探讨EGCG对人肝癌细胞体外增殖和凋亡的影响及机制

目的探讨茶多酚主要成分没石子儿茶素没石子酸酯（EGCG）诱导人肝癌细胞株SMMC27721体外增殖和凋亡过程中的影响,预测其对人肝癌的抗癌作用及机制。方法体外培养人肝癌SMMC27721细胞,采用不同浓度的EGCG对其进行干预,用MTT法观测其对肝癌细胞增殖能力的影响;用流式细胞仪检测其对肝癌细胞凋亡的影响;用免疫细胞化学法检测肝癌细胞中p-Akt（sel473）蛋白的的表达变化;用流式细胞仪检测其对肝癌细胞凋亡的影响。结果在EGCG的作用下,SMMC27721细胞增殖能力明显受到抑制（P〈0.05）,p-Akt（sel473）细胞凋亡明显增加（P〈0.05）。结论 EGCG可通过抑制Akt信号通路而诱导肝癌细胞凋亡。     

艾迪注射液中刺五加提取物对斑蝥素的减毒增效作用

目的探讨艾迪注射液中刺五加提取物对斑蝥素的增效、减毒作用。方法采用MTF法考察刺五加提取物对斑蝥素引起的肿瘤细胞（SMMC-7721肝癌细胞）和正常大鼠肾NRK细胞的细胞毒作用;采用流式细胞术检测SMMC-7721和NRK细胞凋亡情况。用斑蝥素制作大鼠急性肾损伤模型,考察刺五加提取物对肾损伤大鼠的保护作用。结果刺五加提取物可增强斑蝥素对SMMC-7721肝癌细胞增殖的抑制作用,降低斑蝥素对NRK细胞的细胞毒作用（P〈0．05或〈0．01）;刺五加提取物能增强斑蝥素引起SMMC-7721细胞凋亡,抑制NRK细胞凋亡（P〈0．05或〈0．01）。刺五加提取物可降低斑蝥素所致肾损伤大鼠的尿素氮、肌酐含量,减少尿液中尿蛋白含量（P〈0．05或〈0．01）。结论艾迪注射液中刺五加提取物对斑蝥素有增效、减毒作用。     

绿茶提取物EGCG对人肝癌裸鼠移植瘤凋亡和血管生成的影响

目的：用人肝癌SMMC-7721细胞建立裸鼠移植瘤模型,观察绿茶提取物EGCG单体对裸鼠移植瘤凋亡和血管生成的影响。方法：用人肝癌SMMC-7721细胞建立裸鼠移植瘤模型,待皮下移植瘤形成后,将裸鼠随机分为实验组和对照组,每天分别给予EGCG单体溶液50mg/kg.只灌胃和生理盐水灌胃,3周后瘤块离体称重,计算抑瘤率;透射电镜观察实验组与对照组肝癌移植瘤超微结构;用TUNEL法检测移植瘤中人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的情况;用免疫组织化学法检测移植瘤中VEGF蛋白表达的变化,并通过CD34表达检测微血管密度（MVD）;用RT-PCR检测移植瘤中VEGF mRNA的表达。结果：实验组裸鼠经EGCG单体溶液灌胃后,皮下移植瘤体积、重量明显小于对照组,抑瘤率为30.13%±5.17%;透射电镜观察,实验组肝癌移植瘤组织见不同时期凋亡细胞,部分形成凋亡小体;TUNEL法检测实验组移植瘤中人肝癌SMMC-7721细胞凋亡明显多于对照组（P〈0.05）;实验组移植瘤中VEGF蛋白和mRNA表达均明显下调（P〈0.05）,实验组MVD较对照组明显下降（P〈0.05）。结论：绿茶提取物EGCG可能通过增加人肝癌SMMC-7721细胞凋亡,抑制新生血管生成达到抗癌作用     

蛋白激酶Cδ对人原发性肝癌细胞增殖的影响

目的初步探讨PKCδ对人原发性肝癌细胞增殖的影响．方法体外培养SMMC-7721细胞,脂质体介导基因体外转导,通过细胞计数、细胞形态学观察、MTT法、流式细胞仪检测技术等方法研究PKCδ对人原发性肝癌细胞的影响．结果细胞计数的生长曲线示转导人PKCδ的SMMC-7721细胞数目明显减少;MTT法显示转导人PKCδ的SMMC-7721细胞的OD值减小,活细胞数目显著减少（P〈0．01）;细胞形态学观察转导入PKCδ的SMMC-7721细胞脱落,连接疏松,失去光泽;流式细胞仪检测到加入PKCδ的SMMC-7721细胞凋亡率增加．结论PKCδ有抑制SMMC-7721细胞增殖,促进凋亡的作用．     

