不同方法处理对同种异体皮质骨板移植组织相容性的影响

目的 :探讨深低温冷冻、环氧乙烷和γ射线辐照对同种异体皮质骨板移植组织相容性的影响。方法 :分别移植经过 - 70℃深低温冷冻 4周、 - 70℃深低温冷冻 4周 48℃环氧乙烷灭菌、 - 70℃深低温冷冻 4周 2 5kGyγ射线辐照处理的山羊同种异体皮质骨板 ,对照组移植异体山羊新鲜皮质骨板。检测山羊外周血CD4 、CD8 以及移植骨板周围软组织炎性细胞浸润。结果 :新鲜骨板移植组CD4 明显升高 ,移植骨板周围软组织大量淋巴细胞、浆细胞等炎性细胞浸润 ,CD4 升高以及炎性细胞浸润在术后 6周达到顶峰。除深低温组术后 6周CD4 升高外 ,深低温冷冻、深冻 环氧乙烷及深冻 γ射线辐照组T淋巴细胞亚群无明显改变 ,移植骨板周围软组织少量淋巴细胞等炎性细胞浸润。结论 :新鲜同种异体皮质骨板移植有较强的抗原性 ,诱发宿主较强烈免疫排斥反应 ;深低温冷冻、环氧乙烷和γ射线辐照处理皮质骨板移植宿主不发生免疫排斥反应 ,组织相容性较好。     

异体移植气管中骨形态发生蛋白诱导软骨再生的实验

目的:比较骨形态发生蛋白2在犬自体、异体、冷冻异体气管移植体内诱导软骨再生的作用。方法:实验于2004-03/10在第四军医大学唐都医院实验外科完成。21只杂种犬随机等分为3组,自体移植组、异体移植组、冷冻后的异体移植组。各组动物颈部切除4环气管段作为移植体,植入骨形态发生蛋白2后埋入腹腔大网膜中。骨形态发生蛋白2均以胶原溶液作为缓释载体,用注射器直接注入各软骨环间。术后5周处死实验动物,通过对标本组织学观察、碱性磷酸酶活性和钙含量测定,对各标本的新生软骨进行观察和定量分析。结果:各组实验犬均存活到预杀期。①定量组织学观察:各实验组骨形态发生蛋白2植入区均可见新生软骨细胞和软骨岛,HPLAS-1000病理图像分析系统计算各环间新生软骨的像素面积,自体移植组、异体移植组、冷冻后的异体移植组的新生软骨面积差异有显著性犤2573.6±738.4,1691.3±743.6,2482.9±827.5,F=5.711,P<0.05犦自体移植组和深低,而温冷冻后的同种异体移植组差异无显著性。②碱性磷酸酶活性和钙含量测定:自体移植组、冷冻后的异体移植组与异体移植组均差异有显著性犤体移植组:(7.00±0.50)μkat/g,(5.48±1.15)mg/g;冷冻后的异体移植自组:(7.00±0.83)μkat/g,(5.03±0.91)mg/g;异体移植组:(5.00±0.67)μkat/g,(3.57±0.98)mg/g,P<0.05犦,自体移植组与深低温冷冻后的同种异体移植组间无显著性差异(P>0.05)。结论:骨形态发生蛋白2能在气管移植体内有效地诱导出新生软骨,在冷冻后的异体气管移植体内的作用效果与自体气管移植体内相似,明显优于异体气管移植体。     

