上调miR-320a对注射用核糖核酸Ⅱ诱导的肝癌Bel-7402细胞凋亡和迁移的影响

目的研究上调miR-320a对注射用核糖核酸Ⅱ(BP素)诱导的肝癌Bel-7402细胞凋亡和迁移的影响。方法用定量逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-320a在正常肝细胞与肝癌细胞中的表达差异;将miR-320a mimic转染到Bel-7402细胞中,qRT-PCR法检测miR-320a的表达水平;CCK-8法检测注射用核糖核酸Ⅱ对肝癌细胞增殖的影响;FCM检测细胞周期分布及凋亡变化;Transwell法检测注射用核糖核酸Ⅱ对肝癌细胞迁移和侵袭的影响;Western blot检测细胞周期蛋白D1的表达及凋亡相关蛋白p53、Bax、Bcl-2,迁移相关蛋白MMP-3的表达。结果与正常肝细胞相比,miR-320a的表达水平在肝癌细胞中明显下调。转染miR-320a mimic的Bel-7402细胞命名为Bel-7402-miR-320a,CCK-8结果显示,给予注射用核糖核酸Ⅱ(100、200、300、400、500 mg·L~(-1))后,Bel-7402及Bel-7402-miR-320a细胞的增殖均受到了抑制。在Bel-7402和Bel-7402-miR-320a中,12h半数抑制浓度为250、200 mg·L~(-1),24 h半数抑制浓度为150、120 mg·L~(-1)。FCM检测结果显示,注射用核糖核酸Ⅱ可诱导Bel-7402、Bel-7402-miR-320a细胞周期阻滞在G0/G1期,上调miR-320a后细胞凋亡率明显增加。Transwell结果显示,与Control组和加药组相比,Bel-7402-miR-320a+Ribonucleic acidⅡ组细胞迁移和侵袭明显受到抑制。Western blot结果显示,注射用核糖核酸Ⅱ作用Bel-7402和Bel-7402-miR-320a细胞后,凋亡相关蛋白p53、Bax的表达增加,而Cyclin D1、Bcl-2、MMP-3蛋白的表达下调。结论 miR-320a在肝癌Bel-7402细胞中的表达水平明显低于正常肝细胞。注射用核糖核酸Ⅱ可以通过下调细胞周期蛋白Cyclin D1的表达,将细胞周期阻滞在G0/G1期,激活p53信号通路,下调Bcl-2、上调Bax,破坏Bcl-2/Bax的比例,促进人肝癌Bel-7402细胞的凋亡,并通过抑制MMP-3的表达抑制人肝癌细胞的迁移和侵袭。而过表达miR-320a后,可提高肝癌细胞对注射用核糖核酸Ⅱ的敏感性,增强注射用核糖核酸Ⅱ对肝癌细胞Bel-7402的作用。     

蛋白酶体抑制剂MG132对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨蛋白酶体抑制剂MG-132对人肝癌BEL-7402细胞增殖、凋亡的作用。方法体外培养人肝癌细胞系BEL-7402细胞,MTT法测定细胞的生长抑制率。以终浓度为5.0μmol·L^-1的MG132作用BEL-7402细胞不同时间后用流式细胞仪检测其细胞凋亡率和细胞周期。结果流式细胞仪检测细胞周期随MG-132作用时间延长,G2/M期阻滞明显,并引起细胞凋亡。结论蛋白酶体抑制剂MG132能有效抑制人肝癌BEL-7402细胞增殖并将细胞阻滞在G2/M期,促进细胞发生凋亡。     

BMH-21诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡的研究

目的探讨核仁应激对人肝癌BEL-7402细胞的凋亡诱导作用。方法以人肝癌BEL-7402细胞为研究对象,依据给药剂量实验分为4组:对照组(0μmol/L),1、2和4μmol/L组。MTT检测BEL-7402细胞生存率,共聚焦显微镜观察核仁应激标志蛋白变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率,蛋白印迹检测凋亡相关蛋白表达。结果 MTT结果表明BMH-21对BEL-7402细胞生长抑制作用呈剂量依赖性,共聚焦显微镜观察发现BMH-21诱导BEL-7402细胞核仁应激标志蛋白发生变化,流式细胞仪检测结果表明BMH-21以剂量依赖性的方式诱导细胞凋亡,蛋白印迹结果显示凋亡相关蛋白表达明显增加(P0.05)。结论 BMH-21诱导人肝癌BEL-7402细胞核仁应激,导致细胞凋亡的发生。     

