大鼠听皮质NMDA受体亚单位NR2BmRNA年龄-依赖性表达

应用原位杂交技术,研究了大鼠生后发育过程中,听皮质神经元NMDA受体亚单位NR2B mRNA年龄-依赖性的表达变化.特异性DIG标记寡核苷酸探针检测显示,NR2B亚单位mRNA阳性神经元数量从出生后即有高水平表达,之后,随着天龄增长逐渐递减,在出生后14 d出现一过性表达高峰,14～21 d时表达水平急剧降低(＞50.0%),21 d后保持低水平表达至成年.研究结果为进一步在皮质水平上探讨出生后听觉功能发育可塑性的分子机制提供了重要资料.     

大鼠听皮质NMDA受体亚单位NR2BmRNA年龄-依赖性表达

应用原位杂交技术 ,研究了大鼠生后发育过程中 ,听皮质神经元NMDA受体亚单位NR2BmRNA年龄 依赖性的表达变化。特异性DIG标记寡核苷酸探针检测显示 ,NR2B亚单位mRNA阳性神经元数量从出生后即有高水平表达 ,之后 ,随着天龄增长逐渐递减 ,在出生后 14d出现一过性表达高峰 ,14～ 2 1d时表达水平急剧降低(>5 0 .0 % ) ,2 1d后保持低水平表达至成年。研究结果为进一步在皮质水平上探讨出生后听觉功能发育可塑性的分子机制提供了重要资料     

神经干细胞分化的神经元离子型谷氨酸受体NMDA亚单位的mRNA和蛋白表达

目的在体外研究由大鼠神经干细胞(NSCs)分化而来神经元细胞中离子型谷氨酸NMDA受体表达。方法分离培养孕14～16d胎鼠皮质和海马神经干细胞，对NSCs进行nestin和分化鉴定。通过RT—PCR、Western blot免疫印迹和免疫组化检测NSCs分化的神经元细胞中离子型谷氨酸NMDA受体亚单位NR1、NR2A和NR2B的mRNA和蛋白表达。结果从孕14～16d胎鼠大脑中分离培养出NSCs，NSCs分化后的神经元可以表达离子型谷氨酸NMDA受体亚单位NR1、NR2A和NR2B。结论由NSCs分化而来的神经元能表达离子型谷氨酸NMDA受体。     

大鼠听皮层GABAA受体亚单位mRNA年龄相关的表达变化

应用原位杂交技术,研究了大鼠出生后发育过程中,听皮层GABAA受体a2及β3亚单位mRNA年龄相关的表达变化。特异性DIG标记寡核苷酸探针检测显示,a2亚单位mRNA阳性神经元数量从出生后第1天开始逐渐增加,到第12d达到一个高峰,而后逐渐减少,出生后21d降至检测水平以下;β3亚单位mRNA阳性神经元数量从出生后第12d,一直保持较高表达水平,第12d后急剧降低,第21d后降至检测水平以下。研究结果为进一步在皮层水平上探讨出生后听觉功能发育可塑性的分子机制提供了重要资料。     

大鼠生后发育中听皮层NR1 mRNA的表达

目的：研究大鼠生后发育过程中，听皮层神经元NMDA受体NR1 mRNA的表达。方法：采用特异性DIG标记的寡核苷酸探针，分别在动物出生后第7，14，2l，28，35，42，49，56天和成年，检测听皮层NR1 mRNA阳性神经元的分布。结果：NR1亚单位mRNA阳性神经元从出生后第7天即可检测到，之后，随着天龄增加，阳性神经元分布密度呈明显递增趋势。期间，从生后第7天到第14天阳性神经元密度增加最快，增加了33．80％。到生后第35天NR1 mRNA表达达到高峰，一直保持到成年。对称的两侧听皮层阳性神经元表达模式完全一致。结论：听皮层NR1 mRNA表达与动物年龄相关。研究结果为进一步在皮层水平上探讨生后听觉功能发育可塑性的分子机制提供了重要资料。     

