乙酰半胱氨酸对脑死亡大鼠肝脏的保护作用

目的探讨乙酰半胱氨酸(NAC)对脑死亡大鼠肝脏损伤的保护作用。方法将30只大鼠随机分为空白对照组(C)、脑死亡组(B)、NAC保护组(N)。各组动物均于脑死亡4h后采集血清检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、透明质酸(HA)及肿瘤坏死因子α(TNFα),并切取肝组织行电镜观察。结果脑死亡4h后,B组、C组和N组血清ALT水平(U/L)分别是142.88±4.12、43.38±2.33和101.38±5.37,AST水平(U/L)是283.00±12.74、120.38±4.07和216.54±7.16,HA(μg/L)是168.98±2.59、61.14±1.10和139.31±2.61,TNFα(μg/L)是1.26±0.041、0.62±0.03和0.96±0.07;B组较C组、N组显著升高(P<0.05),N组较C组显著升高但明显低于B组(P<0.05)。电镜观察示B组大鼠肝脏Kupffer细胞明显活化、肝窦内皮细胞与基质部分脱落、肝窦内皮窗口扩大,N组Kupffer细胞活化明显减轻、内皮细胞基本完整。结论脑死亡可致大鼠肝脏损伤,NAC对脑死亡大鼠肝脏损伤具有保护作用。     

兔脑死亡状态对肝脏蛋白质表达谱的影响

目的 分析兔脑死亡状态下肝脏存在的差异蛋白质,为揭示脑死亡状态下肝脏损伤的影响因素提供实验依据.方法 采用缓慢颅内加压法建立兔脑死亡模型.提取脑死亡后6h标本蛋白质进行双向凝胶电泳.利用PDQuest凝胶图像分析软件对图像进行分析.将两组间差异在2倍以上的蛋白质点行基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱鉴定.在NCBI数据库中检索,鉴定出相应的蛋白质,并用蛋白印迹法进行验证.结果 双向凝胶电泳显示,假手术组可检测到大约(973±34)个蛋白质点,脑死亡组可检测到大约(987±38)个蛋白质点.经成组比较共计有52个明显差异表达的蛋白质点,与假手术组相比,上调29个,下调23个.10个差异蛋白点分别为线粒体醛脱氢酶、过氧化物酶6、3磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1、3-巯基丙酮酸硫基转移酶、乙醇脱氢酶、二氢嘧啶酶相关蛋白4、Runt相关转录因子1、无机焦磷酸酶、谷氨酸-半胱氨酸连接酶的调节亚基、微粒细胞色素B5.其中,RUNX1是我们比较关注的一个蛋白.通过蛋白印迹法对RUNX1在各组织中的表达情况进行验证发现,随着脑死亡时间的延长,RUNX1在肝脏中的表达逐渐减少.结论 双向凝胶电泳结合质谱鉴定是差异蛋白质组学研究的可靠平台和有力工具,鉴定出的蛋白质RUNX1可能与脑死亡后肝脏损伤的发生、发展有关,有助于对脑死亡后肝脏损伤机制的了解.     

葛根素对脑死亡大鼠肝脏的保护作用

目的 探讨葛根素对脑死亡状态下大鼠的肝脏的保护作用.方法 SD大鼠随机分为3组:模型组,采用渐进式颅内加压法建大鼠脑死亡模型;葛根素组,建脑死亡模型后给予葛根素;假手术组,仅做假手术,不建脑死亡模型.分别于造模后2 h和4 h取材,检测血清中ALT,AST,TNF-α和IL-6水平,并做肝脏病理形态学观察.结果 与假手术组比较,模型组与葛根素组大鼠血清ALT,AST,TNF-α和IL-6水平均明显升高(均P<0.05),同组不同时间点比较显示,模型组与葛根素组大鼠上述指标且均呈进行性升高(均P<0.05),在相同时间点上,葛根素组大鼠上述指标明显低于模型组大鼠(P<0.05);病理学检查显示,模型组与葛根素组肝脏均出现不同程度的损伤,但葛根素组损伤程度明显轻于模型组.结论 葛根素对脑死亡状态下大鼠肝脏具有作用.     