深低温冻储同种异体气管移植并骨髓间充质干细胞移植后气管上皮细胞血管内皮生长因子的表达

背景:深低温冷冻后的组织可以保持其原有的活力和组织完整性,并能消减抗原性。目的:静脉移植骨髓间充质干细胞合并深低温处理供体气管后进行同种异体气管移植,观察骨髓间充质干细胞在促进上皮再生和再血管化后的作用。方法:用深低温冻储2周和6周的气管进行Wistar大鼠同种异体气管移植后,用PKH-26标记的3～5代骨髓间充质干细胞经鼠尾静脉移植入受体内,等量的磷酸盐缓冲液注射作为实验对照。观察供体气管的组织学和血管内皮生长因子蛋白表达。结果和结论:骨髓间充质干细胞移植合并深低温冻储后的移植气管结构完整,软骨无变性坏死;深低温6周的移植气管上皮再生情况优于2周。骨髓间充质干细胞移植组的上皮细胞表达血管内皮生长因子水平高于磷酸盐缓冲液对照组。结果提示,骨髓间充质干细胞移植合并深低温冻储6周后移植气管存活期好于深低温冻储2周;骨髓间充质干细胞能够促进移植物周围新生血管的增加,从而促进气管损伤的修复。     

深低温冻储同种异体气管移植并骨髓间充质干细胞移植后气管上皮细胞血管内皮生长因子的表达

背景：深低温冷冻后的组织可以保持其原有的活力和组织完整性,并能消减抗原性。目的：静脉移植骨髓间充质干细胞合并深低温处理供体气管后进行同种异体气管移植,观察骨髓间充质干细胞在促进上皮再生和再血管化后的作用。方法：用深低温冻储2周和6周的气管进行Wistar大鼠同种异体气管移植后,用PKH-26标记的3～5代骨髓间充质干细胞经鼠尾静脉移植入受体内,等量的磷酸盐缓冲液注射作为实验对照。观察供体气管的组织学和血管内皮生长因子蛋白表达。结果和结论：骨髓间充质干细胞移植合并深低温冻储后的移植气管结构完整,软骨无变性坏死;深低温6周的移植气管上皮再生情况优于2周。骨髓间充质干细胞移植组的上皮细胞表达血管内皮生长因子水平高于磷酸盐缓冲液对照组。结果提示,骨髓间充质干细胞移植合并深低温冻储6周后移植气管存活期好于深低温冻储2周;骨髓间充质干细胞能够促进移植物周围新生血管的增加,从而促进气管损伤的修复。     

异体移植气管中骨形态发生蛋白诱导软骨再生的实验

目的：比较骨形态发生蛋白2在犬自体、异体、冷冻异体气管移植体内诱导软骨再生的作用。方法：实验于2004-03／10在第四军医大学唐都医院实验外科完成。21只杂种犬随机等分为3组，自体移植组、异体移植组、冷冻后的异体移植组。各组动物颈部切除4环气管段作为移植体，植入骨形态发生蛋白2后埋入腹腔大网膜中。骨形态发生蛋白2均以胶原溶液作为缓释载体，用注射器直接注入各软骨环间。术后5周处死实验动物，通过对标本组织学观察、碱性磷酸酶活性和钙含量测定，对各标本的新生软骨进行观察和定量分析。结果：各组实验犬均存活到预杀期。①定量组织学观察：各实验组骨形态发生蛋白2植入区均可见新生软骨细胞和软骨岛，HPLAS-1000病理图像分析系统计算各环间新生软骨的像素面积，自体移植组、异体移植组、冷冻后的异体移植组的新生软骨面积差异有显著性[2573．6&;#177;738．4，1691．3&;#177;743．6，2482．9&;#177;827．5，F=5．711，P〈0．05]，而自体移植组和深低温冷冻后的同种异体移植组差异无显著性。②碱性磷酸酶活性和钙含量测定：自体移植组、冷冻后的异体移植组与异体移植组均差异有显著性[自体移植组：（7．00&;#177;0．50）μkat／g，（5．48&;#177;1．15）mg／g；冷冻后的异体移植组：（7．00&;#177;0．83）μkat／g，（5．03&;#177;0．91）mg／g；异体移植组：（5．00&;#177;0．67）μkat／g，（3．57&;#177;0．98）mg／g，P〈0．05]，自体移植组与深低温冷冻后的同种异体移植组间无显著性差异（P〉0．05）。结论：骨形态发生蛋白2能在气管移植体内有效地诱导出新生软骨，在冷冻后的异体气管移植体内的作用效果与自体气管移植体内相似，明显优于异体气管移植体。     

