微流芯片在出入境人群中对HBV HCV HIV联合检测的研究

目的 探讨在出入境人群中应用微流芯片技术联合检测HBV、HCV、HIV的模式及可行性.方法 收集经两种ELISA试验验证的江西口岸出入境体检人员HBV、HCV、HIV230份血液标本,提取核酸后进行扩增,采用微流芯片进行HBV DNA、HCV RNA和HIV RNA检测,用芯片所带的内对照体系监控试验的有效性.结果 206份HBV、226份HCV抗体和228份HIV抗体阴性标本经微流芯片检测DNA/RNA,阴性符合率分别为99％、100％、100％;24份HBV、4份HCV抗体、2份HIV抗体阳性标本经微流芯片检测DNA/RNA,阳性符合率均为100％;206份江西口岸出入境体检人员HBV阴性标本中检出2份HBV DNA(+),2份标本两对半结果为抗- HBe(+)、抗- HBc(+),HBV DNA检出率为0.97％.结论 本次建立的微流芯片法检测结果准确可靠,可用于出入境人员乙肝、丙肝、艾滋病三种传染病的联合检测.     

抗-HCV EIA试剂与HCV分片段EIA试剂比较分析

[目的]探讨抗-HCV分片段试剂对抗-HCV阳性标本判断价值的可靠性。[方法]用抗-HCVEIA、MEIA及HCV分片段EIA法对23例初筛阳性标本进行检测。[结果]23例中,丙肝分片段不同基因区C区、NS3、NS4和NS5结果阳性分别为18（78．3％）、20（87．0％）、13（56．5％）和12（52．2％）,判断阳性18例,可疑3例,阴性2例。23例中,16例各厂家试剂均阳性,不符7例。HCV分片段与进口雅培试剂阳性结果完全相同18例。[结论]用HCV分片段试剂对抗-HCV EIA弱阳性标本的结果判断有一定的临床使用价值。     

HCV重组基因在大肠杆菌中表达及应用

目的；探讨HCV重组基因在大肠肝菌中的表达条件及其表达蛋白抗原在HCV抗体检测中的应用。方法：将含有丙型肝炎病毒E基因、C基因和部分NS基因重组质粒的大肠杆菌以不同方式培养表达，对表达的蛋白抗原进行提取和纯化，并用间接ELISA和十二烷基磺酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS－PAGE）对表达产物进行了初步检定。结果：表达产物中含有特异性的HCV抗原。对40份国家参比阴性血清检测符合率为97．5％，40份阳性参比血清中检出率为92．5％。     

丙型肝炎病毒窗口期感染核酸阳性血清检测和基因型别分析

目的分析丙型肝炎病毒（HCV）早期感染血液样品核酸（RNA）检测的意义，并对检出的核酸阳性血清进行基因分型。方法对8649份自然供血员及566份HCV可疑感染者血清进行核酸（TMA RNA试剂）检测，检测出的HCV RNA阳性样品利用基因分型芯片进行分型。同时利用HCV核心总抗原（HCVc Ag）和游离抗原（HCV free Ag）试剂以及抗体（Anti—HCV）试剂进行检测。并对检测数据进行比较分析。结果在所有血液样品中发现1份HCV抗体、HCVc Ag、HCV free Ag全部阴性但RNA阳性的样品，基因型别为1b型。在8649份自然供血员血清中筛出1份HCVc Ag、HCV free Ag以及HCVRNA阳性但抗体阴性血清，基因型别为1b型。在566份HCV可疑感染者血清中，筛出1份HCV free Ag和核心抗体同时阳性血清，基因型别为1b型。TMA试剂筛出5份RNA阳性血清但微粒子抗体试剂检测阴性，TMA试剂筛出6份RNA阳性的血清而酶标抗体试剂检测阴性。这6份血清，利用傲拓HCV总抗原试剂检测，其中5份HCV总抗原阳性。在澳大利亚国家血液中心进行复核，其中5份RNA阳性。在566份血清中，TMA试剂检出RNA阳性495份，阳性率87．4％。对RNA阳性血清进行型别分析，以1b、2a型为主，分别为46．5％和27％。结论由于检出了HCV RNA单独阳性的窗口期样品，认为利用HCV抗体试剂对血液进行筛查的同时，使用HCV RNA试剂做必要的补充实验，可以减少因窗口期造成的漏检。型别分析认为，窗口期感染样品基因型别也以1b，2a型为主。     

