乙型肝炎肝硬化患者外周血中单个核细胞Toll样受体4的表达及其与血清内毒素的关系

目的:通过检测乙型肝炎肝硬化患者外周血单个核细胞(PMBCs)Toll样受体4(TLR4) mRNA的表达、血清内毒素水平及肿瘤坏死因子α(TNF-α);探索TLR4 mRNA表达与血清内毒素及TNF-α的关系.方法:抽取29例乙型肝炎肝硬化患者外周静脉血,分离单个核细胞,用RT-PCR半定量分析TLR4 mRNA水平;同时用鲎试剂测定血清内毒素水平和用放免法测定血清TNF-α水平.结果:正常对照组和肝硬化患者血清内毒素水平分别为0.050±0.020 EUmL-1和0.107±0.080 EUmL-1(P<0.05),血清TNF-α水平分别为1.282 pgmL-1±0.249 pgmL-1和2.076±0.358 pgmL-1(P<0.05),后者均明显升高,而且肝功能损害越严重内毒素水平升高越明显;肝硬化患者PMBCs中TLR4 mRNA的表达(0.900±0.263)与正常对照(0.923±0.461)无显著差异(P>0.05).结论:在肝硬化患者,尤其主要是Child-Pugh C级患者,血清内毒素及TNF-α水平较正常对照组明显升高,但PMBC的TLR4 mRNA的表达水平无变化,这可能与肝硬化患者同时存在内毒素耐受有关.     

肥胖患者外周血单个核细胞Toll样受体4表达及活性研究

目的研究肥胖患者外周血单个核细胞（PBMCs）Toll样受体4（11LR4）表达及活性。方法收集16例肥胖患者和16例正常对照者的PBMCs,蛋白印迹法检测PBMCsTLR4及IKBct蛋白表达,实时荧光定量PCR检测PBMCsTLR4及白细胞介素6（IL-6）mRNA表达,并测定空腹血糖、空腹胰岛素、血游离脂肪酸（FFA）、IL-6及肿瘤坏死因子仪（TNF-a）。结果与正常对照组比较,肥胖组血FFA、IL-6、TNF-a及稳态模型评估的胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）明显增高[FFA：（879±64）、（458±48）umoL／L,t=24．613、P=0．000;IL-6：（2．20±0．35）、（1．264-0．25）ng／L,t=14．993、P=0．000;TNF—a（1．964-0．32）、（1．384-0．24）ng／L,t=9．128、P=0．000;HOMA．IR：1．84-0．2、0．44-0．1,t=32．254、P=0．000];肥胖组PBMCsTLR4mRNA及蛋白表达显著升高（TLR4mRNA：3．13±0．21与0．99±0．03,f=54．758,P〈0．05;TLR4蛋白：7．04±0．42与2．53±0．17,t：77．450,P〈0．05）;肥胖组PBMCsIKBet蛋白表达显著降低（2．52±0．16与4．00±0．30,t=23．284,P〈0．05）,IL-6mRNA表达显著升高（2．55±0．15与1．03±O．11,t=53．981,P〈0．05）。结论肥胖患者PBMCsTLR4表达及活性显著增加,可能在肥胖患者胰岛素抵抗的发生、发展中具有重要作用。     

类风湿性关节炎患者早期外周血单个核细胞Toll样受体2、4表达及意义

目的探讨类风湿性关节炎(RA)早期患者外周血单个核细胞(PBMC)Toll样受体(TLR)2、TLR4对其配体双糖链蛋白多糖(BGN)、脂多糖(LPS)的刺激反应性,阐明PBMC TLR2、TLR4在RA疾病早期中的作用。方法采用流式细胞术、实时荧光定量逆转录(RT)-聚合酶链反应(PCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测BGN和LPS刺激前后,RA组和健康对照组外周血CD14+单核细胞TLR4+细胞频率、PBMC TLR2 mRNA和TLR4mRNA及上清液白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNFα)的含量变化。结果 RA早期患者TLR2 mRNA明显升高、TLR4 mRNA下降(P<0.01);经LPS刺激后,RA患者TLR4 mRNA升高3.50倍,而健康对照组下降到0.11倍;LPS和BGN促进了各组PBMC产生IL-6、TNFα,但RA早期患者组上升的倍数明显高于健康对照组。结论 PBMC TLR2、TLR4参与早期RA的发生、发展。     