槲皮素对人肝癌SMMC-7721细胞生长的抑制及细胞凋亡的诱导作用

目的探讨槲皮素体外对人肝癌SMMC-7721细胞的生长抑制作用及诱导细胞凋亡的作用机制。方法以10、30、60、100#mol／L槲皮素作用于体外培养的SMMC-7721细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,Annexi—V／PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡情况,免疫组化染色法检测bcl-2、bax蛋白表达的变化。结果30、60、100umol／L槲皮素可显著地抑制SMMC-7721细胞的生长（P〈0．01）,诱导细胞发生凋亡（P〈0．01）,并呈现量墩和时-效关系;槲皮素作用48h后,免疫组化染色法检测显示bcl-2蛋白表达降低和bax蛋白表达上调。结论槲皮素体外通过引起人肝癌SMMC-7721细胞bcl-2蛋白表达下调和bax蛋白表达上调诱导细胞发生凋亡,抑制细胞生长,槲皮素可能成为一种潜在的抗肝癌药物。     

5-烯丙基-7-二氟亚甲氧白杨素抑制肝癌细胞NF-κB表达的研究

目的：研究5-烯丙基-7-二氟亚甲氧白杨素（ADFMChR）抑制体外培养人肝癌SMMC-7721细胞增殖和诱导凋亡作用及机制。方法：体外培养SMMC-7721细胞,MTT比色法测定ADFMChR对SMMC-7721细胞增殖活性的影响;Western Blotting法分析ADFMChR对SMMC-7721细胞NF-kB蛋白表达活性的影响。结果：MTT比色法结果显示ADFMChR有效抑制SMMC-7721细胞增殖活性,呈剂量依赖性,其IC50值为3.56μM;Western Blot分析证实ADFMChR下调NF-κB蛋白表达,呈浓度和时间依赖性。结论：ADFMChR具有抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖和诱导细胞凋亡作用,其机制与NF-κB蛋白表达有关。     

重离子对人肝癌细胞细胞凋亡及bcl-2/bax基因表达的研究

目的 探讨重离子诱导人肝癌细胞SMMC-7721细胞凋亡及bal-2／bax的表达在重离子治癌中的作用。方法 应用流式细胞技术、MTT法及免疫组化法,观察重离子诱导人肝癌细胞SMMC-7721细胞凋亡和bal-2／bax表达的情况,并应用AO／BE荧光染色,在荧光显微镜下,观察各组织细胞凋亡的形态学变化。结果 经MTT比色法测定细胞增殖能力,可见随辐射剂量的增加,细胞存活率逐渐降低。流式细胞仪检测重离子对SMMC-7721细胞的DNA含量变化,结果显示2．0、3．0Gy组的SMMC-7721细胞在G2／M期所占细胞比率较对照组及1．0、1．5Gy组增高（P〈0．01）。免疫组化法观察随辐射剂量的增加,bax的表达显著上调,而bcl-2的表达则受抑制。结论 重离子能在体外诱导SMMC-7721细胞凋亡,且具有剂量依赖性;重离子在一定剂量时,使细胞增殖能力降低;重离子能诱导SMMC-7721细胞bax蛋白表达上调。而bcl-2表达降低,从而诱导细胞凋亡。     

EGCG诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡后相关蛋白变化的研究

目的:研究EGCG诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡前后,其蛋白质的差异表达。方法:采用SELDI-TOF-MS技术检测EGCG诱导SMMC-7721细胞凋亡后的相关蛋白变化。结果:EGCG作用前的人肝癌SMMC-7721细胞与作用后的SMMC-7721细胞相比,蛋白分子量高表达的有16个,低表达的也有16个。结论:EGCG作用肝癌细胞前后确实存在差异表达蛋白,这可能有助于EGCG诱导肝癌细胞凋亡机制的研究。     

