咪唑克生对实验性自身免疫性脑脊髓炎的行为、病理和免疫的影响

目的探讨咪唑克生(Ida)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的行为、病理和脊髓IL-12p40、IL-10、GFAPmRNA表达的影响.方法用GPSCH免疫Wistar大鼠制作EAE模型,免疫后分别给予Ida0.5、1.5和4.5 mg·kg-1.比较各组行为学和组织学的变化,用RT-PCR法测脊髓IL-12p40、IL-10和GFAP mRNA的表达.结果与EAE组比Ida1.5mg·kg-1组和Ida4.5 mg·kg-1组的行为学和病理变化减轻,脊髓IL-12p40mRNA表达降低,IL-10和GFAPmRNA表达升高(P＜0.05).结论Ida对EAE有保护作用,可能与打乱促炎和抑炎细胞因子的平衡及促进星形胶质细胞增殖活化有关.     

左旋咪唑对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脊髓IL- 10、IL-12/23 P40 mRNA表达的影响

目的:探讨左旋咪唑(LMS)对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)脊髓IL-10、IL-12/23P40mRNA表达的影响。方法:用GPSCH和CFA混匀乳剂免疫Wistar大鼠制作EAE模型,分别在免疫前(LMS1组)、免疫同时(LMS2组)、免疫后(LMS3组)给LMS10mg·kg-1。比较各组行为学变化,用RT-PCR测脊髓IL-10和IL-12/23P40mRNA的表达。结果:LMS1组和LMS2组行为学表现加重(P<0.01,P<0.05)。LMS3组出现EAE复发。与EAE组比,LMS1组、LMS2组和LMS3组脊髓IL-12/23P40mRNA表达不同程度升高,IL-10mRNA表达不同程度降低。结论:LMS可升高脊髓IL-12/23P40mRNA表达,降低IL-10mRNA表达,提示LMS对EAE的促发作用可能与Th1/Th2失衡有关。     

咪唑克生对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠小胶质细胞激活和白介素17、肿瘤坏死因子α表达的影响

目的观察咪唑克生对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠脑组织中小胶质细胞、白介素17(IL-17)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响。方法 SD大鼠30只随机分成3组:EAE-咪唑克生组(免疫当日开始给予咪唑克生2 mg·kg~(-1),腹腔注射,连续14 d)、EAE-生理盐水组(给予相同剂量生理盐水)和空白对照组。用豚鼠全脊髓匀浆免疫诱导制作EAE大鼠模型。每天观察评估各组大鼠神经功能变化;苏木精-伊红染色观察病理学改变;免疫组化法检测小胶质细胞(Iba1阳性)的激活与表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测发病高峰期(免疫后15 d)脑组织中IL-17,TNF-α表达水平。结果与EAE-生理盐水组比较,EAE-咪唑克生组(1)日均神经功能评分降低(P0.05),最大临床症状评分显著降低(P0.01);(2)苏木精-伊红染色:中枢炎症细胞浸润减少(P0.05);(3)免疫组化:Iba1阳性细胞表达减少(P0.05);而EAE-生理盐水组大鼠腰髓内Iba1阳性细胞表达较空白对照组明显升高(P0.01);(4)ELISA:炎性细胞因子IL-17和TNF-α表达明显降低(P0.01)。结论咪唑克生能够减缓大鼠EAE病情,其机制可能与抑制中枢神经系统小胶质细胞激活,下调中枢神经系统炎症因子IL-17和TNF-α的表达,扰乱中枢神经系统内炎症因子的平衡有关。     

2-(2-苯并呋喃基)-2-咪唑啉对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠小胶质细胞活化及氧化应激的影响

目的观察2-(2-苯并呋喃基)-2-咪唑啉(2-BFI)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠CNS小胶质细胞活化及氧化应激的影响。方法将27只C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、EAE组和2-BFI干预组,每组9只。采用MOG_(35-55)免疫法制作经典EAE模型。2-BFI干预组小鼠于EAE造模后当日起腹腔注射2-BFI 20 mg/kg,2次/d,连续14 d。正常对照组和EAE组以等量生理盐水代替。每日观察并记录动物的行为学变化、进行神经功能缺损评分。免疫后第20 d处死各组小鼠,采用HE染色和LFB染色观察组织学变化;免疫组化法测定诱导型小鼠CNS中一氧化氮合成酶(iNOS)蛋白和离子钙接头分子(Iba-1)的表达,比色法检测丙二醛(MDA)的含量;并对活化的小胶质细胞数量和iNOS蛋白表达水平进行线性相关分析。结果正常对照组小鼠未见神经系统受损的表现。与EAE组相比,2-BFI干预组日均神经功能缺损评分明显降低,CNS脊髓炎性细胞浸润明显减少,髓鞘脱失严重程度明显减轻,活化的小胶质细胞数量减少,iNOS蛋白表达明显减少,MDA含量降低(P0.05~0.01)。相关分析结果显示,iNOS表达水平与活化的小胶质细胞数量呈正相关(r=0.596,P0.01)。结论 2-BFI能减轻EAE小鼠临床症状和组织学改变,2-BFI对EAE小鼠的神经保护作用于小胶质细胞激活和减轻氧化应激相关。     