特发性血小板减少性紫癜外周血单个核细胞Toll样受体表达研究

目的了解特发性血小板减少性紫癜(ITP)外周血单个核细胞(PBMCs)Toll样受体(TLRs)的mRNA表达情况。方法采用RT-PCR方法(SYBR GreenⅠ荧光染料结合法),对30名ITP患者和30名健康者的PBMCs中所表达的TLR2、4、6、7、9 mRNA进行相对定量检测。结果ITP组TLR2和TLR7的mRNA相对表达量均明显高于对照组(P<0.05),而TLR4、TLR6、TLR9的mRNA相对表达量两组间无明显差异(P>0.05)。结论TLR2和TLR7在ITP患者中表达水平上调,可能在ITP发病机制中起重要作用。     

ST段抬高型心肌梗死患者入院血糖与外周血单个核细胞TLR4表达和活性的关系

目的研究ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者入院血糖与外周血单个核细胞(PBMCs)Toll样受体4(TLR4)表达和活性的关系,探讨入院血糖影响STEMI患者住院临床预后的可能机制。方法 142例STEMI患者纳入本研究,检测入院血糖、PBMCs TLR4及白细胞介素-6(IL-6)m RNA表达、血IL-6及肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。根据入院血糖水平分为高血糖组(入院血糖≥7.8 mmol/L)和正常血糖组(入院血糖<7.8 mmol/L)。比较两组患者临床特征、主要心脏不良事件、PBMCs TLR4表达和活性的差异,分析入院血糖与PBMCs TLR4表达和活性的相关性。结果高血糖组年龄、糖尿病史、体质指数、心率、白细胞计数、入院血糖、肌钙蛋白I、肌酸激酶、肌酸激酶同工酶、血IL-6和TNF-α显著高于正常血糖组(P<0.05),舒张压和左心室射血分数显著低于正常血糖组(P<0.05)。高血糖组住院期间恶性心律失常、心力衰竭和死亡等主要心脏不良事件的发生率显著高于正常血糖组(P<0.05)。高血糖组PBMCs TLR4 m RNA及IL-6 m RNA表达水平显著高于正常血糖组(3.34±0.68 vs.1.68±0.55,P<0.05;2.89±0.47 vs.1.62±0.57,P<0.05)。Logistic回归分析显示,在所有入选的STEMI患者中,入院血糖是恶性心律失常、心力衰竭和死亡等主要心脏不良事件的独立危险因素(OR=1.976,95%CI:1.445~2.703,P<0.05;OR=2.117,95%CI:1.483~3.023,P<0.05;OR=2.317,95%CI:1.421~3.778,P<0.05)。Pearson相关性分析显示,入院血糖与PBMCs TLR4 m RNA、IL-6 m RNA表达水平呈正相关(r=0.577,0.527,P均<0.05)。结论急性STEMI入院高血糖患者住院期间主要心脏不良事件的发生率显著增加,急性STEMI患者入院血糖与PBMCs TLR4表达和活性显著正相关,急性STEMI患者入院高血糖可能通过增加单核细胞TLR4表达和活性导致心脏不良事件的发生。     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中Toll样受体9和Foxp3的表达及二者相关性

