同种异体角膜移植术后角膜新生淋巴管的实验研究

目的 探讨新西兰大白兔角膜碱烧伤后及同种异体角膜移植术后角膜新生淋巴管(CL)上VEGFR3、LYVE-1及CD4的表达及意义,从而进一步证实角膜碱烧伤和高危角膜移植后角膜新生淋巴管的存在及与排斥反应的关系.方法 饲养96只健康新西兰大白兔,将其随机分为5组.空白对照组24只,选取实验1组24只右眼,不做手术;实验1组24只,左眼制作角膜碱烧伤模型;实验2组24只,左眼进行钻取自体角膜后再缝合;实验3组24只,左眼进行同种异体角膜移植;实验4组24只,左眼进行高危(角膜碱烧伤后)同种异体角膜移植.术后第1、3、7、14天各组分别处死6只兔,进行大体观察、裂隙灯、组织学、电镜检查及免疫组化测定LYVE-1、VEGFR3及CD4的表达情况.结果 (1)空白对照组在术后不同时间LYVE-1、VEGFR3和CD4均无表达.(2)实验1、2、3组:LY-VE-1、VEGFR3和CD4分别于术后第1天未出现表达,第3天出现表达,第7、14天表达增高;(3)实验4组:LYVE-1、VEGFR3和CD4分别于术后第1天开始出现表达,第3、7、14天表达逐渐增高.(4)实验1、2、3组术后第3、7、14天LYVE-1、VEGFR3和CD4表达均高于空白对照组.(5)实验4组术后第1、3、7、14天LYVE-1、VEGFR3和CD4表达均高于空白对照组.(6)实验3组较实验1、2组术后14天LYVE-1、VEGFR3和CD4表达增高.(7)实验4组较实验1、2、3组术后同时期LYVE-1、VEGFR3和CD4表达均增高.结论 角膜移植术后存在CL,且在术后2周内随时间延长逐渐增多,CL可能直接参与角膜移植术后排斥反应.     

地塞米松抑制碱烧伤后角膜新生血管的实验研究

目的：探讨地塞米松对角膜新生血管形成及角膜内血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）的影响。方法：采用碱烧伤的方法制备家兔角膜新生血管模型,分为三组,每日结膜下注射地塞米松０．５毫克组、１．０毫克组、对照组。分别采用宏观测量新生血管长度及生长速度,免疫组化染色检查ＶＥＧＦ蛋白的表达,显微镜下微血管计数方法研究角膜新生血管形成及抑制情况。结果：实验组新生血管生长速度变慢,微血管数量减少,ＶＥＧＦ蛋白表达下降,具     

碱烧伤后角膜干细胞活性的实验研究

目的 了解大鼠角膜烧伤后角膜干细胞的活性。方法 对大鼠角膜中央区,上半周及全周３个不同区域分别进行碱性烧灼,于伤后２４小时取材做离体角膜＾３Ｈ－Ｔｄｒ掺５入,计算角膜基底细胞标记率。结果 中央区及上半周烧伤组角膜基底细胞标记率分别为６．７８４和６．００２,与对照组１．２９相比,Ｈ＝３０．５５,Ｐ〈０．００１,有显著性差异,而全周烧伤组未见标记细胞。     

鼠角膜碱烧伤后新生淋巴管上血管内皮生长因子受体-3的表达和意义

目的探讨鼠角膜碱烧伤后血管内皮生长因子受体-3(VEGFR-3)在新生淋巴管上的表达和意义,进一步证实角膜新生淋巴管的存在。方法在大鼠角膜上制作碱烧伤模型,应用免疫组化法检测第3、5、7天角膜中VEGFR-3蛋白的表达。电镜观测伤后第5、7、10、14天角膜新生淋巴管的情况。结果碱烧伤后,大鼠角膜组织中VEGFR-3表达从第3天开始明显上升,并于第5天达到最高峰,伤后第14天出现新生淋巴管。结论角膜碱烧伤后有新生淋巴管长入,VEGFR-3可能成为抑制角膜新生淋巴管的一个新靶点。     

角膜新生淋巴管的研究进展

近年来随着淋巴管内皮细胞特异性标记物VEGFR-3、LYVE-1、Podoplanin和Prox 1等的发现，对于角膜新生淋巴管的研究有了较大进展，成为近几年的研究热点。本文就角膜新生淋巴管是如何生成，其与新生血管之间的关系，新生淋巴管在角膜移植免疫排斥反应发生过程中的作用作一综述。     

