bc1-2、p53蛋白在肺癌组织中的表达及其意义

恶性肿瘤的异常增殖不仅与促进细胞生长的原癌基因的激活及控制细胞生长的抑癌基因的失活有关，并与细胞凋亡被抑制有重要关系。我们应用免疫组化SP法，对已随访5年以上的125例肺癌患者的组织标本进行了bcl-2和p53基因蛋白产物进行检测和分析，探讨此2种蛋白表达与肺癌临床病理因素及预后的关系。     

bc1-2、p53蛋白在肺癌组织中的表达及其意义

恶性肿瘤的异常增殖不仅与促进细胞生长的原癌基因的激活及控制细胞生长的抑癌基因的失活有关,并与细胞凋亡被抑制有重要关系.我们应用免疫组化SP法,对已随访5年以上的125例肺癌患者的组织标本进行了bc1-2和p53基因蛋白产物进行检测和分析,探讨此2种蛋白表达与肺癌临床病理因素及预后的关系.     

bcl-2、p53蛋白在肺癌组织中的表达及其意义

恶性肿瘤的异常增殖不仅与促进细胞生长的原癌基因的激活及控制细胞生长的抑癌基因的失活有关,并与细胞凋亡被抑制有重要关系。我们应用免疫组化SP法,对已随访5年以上的125例肺癌患者的组织标本进行了bcl-2和p53基因蛋白产物进行检测和分析,探讨此2种蛋白表达与肺癌临床病理因素及预后的关系。1材料与方法1.1材料收集青岛市胸科医院和青岛市肿瘤医院病理科1991年～1996年确诊的原发性肺癌手术切除标本125例,其中男性患者86例,女性患者39例,年龄范围26～76岁,平均(57±10.01)岁,术前均未作过放疗和化疗。125例患者术后均随访5年以上,术后0.5…     

肺癌p16基因纯合缺失,突变,表达及临床意义

目的探讨P16基因的改变与肺癌生物学行为的关系。方法控制正常细胞对肿瘤组织污染后，用聚合酶链反应一单链构型多态性分析（PCR－SSCP）和免疫组织化学法对60例肺癌组织P16基因纯合缺失、突变、表达进行了研究。结果小细胞肺癌无P16基因纯合缺失、突变和蛋白表达异常。非小细胞肺癌P16基因纯合缺失率和突变率分别为40．5％和5．7％且与肿瘤细胞的分化程度、组织类型、转移和预后明显相关。非小细胞肺癌P16蛋白表达缺失率为42．3％，与p16基因纯合缺失有高度的一致性，两者的缺失符合率为76％。结论P16基因异常和失活可能与非小细胞肺癌的组织学类型、分化和预后有一定关系。     

shRNA干扰对肺癌细胞内Skp2和p27水平及其生长的影响

探讨干扰肺腺癌SPC—A—1细胞中skp2（S-phase kinase associated protein，Skp2）基因的发夹结构RNA（small hairpin RNA，shRNA）对肺癌细胞Skp2和p27基因表达的影响及对细胞生长的影响。方法：设计、合成特异性的shRNA序列并与pGenesil-1质粒载体连接转染SPC-A-1细胞，经过稳定筛选后的肺癌细胞，通过RT—PCR和Western印迹法分别检测细胞内Skp2、p27 mRNA和蛋白的表达情况，MTT法检测细胞生长情况并绘制生长曲线。结果：在转染干扰RNA后SPC-A-1细胞内的Skp2 mRNA及蛋白表达下降明显，而p27蛋白水平却明显上升，这与抑制了Skp2表达导致p27降解减少有关。生长曲线表明细胞生长受到了抑制。结论：成功构建了针对脚2基因的shRNA真核表达载体，能有效抑制肺癌细胞生长，并使得Skp2基因表达下降，p27基因的表达增多，为肺癌细胞的基因治疗提供了实验依据。     