目的检测系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞中转录因子Toll样受体9(TLR9)和Foxp3在的表达,并探讨其意义以及二者的相关性,明确TLR9和Foxp3在SLE中的作用和意义。方法选择泰安市中心医院和山东大学齐鲁医院2012年10月至2014年6月门诊或住院SLE活动性患者33例、SLE非活动性患者30例,查体中心健康查体者23例作为正常对照,运用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测正常对照组和SLE患者外周血单个核细胞中Foxp3和TLR9m RNA的表达水平。结果活动性SLE患者外周血单个核细胞中TLR9 m RNA的表达水平明显高于SLE非活动性患者和正常对照(P<0.05),非活动性SLE患者TLR9 m RNA的表达水平高于正常对照(P<0.05)。TLR9 m RNA水平与SLE疾病活动指数(SLEDAI)呈正相关(r=0.702,P<0.05)。活动性SLE患者外周血单个核细胞中Foxp3 m RNA的表达水平明显低于SLE非活动性患者和正常对照(P<0.05),非活动性SLE患者Foxp3 m RNA的表达水平低于正常对照(P<0.05)。Foxp3 m RNA水平与SLEDAI呈负相关(r=-0.681,P<0.05)。在SLE患者外周血单个核细胞中TLR9和Foxp3的表达呈负相关。结论 SLE患者TLR9的表达与疾病活动性呈正相关,而Foxp3的表达与疾病活动性呈负相关。TLR9和Foxp3之间可能存在相互调节的作用,共同导致SLE的发生和发展。     

早期脓毒症患者NOD样受体1表达与病情严重程度相关研究

目的 通过前瞻性研究探讨早期脓毒症患者外周血单个核细胞中NLRP1炎性体和NLRP3炎性体相关组分的表达和血浆中相关炎症因子的水平,以及各指标的临床价值.方法 脓毒症患者21例,年龄(67.71±17.17)岁;非感染性SIRS患者20例,年龄(61.35±11.82)岁;健康者20例,年龄(60.38 ±5.61)岁.Real-time PCR检测炎性体复合物各组分以及相关炎症因子mRNA表达水平,ELISA检测血浆IL-1β和IL-18质量浓度.统计方法使用单因素方差分析和Spearman相关性分析.结果 ①NLRP1在早期脓毒症患者和非感染性SIRS患者外周血单个核细胞(PBMC)中的mRNA表达均较健康对照组明显降低(P＜0.01),NLRP3在脓毒症患者PBMC中表达与健康对照组差异无统计学意义(P＞0.05),但其在非感染性SIRS组的表达较脓毒症组和健康对照组明显升高(P ＜0.01);IL-1β在3组人群PBMC中的mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05),IL-18在脓毒症组和非感染性SIRS组中的表达均较健康对照组增高(P＜0.01),其中非感染性SIRS组IL-18表达水平最高.②脓毒症患者血浆中IL-1β的蛋白水平较健康对照组低(P＜0.05),IL-18水平较健康对照组和非感染性SIRS组显著升高(P＜0.01);③NLRP1与SOFA评分呈负相关性(r=-0.44,P＜0.05);与APACHEⅡ评分也具有负相关性(r=-0.52,P＜0.05).结论 NLRP1在早期脓毒症患者PBMC中表达明显降低,且其水平与患者病情严重程度呈负相关,NLRP1水平越低病情越严重.     

乌司他丁对严重脓毒症患者外周血单核细胞Toll样受体4表达的影响

目的 观察乌司他丁(UTI)对严重脓毒症患者外周血单核细胞Toll样受体4(TLR4)表达的影响,从而进一步了解UTI抑制炎症反应的作用机制.方法 70例严重脓毒症患者随机分为对照组(30例)和UTI组(40例),UTI组在对照组常规治疗基础上加用UTI(质量分数5%葡萄糖250 ml+UTI 600 kU)静脉滴注,每日2次,连用3 d.分别在治疗前及治疗后1、2、3 d采集动脉血,用流式细胞仪检测TLR4表达,用酶联免疫吸附法(EuSA)检测血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(L-6)浓度.结果 两组治疗后单核细胞表面TLR4表达及血浆TNF-α、IL-6浓度均较治疗前显著增加(P均<0.05);UTI组各指标值均较对照组上升幅度低(P均<0.05).结论 UTI可有效抑制单核细胞表面TLR4表达,抑制炎症因子释放,对严重脓毒症患者有一定的保护作用.     