单耳气传导阻滞模型大鼠下丘脑N-甲基-D-门冬氨酸受体各亚基mRNA的表达

实验利用单耳外耳道皮下缝合的方法建立单侧气传导持续阻滞大鼠模型，观察环境变化对生后9，23，37 d的SD大鼠听觉中枢神经系统下丘脑NMDA受体NR1，NR2A，NR2B和NR2C mRNA基因表达的影响。PT-PCR结果显示，单耳缝合后缝耳对侧下丘脑NR1，NR2A，NR2B亚单位与缝耳同侧下丘脑NR1，NR2B依赖的听觉神经元发育临界期均在23 d附近，但同侧下丘脑NR2A亚单位依赖的听觉神经元发育的临界期的结束可能接近出生后37 d。结果证实了下丘脑NMDA受体亚基可受听觉环境调控的假设。     

大鼠生后发育中听皮层NR1 mRNA的表达

目的:研究大鼠生后发育过程中,听皮层神经元NMDA受体NR1 mRNA的表达.方法:采用特异性DIG标记的寡核苷酸探针,分别在动物出生后第7,14,21,28,35,42,49,56天和成年,检测听皮层NR1 mRNA阳性神经元的分布.结果:NR1亚单位mRNA阳性神经元从出生后第7天即可检测到,之后,随着天龄增加,阳性神经元分布密度呈明显递增趋势.期间,从生后第7天到第14天阳性神经元密度增加最快,增加了33.80%.到生后第35天NR1 mRNA表达达到高峰,一直保持到成年.对称的两侧听皮层阳性神经元表达模式完全一致.结论:听皮层NR1 mRNA表达与动物年龄相关.研究结果为进一步在皮层水平上探讨生后听觉功能发育可塑性的分子机制提供了重要资料.     

大鼠螺旋神经节神经元r-氨基丁酸A受体及N-甲基-D-天门冬氨酸受体亚单位的表达

目的：研究大鼠耳蜗螺旋神经节神经元A型γ-氨基丁酸受体（Gamma-aminobutyric acid receptor GABAAR）和N—甲基—D—天门冬氨酸受体(N-methyl D-aspartat receptor,NMDAR)亚单位的表达及意义。 方法：原代培养大鼠螺旋神经节神经元，采用RT-PCR检测大鼠螺旋神经节神经元GABAAR和NMDAR亚单位的mRNA表达。 结果：大鼠螺旋神经节神经元mRNA表达GABAAR亚单位有α1-6,β1-3,γ1-3，且在α亚单位族中, α1，α3表达较高，差别无统计学意义（P>0.05）, α1,α3的表达量与其余亚单位表达量以及其余GABAAR亚单位之间表达量的差异有统计学意义（P<0.05），各亚单位表达量大小排列顺序是:α1/α3＞α6＞α5＞α4＞α2。β亚单位族中,β亚单位族中各亚单位表达量两两比较差异有统计学意义，表达量排列顺序β1＞β3＞β2（P<0.05）；γ亚单位族中各亚单位表达量两两比较差别有统计学意义（P<0.05），表达量排列顺序是γ2＞γ1＞γ3；NMDAR表达的亚单位有NR1,NR2A,NR2B,NR2C,NR2D,NR3A,NR3B，其中NR1亚单位的表达最高(P<0.05)。 结论：大鼠螺旋节神经元mRNA上表达GABAAR的主要亚单位α1-6,β1-3,γ1-3和NMDAR NR1,NR2-D,NR3A-B亚单位.     

脑缺血再灌注大鼠皮质NMDA受体亚单位NR2A/B蛋白的表达变化

目的 采用免疫细胞化学技术，探讨急性脑缺血再灌注不同时间段大鼠脑顶皮质NMDA受体亚单位NR2A及NR2B蛋白的表达变化。方法 雄性Wistar大鼠70只,随机分成正常对照组、假手术对照组、脑缺血再灌注对照组；以颈动脉引流法行全脑缺血7min再灌注造模，术后分6h、24h、72h3个时间段取脑．脑组织恒冷箱连续冠状切片,免疫细胞化学ABC反应，图像分析系统行顶皮质Ⅰ区V层免疫阳性面积检测。结果 （1）麻醉及假手术可导致顶皮质NR2A、NR2B蛋白表达短暂增多，24h内恢复正常；（2）缺血再灌注后6h前后形成表达高峰,24h恢复正常，随后表达急剧减少，持续至72h以后。结论（1）脑缺血再灌注可导致顶皮质神经元NR2A、NR2B蛋白表达变化，且表达存在明显的时间依赖性；（2）缺血再灌注早期皮质NR2A、NR2B蛋白高度表达可能是导致迟发性神经元丢失的重要原因。     

