛋白表达量分别是常氧（N）组的1．35倍和1．23倍,差异均有显著意义（均为P＜0．01）。研究表明,低氧可促进脉血管周细胞TGF－β1mRNA及蛋白表达增高。TGF－β1表达增高可能是低氧诱导肺血管周细胞增殖、向平滑肌样细胞分化的机制之一。     

一氧化氮对慢性缺氧大鼠肺动脉内皮素基因表达的影响

目的探讨一氧化氮对慢性缺氧大鼠肺动脉内皮细胞及平滑肌细胞内皮素－１（ＥＴ－１）ｍＲＮＡ表达的影响，全面了解缺氧性肺动脉高压的发病机制。方法对经Ｌ－精氨酸（Ｌ－Ａｒｇ）及Ｎω－硝基－Ｌ－精氨酸甲酯（Ｌ－ＮＡＭＥ）处理的慢性缺氧大鼠（４０只）肺组织，以ＥＴ－１ｃＲＮＡ探针进行原位杂交。结果缺氧１周及缺氧２周大鼠大部分肺动脉（７５％±３％及７１％±６％）其１％～５０％的内皮细胞显示ＥＴ－１ｍＲＮＡ杂交阳性信号。Ｌ－Ａｒｇ使大鼠肺动脉内皮细胞ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达明显抑制，而Ｌ－ＮＡＭＥ使其表达明显增强。缺氧１周及缺氧２周大鼠大部分肺动脉（８５％±６％及９８％±２％）的平滑肌细胞无ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达，但Ｌ－ＮＡＭＥ使其表达增强。结论一氧化氮对慢性缺氧大鼠肺动脉内皮细胞及平滑肌细胞ＥＴ－１－ｍＲＮＡ表达均有抑制作用。     

低氧诱导因子-1β在低氧性肺动脉高压大鼠肺内表达的研究

目的 观察低氧诱导因子-1β(HIF-1β)在低氧性肺动脉高压大鼠肺内的表达，探讨HIF-1在低氧性肺动脉高压发病机制中的作用。方法 建立低氧性肺动脉高压大鼠模型，采用地高辛标记的HIF-1β cRNA探针进行大鼠肺组织的Northern杂交和原位杂交。结果 低氧4周后大鼠肺动脉压增高，肺血管壁增厚，右心室重量增加。Northern杂交和原位杂交显示：对照组肺组织偶见微弱HIF-1β mRNA表达，低氧组HIF-1β mRNA强阳性，其主要部位为支气管上皮细胞(强阳性)、支气管周围增生淋巴组织(弱阳性)和肺泡壁细胞(弱阳性)，肺动脉上皮细胞和平滑肌细胞未见阳性反应。结论 慢性低氧可导致肺动脉高压和肺血管重建；HIF-1β在低氧性肺动脉高压大鼠肺内高水平表达，可能参与了低氧所致肺动脉的病理生理改变和肺动脉高压的形成。     

慢性缺氧大鼠肺动脉蛋白激酶C表达变化的免疫组织化学研究

为了观察慢性缺氧对大鼠肺动脉蛋白激酶C（PKC）表达的影响，将24只大白鼠分为4组，每组6只：正常对照组，缺氧1周组，缺氧2周组，缺氧4周组；应用免疫组织化学技术及计算机图像分析。结果发现：缺氧组肺动脉PKC阳性杂色较对照组增强，积分吸光度值增加（P＜0．05）。提示缺氧时大鼠肺动脉PKC表达上调可能参与慢性缺氧性肺动脉高压的发病过程。     

肺动脉管壁Ⅰ、Ⅲ型胶原变化在慢性低氧肺动脉高压形成中的作用

目的：探讨肺动脉管壁Ⅰ、Ⅲ型胶原以及Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA变化在慢性低氧肺动脉高压中的作用。方法：将二级SD大鼠分为对照组（A）和低O2组（B），低O2时间为4w。采用透射电镜，免疫组化，原位杂交，图像分析等方法研究慢性低氧对大鼠肺动脉平均压（mPAP)，右心室经（RV＋LV＋S），管壁厚度占血管外径的百分比（MT％），管壁面积占管总面积的百分比（MA％），肺细小动脉超微结构，肺动脉管壁Ⅰ、Ⅲ型胶原以及Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的影响。结果：（1）B组mPAP,RV/LV＋S显高于A组（P＜0．01）。（2）光镜下B组MT％，MA％显高于A组（P＜0．01）；电镜显示B组肺动脉中膜平滑肌细胞增生，胶原纤维较A组明显为多。（3）免疫组化显示B组肺细小动脉（直径约100－200μm)I型胶原含量（平均吸光度值LD）较A组明显为高（P＜0．01），Ⅲ型胶原LD各组间差异无显性（P＞0．05）。（4）原位杂交显示B组肺细小动脉（直径约100－200μm)Ⅰ型前胶原mRNA平均吸光度值较A组明显为高（P＜0．01），Ⅲ型前胶原mRNA平均吸光度值各组是差异无显性（P＞0．05）。（5）肺细小动脉I型及胶原，I型前胶原mRNA与mPAP,MT%均呈正相关。结论：慢性低氧引起肺动脉管壁I型胶原，I型前胶原mRNA表达增多是导致肺血管重构以致形成同压的重要原因之。     

myocardin在低氧诱导肺血管内皮向平滑肌样细胞转分化中的作用

目的探讨低氧条件下肺动脉内皮细胞(PAEC)向平滑肌样细胞的转分化及myocardin在其转分化过程中的作用。方法经免疫磁珠法(用血小板内皮细胞黏附分子1做免疫分选标记)纯化分离的原代肺动脉内皮细胞,用:RNA干扰(RNAi)技术构建psimyocardin RNA表达载体抑制myocardin基因的表达。细胞分为常氧组(含21％O2,5％CO2和74％N2)、低氧组(含1％O2,5％CO2, 94％N2)、常氧+myocardin抑制组和低氧+myocardin抑制组,分别培养1 d、4 d和7 d。用逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测myocardin mRNA的表达;免疫荧光检测平滑肌特异性标志物α-平滑肌(α-SM)肌动蛋白的表达,结合形态学鉴定平滑肌样细胞的转分化。结果(1)免疫荧光检测PAEC中α-SM-肌动蛋白阳性率在低氧4 d组(0．96‰±0．08‰)明显低于7 d组(2．07‰±0．06‰,P< 0．01),阳性细胞呈梭形或多角形,而常氧组和低氧1 d组均未见α-SM-肌动蛋白的阳性表达;(2)RT- PCR显示myocardin mRNA的表达在低氧4 d组(0．14±0．01)明显低于低氧7 d组(0．23±0．03, P<0．01),常氧组和低氧1 d组均未检测出其表达。(3)RNAi沉默myocardin基因表达后,其mRNA水平明显低于对应的低氧4 d组(0．03±0．02)和低氧7 d组(0．05±0．01,P<0．01);平滑肌样细胞的转分化率也明显降低(0．19‰±0．07‰,0．21‰±0．04‰,P<0．01)。以上每组重复3次。结论PAEC中存在少数细胞具有转分化为平滑肌样细胞的潜能,低氧可明显促进其转分化,myocardin在此转分化过程中起重要作用。