丹参体外抑制类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖的研究

目的 检测丹参体外对类风湿关节炎（RA）成纤维样滑膜细胞（FLSs）增殖的影响。方法 用不同浓度丹参处理RA FLSs 24 h后,采用MTT法检测RA FLSs的增殖水平;用流式细胞仪检测其凋亡百分率。结果 加入不同浓度丹参处理RA FLSs 24 h后,细胞增殖受到抑制（P＜0.05）,并在一定丹参浓度范围内（0～1.56 mg/ml）呈现剂量相关性,当丹参浓度达到1.56 mg/ml时,细胞增殖抑制达到平台期。对照组与不同浓度丹参处理组凋亡细胞百分率比较,在丹参浓度为0.195 mg/ml时差异不明显,当丹参浓度为0.39 mg/ml时差异有显著统计学意义（P＜0.05）。结论 丹参在体外抑制RA FLSs增殖,可诱导细胞凋亡。     

LncRNA调控类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的研究进展

长链非编码RNA(LncRNA)是一类具有调控功能的长度大于200个核苷酸的非编码RNA分子。LncRNA的生物学功能广泛,在疾病的发生发展及维持免疫系统稳态的过程中扮演着非常重要的角色,特别是自身免疫性疾病。成纤维样滑膜细胞是关节滑膜的主要效应细胞。LncRNA与类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的持续增生、迁移、侵袭、调亡、炎症因子以及血管翳的形成密切相关。若能明确类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中LncRNA的作用机制,将为类风湿关节炎及其他自免性疾病的诊治提供新思路。     

沙利度胺对类风湿关节炎滑膜成纤维样细胞影响的体外研究

目的研究沙利度胺(Thalidomide)对类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维样细胞(FLS)体外培养时的增生殖分化特性的影响。方法关节镜、关节活检针取RA患者滑膜组织,分离培养和鉴定FLS,MTT法和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法观察沙利度胺对FLS细胞存活分数(SF)和c-fos、COX-2mRNA表达。结果RA-FLS体外培养呈良性增生。沙利度胺对RA-FLS的SF值的抑制作用最强(P<0.05)。生理剂量的沙利度胺干预时的浓度与FLS的SF值呈负相关。RA-FLS的c-fos、环氧化酶2(COX-2)mRNA表达率高,加入沙利度胺共孵育3天后c-fos和COX-2mRNA的表达率均明显下降。结论培养和鉴定RA滑膜细胞,证实体外培养传代的RA-FLS为非恶性无限制增生。实验剂量下沙利度胺通过抑制c-fos、COX-2的表达、降低FLS增殖能力等不同途径,发挥对RA滑膜细胞的免疫调节作用。     

Smoothened表达对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞RhoA/ROCK通路的影响

目的初步探讨Sonic Hedgehog(Shh)信号通路分子Smoothened(Smo)对类风湿关节炎(RA)成纤维滑膜细胞(FLS)RhoA/ROCK通路相关分子的影响。方法收集病情活动(DAS28≥3.2)RA患者关节镜手术或关节置换术切除的滑膜组织,组织块培养法培养RA-FLS作为细胞模型,流式细胞术检测CD55阳性率鉴定细胞,然后分别予Smo分子激动剂Purmorphamine或抑制剂KAAD-Cyclopamine处理,应用GST-pull down法检测RhoA活性,Western blot检测ROCK活性与Smo蛋白表达。结果与对照组相比,RA-FLS经Purmorphamine刺激后,活性RhoA蛋白、磷酸化MYPT1蛋白及Smo蛋白均上调(P<0.05);经KAAD-Cyclopamine处理后,活性RhoA蛋白、磷酸化MYPT1蛋白及Smo蛋白均下调(P<0.05)。结论 RA-FLS Smo表达可影响RhoA/ROCK信号的传导。Smo可能参与了RA-FLS中Shh信号通路非经典途径的调控。     

苦参碱对人成纤维样滑膜细胞生长的影响

目的：探讨苦参碱对类风湿关节炎的潜在治疗作用。方法原代培养人关节成纤维样滑膜细胞,传至第3～5代时,以0．4、0．8、1．2、1．6、2．0mg／mL等不同浓度的苦参碱处理细胞,分别于作用后24、48h用倒置显微镜观察细胞形态。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT ）法检测不同浓度苦参碱处理的细胞生长情况,计算抑制率。结果不同浓度的苦参碱均可抑制人成纤维样滑膜细胞生长,MTT 检测结果显示细胞抑制率为2．52％～25．74％,随苦参碱药物浓度增加和处理时间延长,抑制作用增强。结论苦参碱可抑制人成纤维样滑膜细胞生长,可作为治疗类风湿关节炎的潜在药物。     

三氧化二砷诱导类风湿关节炎滑膜细胞凋亡作用的研究

目的 观察三氧化二砷(ATO)对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(HFLS-RA)凋亡的作用.方法 将HFLS-RA分为单纯培养基空白对照组和0.5、2、8 μmol/L ATO实验组.ATO作用72 h后,电镜下观察细胞的病理改变,采用四唑氮法(MTT)检测ATO对HFLS-RA生长的影响.结果 ATO可以诱导HFLS-RA的凋亡,ATO呈现时间和剂量依赖性抑制HFLS-RA生长的作用.结论 ATO可以抑制HFLS-RA的生长,促进HFLS-RA的凋亡.     