咪唑克生对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠MCP-1、MIP-1α表达的影响

目的：探讨不同剂量咪唑克生（Ida）对Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）中枢神经系统（CNS）内单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、巨噬细胞炎性蛋白-1α（MIP-1α）表达的影响。方法：以豚鼠脊髓匀浆加完全福氏佐剂免疫Wistar大鼠,建立EAE模型。观察Ida 0.5、1.5和4.5mg&#183;kg^-1剂量组对大鼠的EAE发病率、神经功能缺损评分的影响,应用苏木精-伊红和Kluver ＆ Barrera髓鞘染色方法观察大鼠CNS病理变化,采用免疫组织化学技术检测大鼠CNS内MCP-1、MIP-1α表达的变化。结果：Ida 1.5和4.5mg&#183;kg^-1组的EAE发病率和神经功能缺损评分均明显降低,Ida3个不同剂量Ida干预组的CNS内MCP-1、MIP-1α的表达呈现不同程度地减少。结论：不同剂量的Ida能改善EAE,以1.5和4.5mg&#183;kg^-1组的效果更显著。推测可能与咪唑啉2受体有关。     

大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎中一氧化氮的变化

目的　观察外周和中枢一氧化氮 (NO)在大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎 (EAE)中的动态变化 ,探讨EAE大鼠发病的相关生物学机制。方法　 采用免疫组化法和硝酸还原酶法 ,观察豚鼠全脊髓匀浆诱导的Wistar大鼠EAE的过程中 ,脊髓内表达iNOS胶质细胞与外周NO代谢物NO 2 和NO 3的变化。 结果　 对照组脊髓内未发现表达iNOS阳性细胞 ,表达iNOS的CNS胶质细胞可能是小胶质细胞 ,而且它的变化与EAE大鼠的病情一致 ,评分 2分和 3分EAE大鼠脊髓表达iNOS的小胶质细胞比评分 1分大鼠明显增多 (P <0 .0 1) ,恢复期EAE大鼠表达iNOS的小胶质细胞明显减少 (P <0 .0 1)。EAE大鼠外周血清NO值随症状程度加重而升高 ,但在EAE恢复期时仍保持较高水平。未发病大鼠血清NO值明显增高 ,与对照组之间具有显著性差异 (P <0 .0 1)。 结论　 小胶质细胞产生的NO可能在急性期EAE大鼠的发病中起重要作用     

咪唑克生对脂多糖诱导的皮质星形胶质细胞相关炎症细胞因子的影响

目的：了解咪唑克生（Ida）对炎症状态下的星形胶质细胞相关的炎症细胞因子的调节作用。方法：将纯度〉95％星形胶质细胞随机分为空白对照组、脂多糖刺激组和Ida炎症干预组，每组7瓶细胞。Ida 100μmol·L^-1，脂多糖10μg·mL^-1。Ida预处理6h、药物共处理12h、脂多糖处理12和24h时留上清液检测细胞因子，细胞提取RNA检测胶质酸性纤维蛋白和核转录因子κB（NF-κB）水平。结果：Ida能抑制促炎细胞因子（P〈0．01）和NF-κB的表达（P〈0．05）。结论：Ida具有抗炎作用。     

左旋咪唑对实验性自身免疫性脑脊髓炎脊髓IFN-γ、TGF-β1 mRNA表达的影响

目的:探讨左旋咪唑(LMS)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)脊髓IFN--γ、TGF-β1mRNA表达的影响。方法:用GPSCH免疫Wistar大鼠制作EAE模型,分别在免疫前(LMS1组)、免疫同时(LMS2组)、免疫后(LMS3组)给LMS10mg·kg-1。比较各组行为学和组织学的变化,用RT-PCR测脊髓IFN-和TGF-β1mRNA的表达。结果:LMS1组和LMS2组的行为学表现和炎细胞浸润加重(P<0.01,P<0.05)。LMS3组出现EAE复发。与EAE组比,LMS1组和LMS2组脊髓IFN-mRNA表达升高,TGF-β1mRNA表达降低,但仅LMS2组有统计学意义(P<0.05)。结论:LMS可升高脊髓IFN-mRNA表达,降低TGF-β1mRNA表达,提示LMS对EAE的促发作用可能与Th1/Th2失衡有关。     