角膜碱烧伤后大鼠角膜新生血管的细胞学研究

背景微血管壁由周细胞和血管内皮细胞组成,以往人们对血管系统的研究主要集中于血管内皮细胞,而对血管周细胞的研究较少。目的观察角膜碱烧伤后新生血管形成过程中的血管内皮细胞和周细胞的变化,探讨周细胞对新生血管生长的影响。方法36只健康成年SPF级sD大鼠,浸有1mol／LNaOH的4mm自制涂药器放置于右眼角膜中央3s,制作碱烧伤动物模型,3只正常sD大鼠作为正常对照。分别于角膜烧伤后1、2、3、5、7、10d各处死6只大鼠获取平行于角膜缘的环形切片,采用双重免疫荧光染色法检测CD31和α—SMA在角膜组织的表达,以分别评估血管内皮细胞和周细胞的分布,观察角膜碱烧伤后二者在角膜组织中的动态变化。光学显微镜下分别计数抗Ot—SMA阳性的周细胞数和抗CD31阳性的内皮细胞数,以二者的比值作为周细胞包裹指数（PCI）,定量分析角膜碱烧伤后新生血管对周细胞的募集情况。结果角膜碱烧伤后1dCD31即可在角膜浅基质层表达,呈红色荧光,随着角膜碱烧伤时间的延长,CD31在角膜组织中的表达逐渐增加并进入深基质层,至角膜碱烧伤后7d表达的细胞数减少。呈绿色荧光的α一SMA在角膜碱烧伤2d于角膜浅基质层表达,在实验观察期内表达量均少于CD31,至碱烧伤后7d,残留的CD31阳性细胞被α—SMA阳性细胞包裹,未被包裹的CD31阳性细胞多数发生消退。碱烧伤后1、2、3、5、7、10d的PCI分别为0、16．07％、11．95％、43．84％、73．97％、86．21％,呈现递增的趋势。结论大鼠角膜碱烧伤后周细胞对血管内皮细胞的包绕可能对新生血管的成熟与稳定发挥重要作用。     

角膜上皮移植对角膜碱烧伤表层新生血管抑制的实验研究

为评价角膜上皮移植术对角膜碱烧伤后表层新生血管的抑制作用，对大鼠角膜全周碱烧伤后立即行上缘自体角膜上皮移植术，连续观察５周。结果，６４％移植区角膜表面无或有很少新生血管，组织学证实为角膜上皮表型。而９５％的对照组角膜表面全部新生血管化，组织学显示有散在杯细胞为结膜上皮。本文提示角膜上皮移植术对碱烧伤后重建角膜表面的完整性，并预防角膜新生血管化，具有重要价值。     

角膜移植后角膜新生淋巴管与新生血管间的关联

目的:研究角膜移植后角膜新生淋巴管与新生血管间关联。方法:人角膜取自行二次角膜移植的19名患者。5核苷酸酶-碱性磷酸酶(5-nase-Alkaline phosphatase,5-NA-ALP)双重酶组织化学染色及淋巴内皮细胞受体(lymphatic vessel endothelial receptor,LYVE-1)、内皮细胞黏附因子-1(platelet endothelial cell adhesion modecule-1,PECAM-1)双重免疫组化法标记角膜中的新生血管和淋巴管,并进行淋巴管计数(lymphatic vessels counting,LVC)和血管计数(blood vessels counting,BVC),比较BVC与LVC之间的关联。结果:角膜中存在角膜新生血管12例(63%),存在角膜新生淋巴管5例(26%)。角膜新生淋巴管仅出现在血管化角膜中。角膜移植后BVC与LVC间呈显著性正相关(r=0.725;P<0.01)。结论:人角膜移植后角膜新生淋巴管与新生血管之间存在密切关联。     

核糖核酸酶抑制因子抑制碱烧伤后角膜新生血管

目的 制作兔碱烧伤后角膜新生血管(CNV)模型,结膜下注射核糖核酸酶抑制因子(RI),以探讨RI对碱烧伤后CNV的抑制效果。方法 每只兔双眼均制成碱烧伤后CNV模型。自身双眼对照,实验眼结膜下注射RI,对照眼用等量生理盐水结膜下注射。根据烧伤范围和烧伤时间,16只兔随机分成4组,各组给药量相应改变。两周后,摄片分析CNV面积。结果 实验眼组较对照眼组,CNV被抑制了27.83％,P<0.01组1的抑制率为35.26%,P<0.01;组2的抑制率为48.32％,P<0.05;组3的抑制率为8.01％,P<0.01;组4的抑制率为34.84%,P<0.01。结论 RI能够抑制碱烧伤后CNV的发生。     