缺氧所致海马神经元N-甲基-D-天冬氨酸2B受体和PTEN基因的表达

目的探讨OGD缺氧损伤后大鼠海马神经元NR2B受体和抑癌基因PTEN的表达量,以及NR2B与PTEN是否有生理性相互作用关系,为研究PTEN基因在脑缺血中的保护作用机制奠定基础。方法建立海马神经元体外OGD损伤模型,采用细胞比色分析(colorimetric assay)法和Western blotting检测神经元NR2B含量,RT-PCR和Western blotting测定PTEN基因的mRNA和蛋白表达水平,免疫沉淀和Western blotting研究NR2B与PTEN的相互作用。结果细胞比色分析和Western blotting结果显示神经元有大量NR2B表达,OGD损伤72h后NR2B含量表达量明显减少(P<0.05);Western blotting和RT-PCR结果显示OGD损伤后PTEN表达量略有下降但尚无统计学意义(P>0.05),免疫沉淀显示PTEN与NR2B在物理上连接形成复合物。结论海马神经元膜表面NR2B含量丰富,PTEN基因在海马神经元里有表达,OGD缺氧损伤再灌注引起NR2B受体和PTEN基因表达量下降,PTEN与NR2B有生理性相互作用。     

大鼠大脑皮层损伤后N-甲基D-天门冬氨酸受体亚单位NR1、NR2A和NR2B的表达研究

目的 分析研究急性损伤后大鼠大脑皮层N-甲基D-天门冬氨酸受体(NMDA)亚单位NR1，NR2A和NR2B的表达。方法 建立开放式挫伤型机械脑损伤大鼠模型，采用NMDA受体的NR1，NR2A和NR2B3种亚单位的特异性抗体，对不同时间点的皮层组织3种亚单位蛋白作定量免疫印迹分析。结果 以健侧大脑皮层作为对照组，NR1亚单位在各时间点的含量保持基本稳定。NR2A的含量在3h内升高明显，至3h达到高峰，随后降至正常；NR2B在1h时略有上升后随即下降，至3h时最低，尔后又明显升高，于6h时达高峰，随后又恢复正常。结论 大鼠脑皮层损伤NMDA受体NR2A和NR2B亚单位的表达发生了改变。     

局灶性皮质发育不良皮质中NMDA受体亚基表达情况

目的探讨N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体亚基NR1、NR2A、NR2B在难治性癫病人局灶性皮质发育不良(focal cortical dysplasia,FCD)皮质中的表达及意义。方法选取20例难治性颞叶癫(术后病理证实为FCD)为FCD组及10例颞叶血管畸形病人为对照组,收集两组病人术中切除的颞叶皮质,利用免疫组化和Syber Green荧光定量PCR技术检测标本中NMDA受体亚基NR1、NR2A、NR2B蛋白和mRNA的表达情况。结果对照组NR1、NR2A和NR2B蛋白表达分别为3.5、3、3,FCD组分别为5、5、5。对照组NR1、NR2A和NR2B mRNA表达分别为1.109、1.079、1.157,FCD组分别为2.176、2.324、2.348。与对照组比较,FCD组NR1、NR2A、NR2B蛋白和mRNA表达显著增加(均P<0.01)。结论 FCD皮质中NMDA受体亚基蛋白及mRNA表达升高,可能是FCD致机制之一。     

戊四氮点燃癫癎大鼠空间学习记忆改变及海马NR2B表达

目的观察戊四氮点燃癫癎大鼠空间学习记忆功能变化及海马NMDA2型受体(NR2)B亚单位(NR2B)表达,探讨二者的关系及PTZ致癎大鼠认知障碍发生的分子机制。方法采用戊四氮(PTZ)慢性癫癎(CE)模型,Y-迷宫对两组大鼠进行行为学检测,免疫组织化学方法观察两组大鼠海马CA3区NR2B表达的变化,反转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测大鼠海马NR2B mRNA的表达。结果癫癎组大鼠空间学习记忆能力受损;其海马CA3区NR2B阳性细胞较对照组明显减少(P<0.01),同时伴有海马NR2B mRNA表达下降(P<0.01)。结论戊四氮点燃癫癎大鼠空间学习记忆受损可能与海马神经元NR2B的表达减少有关。     

