实时荧光定量PCR在人血液循环DNA检测中的应用

循环DNA主要存在于人血浆和血清等体液中，在多种人类疾病中含量升高，具有临床诊断意义和预后判断价值。本研究以人工重组质粒DNA为内参照物，建立双重实时荧光定量PCR检测方法，对健康人血浆和血清DNA含量进行定量测定。[第一段]     

实时荧光定量PCR在食品致病菌检测中的应用

目的研究实时荧光定量PCR在食品致病菌检测中的应用。方法对PCR在不同食品致病菌的检测效果进行比较,分析PCR在食品致病菌检测中的作用。结果实时荧光定量PCR技术在食品致病菌包括沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌等多种致病菌都有着较为有效地检测结果。结论作为一种新兴的检测方法,PCR技术可以快速,准确地检测食品中的各种致病菌。为保障消费者的食品安全工作做出了很大的贡献。     

实时荧光PCR熔解曲线法快速鉴定嗜肺军团菌

摘要：目的：建立特异、快速、敏感的实时荧光PCR熔解曲线基因分型方法,并探讨该法在鉴定嗜肺军团菌中的应用价值。 方法：根据嗜肺军团菌16S rRNA基因保守序列设计引物和猝灭FRET探针建立实时荧光PCR熔解曲线方法,优化引物与探针浓度,用15株嗜肺军团菌、30株非嗜肺军团菌及7株其他病原菌标准菌株验证该方法的特异性、敏感性和重复性,用该法检测117例临床痰标本并进行基因测序。 结果：15株不同血清型的嗜肺军团菌Tm值均为57 ℃;7株非嗜肺军团菌Tm值为43 ℃,1株Tm值为45 ℃;其余22株非嗜肺军团菌和7株其他病原菌均无明显Tm值。该方法最低检出限可达0.1 pg/μL。检测117例痰标本发现3株嗜肺军团菌,与PCR基因测序法检测结果一致。 结论：实时荧光PCR熔解曲线法可特异、快速和敏感地检测嗜肺军团菌,适用于临床痰标本的嗜肺军团菌检测。     

实时荧光定量PCR检测胸水端粒酶活性

端粒酶检测方法从端粒酶重复序列扩增方法（TRAP）、TRAP-ELISA法逐渐发展为实时荧光定量PCR（FQ—PCR）方法。本文采用的FQ—PCR方法对胸水内的端粒酶活性进行检测，现报道如下。     

实时荧光定量PCR非特异性分析

聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)因灵敏度高、操作简便在各个领域得到了广泛的应用。然而,伴随其高灵敏度存在的非特异性问题在一定程度上限制了其应用。不同于普通检测方法,该技术的非特异性问题主要由可以指数扩增的引物二聚体(primer dimer,PD)引起。对此,引物设计时使用的中部同序引物对可以从根本上避免PD的产生,从而解决由其引起的非特异性问题。该文从PCR的发展和本质、PCR非特异性产生的原因和应对策略等方面作一总结及分析。     

实时荧光定量PCR技术运用于肝癌患者基因检测

目的探讨实时荧光定量PCR SYBR Green I探针技术在研究肝癌患者中基因表达情况的可行性。方法运用实时荧光定量PCR SYBR Green I技术,检测肝癌患者癌组织及癌旁组织RAP1GAP基因表达情况。结果实验组和对照组有明显的统计学差异。结论Real-time PCR技术检测目的基因的表达是非常方便快捷准确的方法。     

嗜肺巴斯德菌TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR快速检测方法的建立及应用研究

目的 建立嗜肺巴斯德菌的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR快速检测方法.方法 针对嗜肺巴斯德菌16SrRNA基因设计特异性引物和探针,建立嗜肺巴斯德菌TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR检测方法,并验证该方法的特异度、敏感度和稳定性.对2008～2011年采集的1 680份样本进行检测.结果 嗜肺巴斯德菌TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR检测方法具有高度特异性,对多杀巴斯德菌、产气巴斯德菌、支气管鲍特杆菌、肺炎克雷伯杆菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌均无交叉反应,检测灵敏度达22拷贝.标准曲线显示备浓度范围内具有良好的线性关系,相关系数为0.999,斜率为-3.488,PCR效率为100％.荧光定量PCR检测1 680份样本,检出137份嗜肺巴斯德菌阳性.该方法可直接从样本中特异性地检出嗜肺巴斯德菌.结论 TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法具有灵敏、特异、稳定的特性,适用于嗜肺巴斯德菌的快速检测.     

