桃红四物汤对人脑微血管内皮细胞OGD损伤的保护作用及机制

目的:通过建立糖氧剥夺(OGD)诱导的人脑微血管内皮细胞(h-BMECs)损伤模型,观察桃红四物汤对细胞的保护作用及机制。方法:体外建立人脑微血管内皮细胞糖氧剥夺损伤模型,随机分为正常组、模型组、桃红四物汤高、中、低质量浓度组(0.8,0.4,0.2 g·L-1)和阳性药尼莫地平组。噻唑蓝(MTT)比色法检测h-BMECs细胞活性,酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)水平、细胞中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达水平。结果:桃红四物汤可显著提高拟缺血损伤的人脑微血管内皮细胞活性,降低LDH漏出率(P0.05,P0.01),改善细胞形态,降低MDA水平(P0.05),增强SOD活性(P0.05,P0.01)。增加内皮细胞VEGF和HIF-α蛋白的表达(P0.05,P0.01)。结论:桃红四物汤对拟缺血损伤人脑微血管内皮细胞具有保护作用,其机制与增强细胞抗氧化能力,通过HIF-α途径增强VEGF表达有关,显示中药组方可发挥整体调节的治疗优势。     

地梢瓜苷对人脐静脉内皮细胞的保护作用及机制

目的观察地梢瓜苷(CG)对低氧低糖损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的保护作用,并探讨相应的机制。方法培养HUVEC,随机分为5组,即对照组,模型组及地梢瓜苷低、中、高剂量组。MTT法检测细胞存活率,TUNEL法及Annexin V-FITC/PI双染法检测内皮细胞凋亡,试剂盒检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出及丙二醛(MDA)产生,酶联免疫吸附试验检测细胞分泌内皮素(ET)及前列环素(PGI2)水平。结果地梢瓜苷预孵育细胞后,提高低氧低糖损伤的内皮细胞存活率,改善细胞凋亡。同时,地梢瓜苷减少了低氧低糖损伤的内皮细胞LDH漏出及MDA产生,降低了ET的分泌,增加了PGI_2的分泌。结论地梢瓜苷可通过增加血管内皮细胞的存活率、减轻氧化应激和细胞膜通透性、调节血管活性物质的分泌从而发挥保护内皮细胞的作用。     

杨梅总黄酮对H_2O_2诱导血管内皮细胞损伤的保护作用

目的:探讨杨梅总黄酮对过氧化氢(H2O2)诱导血管内皮细胞损伤的保护作用及其机制。方法:体外培养人脐静脉血管内皮细胞ECV-304,通过H2O2诱导建立血管内皮细胞损伤模型,利用噻唑蓝(MTT)染色法研究杨梅总黄酮对血管内皮细胞存活率的影响,以MDA、LDH、SOD、NO含量的测定研究杨梅总黄酮对血管内皮细胞氧化应激的影响。结果:与模型组比较,杨梅总黄酮各给药组细胞存活率及SOD、NO活性显著提高,MDA含量和LDH漏出量显著降低。结论:杨梅总黄酮可能通过抑制氧化应激,达到保护内皮细胞的作用。     

藁本内酯预处理对糖氧剥夺-复糖氧损伤血管内皮细胞活性及NO/NOS与HIF-1α、VEGF、Tubulin表达的影响

目的:研究藁本内酯对糖氧剥夺-复糖氧损伤血管内皮细胞活性及NO/NOS与HIF-1α、VEGF、Tubulin表达的影响。方法:将融合生长的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)预处理给予藁本内酯1h后,用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)制备糖氧剥夺-复糖氧损伤(oxygen-glucose deprivation-reperfusion injury,OGD-R)模型,采用MTT法检测细胞活性,微板法检测细胞内丙二醛(MDA)、细胞外一氧化氮(NO)含量与测定细胞内一氧化氮合酶(NOS)活性,WTS-1法测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性;采用高内涵分析系统检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达,采用蛋白免疫印迹法测定细胞内微管蛋白Tubulin的表达。结果:与溶剂对照组比较,OGD-R损伤的HUVEC细胞活力明显下降,细胞内MDA含量增加而SOD活性降低、细胞外NO含量与细胞内NOS活性均下降,细胞内HIF-1α、VEGF和Tubulin表达明显上升;藁本内酯20、40、60μmol/L可提高OGD-R损伤的HUVEC的活力,降低细胞内MDA含量和提高SOD活性,同时增加细胞外NO含量与细胞内NOS活性,提高细胞内HIF-1α、VEGF的表达和Tubulin的含量。结论:藁本内酯预处理对OGD-R损伤的HUVEC有保护作用,可对抗细胞氧化损伤,并调节内皮细胞功能。     