姜黄素诱导人肝癌细胞株Bel-7402凋亡

目的 探讨姜黄素对人肝癌Bel-7402细胞的增殖抑制、诱导凋亡及其分子作用机制.方法 用姜黄素10 μmol/L体外处理Bel-7402细胞48 h.采用MTT比色法检测细胞生长的抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR检测Bcl-2和Bax mRNA表达.结果 10 μmol/L姜黄素处理细胞48 h后呈现时间和剂量依赖性细胞增殖抑制作用;细胞凋亡率随着姜黄素浓度的增加而逐步增高,Bax mRNA表达上调,而Bcl-2 mRNA表达降低.结论 姜黄素对Bel-7402细胞有显著的增殖抑制及诱导凋亡作用,其作用机制可能与上调Bax基因的表达及下调Bcl-2基因的表达有关.     

美洲大蠊提取物对人肝癌细胞Bel-7402作用机制的研究

目的探讨美洲大蠊提取物对人肝癌细胞Bel-7402的作用机制。方法 MTT比色法观察美洲大蠊提取物对人肝癌细胞Bel-7402增殖的影响,AnnexinV-FITC/PI双染色法研究美洲大蠊提取物对人肝癌细胞Bel-7402凋亡的影响,流式细胞术检测线粒体膜电位,DNA Ladder实验检测细胞凋亡,蛋白印迹法检测Bax、Bcl-2、Caspase-9、Caspase-3、Caspase-8蛋白的表达。结果美洲大蠊提取物可抑制人肝癌细胞Bel-7402增殖,IC50为28.2μg.mL 1,并可诱导人肝癌细胞Bel-7402凋亡,降低线粒体膜电位。DNA Ladder实验可见明显的梯形电泳图谱,蛋白印迹法显示Bax、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达减弱,Caspase-8蛋白表达无明显变化。结论美洲大蠊提取物可通过线粒体途径诱导人肝癌细胞Bel-7402凋亡。     

苦参碱抗肝癌药理作用及临床应用的研究进展

苦参碱能防治二乙基亚硝胺诱发大鼠原发性肝癌和小鼠肝癌H22细胞移植瘤在小鼠体内的生长。体外实验发现苦参碱能浓度相关地抑制肝癌H22细胞、SMMC-7721细胞、BEL-7402细胞、BEL-7404细胞、Hep3B细胞、QGY细胞、QGY/CDDP细胞、97H细胞、CRBH-7919细胞、CRBH-7919/mdr1细胞增殖、黏附、迁移、侵袭并诱导凋亡,也能诱导人肝癌SMMC-7721细胞、BEL-7402细胞、BEL-7404细胞、化学品诱发肝癌大鼠体内的低分化肝卵圆细胞分化,也能提高荷瘤机体的免疫调节功能。临床上苦参碱注射液正在试用于肝癌的治疗和复发的预防。     

姜黄素Ⅲ与丝裂霉素联用抑制肝癌细胞BEL-7402的实验研究

目的研究姜黄素Ⅲ联合丝裂霉素抑制体外人肝癌细胞BEL-7402生长增殖的效果。方法体外培养人肝癌细胞BEL-7402,以四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测2种药物对癌细胞的抑制率及联合用药时的抑制率。结果姜黄素Ⅲ、丝裂霉素均能抑制体外肝癌细胞增殖并呈时间与剂量依赖性。姜黄素10、20、40、80μmol／L与丝裂霉素1、2μmol／L联合用药24、48、72h的抑制率显著高于单独用丝裂霉素、姜黄素Ⅲ（P〈0．05）,两者呈现出相加的抗癌效果。结论姜黄素Ⅲ能有效抑制体外人肝癌BEL-7402细胞增殖．联合丝裂垂素用药时能提高丝裂霉素对人肝癌BEL-7402细胞的敏感性。     