Toll样受体4基因多态性与脓毒症的关系

目的 用SPSS 16.0进行统计学分析,多组比较采用方差分析,两两比较采用采用LSD-t检验和秩和检验.结果 深圳地区G-杆菌感染患者TRL4 2244,2299位点均发生不同程度的变异,与文献报道的健康中国人群相比,2299A→G基因型频率有明显差异(P<0.05).但无论从死亡率、感染性休克发生率、ICU平均住院时间、ICU平均费用进行SNP阳性和阴性两组比较,均无统计学意义(P值分别为0.741,0.405,0.160,0.129).结论 TRL4基因5'调控区2244,2299位点确实在深圳地区脓毒症患者中存在广泛存在的遗传学变异,2299A→G基因型频率可能具有地区和人群分布差异.影响脓毒症患者病情发展和预后的因素较复杂,基因多态性可能仅仅是众多的影响因素之一.     

紫癜性肾炎患者外周血单个核细胞Toll样受体3和4的信号转导途径

背景：目前关于Toll样受体3和Toll样受体4介导的信号转导通路在紫癜性肾炎的发病机制中的作用尚不清楚。 目的：分析Toll样受体3和Toll样受体4在过敏性紫癜和紫癜性肾炎发病机制中的作用。方法：选取过敏性紫癜患儿64例,分为过敏性紫癜无肾损害组36例及过敏性紫癜性肾炎组28例,另选健康儿童30例作为正常对照组。实时荧光定量PCR检测外周血单核细胞Toll样受体3、Toll样受体4、髓样分化蛋白2、髓样细胞分化因子88、白细胞介素1β、白细胞介素6、白细胞介素12 mRNA的基因相对表达量;应用流式细胞术检测外周血单核细胞Toll样受体3、Toll样受体4蛋白表达率。结果与结论：①过敏性紫癜患儿Toll样受体4 mRNA及蛋白表达显著高于正常对照组（P 〈 0.05）。紫癜性肾炎组Toll样受体4 mRNA及蛋白表达均显著高于紫癜无肾损害组（P 〈 0.05）。②过敏性紫癜组髓样分化蛋白2、髓样细胞分化因子88、白细胞介素1β、白细胞介素6 mRNA的表达均显著高于正常对照组（P 〈 0.05）,白细胞介素12 mRNA的表达显著低于正常对照组（P 〈 0.05）;紫癜性肾炎组髓样分化蛋白2、髓样细胞分化因子88、白细胞介素1β、白细胞介素6 mRNA的表达显著高于紫癜无肾损害组（P 〈 0.05）,紫癜性肾炎组白细胞介素12 mRNA的表达显著低于紫癜无肾损害组（P 〈 0.05）。③过敏性紫癜组患儿外周血单核细胞Toll样受体4 mRNA与蛋白表达呈正相关（r=0.60,P 〈 0.01）;过敏性紫癜患儿Toll样受体4 mRNA与髓样分化蛋白2、髓样细胞分化因子88、白细胞介素1β、白细胞介素6表达均呈正相关（P 〈 0.01）,与白细胞介素12 mRNA表达呈负相关（r=-0.66,P 〈 0.01）。提示Toll样受体4可能通过髓样细胞分化因子88依赖信号转导途径介导过敏性紫癜的免疫发病机制,Toll样受体4的过度活化可能与过敏性紫癜的肾损伤有关。     

外周血单个核细胞Toll样受体的表达与冠状动脉病变程度的关系

目的观察冠状动脉造影患者外周血单个核细胞Toll样受体（TLR）1～10的表达状况及其与冠状动脉病变程度的关系。方法冠状动脉造影患者436例,根据冠状动脉病变支数,分为多支病变组93例、双支病变组172例、单支病变组98例和冠状动脉造影正常的对照组73例,用流式细胞术检测外周血单个核细胞TLR1～10的表达。用Gensini评分系统对冠状动脉造影结果进行评分。观察TLR1～10在各组中的阳性率的情况,用相关分析研究TLR1～10阳性率与冠状动脉Gensini评分的关系。结果外周血单个核细胞TLR2～6在多支病变组、双支病变组、单支病变组表达的阳性率均显著高于对照组,TLR2（86．36±13．45）％,（81．74±12．68）％,（72．89±10．37）％vs（60．76±11．56）％（均P〈0．01）;TLR3（7．05±2．47）％,（6．94±2．83）％,（7．01±2．21）%vs（5．25±2．06）％（均P〈0．05）;TLR4（39．83±8．34）％,（37．17±8．02）％,（30．35±9．78）%vs（25．86±6．48）％（P〈0．01或〈0．05）;TLR5（18．10±4．46）％,（17．31±4．92）%,（13．62±4．25）％vs（11．34±3．77）％（P〈0．01或〈0．05）;TLR6（9．71±3．60）％,（9．43±3．25）％,（8．62±3．53）％vs（6．84±3．19）％（均P〈0．01）。其中TLR2、4、5在多支病变组、双支病变组的表达阳性率均显著高于单支病变组（均P〈0．01）,其他亚型在各组间差异无统计学意义。相关分析显示,外周血中单个核细胞TLR2～6表达的阳性率与冠状动脉Gensini评分呈正相关,其相关系数分别为0．473,0．327,0．646,0．516,0．304（P〈0．05或〈O．01）。结论冠状动脉病变患者外周血中单个核细胞TLR2～6表达的阳性率增多,TLR2、4、5可反映冠状动脉病变的广泛性;冠状动脉的病变程度与TLR2～6的表达有关。     