两种不同基因型NS3抗原在HCV感染者血清学诊断中的应用

目的 研究两种不同基因型NS3抗原在HCV感染者血清学诊断中的应用价值. 方法 分别用两种不同基因型NS3单片段抗原、两种单片段抗原的混合物(MIX)作为包被抗原,对血清标本进行ELISA测定;应用反转录套式聚合酶链反应(RT-nPCR)检测血清中HCV RNA,数据以X2检验. 结果 85份抗-HCV阳性血清以不同基因型HCV NS3单片段抗原检测,阳性检出分别为52份(Ⅰ型)和50份(Ⅵ型),X2=0.06,P>0.05;100份健康成人体检血清以此两种抗原检测均为阴性;90份抗-HCV阳性血清经MIX抗原检测,阳性检出为65份;51份抗-HCV阳性血清经RT-nPCR检测,29份阳性. 结论 HCV不同基因型NS3编码区抗原片段有不同的抗原反应性,在HCV感染者的血清学诊断中将不同基因型NS3抗原混合使用可能是更好的选择.     

丙型肝炎病毒抗体酶联免疫吸附试剂检测结果可信度的分析

[目的]分析丙型肝炎病毒（HCV）抗体酶联免疫吸附试验（ELISA）诊断试剂的可信度。（方法）本研究对应用2种国产ELISA试剂从大连口岸出入境人员中检出的HCV阳性标本采用免疫印迹试验（RIBA）进行确证,并对检测结果进行综合分析。[结果]138份标本中万泰（WT）、丽珠（LZ）2种ELISA试剂检测均为阳性的120份,进行RIBA确证阳性115份,阳性率95．8％;仅WT阳性的10份标本,RIBA确证阳性4份,阳性率40．0％;仅LZ阳性的8份标本,RIBA确证阳性3份,阳性率37．5％。对ELISA检测真阳性和假阳性标本的S／CO值进行统计学处理,发现差异有显著性（P〈0．05）。对16份假阳性标本进行RIBA条带分析,其中Core条带有10条,占62．5％;NS3-1条带有3条,占18.8％;NS3—2条带有2条,占12．5％;NS4条带有1条,占6.3％;没有出现NS5条带。[结论]本研究的结果与美国疾病预防与控制中心（CDC）在对美国公司所生产的抗HCV试剂可信度评价的基础上规定：当S／CO值在3．8以下时,样品需进行确证方可确定其阴、阳性的要求相一致。当HCV的ELISA检测结果S／CO值较低或1种ELISA试剂检测结果为阴性时应进行RIBA确证试验。     

HCV单克隆抗体的制备及其应用的初步研究

目的:丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus,HCV)感染已成为全球公认的健康难题,目前并没有很好的疫苗和特效药,尽早检出HCV感染者是实现丙型肝炎早期诊断、阻断传播的重要途径。方法:研究通过免疫Core-NS4B融合重组蛋白,制备抗HCV单克隆抗体,并获得5H5和4E7-HRP最优的抗体配对组合,检测120例血清,同时与HCV-RNA检测做比较。结果:阴性血清均未测出阳性,HCV阳性标测出23例阳性,检出率77%,HCV-RNA测出26例,检出率87%;HCV可疑标本测出15例阳性,HCV-RNA测出17例;单项ALT增高的标本测出2例阳性,HCV-RNA测出1例。结论:研究所获得的抗体能够用于HCV抗原检测,具有巨大的潜力,为建立HCV抗原检测试剂盒奠定了基础,为临床检测提供了实验依据。     

HIV感染者中ELISA法与RT-nPCR法检测HCV的比较

目的 比较酶联免疫吸附试验(ELISA)和逆转录巢式聚合酶链反应(RT-nPCR)检测HIV感染者血清中抗-HCV与HCV RNA的结果是否有差异.方法 采用ELISA法和RTn-PCR法对300例HIV感染者的血清进行抗-HCV与HCV RNA检测.结果 在300份血清标本中,抗-HCV与HCV RNA均为阳性者114份,占38％ (114/300);抗-HCV阴性、HCV RNA阳性者41份,占13.67％ (41/300);抗-HCV阳性、HCV RNA阴性者32份,占10.67％ (32/300);两者均阴性113份,占37.67％ (113/300);两种方法检测结果的一致率为75.67％,两种方法结果的差异无统计学意义(x2=1.11,P＞0.05).结论 ELISA法与RTn-PCR法在HIV感染者中诊断丙型肝炎其结果差异无统计学意义,但二者联合检测可提高检出率,在HIV感染者中存在免疫抑制造成血清学结果假阴性率较高,因此,对HIV感染者中抗-HCV阴性者应进行HCV RNA检测,降低漏诊率.     