阿霉素预处理对大鼠肝脏低温保存损伤的保护作用

我们采用大鼠肝脏非循环灌注模型。探讨应用抗癌药阿霉素预处理(DPc)是否可以模拟缺血预处理的延迟保护作用，旨在减轻肝脏缺血一再灌注(I／R)损伤，为临床提供一种安全有效的预处理方法。     

脑死亡对供体心脏损伤的研究进展

早期原发性移植物衰竭是心脏移植患者早期死亡的重要因素,而应用脑死亡供体是引起早期原发性移植物衰竭的重要因素。急性脑死亡后可引起供体血流动力学的剧烈改变以及循环中生化指标的紊乱,并造成心肌形态学上的损伤。本文就急性脑死亡后机体各系统出现的变化及造成心肌损伤的研究进行综述。     

超氧化物歧化酶对大鼠肝脏缺血再灌注损伤保护作用的体外实验

目的：探讨氧自由基清除剂对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用及其机理。方法：将Wistar大鼠分成三组，各组通过门静脉插管，对肝脏进行原位灌洗，心脏搏动组以4℃HTK液灌洗；心脏停跳组在心脏搏动停止60min后，以同样方法灌洗肝脏；SOD实验组灌洗方法同心脏停跳组，但灌洗液中含有超氧化物歧化酶（SOD）7500IU。灌注结束后，快速切取肝脏，于4℃HTK液中保存24h，然后在体外以Krebs-Henseleit缓冲液再灌注45min。测定再灌注过程中的门静脉压力，收集再灌注液，进行血气分析，测定其中丙氨酸转氨酶（ALT）、谷氨酸乳酸脱氢酶（GLDH）及脂质过氧化物（LPO）的含量；切取肝组织，检测其能量底物总和（TAN）及细胞凋亡情况。结果：再灌注期间，SOD实验组的门静脉压力为（6．4±0．9）cmH20，明显低于心脏停跳组的（12．1±0．7）cmH20（P〈0．01）。随着再灌注时间的延长，灌注液中AL]r和GLDH的浓度不断升高，但SOD实验组明显低于心脏停跳组（P〈0．05）。心脏停跳组肝脏氧消耗量明显低于心脏搏动组（P〈0．01），而SOD实验组氧消耗量明显增加（P〈0．01）。SOD实验组的TAN为（7．6±0．4）μmol／g，明显高于心脏停跳组的（5．3±0．7）,μmol／g（P＜0．05）。SOD实验组灌注液中LPO的含量为（0．42±0．10）nmol／g，明显低于心脏停跳组的（0．98±0．18）nmol／g（P＜0．01）。心脏搏动组只有极少量的肝窦内皮细胞和肝细胞凋亡，SOD实验组中凋亡细胞的数量也非常有限，而在心脏停跳组，则有大量的肝窦内皮细胞发生凋亡。结论：在体外，SOD能显著减轻大鼠肝脏的缺血再灌注损伤，这可能与SOD抑制了氧自由基所致的细胞凋亡有关。     

脑死亡状态下家兔肝脏质量评估新指标:线粒体醛脱氢酶

目的 应用蛋白质组学方法筛选脑死亡状态下肝脏的差异蛋白,为肝脏供体质量评估提供实验依据.方法 健康雄性新西兰家兔60只,随机分为脑死亡和假手术2个大组,每组30只,每个大组再分为2h、6h和8h三个时间亚组,每组10只.各组分别于处理后2、6及8h收集血液及肝脏组织,生化分析仪检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平,HE染色观察肝脏的形态学改变.用双向凝胶电泳、胶图分析、质谱分析及NCBI数据库筛查并鉴定差异蛋白.结果 脑死亡8h血清ALT水平较6h升高(P＜0.05),AST水平随脑死亡时间延长无明显改变(P＞0.05);假手术组不同时间点ALT、AST水平差异无统计学意义(P＞0.05).光镜下,随着时间延长,脑死亡组家兔肝脏水肿及汇管区炎性细胞浸润逐渐增加,8h时出现中性粒细胞微脓肿,肝细胞受损不明显;实验8h脑死亡家兔胆管区以淋巴细胞浸润为主,假手术组以中性粒细胞浸润为主.通过双向凝胶电泳、质谱分析及数据库查询,发现脑死亡组与假手术组共存在10种差异表达蛋白.其中一种差异蛋白与物质代谢密切相关,为线粒体醛脱氢酶,其在脑死亡组表达降低.结论 脑死亡可以导致家兔肝脏形态学方面的粗略改变,而功能学无明显改变.线粒体醛脱氢酶可能参与了脑死亡后肝脏损伤的发生和发展,有望成为脑死亡状态下家兔肝脏质量评估的新指标.     