过敏性紫癜患儿外周血单核细胞TLR2、TLR4、TLR6及与Treg相关细胞因子的表达

背景：Toll样受体介导的信号通路转导及调节性T细胞异常活化在过敏性紫癜发病中的作用不清楚。目的：研究Toll样受体TLR2、TLR4、TLR6在过敏性紫癜患儿外周血单核细胞的表达及调节性T细胞（Treg）的免疫应答,探讨TLR及Treg活化在敏性紫癜发病机制中的作用。方法：选择处于过敏性紫癜急性期的患儿42例为观察对象,另选取15名门诊健康查体儿童为正常对照组。采用流式细胞术检测外周血单核细胞的TLR2、TLR4、TLR6的蛋白表达量;应用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及实时荧光定量PCR检测外周血单核细胞TLR信号途径分子MyD88 mRNA的基因相对表达量;ELISA法测Treg细胞分泌的转化生长因子β、白细胞介素10的血浆水平;两组间比较采用独立样本t或t’检验,相关性分析采用Pearson相关检验。结果与结论：过敏性紫癜患儿外周血单核细胞的TLR2、TLR4、TLR6蛋白的表达及MyD88 mRNA基因的相对表达量均显著高于对照组（P〈0.01）;过敏性紫癜患儿血浆中转化生长因子β、白细胞介素10均高于对照组（P〈0.05）;过敏性紫癜患儿TLR2、TLR4、TLR6的蛋白表达量与Myd88 mRNA的基因相对表达量呈正相关（P〈0.01）,与血浆白细胞介素10、转化生长因子β水平无明显相关（P〉0.05）。提示TLR2、TLR4、TLR6活化后可能通过MyD88依赖的途径参与敏性紫癜的发病,而过敏性紫癜急性期Treg代偿性活化可能为机体的保护性免疫应答。     

非重症及重症脓毒症患者外周血单核细胞炎性因子分泌及Toll样受体4表达的研究

目的 观察革兰阴性菌感染的非重症及重症脓毒症患者内毒素(LPS)刺激后外周血单核细胞炎性因子分泌及TLR4的表达.方法 以我院ICU革兰阴性菌感染所致脓毒症52例患者为研究对象,28例非重症脓毒症患者,24例重症脓毒症患者,选取30例健康对照者.所有人均晨起空腹采血,分离外周血单核细胞,将细胞加入1 μg/mL细菌LPS培养24 h后流式细胞仪检测单核细胞表面TLR4的表达,同时应用放射免疫法测定外周血单核细胞培养液中TNF-α、IL-10的浓度.结果 ①重症脓毒症患者单核细胞培养上清液中TNF-α的浓度低于非重症脓毒症患者及健康对照组(P<0.05),但IL-10浓度高于其他两组(P<0.05),IL-10/TNF-α比值明显高于非重症脓毒症患者及健康对照组(P<0.01).②三组患者外周血单核细胞LPS刺激后,细胞表面TLR4表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 重症脓毒症患者外周血单核细胞体外给予LPS刺激后,促炎因子表达较非重症脓毒症组下降,且伴有抗炎因子表达的上调,IL-10/TNF-α比值明显升高,显示重症脓毒症患者存在更加严重的免疫抑制现象,但这种现象不能单纯用细胞膜表面TLR4的表达解释,其可能存在更复杂的机制.     