非小细胞肺癌中p53蛋白表达及其临床意义

目的：为探讨非小细胞肺癌中p53蛋白表达与肺癌组织学类型、分化程度和淋巴结转移的关系。方法：应用免疫级化技术（ABC法），以p53单克隆抗体检测53例非小细胞肺癌组织中p53基因的表达，组织经微波抗原修复后进行免疫染色。结果采用X2检验。结果：p53蛋白在53例非小细胞肺癌中表达阳性率为64．2％，p53蛋白表达与非小细胞肺癌的组织学类型无关（P＞0.05）；与肺鳞癌分化程度有关（P＜0.01）；肺腺癌中与淋巴结转移有关（p＜0.05）。结论：p53基因的表达异常与不同类型的肺癌发生发展相关，提示P53基因在肺癌的形成、分化和转移过程中起不同的调节作用，p53蛋白过度表达则预后差，检测p53蛋白对判断非小细胞肺癌预后具有应用价值。     

DFMO通过Fas/FasL通路诱导人肺癌细胞凋亡的研究

背景与目的:Fas/FasL系统是细胞凋亡的重要通路。为了解Fas/FasL系统在肿瘤多胺生物合成抑制导致恶性表型逆转中的作用,本研究拟探讨多胺生物合成抑制剂α-二氟甲基鸟氨酸(α-difluoromethylornithine,DFMO)对人肺癌A549细胞生长、凋亡的影响及其与人肺癌相关抗原、rasP21蛋白及Fas/FasL表达的相关性。方法:用MTT法观察细胞生长,流式细胞仪分析细胞周期,DNAladder电泳法观察细胞凋亡,SP免疫组化法及RT-PCR法检测细胞蛋白及基因表达。结果:DFMO可抑制A549细胞生长并诱导凋亡,使G1期细胞增多(61.0±2.08)%,S期细胞减少(21.2±0.88)%,出现DNAladder;同时下调A549细胞人肺癌相关抗原及rasP21蛋白表达,上调Fas基因mRNA及蛋白表达。结论:DFMO通过Fas/FasL通路诱导肺癌A549细胞的凋亡,并可能与人肺癌相关抗原及rasP21蛋白表达调控有关。     

肿瘤相关新基因pp4519在肺癌中的表达差异及初步功能研究

目的探讨肿瘤相关新基因pp4519在肺癌细胞系、人肺癌及癌旁组织中表达差异及其初步生物学功能.方法合成肿瘤相关新基因pp4519特异性多肽,免疫家兔制备兔源性多克隆抗体;从体外细胞集落形成试验,生长曲线,裸鼠体内成瘤试验,半定量RT-PCR,蛋白印迹,免疫细胞化学及免疫组化检测pp4519基因的表达差异,以及转染肺癌细胞系的细胞凋亡检测等方法研究pp4519基因对体内外细胞生长和生物学功能的影响.结果 SPC-A1肺癌细胞系的体外集落形成试验表明,pp4519基因转染组集落形成数明显少于空载体组(P<0.05);转染pp4519基因的肺癌细胞系的裸鼠体内成瘤试验结果表明该基因对SPC-A1细胞系的成瘤有明显抑制作用(P<0.01);瞬时转染细胞的流式细胞凋亡检测结果表明该基因具有促进SPC-A1细胞凋亡的作用;半定量RT-PCR,蛋白印迹检测结果表明肺癌及癌旁组织中pp4519 RNA和蛋白表达无明显差异(P>0.05),但免疫组化结果显示PP4519在人肺癌癌旁组织中的表达略高于肺癌.结论 pp4519是一个具有抑制肺癌细胞生长功能的新基因.     