程序性细胞死亡分子5在类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中的表达与意义

目的:程序性细胞死亡分子5作为一个重要的凋亡正调控分子,在许多疾病的发生发展过程中起着重要的作用,但有关其在类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中的作用研究甚少.实验拟验证程序性细胞死亡分子5在类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中的表达水平及细胞定位分布,探讨程序性细胞死亡分子5在类风湿关节炎发病中的可能作用.方法:实验于2005-06/2006-10在北京大学人民医院关节病诊疗研究中心完成.①实验材料:滑膜均取材于北京大学人民医院关节病诊疗研究中心行人工全膝关节表面置换术的类风湿关节炎或骨关节炎患者.所有患者均参照美国风湿病学会标准确诊.术前获得患者知情同意,并经北京大学人民医院伦理委员会批准.②实验方法:原代培养并传代分离获得型别均一的成纤维样滑膜细胞,提取细胞RNA和蛋白.③实验评估:实时定量聚合酶链反应及蛋白免疫印迹检测类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞和骨关节炎成纤维样滑膜细胞中程序性细胞死亡分子5 mRNA和蛋白的表达水平:制备细胞爬片采用免疫组织化学技术分析程序性细胞死亡分子5在成纤维样滑膜细胞中的定位分布特征.结果:①相对于骨关节炎,分离培养的类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中程序性细胞死亡分子5在mRNA和蛋白水平上表达下调.②类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中程序性细胞死亡分子5的下调与抗凋亡分子Bcl-2的上调是协调一致的.③程序性细胞死亡分子5蛋白主要定位于体外培养的成纤维样滑膜细胞的胞浆中.结论:程序性细胞死亡分子5可能参与类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞对凋亡刺激信号所产生的凋亡抑制过程,在类风湿关节炎的病理演变过程中可能具有抑制凋亡的作用.     

卵泡抑素样蛋白1在类风湿关节炎中的作用

目的研究卵泡抑素样蛋白1(FSTL1)与类风湿关节炎(RA)活动度的相关性。方法 20例RA患者纳入观察组,20例非RA患者纳入对照组。用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定20例RA患者治疗前后的血清FSTL1水平;魏氏法测定患者治疗前红细胞沉降率(ESR),免疫透射比浊测定C反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF)水平,抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体酶联免疫试剂盒检测抗CCP抗体,并进行疾病活动指数28(DAS28)评分。用免疫印迹法测定两组被试成纤维样滑膜细胞(FLSs)中FSTL1的水平。结果观察组患者血清FSTL1水平与ESR、CRP、RF、抗CCP抗体及DAS28呈较好的相关性(P<0.05);观察组关节组织FSTL1蛋白相对表达量明显高于对照组(P<0.05);观察组治疗后,血清FSTL1水平明显低于治疗前(P<0.05)。结论 FSTL1可作为RA患者疾病活动度的新炎性标志物。     

双向电泳和质谱技术在类风湿关节炎滑膜细胞差异蛋白分析中的应用及意义

目的 采用2-DE和质谱技术分析RA患者和创伤件关节炎患者关节滑膜组织中FLS蛋白质组学的变化,寻找RA关节滑膜特异性自身抗原.方法 采用2-DE分离6例创伤性关节炎患者及3例RA患者关节滑膜组织中FLS总蛋白质,凝胶经银染显色和图像数据分析识别差异蛋白质点,并用MALDI-TOF-MS对筛选出的差异蛋白质点进行鉴定.结果 RA患者与创伤性关节炎患者中的FLS蛋白质通过2-DE检测,分别检出1 633、1 603个蛋白质点;对2组相互匹配的蛋白质点进行差异分析后,其中蛋白质差异量大于3倍的差异点共有92个,从中选取在RA患者FLS中表达上调的33个差异蛋白质点进行MALDI-TOF-MS 鉴定分析,并与IPI和Swiss-Prot数据库进行比对,共鉴定出包括肿瘤型丙酮酸激酶、α-烯醇化酶、二硫键异构酶A3 前体、谷胱甘肽转移酶、泛素结合酶E2K、血小板活化因子乙酰水解酶、二氢嘧啶酶样2、腺苷酸酶、转醛醇酶、乙酰基辅酶A异构酶、26S蛋白调节亚单位S6a、膜联蛋白A11、过氧化物还原酶1、人色氨酰tRNA合成酶、核纤层蛋白、肌间蛋白、核基质蛋白、肌动蛋白、T-复合物多肽1、葡萄糖调节蛋白75、αB-晶体蛋白、葡萄糖调节蛋白78、未知蛋白:如PSMFA和SELENBP1等30个与RA发病有关的蛋白.结论 RA患者与创伤性关节炎患者FLS间存在差异表达的蛋白质,这些差异蛋白有可能是构成RA关节滑膜的相关自身抗原,并可能在诱导RA自身免疫反应中发挥一定作用.     