静脉吸毒人群HIV/HBV/HCV混合感染分析

目的 了解静脉吸毒人群人类免疫缺陷病毒(HIV)、乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)感染情况。方法 采用血清流行病学方法对412例静脉吸毒者进行抗HIV、抗HBV和抗HCV抗体检测。结果 在412例静脉吸毒人群中，HIV阳性检出率为41．75％；在HIV阴性的静脉吸毒人群中，单纯HCV感染比例最高(45．1％)，其次为抗HCV阳性伴抗HBs阳性(35．83％)；在，HIV阳性的静脉吸毒人群中，单纯HCV感染比例最高(55．81％)，其次为抗HCV阳性伴抗HBs阳性(36．05％)。结论 静脉吸毒是HIV、HBV和HCV多重感染的主要原因之一，且HIV合并HCV感染最为常见。     

盐都区226例美沙酮维持治疗门诊戒毒人员病毒性肝炎／梅毒／HIV感染检测

[目的]了解戒毒人员HIV、HCV、梅毒、HBV感染状况,为更有针对性地开展干预工作提供科学依据。[方法]对2008年10月至2009年10月到盐都区疾病预防控制中心美沙酮维持治疗门诊接受美沙酮维持治疗的戒毒人员HIV抗体、抗-HCV、梅毒抗体、HBsAg检测资料进行分析。[结果]检测226人,HBsAg阳性率为10．18％;抗一HCV阳性率为56．64％;梅毒抗体阳性率为19．47％,HIV抗体均为阴性。226人中,HBsAg和抗-HCV均阳性的占6．19％,抗-HCV和梅毒抗体均阳性的占14．60％,HBsAg和梅毒抗体均阳性的占0．44％,单纯HBsAg阳性的占3．54％。单纯抗-HCV阳性的占37．17％,单纯梅毒抗体阳性的占4．42％,4项指标均阴性的占33．63％。[结论]接受美沙酮维持治疗的戒毒人群HBV、HCV、梅毒感染率和重叠感染率均较高。     

原位PCR检测肝组织中HCV基因状况分析

为了探讨肝组织中ＨＣＶＲＮＡ的意义，使用原位ＰＣＲ检测技术，对２６例血清ＨＣＶ标志物阳性肝病者进行检测。结果显示该方法特异性强，肝组织ＨＣＶＲＮＡ阳性率为６９２％，阳性信号主要定位在细胞浆，个别呈浆核型，但仍以浆型为主。肝功损害与肝细胞中ＨＣＶＲＮＡ有一定相关性。     

抗HCV国家参考品的研制

目的 建立新的抗HCV国家参考品，促进国产抗HCV试剂的发展。方法 从全国各地收集供血员及丙型肝炎病人血样4000多份，应用10多种抗HCV EIA试剂筛选，应用免疫印迹及HCVPCR方法进行确证，并会同26家单位进行会同标定。结果 新参考品由40份抗HCV阴性样品及40份抗HCV阳性样品组成，阳性样品中有单独某一种抗体阳性的样品，有同时含有某两种抗体的样品。也有同时含有4种抗体的样品。结论 新参考品针对试剂存在的问题及发展方向，对研究开发和筛选高质量的丙肝抗原提供了参考数据。并为国产试剂的质量控制提供了标准。     

乙型、丙型、庚型肝炎病毒多重感染研究

目的探讨庚型肝炎感染患者是否存在双重感染和多重感染。方法应用庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）ＮＳ３区逆转录聚合酶链反应技术检测了ＨＧＶ系列稀释的质控血清及ＡｂｂｏｔＧＢＶ－Ｃ参比样品中ＨＧＶＲＮＡ，并对９０例丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ阳性和１２例乙型肝炎、丙型肝炎双重感染献血员进行了ＨＧＶＲＮＡ的检测。结果ＨＧＶ系列稀释质控血清１０－１～１０－５均为阳性；１０－６为阴性。２份ＡｂｂｏｔＧＢＶ－Ｃ样品均为ＨＧＶＲＮＡ阳性。９０例ＨＣＶＲＮＡ阳性样品中，８例ＨＧＶＲＮＡ阳性（１７．８％）；１２例乙、丙双重感染者中４例（４／１２）ＨＧＶＲＮＡ阳性。结论不仅存在ＨＣＶ及ＨＧＶ双重感染，也存在多重感染。     