表没食子儿茶素没食子酸酯诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的实验研究

目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)诱导人肝癌(SMMC-7721)细胞系,细胞凋亡的生物学效应.方法:通过MTT比色法检测EGCG对SMMC-7721细胞生长的影响;应用细胞计数法研究不同浓度EGCG对SMMC-7721细胞生长曲线的影响;PI染色流式细胞术研究EGCG对SMMC-7721细胞周期和凋亡率的影响.结果:EGCG显著抑制人肝癌SMMC-7721细胞的生长,呈浓度依赖性;SMMC-7721细胞经EGCG作用后,其细胞群体倍增时间明显延长,细胞增殖周期延长,从而细胞增殖速度减慢;流式细胞术分析结果表明EGCG(30 μg/mL、60μg/mL、120 μg/mL)处理SMMC-7721细胞48 h后,G1期细胞累积均逐渐增加.结论:EGCG具有诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的作用,其机制可能与使细胞周期G1期阻滞相关.     

透骨草提取物对人肝癌SMMC-7721细胞Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的观察透骨草提取物对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响,探讨透骨草提取物诱导SMMC-7721细胞凋亡的分子机制。方法荧光显微镜观察透骨草提取物对SMMC-7721细胞形态的影响;免疫组化法检测透骨草提取物对SMMC-7721细胞Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。结果荧光显微镜可见,40.91μg/mL透骨草提取物处理的SMMC-7721细胞,细胞皱缩,细胞核固缩,呈新月状且边集,呈现凋亡现象。免疫组化结果显示40.91μg/mL透骨草提取物处理的SMMC-7721细胞Bcl-2蛋白表达明显低于对照组（P〈0.05）,而Bax蛋白表达明显高于对照组（P〈0.05）。结论透骨草提取物可能通过下调Bcl-2蛋白表达、上调Bax蛋白表达诱导SMMC-7721细胞凋亡。     

NF-κB信号通路阻断对肝癌细胞SMMC7721增殖的影响

目的研究NF-κB信号通路阻断对肝癌细胞SMMC7721生长增殖的影响。方法常规培养SMMC7721细胞,采用SN50（36μmol/L）阻断NF-κB信号通路,Western blot检测核内p65蛋白水平,MTT比色法检测细胞生长增殖,计算肿瘤细胞生长抑制率,PI染色、流式细胞仪分析细胞周期与凋亡,观察NF-κB信号通路阻断对肝癌细胞SMMC7721细胞周期及凋亡的影响。结果肝细胞癌SMMC7721细胞核内存在较高水平的p65蛋白。经SN50阻断后,MTT测定显示细胞的增殖受到明显抑制,并随时间的延长而愈渐明显,24、48、72h后细胞增殖抑制率分别为22.77%、33.33%和38.89%,与阻断前相比,差异有统计学意义（P〈0.05）。流式细胞仪检测发现实验组G1期细胞比例高于对照组差异有统计学意义（69.5% vs 56.5%,P〈0.05）,S期细胞比例明显降低,与阻断前相比差异有统计学意义（11.1% vs 28.6%,P〈0.05）,而细胞凋亡率在实验组为38.3%,对照组仅为23.2%,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论NF-κB信号通路阻断诱导细胞周期于G1期停滞和细胞凋亡,从而抑制了SMMC7721细胞生长与增殖,提示NF-κB信号通路组成性激活参与了肝细胞癌的生长增殖与发展,以NF-κB信号通路作为治疗的靶点可能给肝细胞癌带来新的治疗选择。     

黄芪、苦参、知母配伍方体外抗肿瘤细胞作用研究

目的研究黄芪、苦参、知母3药合用及两两配伍对肝癌SMMC-7721细胞生长和凋亡的影响。方法96孔培养板培养肝癌SMMC-7721细胞,分别经中药配伍方作用后,采用MTT法检测药物对肝癌细胞生长的影响;采用流式细胞术检测药物对肝癌细胞凋亡的影响。结果黄芪、苦参、知母3药合用对肝癌SMMC-7721细胞生长有明显的抑制作用,并呈剂量、时间依赖性;流式细胞术结果显示,黄芪、苦参、知母3药合用能明显诱导肝癌细胞坏死,与对照组比较有统计学意义,中、高剂量药物诱导肝癌细胞坏死差异有统计学意义（P〈0.01）。结论黄芪、苦参、知母配伍方可通过诱导肝癌SMMC-7721细胞坏死发挥其抑制肿瘤细胞生长的作用。     