NLRP3炎性小体在EAE大鼠中的表达及意义

目的通过检测实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠中NLRP3信号传导通路的改变,探讨NL-RP3炎性小体介导的释放IL-1β的炎性反应在EAE大鼠发病机制中的作用。方法将30只大鼠随机分为两组,正常对照组10只,EAE模型组20只,并以豚鼠脊髓匀浆(GPSCH)为抗原免疫建立EAE模型。免疫组化检测比较对照组和模型组大鼠CNS内NLRP3、caspase-1、IL-1β细胞因子的表达情况并进行研究分析。结果模型组脑和脊髓的NLRP3、caspase-1、IL-1β的表达均高于正常对照组(P<0.05)。结论 NLRP3介导炎性反应可能参与了EAE的发病过程,可能是MS的发病机制之一。     

骨髓间充质干细胞对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的Iba1、IL-1β和IL-10影响

目的探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠的小胶质细胞Iba1、IL-1β和IL-10表达的影响。方法以髓鞘少突胶质细胞糖蛋白多肽35-55(MOG 35-55)免疫诱导C57BL/6雌性小鼠制备EAE小鼠模型。将30只雌性C57BL/6小鼠随机分为3组:BMMSCs移植组、EAE组和正常组。采用免疫组化检测脑和脊髓的Iba1(离子钙结合衔接分子1)、IL-1β和IL-10的表达。结果 BMMSCs移植组神经功能缺损症状要轻于EAE组,BMMSCs移植组脑和脊髓的Iba1和IL-1β表达水平低于EAE组(P0.05),而BMMSCs移植组脑和脊髓的IL-10表达水平高于EAE组(P0.05)。结论 BMMSCs能改善EAE小鼠的症状,其作用机制之一可能是抑制了小胶质细胞的激活、抑制炎症因子IL-1β及促进抗炎因子IL-10的表达。     

实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠小胶质细胞的变化

目的　观察活化的小胶质细胞 (表达主要组织相容性抗原 )在实验性自身免疫性脑脊髓炎 ( EAE)大鼠脊髓中的变化 ,探讨 EAE大鼠发病相关生物学机制。方法　采用免疫组化法观察豚鼠全脊髓匀浆诱导的 Wistar大鼠 EAE过程中脊髓内表达 MHC 、MHC 类抗原的小胶质细胞的变化情况。结果　对照组脊髓内未发现表达 MHC抗原细胞 ,实验组脊髓内表达 MHC 抗原细胞与表达 MHC 抗原细胞的分布和形态一致 ,小胶质细胞变化与 EAE大鼠的病程一致。动物临床症状评分 2分和 3分 EAE大鼠脊髓表达 MHC抗原的小胶质细胞比评分 1分大鼠明显增高 ( P <0 .0 1 ) ,恢复期 EAE大鼠表达 MHC抗原的小胶质细胞明显减少 ( P <0 .0 1 )。结论　活化小胶质细胞与 EAE大鼠的病情相关 ,提示其可能通过表达 MHC抗原在 EAE大鼠的发病机制中具有作用     

Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型的建立

目的:建立Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalo-myelitis,EAE)模型,并检测可溶性血管细胞黏附分子-1(soluble vascular cell adhesion molecule-l,sVCAM-1)在EAE大鼠中的动态表达。方法:将豚鼠麻醉后,不用磷酸盐缓冲液(PBS)灌注,直接取新鲜豚鼠全脊髓制备匀浆(Guinea Pig Spinal Cord Homoge-nate,GPSCH)为抗原,免疫Wistar大鼠建立EAE的动物模型。观察其体重及神经功能评分的变化;取脑、脊髓组织石腊包埋,病理切片,光镜观察;采用双抗体夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清中sVCAM-1的表达。结果:Wist-ar大鼠在免疫后10天出现明显的神经系统体征,发病率达100%;脑脊髓组织可见血管周围炎细胞呈袖套样浸润;sV-CAM-1的表达与对照组比较有显著性升高(P<0.01)。结论:采用非灌注法制备的豚鼠全脊髓匀浆作为抗原,能够成功诱发Wistar大鼠的EAE模型,为研究多发性硬化(multiple sclerosis,MS)的发病机制及治疗奠定了一定的基础。     