乙型肝炎病毒核酸的实时荧光定量PCR检测及其临床意义

目的建立实时荧光定量PCR(rea l-tim e fluorescence quan titative PCR,RFQ-PCR)检测HBV-DNA含量的方法,探讨其在乙型肝炎预防、诊断、治疗及判断病情等方面的临床应用价值。方法在HBV S基因高保守区设计了特异性的引物和探针,利用T aqM an探针的基本原理,PCR扩增目的片段并实时检测产物的荧光强度,根据标准品建立的标准曲线,由软件自动计算出待测样本中HBV-DNA的准确含量。结果220例临床样本的检测结果显示,乙肝大三阳患者HBV-DNA阳性率(98.8%)显著高于其它各组(P<0.01),病毒平均含量为7.52±0.43 cop ies/m l;小三阳患者HBV-DNA阳性率低于大三阳组(P<0.01),但平均病毒含量与大三阳组无差异(P>0.05),高达7.41±0.26 cop ies/m l;单独HB sA g阳性和单独HB sA b阳性组HBV-DNA阳性率分别为56.4%,19.2%,平均病毒含量分别为5.35±0.32 cop ies/m l,4.02±0.31 cop ies/m l;80例献血员血清仍有3例HBV-DNA阳性,其病毒含量低于其它各组。结论RFQ-PCR检测HBV-DNA含量比EL ISA法具有更好的灵敏度和特异性,能准确反映HBV在体内的复制情况,对临床上抗病毒药物的选择和判断疾病的预后意义重大。     

实时荧光PCR检测军团菌研究进展

实时荧光定量PCR(polymerase chain reaction,聚合酶链反应)能对目标基因进行定性分析,同时也可以对其起始浓度进行定量,且有可减少交叉污染和缩短样品检测时间、无需对PCR终产物进行凝胶电泳分析、高敏感性和特异性等优点,近年来被广泛用于军团菌分型检测。本文对用于军团菌实时荧光YPCR检测的目的基因和检测方法作简要综述,并对其优劣和实用价值进行探讨。     

实时荧光定量PCR在肺炎支原体DNA检测中的应用

支原体（Mycoplasma）是1898年Nocard等发现的一种类似细菌但不具胞壁的原核微生物。支原体种类繁多,对人致病的有肺炎支原体、人型支原体、解脲脲原体等。肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae, MP）引起的主要疾病有原发性非典型肺炎、咽炎和气管支气管炎。MP是儿科患者呼吸道感染的常见病原体之一。     

实时荧光定量检测中引物二聚体的优化

实时定量检测中引物二聚体的存在会严重影响检测结果的准确性，本文提出多方面的优化策略，以减少或消除实时定量检测中引物二聚体的集聚。     

实时荧光定量PCR检测沙眼衣原体的分析

目的对实时荧光定量PCR检测沙眼衣原体的效果进行分析。方法选取我院拟诊为泌尿生殖道感染患者作为研究样本,对所有患者的分泌物进行分析,分别通过金免疫层析CT抗原检测法实施检验,以及通过RT-PCR对CT的核酸进行检测,对比最终的两组检测结果。结果应用RT-PCR检测检测方法阳性检出效果明显高于对照组的阳性检出效果,对比呈现显著差异,有统计学分析价值(P<0.05)。结论在对沙眼衣原体感染患者进行诊断检查时,应用RT-PCR检测准确率相对较高,能够成为常规方法的补充,值得在临床上广泛应用普及。     

实时荧光定量PCR检测HBV—DNA在诊断乙型肝炎中的价值

目的：分析实时荧光定量PCR（Real Time PCR）检测HBV—DNA在诊断乙型肝炎病毒（HBV）中的作用。方法：分别用实时荧光定量PCR和ELISA方法检测389份临床病人血清，并用t检验分析比较HBV—DNA阳性结果。结果：在血清学标志物组合模式中，多种组合都可检测出HBV—DNA含量，尤其是在传统认为没有HBV感染的血清中也可检测到一定程度的HBV—DNA含量。结论：实时荧光定量PCR检测HBV—DNA是乙肝病毒在体内复制和传染的可靠指标，特别是在反映HBeAg阴性的乙型肝炎患者是否有病毒复制的诊断中有重要意义。     

实时荧光定量PCR的研究进展及其应用

多聚酶链反应飞速的发展使其成为了分子生物学实验室重要的工具，实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR）以其敏感性高、重复性好、速度快和污染少使PCR技术又向前迈进了一步。本文对real-time Q-PCR技术的原理、五种主要的荧光化学及定量方法作一介绍，同时也讨论了此技术存在的不足，并对其目前在研究领域中主要的应用进行了概述。     