NMDA受体亚单元NR2A和NR2B mRNA在缺血大鼠海马的表达及其与细胞凋亡的关系

目的 探讨短暂性前脑缺血后大鼠海马NR2A和NR2B mRNA的表达变化及其与海马缺血性细胞凋亡的关系。方法 四动脉阻断法建立脑缺血再灌注动物模型、原位杂交、TUNEL染色和图像分析与统计处理。结果 ①缺血后，NR2A和NR2B mRNA在海马各区呈现出一种相对一致的表达规律。在CA1区，NR2A和NR2B mRNA的表达分别在缺血再灌6h和12h降至低谷，然后回升，在缺血再灌48h都升至高峰，之后表达再次下降，直至缺血后7d；在CA3区，该变化规律依然存在，不同的是表达变化的幅度明显减小；而在齿状回，缺血再灌0．5～72h，二者的表达未见显著性变化；72h后，表达下降，直至缺血后7d。②缺血后24h，凋亡细胞出现，主要位于海马CA1区，进行性增多，48h增加更为明显，缺血后72h达高峰；然后凋亡细胞有所减少，但至缺血后7d，依然存在。结论 短暂性前脑缺血后，大鼠海马各区NR2A和NR2B mRNA的表达变化及细胞凋亡均存在着显著性差异；这种差异提示，缺血后，NR2A和NR2B mRNA的表达变化与海马的选择性易损现象和缺血性细胞凋亡之间可能存在着某种密切的关系。     

精神发育迟滞相关基因CDKL3对神经元轴突形态发育的影响

目的：探讨精神发育迟滞相关基因CDKL3在神经元轴突生长发育中的作用,从而揭示CDKL3失活与精神发育迟滞间的内在联系。方法：采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和逆转录-实时定量聚合酶链反应（RT-realtimequantitivePCR）方法研究内源性CDKL3基因在小鼠中枢神经系统发育中mRNA水平的时空表达,采用RNA干扰技术和免疫荧光组化方法研究CDKL3在小鼠体外培养神经元轴突早期发育中的作用。结果：RT-PCR和RT-realtimequantitivePCR结果显示,CDKL3在小鼠胚胎14d开始表达,出生时达峰,随后下降,出生14d时降至较低水平并维持至成年后。免疫荧光组化结果显示,用RNA干扰技术敲减体外培养神经元中的CDKL3可引起神经元轴突分支数量和总长度的显著增加,而上调神经元中的CDKL3可引起相反的结果,并且敲减CDKL3对神经元的病理影响可被转染入神经元的RNA干扰质粒相对应的CDKL3-Res质粒所拯救。结论：CDLK3的表达和活动在神经元轴突的生长、分支形成中具有至关重要的作用,CDKL3失活引起神经元轴突形态发育异常可能与非综合征轻型精神发育迟滞的特征表现相关。     

GABA对体外培养大鼠神经元GABA_A受体亚单位mRNA表达的影响

目的观察γ-氨基丁酸(GABA)对体外大鼠培养神经元GABAA受体亚单位mRNA表达的影响,探讨肝性脑病(HE)发病机制。方法采用原位杂交技术,观察GABA对体外培养新生大鼠神经元GABAA受体亚单位α1β1γ2mRNA表达的改变。结果与对照组相比,GABA组神经元GABAA受体亚单位α1及γ2(增幅14%,P<0.01)的mRNA表达显著上升,亚单位β1的mRNA表达显著减少(降幅11%,P<0.05)。结论GABA可通过影响GABAA受体亚单位的表达发挥其对肝性脑病的致病作用。     