阿托伐他汀对EAE大鼠脊髓ICAM-1和TGF-β1表达的影响

目的 探讨阿托伐他汀对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠脊髓细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响. 方法 80只清洁级健康雌性Wistar大鼠按照随机数字表法分为4组:正常对照组、EAE模型组、低剂量治疗组、高剂量治疗组,每组20只.各组再分为第14天、21天两个亚组,每个亚组10只.利用新鲜豚鼠全脊髓匀浆及完全福氏佐剂免疫Wistar大鼠建立EAE模型.低、高剂量治疗组大鼠分别给予2 mg/(kg·d)、10 mg/(kg·d)阿托伐他汀灌胃,正常对照组及EAE模型组应用生理盐水灌胃.观察每组大鼠发病情况并进行神经功能障碍评分,采用HE染色方法观察病理改变,免疫组化方法检测ICAM-1及TGF-β1的表达. 结果 与EAE模型组及低剂量治疗组比较,阿托伐他汀高剂量治疗组发病率明显减轻,炎性病灶明显减少,组织中ICAM-1表达明显减少,TGF-β1表达明显增多,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 阿托伐他汀可改善EAE大鼠的临床症状及病理改变,并且与剂量有关,其作用推测与减少ICAM-1表达、提高TGF-β1表达有关.     

2-(2-苯并呋喃基)-2-咪唑啉对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠脊髓胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的探讨咪唑啉Ⅱ类受体(I2R)高选择性配体2-(2-苯并呋喃基)-2-咪唑啉(2-BFI)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠脊髓胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响。方法 C57BL/6小鼠30只,随机分成EAE组、2-BFI组和对照组,每组10只。EAE组及2-BFI组给予皮下注射抗原液诱导为EAE模型;2-BFI组同日起腹腔注射2-BFI共14 d。各组每日进行2次神经功能缺损评分;第19 d进行脊髓病理学检查,免疫组化法观察脊髓炎症细胞浸润、髓鞘脱失程度及GFAP表达。结果 2-BFI组神经功能缺损评分(4.17±3.65)明显低于EAE组(10.41±3.02)(P<0.01);脊髓病理评分(1.10±0.59)较EAE组(2.38±0.86)显著减少(P<0.01);GFAP阳性细胞数[(18.83±2.31)个/HP]明显多于EAE组[(12.25±2.66)个/HP](P<0.05)。结论 2-BFI能减缓小鼠EAE疾病发展,可能与促进中枢神经系统中GFAP的表达有关。     

甲基强的松龙治疗实验性变态反应性脑脊髓炎的作用机制

目的:研究细胞因子、T细胞凋亡和淋巴细胞增殖在实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)形成中的作用及甲基强的松龙(MP)治疗EAE的作用机制。方法:采用人脑纯化的髓鞘碱性蛋白(MBP)与完全福氏佐剂免疫Lewis大鼠,建立EAE动物模型。用双抗体夹心ELISA法检测各组大鼠血清中IL-10、TNF-α、IFN-γ的含量:流式细胞仪检测外周血T细胞凋亡;3H-TdR释放法检测外周血淋巴细胞转化率。结果:与对照组比较,EAE组的外周血IFN-γ、TNF-α水平明显增高,IL-10水平明显降低,MP治疗后IFN-γ和TNF-α水平下降,IL-10浓度上调。MP还诱导外周血T细胞凋亡和抑制MBP致敏淋巴细胞增殖并呈剂量依赖性。结论:应用人MBP成功建立EAE大鼠模型,MP可能通过调节Th细胞因子格局、促进Th2细胞因子分泌、抑制MBP致敏淋巴细胞增殖及外周血T细胞凋亡而发挥治疗多发性硬化的作用。     

咖啡因慢性干预对小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎影响的观察

目的：探讨不同剂量咖啡因慢性干预对小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）的影响及其分子免疫学机制。方法：C57BL／6小鼠随机分为CFA阴性对照组,EAE阳性对照组,咖啡因饮水干预组（1mg·k-1,10mg·kg-1,30mg·kg-1）。使用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55（MOG35-55）抗原诱导小鼠EAE模型,咖啡因干预至EAE造模后第20天与对照组小鼠同期处死为止。观察小鼠行为学变化、中枢炎症细胞浸润和损害程度、检测中枢细胞因子IL-17、IFN—γ、TGF—β的mRNA表达含量。结果：咖啡因干预组,特别是30mg·kg-1组的病情严重程度减轻,中枢炎症细胞浸润程度下降,促炎因子表达降低,抑炎因子表达上升。结论：慢性咖啡因干预,可通过降低促炎因子的表达,升高抑炎因子的表达,减轻小鼠EAE的炎症损伤。     