IgA肾病患者外周血单个核细胞Toll样受体4的表达及血清炎症趋化因子的水平

目的研究Ig A肾病(IgAN)患者外周血单个核细胞Toll样受体4(TLR4)的表达及血清中趋化因子MCP-1和炎症因子IL-6的水平,探讨TLR4在IgAN发病中可能的作用。方法将在本科经肾组织活检确诊为IgAN的60例患者(排除继发性和遗传性IgAN)根据蛋白尿程度进行分组,分为轻度蛋白尿组(24 h尿蛋白定量≤1.0 g),中度蛋白尿组(24 h尿蛋白定量1.0~3.0 g)和重度蛋白尿组(24 h尿蛋白定量≥3.0 g)。另取年龄性别相匹配的健康志愿者20例作为健康对照组。分别使用流式细胞仪和Realtime-PCR方法检测外周血单个核细胞(PBMC)中TLR4蛋白和基因的表达,ELISA法检测血清中趋化因子MCP-1和炎症因子IL-6的水平。结果 IgAN组患者PBMC中TLR4的蛋白和基因表达水平以及血清中MCP-1和IL-6的浓度均较健康对照组显著增加(P均0.05)。PBMC中TLR4的蛋白和基因表达水平随着蛋白尿的严重程度而逐渐增高。直线相关分析提示PBMC中TLR4 mRNA的表达水平与24 h尿蛋白定量呈显著正相关(r=0.855,P0.05),而与GFR呈负相关(r=-0.735,P0.05)。MCP-1和IL-6的水平与PBMC中TLR4 mRNA的表达水平呈显著正相关(r=0.746、0.821,P0.05)。结论 IgAN患者PBMC中存在TLR4的表达水平上调,与蛋白尿程度和肾功能水平密切相关。血清中趋化因子MCP-1和炎症因子IL-6的水平也随着PBMC中TLR4的表达水平升高而升高。TLR4可能通过调节机体趋化因子和炎症因子的释放介导了Ig A肾病中的炎症损伤。     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞Toll样受体4基因的表达及临床意义研究

目的探讨Toll样受体4（TLR4）基因在原发性胆汁性肝硬化（PBC）患者、乙型肝炎肝硬化患者及健康对照外周血单个核细胞（PBMC）中的表达差异及其临床意义。方法应用实时荧光定量RT-PCR方法检测30例PBC患者、20例乙型肝炎肝硬化患者及30例健康对照PBMC中TLR4 mRNA的表达水平;γ-谷氨酰转肽酶（GGT）和碱性磷酸酶（ALP）的检测,按临床生化常规上机进行。结果PBC患者及乙型肝炎肝硬化患者PBMC中TLR4 mRNA的表达水平均显著高于健康对照,且以乙型肝炎肝硬化患者升高更为明显。在PBC患者中,TLR4 mRNA的表达水平与血浆ALP及GGT均无显著相关性。结论TLR4 mRNA的表达水平在PBC患者明显上调,但并无疾病特异性。TLR4及其通路的异常可能参与PBC的发病但与疾病的进展程度无关。     

SOCS-3在脓毒症患者外周血单个核细胞中表达的研究

目的探讨细胞因子信号转导抑制因子-3（SOCS-3）在脓毒症发病机制中的作用。方法选择36例脓毒症患者,30例健康志愿者为对照组,应用RT-PCR方法测定SOCS-3在外周血单个核细胞中的表达,并和患者APACHEⅡ评分进行相关分析。结果SOCS-3在脓毒症组和对照组的外周血单个核细胞中均有表达,脓毒症组较对照组表达显著增加（P〈0．001）,SOCS-3 mRNA的表达和脓毒症A—PACHEⅡ评分呈负相关,相关系数（r）为-0．746（P〈0．01）。结论SOCS-3参与了脓毒症的发病过程,SOCS-3的表达在脓毒症患者中可能起着保护作用。