活络效灵丹对乳鼠缺氧/复氧损伤心肌细胞的保护作用研究

目的 探讨活络效灵丹含药血清对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧( hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤的保护作用及其机制.方法 取体外培养的乳鼠心肌细胞,建立H/R心肌细胞损伤模型,实验分为4组:正常血清对照组、模型组(H/R组)、活络效灵丹(HXP)血清组和单硝酸异山梨酯(ISMN)血清组,采用MTT比色法检测活络效灵丹对H/R损伤心肌细胞存活率的影响,测定细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)的漏出量以及胞浆丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,并采用流式细胞仪检测活络效灵丹对H/R损伤心肌细胞凋亡的影响.结果 与正常组比较,模型组细胞存活率明显降低,上清液中LDH漏出量和胞浆MDA含量升高,SOD活性降低,细胞凋亡率显著增加(P＜0.01);与模型组比较,活络效灵丹含药血清可明显提高细胞存活率,增加胞浆SOD活性,减少上清液中LDH漏出量和胞浆MDA含量,并降低细胞的凋亡率(P＜0.01).结论 活络效灵丹对H/R损伤的心肌细胞具有保护作用,其作用可能与其抗脂质过氧化作用有关.     

三七总皂苷及其主要成分对血管内皮细胞缺氧损伤的保护作用

研究三七总皂苷活血化瘀作用的血管内皮保护机制 ,并确定其血管内皮保护作用的主要效应成分。方法 :血管内皮细胞培养 ,MTT比色法测定药物毒性、台盼蓝染色、MTT比色法、LDH漏出率评价药效。结果 :与模型组比较 ,三七总皂苷及其主要成分三七皂苷Rb1 、Rg1 、Re组的LDH漏出率、细胞死亡率显著下降 (P <0 0 0 1) ,细胞存活率显著提高 (P <0 0 0 1)。结论 :三七总皂苷的活血化瘀作用机制与其对血管内皮细胞缺氧损伤的保护作用有关 ,三七皂苷Rb1 、Rg1 、Re是其血管内皮保护作用的主要效应成分。     

含溶栓颗粒血清对TNF-α损伤人脐静脉内皮细胞VEGF及ICAM-1影响的研究

目的:探讨溶栓颗粒对TNF-α损伤血管内皮细胞VEGF及ICAM-1表达的影响。方法:用TNF-α(40ng/mL)损伤人脐静脉内皮细胞(HUVEC)造模,用含大、中、小剂量溶栓颗粒的大鼠血清干预受损HUVEC,应用HE染色观察细胞形态变化,免疫组化法观察血管内皮细胞生长因子(VEGF)以及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达。结果:TNF-α可以造成HUVEC损伤,表现细胞数量下降、皱缩、分裂相细胞明显增加;受损细胞的VEGF、ICAM-1表达明显增多;含大、中剂量溶栓颗粒的大鼠血清能减少VEGF、ICAM-1表达,减少细胞有丝分裂。结论:溶栓颗粒可以减少因炎性介质TNF-α增加而受损的血管内皮细胞VEGF、ICAM-1表达,或许可以减缓动脉粥样硬化形成,并对稳定动脉粥样斑块稳定性有积极作用。     

淫羊藿苷对缺氧诱导血管内皮细胞损伤的保护作用

目的 研究淫羊藿苷(icariin,ICA)对缺氧所致血管内皮细胞(vascular endothelial cells,VECs)损伤的影响。方法 建立体外细胞缺氧模型,用MTT法观察ICA对缺氧损伤的血管内皮细胞活性的影响,测定细胞中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)及乳酸脱氢酶(LDH)活力,并对细胞进行Hoechst33342荧光染色、电镜观察细胞超微结构,运用流式细胞仪及DNA琼脂糖凝胶电泳分析DNA断裂情况,以观察ICA对缺氧诱导的内皮细胞凋亡的影响。结果 ICA能抑制缺氧引起的血管内皮细胞的减少,降低LDH活力,并抑制缺氧条件下MDA生成,提高SOD活力;缺氧能诱导血管内皮细胞凋亡,表现为细胞核浓缩,沿核膜排列成块状,DNA琼脂糖凝胶电泳显示典型“梯形条带”,流式细胞仪分析呈现典型凋亡亚二倍体峰。ICA能显著抑制缺氧诱导的内皮细胞凋亡。结论 ICA具有保护缺氧诱导的血管内皮细胞损伤的作用,其作用机制与抗脂质过氧化物产生、提高SOD活力以及抗细胞凋亡有关。     