RN181过表达影响SMMC7721肝癌细胞凋亡的初步研究

目的构建过表达RN181基因的SMMC7721重组细胞株,研究RN181对顺铂诱导肝癌细胞凋亡的影响,并初步探讨其凋亡机制。方法构建高表达RN181逆转录病毒感染SMMC7721细胞,显微镜观察其细胞株荧光强弱,Western blot鉴定RN181蛋白表达水平;采用DAPI染色法、Western blot检测RN181对顺铂诱导SMMC7721细胞株凋亡的变化情况。结果重组细胞株荧光表达良好,7721RN181细胞中RN181蛋白表达量高于其对照,差异有统计学意义(P0.05)。DAPI染色法观察到在顺铂作用下,7721RN181的细胞凋亡阳性率高于其对照,差异有统计学意义(P0.05);Western blot检测到7721RN181的activated caspase-3、cleaved PARP的表达量高于对照组,procaspase-6,pro-caspase-8的表达量低于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 RN181表达能促进肝癌细胞的凋亡,其可能通过参与死亡受体凋亡途径来促进肝癌细胞凋亡。进而推测RN181基因可能成为肝癌靶向治疗的一个新靶点。     

RMP在γ射线诱导的肝癌细胞凋亡中的表达

目的研究RPB5调节蛋白RMP在γ射线诱导的SMMC-7721肝癌细胞凋亡过程中的表达,探讨RMP在细胞凋亡及维系细胞DNA稳定性中的作用。方法不同剂量60Coγ射线照射SMMC-7721肝癌细胞和HL-7702正常肝细胞,观察细胞形态变化;PI染色观察细胞凋亡;流式细胞技术检测肝癌细胞周期变化及细胞凋亡;半定量RT-PCR法检测RMP基因在肝癌细胞及正常肝细胞中的表达以及凋亡相关基因bax、bcl-2在肝癌细胞中的表达。结果随着照射剂量增加,肝癌细胞形态发生明显改变;PI染色观察细胞凋亡增多;流式细胞仪检测结果显示随着照射剂量增加,细胞凋亡明显增多,差异有统计学意义（P〈0.05）,细胞周期G1期增高,而S期降低,差异有统计学意义（P〈0.05）;RMP基因相对表达量增加,bax/bcl-2增加,与未照射组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论γ射线照射可诱导人肝癌细胞凋亡,RMP基因可能在提高细胞DNA稳定性中起重要作用。     

无花果浆液对肝癌细胞增殖抑制作用研究

目的探讨无花果浆液（Fig fruit latex,FFL）对肝癌细胞SMMC7721及正常肝细胞L-02增殖、凋亡等生物学行为的影响。方法采用MTT法、克隆形成试验、Brdu掺入试验,Hoechst33342染色、流式细胞术检测FFL作用后,SMMC7721、L-02细胞增殖、凋亡和细胞周期分布的变化,并通过RT-PCR观察其诱导凋亡的机制。结果用FFL处理后,肝癌细胞增殖活性降低（P〈0.05）,克隆形成下降（P〈0.05）,Brdu标记指数降低（P〈0.05）,Hoechst33342染色凋亡细胞增多（P〈0.05）;细胞周期分布改变,凋亡指数升高（P〈0.01）,G0/G1期细胞数增加（P〈0.01）,S期细胞数减少（P〈0.01）,在一定剂量内对正常细胞无明显影响。RT-PCR检测ADPRTL基因表达增强。结论与正常肝细胞比较,FFL通过上调ADPRTL基因诱导肝癌凋亡,促进肝癌细胞周期阻滞,抑制肝癌细胞DNA合成等作用,抑制肝癌细胞增殖。     

三氧化二砷抑制人肝癌细胞侵袭性的体外研究

目的：研究三氧化二砷（As2O3）对人肝癌SMMC-7721细胞侵袭能力的影响,为As2O3用于原发性肝癌的治疗提供实验依据。方法：以0.25、0.5、1.0、2.0、4.0μg/ml的As2O3与人肝癌细胞株SMMC-7721孵育24、48和72h后,应用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）观察As2O3对细胞生长的影响;应用Transwell小室进行人工重组基底膜侵袭和运动实验,观察As2O3对肝癌细胞侵袭能力的影响。结果：应用As2O3处理后人肝癌SMMC-7721细胞生长受到抑制,且有时间-浓度依赖性;同时肝癌细胞过膜细胞数减少,侵袭能力受到抑制。结论：As2O3在体外能有效抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖和侵袭能力,且有浓度依赖性。