美洲大蠊提取物逆转BEL-7402/5-Fu多药耐药性的作用及机制研究

目的 探讨美洲大蠊提取物 CⅡ-3和脱脂膏逆转耐5-氟尿嘧啶人肝癌细胞BEL-7402(BEL-7402/5-Fu)细胞多药耐药性的作用及可能的作用机制.方法 通过测定耐5-氟尿嘧啶人肝癌细胞BEL-7402细胞生长曲线和细胞凋亡率,以及P-糖蛋白(P-gp)的摄取情况,探索美洲大蠊提取物体外逆转耐5-氟尿嘧啶人肝癌细胞BEL-7402的作用.结果 CⅡ-3和脱脂膏对耐5-氟尿嘧啶人肝癌细胞BEL-7402的抑制率、逆转倍数及细胞凋亡率随浓度增加逐渐增大,且差异无统计学意义,说明CⅡ-3与脱脂膏对耐药细胞的逆转效果及诱导凋亡作用相当.CⅡ-3和脱脂膏能减弱P-糖蛋白的外排功能,且脱脂膏较CⅡ-3作用强,细胞内药物蓄积量较多.结论 美洲大蠊提取物CⅡ-3和脱脂膏能够有效逆转人肝癌耐5-氟尿嘧啶人肝癌细胞BEL-7402细胞的多药耐药性,其逆转作用机制主要通过诱导耐药细胞凋亡和抑制P-糖蛋白蛋白的表达.     

人参皂甙Rg3在体外对肝癌细胞生长和凋亡的影响

目的观察人参皂甙Rg3对肝癌Bel-7402细胞凋亡的影响及其可能机制。方法用不同浓度人参皂甙Rg3作用于肝癌Bel-7402细胞24～72 h后,MTT法检测细胞活力;荧光染色观察细胞核的形态学改变;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测细胞caspase-3、Bcl-2和Bax的表达情况。结果人参皂甙Rg3对Bel-7402细胞的生长有明显的增殖抑制作用,呈浓度和时间依赖性。经荧光染色后可观察到典型的凋亡小体。细胞凋亡率明显增高,Bcl-2蛋白表达量逐渐降低,Caspase-3和Bax蛋白表达量逐渐增加,呈明显的浓度依赖性。结论人参皂甙Rg3能诱导体外培养的人肝癌Bel-7402细胞凋亡;下调Bc1-2和上调Bax表达,活化caspase-3是人参皂甙Rg3诱导Bel-7402细胞凋亡的可能机制之一。     

三氮唑席夫碱衍生物对人肝癌细胞分化和凋亡的影响

目的探讨三氮唑席夫碱衍生物对人肝癌细胞BEL-7402的诱导分化和凋亡作用。方法用不同剂量的3-吡啶-3-基-4-[(4-羟基-3-甲氧基-苯亚甲基)氨基]-5-甲硫基-1,2,4-三唑(LH-37)与BEL-7402细胞共同培养,以MTT法检测细胞增殖和LH-37对细胞增殖的抑制作用;RT-PCR方法检测细胞甲胎蛋白(α-FP)和白蛋白(Alb)mRNA表达;ELISA法测定细胞α-FP含量;免疫组织化学检测细胞内激活型Caspase-3表达;Western blot检测Caspase-3和Caspase-9蛋白表达;可见光法测定超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活力;荧光显微镜观察凋亡细胞形态;Annexin-Ⅴ和PI双染流式细胞术测定凋亡细胞数。结果LH-37在10μmol·L-1~1mmol·L-1的浓度范围能抑制细胞增殖,且抑制率随浓度的增加而增高(P<0·05或P<0·01),10μmol·L-1和1·0μmol·L-1的LH-37使细胞Alb mRNA表达量增高,α-FP mRNA和蛋白质表达量明显下降,Caspase-3和Caspase-9表达量明显增加,Caspase-3阳性细胞明显增加;药物浓度达100μmol·L-1作用48h后,BEL-7402细胞皱缩,呈现凋亡各期改变,细胞凋亡率高于对照组(P<0·05)。结论三氮唑席夫碱衍生物对人肝癌BEL-7402细胞具有抗增殖、促分化和凋亡作用,作用可能与过氧化氢的氧化损伤作用有关。     