同种异体骨软骨柱移植治疗关节软骨缺损

背景:同种异体骨软骨移植修复关节软骨损伤可以解决自体骨软骨来源有限的问题,但存在免疫排斥问题.目的:观察以深低温保护剂保护的同种异体骨软骨柱移植修复兔关节软骨缺损的效果,并与自体关节软骨移植作比较.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008 05/10在武汉协和医院骨科实验室完成.材料:24只成年健康新西兰兔中8只用于异体骨软骨柱的制备,16只随机分成同种异体移植组和自体移植组,每组8只.方法:使用横穿钉套筒提取兔股骨内侧髁骨软骨柱,将骨软骨柱在4℃条件下放入盛有10%二甲基亚砜的冻存管中2 h,将冻存管移入程序冷冻仪内以1℃/min速率降至-75℃,放入-196℃液氮罐底部保存3周备用.用横穿钉钻头在兔左膝关节股骨内侧髁垂直于软骨面制造缺损,缺损深4 mm,直径4.45 mm,自体移植组取右膝关节内侧髁骨软骨柱植入到左侧膝关节相应缺损处,异体移植组将经过程序性深低温冷冻保存的同种异体骨软骨柱移植到相应缺损处.主要观察指标:术后12周观察兔关节活动度、修复组织的质地等情况.以苏木精-伊红染色观察关节软骨组织的病理变化,以半定量改良Wakitani score法进行评估.以免疫组织化学染色观察Ⅱ型胶原分泌情况.结果:两组实验动物关节活动度正常.异体移植组移植处关节软骨面较光整,与周围正常关节软骨高度一致,结合紧密,颜色接近,与自体移植组相似.两组移植后,兔关节缺损处被透明软骨覆盖,潮线整齐,细胞排列有序,分泌大量基质,异体移植组移植处软骨深层及软骨下骨处可见微小裂隙,未见淋巴细胞和浆细胞浸润.同种自体与异体骨软骨移植组Wakitaniscore评分结果无统计学差异,总分接近,修复软骨Ⅱ型胶原免疫组织化学染色均强阳性.结论:冷冻同种异体骨软骨柱移植可修复全层小面积关节软骨缺损,术后近期软骨细胞存活,可分泌软骨基质,未见明显排斥反应,与自体骨软骨柱修复的兔关节软骨缺损在组织学上相近.     

异位气管移植模型中上皮细胞的增殖与凋亡

背景：异位气管移植中上皮细胞的变化过程尚不清楚,有研究表明在上皮增殖同时伴随有不可逆的细胞死亡,并且气道上皮再生与死亡发生在移植气道闭塞之前。目的：观察异位鼠气管移植过程中气道上皮细胞的增殖与凋亡情况。方法：将异体BALB/c小鼠气管植入BALB/c小鼠颈背部皮下,移植后不注射环孢素A。将BALB/c小鼠气管植入C57BL/6小鼠颈背部皮下,一组不注射环孢素A,另一组全程腹腔注射环孢素A。移植后第3,7,14,21,30天苏木精-伊红染色评价气道上皮的完整性、黏膜下炎症细胞浸润和纤维组织增生情况;测定移植气管中BrdU标记指数及TUNEL阳性细胞数。结果与结论：受体BALB/c小鼠移植后第3天气道上皮细胞轻度损伤丢失,第7～21天,气道上皮逐渐恢复正常,第30天,气道上皮接近正常上皮;BrdU标记指数变化范围为3%～5%;TUNEL阳性细胞数基本无变化。受体C57BL/6小鼠移植后第3天,气道上皮轻度损伤,第7～21天,气管上皮脱落、坏死,开始出现纤维增殖并逐渐加重,第30天时,上皮细胞完全消失,管腔被纤维组织填塞,接近闭塞;移植后第14天,BrdU标记指数达到最高,未注射环孢素A组高于注射环孢素A组（P=0.000）,移植后第21,30天,标记指数明显降低;移植后第21天,未注射环孢素A组TUNEL阳性细胞数达到最大值,注射环孢素A组于移植后第14天达最大值。说明异位气管移植上皮增殖同时伴随有不可逆的细胞凋亡,环孢素A可以减轻闭塞性细支气管炎的发病程度,但并不能阻止其发生。     