敲减Akt表达对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖的影响

目的:研究慢病毒介导Akt靶向的RNA干扰对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RAFLS)增殖的影响。方法:慢病毒表达载体pL/Akt转染RAFLS并表达靶向Akt的siRNA序列,采用RT-PCR和Western Blot检测Akt表达,MTT法检测RAFLS增殖能力的变化。结果:转染pL/Akt后,RAFLS中Akt1、Akt2的mRNA分别下降了65%和68%以上,Akt蛋白的表达量在48h后下降76.19%(P<0.05),RAFLS细胞增殖在48、72、96h分别下降了27.50%、44.69%和56.80%(P<0.05)。结论:慢病毒表达载体pL/Akt能够降低Akt蛋白表达水平,并显著抑制RAFLS增殖。     

Eicosapentaenoic Acid suppresses the proliferation of synoviocytes from rheumatoid arthritis

Eicosapentaenoic acid (EPA) is essential for normal cell growth, and may play an important role in inflammatory and autoimmune disorders including rheumatoid arthritis. We investigate that EPA could suppress the proliferation of fibroblast like synoviocytes in vitro. We treated synoviocytes with 1 to 50 microM EPA and measured cell viabilities by the modified MTT assay. We sorted the number of them in sub G1 stage by fluorescence-activated cell sorting caliber. And we stained them by light green or Hoechst 33258, and investigate microscopic appearance. The cell viabilities were decreased at 30 microM, 40 microM, and 50 microM of EPA comparing to 0 microM of EPA. The half maximal concentration of synoviocytes inhibition was approximately 25 microM. At day 1 and day 3, cell number was also decreased at 50 microM EPA comparing to control. FACS caliber indicated the number of synoviocytes in sub G1 stage did not increase in each concentration of EPA. Hoechst staining indicated normal chromatin pattern and no change in a nuclear morphology both in EPA treated synoviocytes and in untreated synoviocytes. These findings suggest that EPA could suppress the proliferation of synoviocytes in vivo dose dependently and time dependently, however, the mechanism is not due to apoptosis.     

Prognostic significance of synovial fluid analysis in rheumatoid arthritis

Thirty patients with definite rheumatoid arthritis and hydropsy in a knee joint were followed for 42 months in a prospective study. The knee joints were initially aspirated and 15 synovial fluid variables investigated. The patients were split into two groups, those with and those without progress of radiologically detected destruction in the knee joints during the follow-up. Of the synovial fluid variables at the start synovial fluid proteins (P = 0.002) and acid phosphatase (P = 0.03) differed statistically significantly between the groups, both being higher in patients with worsening of knee joint. The results suggest that high synovial fluid proteins and acid phosphatase are predictors of poor prognosis in a joint affected by rheumatoid arthritis.     

沙利度胺对实验性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡的影响

目的 研究不同浓度沙利度胺对体外培养成纤维细胞样滑膜细胞(FLS)凋亡的影响.方法 体外培养及纯化FLS,分为6组:对照组,脂多糖(LPS)组,LPS+高剂量沙利度胺(50 mg/L)组,LPS+中剂量沙利度胺(5 mg/L)组,LPS+低剂量沙利度胺(0.5 mg/L)组,LPS+甲氨蝶呤(MTX)组.48小时后显微镜及电镜观察不同处理组FLS形态,膜黏连蛋白-5/碘化丙啶(Annexin- V/PI)联合标记法测定FLS凋亡率及坏死率.结果 ①原代滑膜细胞培养3代后以梭形且呈极向排列FLS为主;②沙利度胺及MTX处理后FLS渐呈不规则形,细胞变圆缩小,透射电镜下可见典型细胞凋亡.③中、高剂量沙利度胺及MTX组凋亡率和坏死率均高于对照组、LPS组及低剂量沙利度胺组,凋亡率分别为(5.72±1.42)％、(8.07±1.45)％、(11.28±2.48)％vs (0.30±0.09)％、(0.24±0.05)％、(0.40±0.04)％(P＜0.05),坏死率分别为(12.96±4.32)％、(20.34±4.43)％、(18.11±1.17)％ vs (0.22±0.08)％、(0.13±o.09)％、(1.94±1.16)％(P＜o.05);低、中、高剂量沙利度胺及MTX组凋亡率均依次升高(P＜0.05);低、中、高剂量沙利度胺组及MTX组坏死率均依次升高(P＜0.05);高剂量沙利度胺组与MTX组坏死率之间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 沙利度胺能够诱导FLS凋亡,在一定浓度范围内该作用呈剂量依赖性.沙利度胺对FLS早期凋亡作用弱于MTX,对晚期凋亡作用与MTX相同.