聚乙二醇化内皮抑素抑制碱烧伤角膜新生血管的实验研究

目的观察聚乙二醇化内皮抑素（PEG—endostatin）抑制碱烧伤诱导的兔角膜新生血管（CNV）的效果，探讨其作用机制。方法采用碱烧伤法诱导兔角膜新生血管形成。在碱烧伤后1d，治疗1、2组和对照组分别在球结膜下注射50μg／mL PEG化内皮抑素、50μg／mL重组内皮抑素、生理盐水各0．2mL。以后隔日注射1次，共8次。动态观察CNV的生长状况。利用免疫组化方法检测血管内皮生长因子（VEGF）的表达，并在显微镜下进行微血管计数。结果治疗1、2组CNV的长度和面积、VEGF的表达及微血管数量均明显少于生理盐水对照组（P〈0．05）；而治疗1组的CNV的长度和面积、VEGF的表达及微血管数量均明显少于治疗2组（P〈0．05）。结论PEG化内皮抑素及重组内皮抑素都可有效抑制CNV的生长，但前者效果更好。     

角膜碱烧伤的油剂治疗

目的 研究油剂对角膜碱烧伤的治疗效果。方法 本文对1997-2002年眼科住院的角膜碱烧伤病人34例44眼，随机分为两组，治疗组点油剂（茶油、鱼肝油）、对照组未点油剂。记录视力，荧光素染色裂隙灯检查情况。结果 发现油剂治疗组有效率为90．9％，对照组有效率为63．6％，差异有非常显著性（P〈0．01）。结论 油剂是治疗角膜碱烧伤的有效药物。     

苏拉明对角膜碱烧伤新生血管抑制作用的研究

目的研究苏拉明对碱烧伤角膜新生血管（CNV）及血管内皮生长因子（VEGF）、胰岛素样生长因子-I（IGF—I）的影响。方法新西兰大白兔48只,分为空白组、对照组、苏拉明组3组,每组16只（32只眼）。对照组与治疗组制备角膜碱烧伤模型,术后分别给予氯霉素、8g／L苏拉明滴眼液点眼。分别于术后第1、4、7、14d观察新生血管情况,免疫组织化学法检测VEGF、IGF—I的表达。结果术后第1d各组无新生血管生长。第4、7、14d,空白组未出现新生血管,对照组与治疗组可见CNV,且治疗组比对照组新生血管面积小（P〈0．01）。第1、4、7d,对照组与治疗组VEGF、IGF—I的表达均比空白组升高,差异有统计学意义（P〈0．01）,治疗组与对照组相比,差异亦有统计学意义（P〈0．01）。第14d,3个组间比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论VEGF、IGF—I参与CNV形成,苏拉明通过降低角膜上皮中二者的表达,抑制角膜碱烧伤新生血管形成。     

白细胞介素—1受体拮抗剂对角膜碱烧伤治疗的实验研究

目的 系统观察研究白细胞介素-1受体拮抗剂（LI-lra)对角膜碱烧伤的治疗作用。方法 采用日本大耳白兔及Wistar大鼠,制成角膜碱烧伤模型。通过裂隙灯与病理组织学观察,进行角膜OD值与角膜上皮细胞活性测定。烧伤斑图像分析。以及IL-1酶联免疫吸附测定（IL-1ELISA）。结果 应用IL-1ra后兔角膜水肿程度减轻,角膜OD值较大,角膜上皮细胞活性恢复较好,并能明显抑制大鼠角膜中的IL-1水平。结论 IL-1ra能抑制炎症反应。有利于角膜透明度和上皮细胞活性恢复。     

Research on mouse model of grade II corneal alkali burn

AIM: To choose appropriate concentration of sodium hydroxide (NaOH) solution to establish a stable and consistent corneal alkali burn mouse model in grade II. METHODS: The mice (n=60) were randomly divided into four groups and 15 mice each group. Corneal alkali burns were induced by placing circle filter paper soaked with NaOH solutions on the right central cornea for 30s. The concentrations of NaOH solutions of groups A, B, C, and D were 0.1 mol/L, 0.15 mol/L , 0.2 mol/L, and 1.0 mol/L respectively. Then these corneas were irrigated with 20 mL physiological saline (0.9% NaCl). On day 7 postburn, slit lamp microscope was used to observe corneal opacity, corneal epithelial sodium fluorescein staining positive rate, incidence of corneal ulcer and corneal neovascularization, meanwhile pictures of the anterior eyes were taken. Cirrus spectral domain optical coherence tomography was used to scan cornea to observe corneal epithelial defect and corneal ulcer. RESULTS: Corneal opacity scores (
) were not significantly different between the group A and group B (P=0.097). Incidence of corneal ulcer in group B was significantly higher than that in group A (P=0.035). Incidence of corneal ulcer and perforation rate in group B was lower than that in group C. Group C and D had corneal neovascularization, and incidence of corneal neovascularization in group D was significantly higher than that in group C (P=0.000). CONCLUSION: Using 0.15 mol/L NaOH can establish grade II mouse model of corneal alkali burns.     