儿茶素对人肝癌细胞HepG2的影响

目的研究儿茶素[(+)-catechin,Cat]不同时间、不同浓度对人肝癌细胞(HepG2)的增殖、迁移能力的抑制及诱导凋亡作用。方法 HepG2细胞分别与不同浓度Cat作用,MTT法检测细胞增殖率的变化,显微镜观察细胞形态学变化,划痕法检测细胞的迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫组织化学染色法检测HepG2的Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达。结果 Cat(4~100mg·mL-1)能明显抑制人肝癌细胞HepG2的增殖和迁移能力,并呈浓度依赖性。流式细胞术检测结果显示Cat(4mg.L-1)作用于HepG2细胞24h即可诱导细胞凋亡。免疫组织化学结果显示Cat(4~20mg·mL-1)的Bax和Caspase-3的表达呈浓度依赖性升高,而Bcl-2的表达呈浓度依赖性降低。结论 Cat可以一定程度的抑制HepG2细胞的增殖和迁移能力并诱导其凋亡,其诱导凋亡机制可能与其下调HepG2细胞内Bcl-2蛋白的表达,上调Bax蛋白的表达,从而促进Caspase-3活化有关。     

牡荆素对人肝细胞癌SMMC-7721细胞的增殖抑制作用及其机制的影响

目的: 研究牡荆素(vitexin)对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖抑制作用, 并初步探讨其作用机制。方法: 体外培养人肝癌细胞SMMC-7721, 分别采用MTT法和Hoechst33258核染色法检测牡荆素对人肝癌细胞SMMC-7721活力的影响以及观察细胞形态学变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率和线粒体膜电位(ΔΨm) 变化;蛋白免疫印迹法检测p53、Bcl-2、Bax等相关凋亡蛋白水平的表达情况。结果: 牡荆素培养人肝癌细胞SMMC-7721 48, 72, 96 h后能明显抑制细胞增殖, 呈时间-剂量依赖性(P<0.05), 其IC₅₀分别是150.37, 116.24, 90.19 μmol·L^-1。牡荆素作用于人肝癌细胞SMMC-7721 72 h后, 以浓度依赖性方式增加细胞凋亡率、降低线粒体膜电位(ΔΨm) 以及上调p53、Bax、Caspase-3等相关促凋亡蛋白的表达, 下调Bcl-2抗凋亡蛋白的表达。结论: 牡荆素能抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖诱导凋亡, 呈时间-剂量依赖性, 其作用机制可能通过依赖P53途径下调Bcl-2, 上调Casepase-3、Bax、P53、PARP等基因表达, 进而诱导凋亡有关。     

红霉素逆转人肝癌细胞BEL-7402多药耐药性的研究

目的研究红霉素(ERY)对BEL-7402细胞(人肝癌细胞)多药耐药性的逆转作用.方法将BEL-7402细胞连续培养在含阿霉素(ADM)的培养液中诱导耐药细胞株BEL-7402/ADM,用cell-ELASA法检测细胞膜表面P-gp的表达,细胞毒试验采用MTT法,用荧光分光光度法测定细胞内ADM浓度.结果 BEL- 7402/ADM细胞表面P-gp高度表达,除对ADM耐药外,对长春新碱(VCR)和丝裂霉素(MMC)也有不同程度的交叉耐药;ERY可增强ADM、VCR、MMC对BEL-7402/ADM细胞的增殖抑制作用, 可增加BEL-7402/ADM细胞内ADM的浓度而对细胞膜表面P-gp的表达没有影响.结论 ERY通过竞争性地饱和BEL-7402/ADM细胞表面P-gp通道,使细胞内药物外排减少、浓度增加,从而发挥对BEL-7402/ADM细胞多药耐药性的逆转作用.     