非小细胞肺癌中p53蛋白表达及其临床意义

为探讨非小细胞肺癌中Ｐ５３蛋白表达与肺癌组织学类型分化程度和淋巴结转移的关系。方法：应用免疫组化技术，以Ｐ５３单克隆抗体检测５３例非小细胞肺癌组织中Ｐ５３基因的表达，组织经微波抗原修复后进行免疫染色。结果采胜Ｘ＾２检验。结果：Ｐ５３蛋白在５３例非小细胞肺癌中表达阳性率为６４．２％，Ｐ５３蛋白表达与非小细胞肺癌的组织学类型无关；与肺鳞部分化菜关；肺腺癌中与淋巴结转移有关。     

FHIT基因在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的研究FHIT基因失表达与人非小细胞肺癌临床病理特征和预后的关系。方法应用免疫组化方法检测60例非小细胞肺癌组织及14例癌旁非典型增生组织（以60例癌旁正常肺组织和15例肺良性病变组织为对照）中FHIT基因的表达情况，分析其与非小细胞肺癌的临床病理特征及预后的关系。结果（1）60例非小细胞肺癌组织Fhit蛋白失表达率为48．3％，而癌旁正常肺组织和肺良性病变组织失表达率为0．0％，其差异有显著性（P=0．000）。（2）Fhit蛋白在鳞癌中失表达率为61．3％，腺癌的失表达率为33．3％，差异有显著性（P=0．034）。（3）Fhit蛋白在有吸烟史患者失表达率明显高于无吸烟史者（P=0．001）。（4）Fhit蛋白在癌旁非典型增生组织区失表达率为78．6％，与癌旁正常肺组织及肺良性病变组织相比，其差异有显著性（P=0．000）。结论（1）Fhit蛋白失表达是非小细胞肺癌的早期、频发事件。（2）Fhit蛋白失表达与非小细胞肺癌的组织学亚型和吸烟史有关。（3）Fhit蛋白失表达可能与肺癌早期发生及环境致癌过程有关，Fhit蛋白有望成为肺癌早期检测的一项指标。     

p16基因在肺癌中突变和表达改变的研究

 目的 检测非小细胞肺癌ｐ１６ 基因蛋白表达及其第 ２外显子突变，并探讨其与非小细胞肺癌的临床病理类型和预后的关系。方法 用Ｓ－Ｐ免疫组化法对ｐ１６基因蛋白表达进行对比检测，并用 ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术检测ｐ１６基因第 ２外显子的突变情况。结果 非小细胞肺癌中 ｐ１６蛋白表达阳性率５２．５％，肺部非癌性病变阳性率９２．５％，两者比较差异有显著性意义（Ｐ＜０．０５）；非小细胞肺癌中 Ｐ１６基因第 ２外显子突变率为 ５％，而肺部非癌性病变中无一例突变。结论 ｐ１６蛋白表达下调在非小细胞肺癌的发生发展中起重要作用，对判断其预后有意义，提示 Ｐ１６／ＭＴＳ１基因在非小细胞肺癌发生中具有一定的作用。     

L-myc蛋白在小细胞肺癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨L-myc蛋白在小细胞肺癌组织中的表达及临床意义。方法:应用免疫组化法检测142例小细胞肺癌组织标本中L-myc蛋白的表达情况，统计患者的临床资料，分析L-myc蛋白表达与小细胞肺癌患者临床病理因素的相关性，并进行预后关系分析。结果:小细胞肺癌组织中L-myc蛋白阳性染色位于细胞的胞浆和胞核中。L-myc蛋白在小细胞肺癌组织中的阳性表达率明显高于正常肺组织（25.4% vs 5.0%，P=0.043），其表达与小细胞肺癌的临床分期、远处转移明显相关（P=0.040、P=0.037）。L-myc蛋白表达阳性患者的总生存期短于表达阴性的患者（P=0.031）。多因素分析表明，小细胞肺癌患者的独立预后因素有临床分期、L-myc蛋白的表达（P＜0.05）。结论:L-myc蛋白在小细胞肺癌组织中高表达，其表达与小细胞肺癌的发生发展、临床分期及预后关系密切，可能成为治疗小细胞肺癌的一个很有前途的靶点。     