口服法舒地尔治疗EAE对巨噬细胞、T细胞及TLR/NF-B通路的作用研究

目的探讨口服盐酸法舒地尔(Fasudil)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental allergic encephalomyelitis,EAE)小鼠巨噬细胞及TLR/NF-B通路的作用。方法采用小鼠髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55肽(myelin oligodendrocyte glycoprotein 35-55peptide,MOG35-55)诱导C57BL/6小鼠建立EAE模型,将EAE小鼠随机分为EAE模型组和Fasudil治疗组,免疫后第3天给予Fasudil治疗组小鼠Fasudil灌胃干预,直到免疫后第27天,EAE模型组同样处理给予等量生理盐水。光镜观察脊髓组织CD4+T细胞/CD68巨噬细胞表达的变化,Western blot法测定脊髓诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶1(Arg-1)、Toll样受体2(TLR-2)、TLR-4和磷酸化核因子B(p-NF-B)蛋白的表达,ELISA法测定培养72h脾细胞分泌细胞因子的含量。结果与EAE模型组比较,Fasudil组CD4+T细胞数和CD68巨噬细胞数明显减少(P0.01),巨噬细胞M1表型iNOS表达减少(P0.05),M2表型Arg-1表达增加(P0.01),炎性通路蛋白p-NF-B、TLR-2和TLR-4表达减少(P0.05),外周细胞炎性因子白细胞介素-6(IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)和IL-17分泌减少(P0.05),而IL-10分泌增加(P0.05)。结论口服Fasudil可抑制CD4+T细胞/CD68巨噬细胞的激活,促进巨噬细胞表型M1向M2转化,抑制脊髓组织中p-NF-B、TLR-2和TLR-4的表达,抑制外周免疫细胞炎性因子分泌,而增加IL-10的分泌。     

苦参素对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脑内神经干细胞增值的影响

目的观察苦参素对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠的治疗作用及对脑内神经干细胞标志物-巢蛋白Nestin、转录因子Sox-2表达的影响,探讨苦参素对EAE大鼠的治疗机制。方法将60只雌性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组和治疗组,每组20只。用新鲜豚鼠全脊髓匀浆免疫诱导建立EAE模型,自免疫后第11天(发病初期)起,治疗组大鼠每日腹腔注射苦参素6.70 ml/kg(250 mg/kg),同时正常组与模型组注射等量生理盐水。每天观察并记录大鼠的体重变化及神经功能学评分。给药1 w后将大鼠处死,取脊髓和大脑,免疫组织化学法检测脑内Nestin的表达,RT-PCR法测定脑内SOX-2含量的变化。结果与模型组相比,治疗组大鼠神经功能评分明显降低,Nestin阳性细胞数和SOX-2的表达均显著增加(P0.05)。结论苦参素对EAE大鼠有治疗作用,其机制可能与增加中枢神经系统中神经干细胞的数量有关。     

白介素-10对脑出血大鼠脑组织核因子-кB、细胞间黏附分子-1表达及神经细胞凋亡的影响

目的探讨白介素(IL)-10对脑出血大鼠脑组织核因子(NF)-кB、细胞间黏附分子(ICAM)-1表达及神经细胞凋亡的影响。方法 96只SD大鼠随机分为正常组、对照组、IL-10低剂量组和高剂量组,后3组再随机分为6 h、12 h、1 d、3 d及7 d 5个时间点。应用Ⅶ型胶原酶注射法制备脑出血模型;制模成功后3 hIL-10低剂量组和高剂量组分别给予IL-10 5μg/kg或30μg/kg、对照组给予生理盐水腹腔注射,以后每天1次。应用免疫组化法测定各组血肿周围脑组织NF-кB及ICAM-1表达,原位末端标记法检测脑组织细胞凋亡。结果与正常组比较,其他各组各时间点脑组织NF-кB、ICAM-1表达明显升高,神经细胞凋亡数量明显增多(均P<0.01)。与对照组比较,IL-10低剂量组NF-кB表达制模后12 h开始降低,ICAM-1表达及神经细胞凋亡数量自1 d开始降低,7 d时降低最显著(P<0.05～0.01);IL-10高剂量组上述变化在制模后12 h开始,且下降程度更显著(P<0.05～0.01)。结论 IL-10可抑制脑组织NF-кB及ICAM-1表达,减轻血肿周边炎症反应及神经细胞凋亡,对出血性脑损伤起保护作用;高剂量组作用更明显。