荧光环介导恒温扩增技术检测嗜肺军团菌方法的建立

目的探讨利用环介导恒温扩增技术(LAMP)建立可以准确快速检测嗜肺军团菌的方法。方法选取嗜肺军团菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞杆菌、大肠埃希氏菌、阪崎肠杆菌、单核细胞增生李斯特氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、福氏志贺氏菌、副溶血性弧菌菌株,根据嗜肺军团菌毒力mip基因的6个特殊区域,使用Primer Explorer Version 4软件设计LAMP引物(mip-1、mip-2、mip-3),提取病原菌基因组DNA进行LAMP,评价其特异性、最低检测限和稳定性。结果筛选出mip-3引物在测定嗜肺军团菌的LAMP反应体系中扩增约10min出峰且峰值较高;非嗜肺军团菌菌株没有扩增反应;LAMP检测限可达100fg/μL;mip-3引物在10次重复检测中几乎同时出峰,稳定性良好。结论建立的LAMP检测方法具有特异性强、稳定性高特点,能快速、准确检测出嗜肺军团菌,具有较大的推广及应用前景。     

实时荧光定量PCR检测布鲁氏菌核酸DNA的应用评价

目的探讨实时荧光定量PCR检测布鲁氏菌核酸DNA浓度的检测范围和检测健康人全血中核酸DNA的Ct本底值。方法采用试剂盒提取纯菌、健康人和临床患者血液中的核酸DNA,应用实时荧光定量PCR进行检测。结果经检测,40份健康人群血液标本Ct值平均值为37.0,标准差为1.9,Ct值95%置信区间为33.0~38.8。将布鲁氏菌核酸DNA标准品倍比稀释(56.2 ng^0.026 5 fg),实时荧光定量PCR检测灵敏度为6.7fg。结论实时荧光定量PCR检测纯菌核酸DNA的灵敏度相当于2个基因组DNA拷贝数,但用于检测血液标本尚待进一步研究。     

西尼罗河病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及其应用研究

建立特异、敏感、快速检测西尼罗河病毒(WNV)的SYBR Green实时荧光定量PCR方法.方法:针对西尼罗河病毒囊膜蛋白(E)的保守序列设计引物,建立WNV的实时荧光定量检测方法,并验证该方法的特异性、敏感性以及稳定性.对保存的54例WNV感染者的血清样本进行检测,分析其检测的准确性.结果:建立的SYBR Green实时荧光定量PCR方法对WNV的检测具有高度的特异性,而对日本脑炎病毒(JEV)、圣路易斯脑炎病毒(SLEV)等均无交叉反应,检测的灵敏度可达到100 pg.标准曲线具有较好的线性关系,相关系数为0.995,实时荧光定量PCR效率为100％.对54例WNV感染样本进行检测,准确率高达98.15％.结论:实时荧光定量PCR技术检测WNV具有较高的特异性、敏感性和稳定性,可作为临床诊断WNV的手段.     

实时荧光定量PCR的研究进展及其应用

多聚酶链反应飞速的发展使其成为了分子生物学实验室重要的工具 ,实时荧光定量PCR(real timequantitativePCR)技术以其敏感性高、重复性好、速度快和污染少使PCR技术又向前迈进了一步。本文对real timeQ PCR技术的原理、五种主要的荧光化学及定量方法作一介绍 ,同时也讨论了此技术存在的不足 ,并对其目前在研究领域中主要的应用进行了概述。     

荧光定量PCR技术在结核杆菌检测中的应用

目的：建立结核病荧光定量PCR快速检测方法。方法：建立检测结核杆菌的荧光定量PCR方法并进行特异性、敏感性、重复性实验，对临床样品进行检测分析。结果：该方法的敏感性达到了1Pg，且特异性高．重复性好。应用荧光定量PCR法及抗酸染色、结核杆菌培养法，对332例活动性肺结核患者晨痰、215例活动性肺结核患者外周血、187例结核性胸膜炎患者胸水进行检测．荧光定量PCR技术阳性率分别为53．0％（176／332）、34．4％（74／215）、36．9％（69／187），经统计学比较分析，3种方法检测率差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：荧光定量PCR技术具有简便、快速、防污染、敏感性与特异性高等优点，是结核病诊断的有效方法之一。[著者文摘]