缺血预处理对大鼠肝脏低温保存损伤的保护作用

目的　探讨缺血预处理 (IPC)对大鼠肝脏低温保存损伤的保护作用。方法　制备大鼠肝脏离体非循环灌注模型 ,对供肝分别作不同时间的IPC (IPC1组缺血 5min、IPC2 组缺血 10min、IPC3 组缺血 15min) ,而后比较各组供肝的损伤程度。结果　流出液中AST和ALT的水平 ,IPC1组分别为 (4 0 .1± 6.3 )U/L和 (17.1± 0 .5 )U /L ,IPC2 组分别为 (5 3 .6± 3 .7)U/L和 (19.7± 0 .5 )U /L ,均显著低于未预处理 (NPC)组的 (64 .5± 8.2 )U/L和 (2 3 .8± 3 .9)U /L (P<0 .0 5 ) ;IPC1组又显著低于IPC2 组和IPC3 组的 (63 .8± 7.2 )U/L和 (2 2 .8± 2 .5 )U /L (P<0 .0 5 )。LDH水平 ,NPC组、IPC1组、IPC2 组和IPC3 组分别为 (10 4.3± 2 0 .6)U/L、(84.1± 19.7)U /L、(90 .5± 2 1.1)U/L和 (10 3 .1± 18.5 )U /L ,4组间差异无统计学意义 (P>0 .0 5 ) ,但均高于正常组〔(71.5± 18.9)U /L〕 (P<0 .0 5 )。胆汁分泌量及肝组织ATP含量 ,IPC1组分别为 (5 3 .5± 10 .2 ) μl和 (6.15± 0 .65 ) μmol/g ,IPC2 组分别为 (4 1.5± 8.1) μl和 (4 .77± 0 .2 1) μmol/g ,均显著高于NPC组的 (2 2 .8± 9.7) μl和 (2 .62± 0 .3 4) μmol/g (P<0 .0 5 ) ;IPC1组又显著高于IPC2 组和IPC3 组的 (2 7.5± 2 .8) μl和 (2 .61     

脑死亡对供体心脏损伤的研究进展

早期原发性移植物衰竭是心脏移植患者早期死亡的重要因素，而应用脑死亡供体是引起早期原发性移植物衰竭的重要因素。急性脑死亡后可引起供体血流动力学的剧烈改变以及循环中生化指标的紊乱，并造成心肌形态学上的损伤。本文就急性脑死亡后机体各系统出现的变化及造成心肌损伤的研究进行综述。     

脑死亡对猪肝脏免疫原性的影响

目的观察脑死亡对猪肝脏免疫原性的影响。方法健康猪12头,随机分为2组:对照组6头,仅行麻醉维持24h;脑死亡组6头,建立猪脑死亡模型并维持脑死亡状态24h。脑死亡后(对照组持续麻醉后)6、12、24h取血标本及开腹取同一部位肝组织,利用ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平变化,实时荧光定量PCR法观察肝组织细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA变化,免疫组织化学法观察肝组织主要组织相容性复合体Ⅱ(MHC-Ⅱ)表达变化。结果各时间点脑死亡组血清TNF-α、IL-6水平、肝组织ICAM-1、MCP-1mRNA转录水平及肝组织MHC-Ⅱ表达水平均较对照组高,两者相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论脑死亡状态增加了肝组织的免疫原性。可能潜在增加了移植后供肝的免疫损伤及排斥反应发生率。     

胆绿素对脑死亡致大鼠肺损伤的影响

目的 评价胆绿素对脑死亡致大鼠肺损伤的影响.方法 成年雄性清洁级Wistar大鼠23只,体重250～300 g,随机分为3组,假手术组(S组,n=7)仅向大鼠颅内置入Fogarty导管;脑死亡组(BD组,n=8)和胆绿素组(B组,n=8)向大鼠颅内置入Fogarty导管,通过膨胀球囊诱导脑死亡,膨胀球囊后30 min确认脑死亡情况,发生脑死亡后分别腹腔注射生理盐水1 ml或胆绿素35 mg/kg.分别于给予胆绿素前、后间断采集动脉血样,进行血气分析,计算PaO2/FiO2,并测定血浆胆红素浓度.给予胆绿素后1.5 h处死大鼠,取肺组织,测定MDA含量、SOD活性、总抗氧化能力、肺组织细胞凋亡情况及胆绿素还原酶的表达水平,对细胞凋亡情况进行免疫组化评分.结果 与S组比较,BD组PaO2/FiO2、SOD活性和总抗氧化能力降低,MDA含量和凋亡细胞免疫组化评分升高(P＜0.05);与BD组比较,B组PaO2/FiO2、胆红素浓度、SOD活性、总抗氧化能力和胆绿素还原酶表达水平升高,MDA含量和凋亡细胞免疫组化评分降低(P＜0.05).结论 外源性给予胆绿素可减轻脑死亡致大鼠肺损伤,其机制与抑制肺组织氧化应激反应和细胞凋亡有关.     