氧化苦参碱抗肝癌作用及机制的药理作用研究进展

氧化苦参碱能防治二乙基亚硝胺或2-乙酰氨基芴诱发大鼠原发性肝癌和小鼠肝癌H22细胞移植瘤在小鼠体内的生长。体外研究发现氧化苦参碱能浓度相关地抑制肝癌HepG2细胞、SMMC-7721细胞、BEL-7402细胞、BEL-7404细胞、QGY细胞、QGY-7703细胞、97H细胞的增殖并诱导其凋亡,还可能诱导HepG2细胞、BEL-7402细胞、PLC/PRF/5细胞的分化,也能提高荷瘤机体的免疫调节功能。综述氧化苦参碱抗肝癌作用及机制的药理作用文献,并对其研究进展做了分析。     

博安霉素抗人肝癌的作用及其作用机制的研究

目的研究新抗肿瘤抗生素博安霉素(BAM)在体外的抗人肝癌的作用及其分子机制.方法采用细胞克隆形成法和NAG酶反应测定BAM抗肝癌作用,利用[3H]标记物参入法测定BAM对肝癌细胞大分子合成的作用,利用斑点杂交检测BAM对肝癌细胞相关癌基因和抗癌基因表达的影响,利用中性凝胶电泳分析DNA损伤后的修复情况.结果BAM作用于BEL-7402细胞克隆形成的最小IC50为8.6×10-9mol·L-1;对BEL-7402细胞的杀伤的IC50为6.2×10-6mol·L-1,表现出很强的抗肿瘤作用和良好的剂量-效应关系.对BEL-7402细胞的DNA,RNA和蛋白质合成均有强抑制作用,以抑制DNA和Pro合成的作用较强.在0.1～10μmol·L-1浓度时,BAM明显抑制人肝癌细胞的c-myc,N-ras和p53基因的表达.BAM造成的人肝癌细胞DNA的损伤难以修复.结论BAM是对人肝癌有效的抗肿瘤抗生素,其作用的分子机制与培洛霉素(PEP)相似.     

姜黄素对肺癌细胞的放疗增敏作用及机制研究

目的 观察姜黄素对肺癌NCI-H446细胞的体外放疗增敏作用,探讨其可能的机制.方法 体外培养肺癌NCI-H446细胞,分为对照组、姜黄素处理组、X射线干预组以及联合干预组.对照组仅给予等体积培养基,姜黄素处理组给予不同浓度姜黄素处理48 h,X射线组采用X射线照射(剂量率250 cGy/min),联合治疗组细胞先采用姜黄素处理,之后使用X射线照射.采用MTT法检测各处理组细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中p53、p21、Bax、Bcl-2蛋白表达.结果 不同浓度的姜黄素对人肺癌NCI-H446细胞生长具有抑制作用;剂量为6～12 Gy的X线处理后,也可显著抑制NCI-H446细胞增殖;不同浓度姜黄素和8GyX线处理后,NCI-H446细胞增殖进一步降低,并与姜黄素浓度呈一定的剂量依赖性.流式细胞术结果显示:姜黄素和X射线照射均可促进细胞凋亡;2者联合使用与单纯姜黄素或X射线照射相比细胞凋亡显著增加,差异均有统计学意义(P＜0.05).Western blot结果显示:姜黄素与X射线均能诱导NCI-H446细胞中p53、p21和Bax蛋白表达,降低Bcl-2蛋白表达(P＜0.05).X射线与姜黄素联合处理后,p53、p21和Bax以及Bcl-2蛋白含量比单独作用变化显著,差异有统计计学意义(P＜0.05).结论 姜黄素对人NCI-H446细胞具有放疗增敏作用,其机制与诱导细胞凋亡,上调p53、p21蛋白及下调Bel-2/Bax表达有关.     