HCV基因型和HCVRNA检测在丙型肝炎病毒母婴传播中的意义

从流行病学角度来探讨丙肝病毒母婴垂直传播的可能性 ,并探讨此传播途径在丙肝流行中的作用。利用 RT- nested PCR方法检测感染率和基因分型 ,采用双脱氧链终止法测定 HCV- PCR产物序列。抗 - HCV阳性 45例母血中 HCV- RNA阳性 38例 (84.44% )。抗 - HCV阳性 30例脐血中 HCV- RNA阳性 1 4例 (46.67% ) ,这 1 4例抗 - HCV阳性的母婴 HCV- RNA均阳性 ,1 4对母婴的基因分型完全一致。以上结果可以表明母婴垂直传播是 HCV感染的一个途径     

抗—HCV阳性血引发感染的核酸证据

血液和血液制品是丙型肝炎的主要传播方式之一,供血者健康检查标准规定凡ＥＬＩＳＡ检测抗ＨＣＶ抗体阳性者均不得献血。但ＥＬＩＳＡ检测存在着漏检及假阳性问题,并且只有ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性血清才具有感染性。因此,我们对某血站送检的１００例抗ＨＣＶ阳性献血员的血样进行了ＨＣＶ－ＲＮＡ检测,结果表明,在ＨＣＶ－ＲＮＡ半套式ＲＴ－ＰＣＲ中,传统的异硫氰酸胍／氯仿／异戌醇方法同磁珠法抽提病毒ＲＮＡ,结果两种方法同样可以得到理想的２４０ｂｐ扩增带。用传统方法进行实验,１００例血标本中３例ＨＣＶ－ＲＮＡ阴性,其它均阳性,说明我国制定的献血员标准规定绝大多数情况下是适宜的,如果结合ＲＴ－ＰＣＲ检测ＨＣＶ－ＲＮＡ,结果会更加理想。这为库血ＨＣＶ检测与献血员ＨＣＶ感染检测提供了一种可靠的检测方法,对防止输血后肝炎的发生、净化献血员有一定的指导意义     

国产抗HCV酶联免疫诊断试剂质量分析

目的 了解国产抗HCV EIA试剂的质量情况。方法 用16例国产抗HCV EIA试剂盒对2种进口试剂对1426份来源于血站及医院的血清进行了检测,并对疑难样品用RIBA及PCR试剂进行了确证。对各种试剂的灵敏度,特异度及检测的抗体谱进行了分析。结果 目前国产试剂灵敏度不低于国外试剂,特异度尚有待于改进。国产试剂漏检及假阳性的主要原因为HCV NS3区抗原相对较弱,抗原纯度较低,用量不足,有待于改进。结论 国产抗HCV试剂灵敏度不低于国外试剂,特异度有待提高。     

抗-HCV阳性血清HCV RNA检测与基因分型的研究

目的 检测抗-HCV阳件血清巾的HCV RNA并进行HCV基因分型.方法 采用荧光定量PCR法检测85例大连地区抗-HCV阳性患者血清中HCV RNA,应用型特异性引物逆转录套式PCR法对HCV RNA阳性样本进行基因分型.结果 85例的抗-HCV阳性患者中,HCV RNA阳性65例(76.5%),其中基因分型1b型32例(49.2%),2a型29例(44.6%),未分型4例(6.2%).结论 抗-HCV阳性并非HCV直接标志,大连地区HCV基冈1b型和2a型基本相等.     

丙型肝炎病毒体外感染人外周血单个核细胞的初步研究

目的 探讨丙型肝炎病毒(HCV)在体外能否感染人外周血单个核细胞，并观察其复制情况。方法 HCVRNA阳性血清与原代培养的外周血单个核细胞共同孵育6～8h，收集不同时相点标本，以逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)、免疫组化、原位杂交分别检测细胞内或上清中正负链RNA，细胞内HCV NS3、NS5、CP10 3种抗原的表达情况，以及原位检测HCV负链RNA。结果 接种感染血清后5d，可在细胞内或培养上清中间断检出HCV正负链RNA；HCV NS3、NS5、CP10可在感染细胞内表达，阳性物质位于胞浆中；原位杂交法证实细胞胞浆内存在负链RNA。结论 HCV在体外能感染原代培养的人外周血单核细胞，并在其中复制。