异位气管移植模型中上皮细胞的增殖与凋亡

背景:异位气管移植中上皮细胞的变化过程尚不清楚,有研究表明在上皮增殖同时伴随有不可逆的细胞死亡,并且气道上皮再生与死亡发生在移植气道闭塞之前。目的:观察异位鼠气管移植过程中气道上皮细胞的增殖与凋亡情况。方法:将异体BALB/c小鼠气管植入BALB/c小鼠颈背部皮下,移植后不注射环孢素A。将BALB/c小鼠气管植入C57BL/6小鼠颈背部皮下,一组不注射环孢素A,另一组全程腹腔注射环孢素A。移植后第3,7,14,21,30天苏木精-伊红染色评价气道上皮的完整性、黏膜下炎症细胞浸润和纤维组织增生情况;测定移植气管中BrdU标记指数及TUNEL阳性细胞数。结果与结论:受体BALB/c小鼠移植后第3天气道上皮细胞轻度损伤丢失,第7～21天,气道上皮逐渐恢复正常,第30天,气道上皮接近正常上皮;BrdU标记指数变化范围为3%～5%;TUNEL阳性细胞数基本无变化。受体C57BL/6小鼠移植后第3天,气道上皮轻度损伤,第7～21天,气管上皮脱落、坏死,开始出现纤维增殖并逐渐加重,第30天时,上皮细胞完全消失,管腔被纤维组织填塞,接近闭塞;移植后第14天,BrdU标记指数达到最高,未注射环孢素A组高于注射环孢素A组(P=0.000),移植后第21,30天,标记指数明显降低;移植后第21天,未注射环孢素A组TUNEL阳性细胞数达到最大值,注射环孢素A组于移植后第14天达最大值。说明异位气管移植上皮增殖同时伴随有不可逆的细胞凋亡,环孢素A可以减轻闭塞性细支气管炎的发病程度,但并不能阻止其发生。     

冷冻对同种异体鼠坐骨神经移植免疫反应的影响

目的 探讨应用冷冻法与免疫抑剂法对同种异体鼠坐骨神经再生效果的比较。方法 实验分为新鲜自体神经移植组、新鲜异体神经移植组、供体神经冷冻后异体神经移植组、异体神经移植组后应用免疫抑制剂组。于移植后3周各组分别进行电生理学、组织学、电镜、混合淋巴细胞培养及迟发性超敏反应检查神经移植效果。结果 各组神经移植效果由优至差排序为自体神经移植组、冷冻神经移植组、应用免疫抑制剂组、新鲜异体神经移植组。结论 周围神经的细胞成份可被低温保存，移植后可存活并具有功能，冷冻法优于应用免疫抑制剂法。     

冷冻法与免疫抑制剂法对鼠异体神经移植影响的比较研究

目的：探讨应用冷冻法与免疫抑制剂法对同种异体鼠坐骨神经再生效果的比较。方法：实验分为新鲜自体神经移植组、新鲜异体神经移植组、供体神经冷冻后异体神经移植组、异体神经移植后应用免疫抑制剂组。于移植后3周各组分别进行电生理学、组织学、电镜、混合淋巴细胞培养及迟发性超敏反应检测神经移植效果。结果：各组神经移植效果由优至差排序为自体神经移植组、冷冻神经移植组、应用免疫抑制剂组、新鲜异体神经移植组。结论：周围神经的细胞成分可被低温保存，移植后可存活并具功能，冷冻法优于应用免疫抑制剂法。