非小细胞肺癌中nm23、P-gp基因蛋白表达的研究

目的 研究非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC ）中nm23及多药耐药基因蛋白MDR1产物P-糖蛋白（P-glycoprotein ,P-gp）的表达及其临床意义。方法 用免疫组化二步法对69例非小细胞肺癌进行nm23,P-gp检测分析并随访.结果 69例非小细胞肺癌中nm23及P-gp的阳性表达率为18.84%、17.73%。 nm23蛋白表达与P-gp耐药基因表达无关（P〉0.05）。nm23的表达与淋巴结转移有关（P〈0.01）。耐药基因MDR1产物P-糖蛋白的阳性表达与非小细胞肺癌的组织学类型有关（P〈0.05）；与淋巴结转移及临床分期相关（P≤0.01）；与性别、年龄无关（P〉0.05）。结论部分非小细胞肺癌病人体内存在多药耐药基因MDR1产物P-gp或对P-gp介导的抗癌药物已产生耐药.nm23基因蛋白在非小细胞肺癌中的表达与多药耐药基因蛋白MDR1产物P-gp无关；与非小细胞肺癌的淋巴结转移呈相反关系；对判断肺癌的预后有重要意义。非小细胞肺癌中多药耐药基因P-gp的表达与组织学类型、淋巴结转移、临床分期有关。     

nm23和TGFβ_1在人体非小细胞肺癌中的表达及其临床病理关系的探讨

目的　探讨转移抑制基因nm2 3及转化生长因子 β1基因在人非小细胞肺癌 (NSCLC)中的表达水平及其临床病理关系。方法　应用免疫组化方法对 83例人非小细胞肺癌组织中转移抑制基因nm2 3及转化生长因子 β1基因表达蛋白水平进行了研究。结果　nm2 3和TGFβ1表达水平与肺癌的TNM分期、细胞分化程度及肺癌的转移有密切关系 (P <0 .0 5 )。结论　nm2 3、TGFβ1基因表达水平同时降低 ,预示肺癌的转移和预后不良。     

Her—2／neu基因的增及其蛋白表达与肺癌分化和转移的关系

应用荧光原位杂交技术和免疫组化法观察５０例肺癌中Ｈｅｒ－２／ｎｅｕ基因扩增及其蛋白表达及状况，组织学分级和淋巴结转移的关系。结果有Ｈｅｒ／２／ｎｅｕ基因扩增者共２例。有Ｈｅｒ－２／ｎｅｕ基因蛋白表达共１２例，其中鳞癌１例，肺泡细胞癌４例，腺癌６例，神经内分泌癌１例。肺癌组织不分级Ⅰ级与Ⅱ，Ⅲ级间该基因蛋白表达均有明显差异，有肺门或支气管淋巴结转移与无淋巴结转移蛋白表达亦有明显差异。     

肺癌组织Bax的表达及其与细胞凋亡和增殖的关系

 目的　探讨Bax基因在肺癌中的表达及其与细胞凋亡和增 殖的关系。方法　对38例肺癌组织及21例肺部良性组织,应用TUNEL技术对 细胞凋亡情况进行了检测,应用免疫组织化学法对Bax蛋白和增殖细胞核抗原(PCNA)进行检 测。并分别定义凋亡指数和增殖指数。结果　肺癌组织Bax蛋白及PCNA的表 达明显高于肺部良性组织,P＜0.01;肺癌组织中凋亡指数和增殖指数均高于肺部良性 组织,P＜0.01;而Bax阳性肺癌组织中的凋亡指数明显高于Bax阴性肺癌组织P＜0 .01;结论　Bax蛋白在肺癌中的表达率较高,同时在肺癌中细胞凋亡和细 胞增殖亦较活跃;Bax蛋白过度表达促进细胞凋亡。     

nm23和TGFβ_1在人体非小细胞肺癌中的表达及其临床病理关系的探讨

 目的　探讨转移抑制基因nm2 3及转化生长因子 β1基因在人非小细胞肺癌 (NSCLC)中的表达水平及其临床病理关系。方法　应用免疫组化方法对 83例人非小细胞肺癌组织中转移抑制基因nm2 3及转化生长因子 β1基因表达蛋白水平进行了研究。结果　nm2 3和TGFβ1表达水平与肺癌的TNM分期、细胞分化程度及肺癌的转移有密切关系 (P <0 .0 5 )。结论　nm2 3、TGFβ1基因表达水平同时降低 ,预示肺癌的转移和预后不良。     