无镁诱导惊厥后发育中神经元NMDA受体基因表达

目的　观察短暂无镁处理诱导惊厥后发育不同阶段的神经元NMDA受体亚单位基因的表达 ,以期进一步阐明惊厥对发育不同阶段的神经元所造成的影响。 方法　 以培养的发育中皮层神经元为研究对象 ,经短暂无镁处理诱导惊厥样放电 ,用real time定量RT PCR方法检测惊厥后NMDAR1,NMDAR2A ,NMDAR2BmRNA的表达。 结果　 ①培养 6 ,17d的神经元无镁处理后 6hNR1表达均较对照组增高 (P <0 .0 1) ,前者增高更明显 (P<0 .0 1)。②培养 6 ,17d的神经元无镁处理后 6hNR2A表达均较对照组增高 (P <0 .0 5 )。此后其表达较对照组降低 (P <0 .0 1) ,增高及降低的程度在两者间无明显差异 (P >0 .0 5 )。③培养 6 ,17d的神经元无镁处理后 6hNR2B表达均较对照组增高 (P <0 .0 1) ,后者增高更明显 (P <0 .0 5 )。此后其表达逐渐降低 ,在 6及 17d的神经元其表达存在差异。 结论　 短暂无镁处理诱导惊厥后在发育不同阶段的神经元NMDA受体亚单位基因表达不同     

海人酸致痫大鼠海马结构GABAB受体亚单位表达的研究

目的：探讨海人酸诱导大鼠颞叶癫痫（EP）发作后2种γ-氨基丁酸（GABA）受体亚单位GABABR亚单位1a（GBR1a）和GABABR亚单位2（GBR2）在EP发生、发展中的作用。方法：运用原位杂交及免疫组化法，检测EP发作后GABABR亚单位mRNA及蛋白在海马的表达。结果：致痫早期CA1和CA3区2种亚单位mRNA表达持续低下后逐渐增加，DG区则暂时性下降后很快回升；而免疫反应早期却未见明显改变，随后CA1和CA3区表达处于低水平，DG区和颞叶皮质表达下降后很快恢复。结论：致痫后2种GABAB受体亚单位基因和蛋白表达上调为颞叶EP的内源性自我保护机制。     

实验性癫癎大鼠发作后海马γ-氨基丁酸B受体亚单位的表达及其激动剂的影响

目的观察海人酸(KA)诱导的实验性癫癎(EP)大鼠发作后海马γ-氨基丁酸B受体(GABABR)亚单位mRNA表达及其激动剂巴氯芬的影响。方法运用原位杂交法检测各实验组大鼠EP发作后及巴氯芬干预后海马区GABABR亚单位GAR1a及GAR2 mRNA表达。结果KA致癎早期(6~12h)2种亚单位mRNA表达水平广泛下降,至1d仍明显低于对照组(均P<0.05),但齿状回(DG)区mRNA表达开始回升,3d后表达水平已明显高于对照组(P<0.05),而CA1与CA3区表达仍维持低水平(均P<0.05),但其表达水平渐向对照组水平恢复。巴氯芬干预后亚单位表达明显下降的时间点延迟,且表达水平明显高于非干预的致癎组(P<0.05~0.01)。结论致癎鼠2种亚单位表达下降后又上调为颞叶EP的内源性自我保护机制;巴氯芬促进2种亚单位表达,增强GABA抑制作用,有利于控制EP,为筛选针对GABABR亚单位的抗癎药提供新途径。     

实验性癫痫大鼠发作后海马γ-氨基丁酸B受体亚单位的表达及其激动剂的影响

目的 观察海人酸(KA)诱导的实验性癫疒间(EP)大鼠发作后海马γ-氨基丁酸B受体(GABABR)亚单位mRNA表达及其激动剂巴氯芬的影响.方法 运用原位杂交法检测各实验组大鼠EP发作后及巴氯芬干预后海马区GABABR亚单位GAR1a及GAR2 mRNA表达.结果 KA致疒间早期(6～12 h)2种亚单位mRNA表达水平广泛下降,至1 d仍明显低于对照组(均P<0.05),但齿状回(DG)区mRNA表达开始回升,3 d后表达水平已明显高于对照组(P<0.05),而CA1与CA3区表达仍维持低水平(均P<0.05),但其表达水平渐向对照组水平恢复.巴氯芬干预后亚单位表达明显下降的时间点延迟,且表达水平明显高于非干预的致疒间组(P<0.05～0.01).结论 致疒间鼠2种亚单位表达下降后又上调为颞叶EP的内源性自我保护机制;巴氯芬促进2种亚单位表达,增强GABA抑制作用,有利于控制EP,为筛选针对GABABR亚单位的抗疒间药提供新途径.