吸入一氧化碳对大鼠脑死亡致肺损伤的影响

目的 评价吸入一氧化碳(CO)对大鼠脑死亡致肺损伤的影响.方法 成年雄性Wistar 大鼠24只,随机分为3组(n=8),假手术组(SH组)颅内置入Fogarty管,但不诱导脑死亡,吸入40%氧气,持续150 min;脑死亡组(BD组)膨胀Fogarty球囊,确认脑死亡后吸入40%氧气,持续120 min;脑死亡+CO组(BDCO组)膨胀Fogarty球囊,确认脑死亡后吸人40%氧气+0.025%CO混合气,持续120 min.于麻醉前、确认脑死亡即刻、吸入CO 30、60、90、120 min时行动脉血气分析;于吸人CO 120 min时.检测血浆白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和IL-10的浓度;计算肺湿干重比(W/D);检测肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性,行肺组织损伤评分.结果 与SH组比较,BD组和BDCO组脑死亡后PaO2/FiO:、BE和pH值下降,血浆IL-6、TNF-α和IL-10的浓度和肺组织损伤评分升高,BD组肺W/D、MPO活性升高(P<0.05);与BD组比较,BDCO组脑死亡后PaO2/FiO2、BE、pH值和血浆IL-10浓度升高,肺组织MPO活性、血浆IL-6、TNF-α的浓度和肺组织损伤评分降低(P<0.05).结论 吸入CO可减轻大鼠脑死亡诱发的肺损伤,其机制可能与CO降低肺组织局部和全身炎性反应有关.     

Differences in cell death between high and low energy brain injury in adult rats

Background  Traumatic brain damage is dependent on energy transfer to the brain at impact. Different injury mechanisms may cause different types of brain injury. It is, however, unknown if the relative distribution between apoptotic cell-death and necrotic cell- death in different populations of brain cells varies depending on energy transfer. Method  Experimental contusions were produced with a modified weight drop onto the exposed dura of rats. Animals were divided into two groups. They received a weight drop from two different heights to vary energy transfer to be higher or lower. Animals were sacrificed at 24 hours post injury (1 DPI) or 6 days (6 DPI); brains were frozen and processed for TUNEL (TdT mediated dUTP nick end labelling), light microscopy and immunochemistry. Findings  The total number of TUNEL positive cells was higher in the higher energy group on the first day after the injury. At the same time point, relatively fewer cells were apoptotic than necrotic, while relatively more glial cells than neurons were TUNEL-positive in higher energy trauma. At 6 day after the injury fewer cells were TUNEL positive and there were no longer significant differences between the high and low energy groups. Conclusions  Increasing energy transfer in a model for brain contusion demonstrated qualitative and quantitative changes in the pattern of cell death. This complexity must be considered when evaluating brain-protection as treatment results may vary depending on which cellular population and which mechanism of cell death is treated under the exact experimental and clinical conditions.     

多巴胺预处理对脑死亡大鼠肾免疫原性的影响

目的　观察用多巴胺预处理对脑死亡大鼠肾免疫原性的影响。方法　对脑死亡大鼠静脉内持续滴注多巴胺 ,剂量分别为 2、6、10和 14 μg·kg-1·ml-1,6h后取出肾脏 ,进行免疫组化分析。结果　用多巴胺预处理后 ,脑死亡大鼠的肾脏单核吞噬细胞浸润、主要组织相容性复合物Ⅱ类抗原的表达以及P 选择素的表达受到抑制 ,其抑制程度随多巴胺的用量增加而加大。结论　多巴胺的预处理可以明显降低脑死亡大鼠肾脏的免疫原性     