自体前板层角巩膜缘移植治疗角膜重度碱烧伤

目的:探讨自体前板层角巩膜缘移植治疗角膜周边部小面积重度碱烧伤的临床疗效及安全性。方法:对39例39眼角膜周边部小面积重度碱烧伤患者,行局部清创,切除病灶处前板层角膜及邻近板层巩膜、部分结膜,取健眼相对应处的前板层角巩膜及结膜移植,术后观察患者主观症状(疼痛、畏光、流泪)、视力、角膜上皮修复时间及复发情况,健眼的视力、伤口恢复及并发症。结果:术后随访2～12mo,所有患者角膜上皮全部愈合,患者主观症状恢复快,均未发生视力下降,无1例复发;健眼角巩膜缘伤口愈合良好,未出现并发症。结论:自体前板层角巩膜缘移植治疗角膜周边小面积重度碱烧伤,手术操作简单,可有效缩短角膜碱烧伤的愈合时间,促进角膜上皮修复,健眼(供体眼)恢复良好,无严重并发症发生。     

角膜碱烧伤的免疫学机制研究进展

角膜碱烧伤是眼科临床常见的致盲性眼病,一旦发生,治疗相当棘手,预后极差,其损伤机制的研究一直受到众多学者的重视。许多研究表明,角膜碱烧伤后免疫系统的参与起着非常重要的作用。角膜碱烧伤后角膜免疫微环境的变化致使各种效应细胞和炎性细胞出现规律性变化,另外各种炎性因子也参与角膜碱烧伤的病理损伤过程。就角膜碱烧伤的免疫学机制进行综述。     

Experimental study on the treatment of rabbit corneal melting after alkali burn with Collagen cross-linking

AIM: To evaluate the effect of Collagen cross-linking on the prevention of melting in rabbit corneas after alkali burn. METHODS: Twenty New Zealand white rabbits were randomly divided into model control group and collagen cross-linking treatment group. The second group of rabbits received collagen cross linked treatment. Both groups were applied with antibiotic eye drops to prevent infection. The corneas were evaluated for melting, opacity, pathological and immunohistochemistry, record the changes when 28 days after the animals were killed. RESULTS: In the control group, 6 out of 8 rabbits showed corneal melting after injury (14±4) days, while two corneal perforated. In collagen cross-linking treatment group, one rabbit showed corneal melting after injury 23 days, without corneal perforation; corneal dissolution rate between the two groups was significantly different (P <0.05). Pathological examination suggested that in the treatment group, mild corneal edema, mild damage to collagen fibers, inflammatory cell infiltration was significantly less than the control group. Immunohistochemistry showed that corneal collagen fibers arranged in neat rows in the control group. CONCLUSION: Collagen cross-linking treatment not only can prevent and delay the corneal melting after alkali burn, but also can reduce the destruction of corneal collagen fibers and infiltration of inflammatory cells in the corneal tissue.     

角膜碱烧伤白细胞介素-1ra基因治疗的实验研究

目的探讨阳离子聚合物包装IL-1ra重组质粒、角膜原位转染治疗角膜碱烧伤的疗效。设计实验性研究。研究对象角膜碱烧伤大鼠动物模型。方法制作Wistar大鼠角膜碱烧伤模型，随机分为2组，Ⅰ组为阴性对照（12只），结膜下注射生理盐水。Ⅱ组为IL-1ra基因治疗组（18只），以PeDNA3．1质粒作为IL-1ra基因表达载体，阳离子聚合物为转染介质，角膜基质显微注射20μg IL-1ra质粒。碱烧伤后不同时间点（3、7、21天）处死实验动物取下角膜，HE染色分析角膜组织病理变化，比较两组角膜透明性和新生血管生长情况，对角膜内浸润的炎性细胞进行计数。主要指标角膜透明性和新生血管情况，角膜组织病理变化及炎性细胞计数。结果碱烧伤造模后，对照组角膜浸润水肿明显，且随时间延长而加重，角膜基质内大量炎性细胞浸润和粗大新生血管形成。IL-1ra基因治疗组的角膜基质轻、中度水肿，角膜中性粒细胞、淋巴细胞等炎性细胞计数在不同时间点均少于对照组，角膜新生血管管径均较细。结论角膜基因原位转染可使IL-1ra在局部有效表达，抑制碱烧伤引起的角膜免疫炎症反应，为眼碱烧伤的治疗提供了新的选择。