肺癌中ING1基因变化及其表达水平的研究

目的：检测肺癌中抑癌基因ING1微卫星杂合性缺失（LOH）及其主要蛋白产物p33^ING1b的表达情况，以探讨ING1基因改变-9肺癌发生发展的关系。方法：采用银染PCR—SSCP法检测肺癌组织ING1基因微卫星LOH发生的频率；应用组织芯片技术和免疫组化方法，检测肺癌p33^ING1b蛋白表达水平。结果：70例肺癌组织ING1基因4个微卫星位点的总杂合性缺失率为55．7％（39／70），并且越靠近ING1基因位点，发生率越高，但与临床病理参数无关。217例肺癌p33^ING1b蛋白的LOH发生率为47．0％（102／217），鳞状细胞癌高于腺癌、腺鳞癌和细支气管肺泡癌（P〈0．05），其余类型间差异无显著性（P〉0．05）；p33^ING1b的表达与其他临床病理参数不相关（P〉0．05），但与LOH发生频率相关（P〈0．05）。结论：p33^ING1b蛋白在肺癌组织中存在高频率的低表达或失表达，并且ING1基因的微卫星LOH发生频率也很高。推测LOH是该基因异常表达的重要原因，其结果可能导致该基因的下调和（或）蛋白质功能的失活，从而丧失其对细胞的生长抑制作用，促进了肿瘤的发生。     

RNA干扰抑制HMGB1基因表达对肺癌细胞L9981增殖和侵袭的影响

背景与目的 研究小干扰RNA抑制高迁移族蛋白B1基因表达对肺癌细胞L9981增值和侵袭能力的影响.方法 设计合成靶向HMGB1基因的siRNA,采用阳离子脂质体试剂瞬时转染肺癌细胞株L9981,利用实时荧光定量PCR和Western blot检测RNA干扰后HMGB1基因的沉默效果,评价siRNA设计的合理性及RNA干扰抑制HMGB1表达的有效性;用细胞活力计数仪测定3组细胞活力;分别在RNA干扰后24、48、72和96小时应用MTF实验检测细胞生存状态,计算生长抑制率并绘制生长曲线;应用boyden chamber法检测侵袭能力的差异.结果 靶向HMGB1的stRNA成功抑制肺癌细胞株L9981中HMGB1基因及蛋白表达,细胞活力检测仪测定RNA干扰48小时后,细胞活力显著下降;MTT测定肺癌细胞生长受到明显抑制;boyden chamber小室细胞侵袭实验结果肺癌穿膜细胞数明显减少.结论 应用siRNA技术能有效的抑制HMGB1基因的表达,同时有效抑制L9981细胞的体外增值和侵袭,为肺癌的生物学治疗提供了新思路.     

Her-2/neu基因扩增及其蛋白表达与肺癌分化和转移的关系

应用荧光原位杂交技术（FISH）和免疫组化法观察50例肺癌中Her－2／neu基因扩增及其蛋白表达状况、组织学分级和淋巴结转移的关系。结果有Her－2／neu基因扩增者共2例（4％）。有Her－2／neu基因蛋白表达共12例（24％），其中鳞癌1例，肺泡细胞癌4例，腺癌6例，神经内分泌癌1例。肺癌组织学分级Ⅰ级与Ⅱ、Ⅲ级间该基因蛋白表达均有明显差异（P＜0．05），有肺门或支气管淋巴结转移与无淋巴结转移蛋白表达亦有明显差异（P＜0．05）。研究结果表明Her－2／neu基因编码的P185KD蛋白在肺癌分化及转移过程中起重要作用。