脑死亡时猪肝脏功能及组织学改变的研究

目的 观察脑死亡对猪肝脏功能、形态的影响并探讨核因子κB(nuclear factor κB,NF-κB)在脑死亡发生机制中的作用.方法 健康长白猪12头,随机分为2组:对照组6头,仅行麻醉维持24 h;脑死亡组6头,建立猪脑死亡模型并维持脑死亡状态24 h.脑死亡后(对照组持续麻醉后)6、12、24 h取血标本及开腹取同一部位肝组织,检测血清中丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(espartate aminotransferase,AST)水平;ELISA法检测血清白细胞介素1β(intedeukin-1β,IL-1β)水平;实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,real-time PCR)法检测肝组织NF-κB mRNA变化;免疫组织化学法观察肝组织NF-κB p65蛋白表达情况.结果 脑死亡组长白猪各时间点血清ALT、AST、IL-1β水平、肝组织NF-κB mRNA转录水平及肝组织NF-κB p65蛋白表达水平均较对照组高,两者相比差异有统计学意义(P<0.05).脑死亡组脑死亡后12 h肝细胞轻度浊肿;24 h细胞水肿,肝细胞疏松化.结论 脑死亡导致猪肝脏出现功能与形态学的损伤性变化.其机制可能是脑死亡引起肝细胞NF-κB mRNA 转录和蛋白翻译水平升高,进而导致机体炎症介质合成与释放.     

改良大鼠渐进性脑死亡模型的制作

目的 总结制作大鼠渐进性脑死亡模型的技巧并改良此模型的制作方法.方法 对经典Pratschke术式的麻醉、插管、颅内加压、脑死亡判断等环节进行探讨,建立Wistar大鼠的渐进性脑死亡模型.结果 所有动物在诱导脑死亡过程中均出现较一致的血压变化规律:诱导后期平均动脉压开始急剧升高,于颅内加压后(11±2)min时达到峰值(190±15)mm Hg,其后血压急剧下降,(20±3)min时达到谷值(70±16)mm Hg,与诱导前平均动脉压(110±18)mm Hg比较,其峰值和谷值差异均具有统计学意义(P＜0.05).共诱导40例大鼠脑死亡,37例能成功维持正常血压达6 h,手术成功率92.5%(37/40).结论 与经典Pratschke术式比较,该术式降低难度,提高手术成功率,是一种较稳定、可靠的大鼠脑死亡模型.     

Evolution of criteria for determination of brain death in Japan

Summary In 1974, the Japanese EEG Society's Ad Hoc Committee on Brain Death published criteria for determining brain death only in cases of acute gross primary brain lesions. In 1983, a new brain death study group was organized to re-evaluate these criteria. During a 6-month period from March 1, 1984, 217 neurosurgical and neurological clinics and emergency services throughout Japan reported 718 brain deaths caused not only by primary lesions but also by secondary brain lesions and diagnosed as such on the basis of the 1974 criteria excluding the condition of abrupt fall of blood pressure followed by persistent hypotension. The data derived from the 718 cases in this collaborative study were pooled and analyzed, and it became known that the 1974 criteria still are generally reliable. Some changes have been made, however, and new criteria for determination of brain death adopted.     

急性脑死亡对移植供体心脏的影响

目的探讨急性脑死亡(BD)对机体造成的病理生理改变和对心脏造成的损伤及其机制。方法采用30～40kg体重的猪8只，制造BD前为对照组，BD后为实验组。测定BD前后血流动力学指标和血中生化学指标，并进行心肌活检。结果BD后心率增加了88％，收缩压升高了132％，心排量增加了80％、肾上腺素和去甲肾上腺素分别升高240％和241％，三碘甲腺原氨酸浓度显著下降，心肌形态学检查发现有心肌损害。结论BD可造成机体血流动力学的剧烈改变和心肌损害，血中儿茶酚胺含量升高和T3含量下降是造成心肌损伤的重要因素。     

rCBF in impending brain death

Summary Regional cerebral blood flow (rCBF) was measured in three patients after relief of elevated intracranial pressure and restoration of normal cerebral perfusion pressure. Two patients, studied within 4 hours after closed head injury were found to have marked impairment of cortical blood flow and elevation of cerebrovascular resistance. We suggest that this picture is indicative of impending brain death, and may be the result of a long period of severe cerebral ischemia. The third patient, who had a shorter period of intracranial hypertension occurring during anaesthetic induction, responded to reduction of ICP quite differently with a transient relative hyperaemia. The physiopathological explanations for these two different types of flow response and their possible clinical significance are discussed.