洛铂对肝癌细胞HepG2的放疗增敏效应

目的 探讨洛铂对肝癌细胞的放疗增敏效应.方法 用MTT法确定洛铂对肝癌细胞株HepG2半数抑制浓度(IC50),流式细胞仪检测1/4 IC50、1/8 IC50洛铂对HepG2细胞周期、凋亡的影响,蛋白免疫印迹检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达,细胞克隆形成实验研究洛铂对HepG2的放射增敏比.结果 洛铂对肝癌细胞株HepG2细胞毒作用呈剂量依赖性,半数抑制浓度为1.85μg/ml,不同浓度洛铂组(1/4 IC50组、1/8 IC50组)均观察到HepG2细胞凋亡和G2/M期阻滞明显增加(P＜0.05);两组洛铂干预组肝癌细胞Bcl-2表达下降,Bax、Caspase-3表达水平升高;洛铂对肝癌细胞HepG2的放疗增敏比分别是1.12、1.28.结论 洛铂具有放射增敏作用;其机制可能与促进肝癌细胞凋亡以及细胞G2/M期阻滞相关.     

胡桃醌对人肝癌BEL-7402细胞增殖和膜流动性的影响

目的:研究胡桃醌诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡及其作用机制。方法:采用MTT法测定细胞生长抑制率,通过流式细胞仪观察凋亡细胞,采用荧光偏振技术离体动态地检测30 min内胡桃醌对BEL-7402细胞各向异性r、荧光偏振度P和微粘度η的影响,分析细胞膜流动性的改变。结果:各浓度的胡桃醌均可抑制人肝癌BEL-7402细胞的生长,诱导其凋亡,IC50为13.78μM。不同浓度胡桃醌均可引起BEL-7402细胞膜的r、P和η值显著性降低(P<0.05),尤其在前1 min内r、P、η值下降迅速,1min后各指标下降的趋势渐渐平缓。结论:胡桃醌能显著增加BEL-7402细胞的膜流动性,促进其本身进入细胞内部,抑制细胞的增殖,诱导细胞凋亡。     

蛇葡萄素改变Bcl-2/Bax表达和激活caspase-3诱导人肝癌细胞Bel-7402凋亡

目的探讨蛇葡萄素在体外诱导人肝癌细胞株Bel-7402的凋亡作用及其可能机制。方法以不同浓度的蛇葡萄素作用于体外培养的人肝癌细胞株Bel-7402,应用MTT法检测培养24、48和72h的细胞生长情况;荧光染色观察细胞核的形态学改变;琼脂糖凝胶电泳分析细胞DNA变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测细胞caspase-3、Bcl-2和Bax的表达情况。结果蛇葡萄素对Bel-7402细胞的生长有明显的增殖抑制作用,呈浓度和时间依赖性。24、48、72h的IC50值分别是89.6±16.1、36.2±6.5和15.3±3.0mg·L-1。经荧光染色后可观察到典型的凋亡小体。细胞DNA电泳后呈现出凋亡细胞典型的DNAl adder。流式细胞术检测细胞凋亡率呈时间和浓度依赖性。caspase-3和Bcl-2蛋白表达量逐渐降低,Bax蛋白表达量逐渐增加,呈明显的浓度依赖性。结论蛇葡萄素能诱导体外培养的人肝癌Bel-7402细胞凋亡,其作用具有时间和浓度依赖性。下调Bcl-2、上调Bax表达,活化caspase-3是蛇葡萄素诱导Bel-7402细胞凋亡的可能机制之一。     

葛根素抑制人子宫颈癌细胞株HeLa细胞增殖研究

目的 探讨葛根素(puerarin)对人子宫颈癌细胞株HeLa的增殖抑制和凋亡诱导作用,并探讨其机制.方法 MTT法检测不同浓度葛根素(0,12.5,25,50)处理48 h对HeLa细胞增殖的影响;流式细胞术检测葛根素对HeLa细胞凋亡的影响.Western blotting 检测葛根素对HeLa细胞Wnt,β-catenin ,Bax,Bcl-2,p53和p21表达水平影响.结果 葛根素对 HeLa细胞增殖有明显的抑制作用,呈明显的剂量-效应依赖性;葛根素明显促进HeLa细胞凋亡;Western blotting检测显示,经葛根素处理72 h后,Wnt,β-catenin ,Bcl-2,p53和p21表达明显下降,呈浓度依赖性.结论 葛根素可诱导HeLa细胞增殖抑制和凋亡, 其作用机制与抑制Wnt/β-catenin 信号通路相关.