基于细胞力学加载装置的推拿法行气活血作用机制研究

目的通过细胞力学加载装置,观察推拿法对体外培养人脐静脉血管内皮细胞血管活性物质的影响,探索法的行气活血效应机制。方法培养HUVEC细胞,建立缺氧细胞模型,分别将正常细胞和缺氧细胞分为对照组、推拿组、推拿+维拉帕米组。除对照组外另两组均进行法干预,推拿方法在已建立的HUVEC细胞力学加载模型上进行,用Griess还原法分别检测各组HUVEC细胞NO的合成与释放量,采用实时荧光定量PCR技术分析推拿法对HUVEC细胞e NOSm RNA相对表达量的影响。结果缺氧可导致HUVEC合成和释放NO量显著降低(P0.01),e NOSm RNA相对表达量显著降低(P0.01);与对照组细胞相比,不论正常还是缺氧HUVEC细胞,推拿组NO合成和释放量显著增加(P0.01),e NOSm RNA相对表达量显著增强(P0.01,)推拿+Ver组NO及e NOSm RNA相对表达量并未显著增加,提示Ca2+拮抗剂Ver能显著抑制手法的这种促进作用。结论法能够激活HUVEC的分泌功能,促进内源性血管舒张因子NO的合成和释放,引发血管舒张,这是其实现行气活血效应的主要机制。但该作用可能与Ca2+有关,尚需进一步研究。     

定心方经Ang1-Tie2通路干预人脐静脉内皮细胞血管生成的实验研究

目的探讨定心方(DXR)含药血清对氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)诱导损伤的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)Angiopietin/Tie2(Ang1-Tie2)通路及血管形成的影响,研究DXR防治动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,采用OX-LDL 100 mg·m L-1损伤人脐静脉内皮细胞24 h,分别观察DXR含药血清对其迁移及其小管形成的影响。采用免疫印迹法(Western Blot)检测血管内皮细胞生长因子(VEGF)和血管紧张素(Angiotensin1,Ang1)以及Ang1受体Tie2的表达。采用鸡胚尿囊膜实验观察(Chick embryo chorioallantoic membrane)DXR对体外血管生成的影响。结果经DXR作用24 h后,DXR高剂量组(DXR1,30%浓度)、中剂量组(DXR2,15%浓度)、低剂量组(DXR3,5%浓度)、空白组HUVEC细胞迁移数目与模型组相比,DXR1和DXR2组与Model组相比迁移细胞数量减少,差异具有统计学意义(P0.05),DXR3、DXR2、DXR1、空白组鸡胚尿囊膜实验中形成的一级和二级血管数目与Model组一、二级血管数目相比,DXR3、DXR2、DXR1与Model组相比,一级血管数量明显降低(P0.05),二级血管数量明显降低(P0.05)。Western Blot实验显示,与Model组比较,受DXR干预的HUVEC细胞中的Ang1蛋白和Tie2蛋白表达量上调,VEGF蛋白表达量下降。受DXR干预的HUVEC细胞形成小管密集程度明显低于Model组。结论体外实验结果表明,DXR具有抑制血管生成的作用,这种效应与其可以调控HUVEC细胞内与血管生成密切相关的Ang1,Tie2,VEGF有关联。     

蒲黄提取物抗人脐静脉内皮细胞氧化损伤的研究

目的：研究蒲黄提取物对氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）脂质过氧化的影向。方法：体外培养人脐静脉内皮细胞,采用MTT法测定不同浓度蒲黄提取物对内皮细胞有无毒性。根据MTT法的结果,采用蒲黄提取物（10mg/L,50mg/L,100mg/L）预处理细胞24h,再加入100mg/L Ox-LDL造成细胞损伤,检测细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）的活性、丙二醛（MDA）的含量及超氧化物歧化酶（SOD）的活力。结果：Ox-LDL损伤组LDH的活性、MDA的含量显著升高,SOD的活力显著降低,与正常对照组比较有显著差异（P〈0.05）;10、50、100mg/L蒲黄提取物可显著降低LDH的活性、MDA的含量,提高SOD的活力。结论：蒲黄提取物可通过抗脂质过氧化,清除自由基起到保护血管内皮细胞的作用。     

罗布麻总黄酮对过氧化氢致血管内皮细胞损伤的保护作用

目的：探讨罗布麻总黄酮对过氧化氢（H2O2）所致的人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）损伤的保护作用。方法：采用MTT法观察不同浓度罗布麻总黄酮对HUVEC增殖的影响,流式细胞仪检测不同浓度罗布麻总黄酮对HUVEC细胞周期变化的影响,采用比色法分别检测细胞培养液NO和SOD的活性、MDA和LDH的含量,免疫组化法测定NF-κB的表达。结果：正常细胞组比,200μmol．L—H2O2模型组细胞增殖活性下降,细胞凋亡率明显增加,G0／G1期细胞比率增加,S期细胞和G2／M期细胞比率明显降低,培养上清液中NO和SOD活性明显下降,MDA和LDH的释放量明显增加,NF—κB的表达时明显增加（P〈0．01）。不同浓度的罗布麻总黄酮作用后,与模型组比较,可明显提高细胞增殖活性,降低细胞凋亡率,降低G0／G1期细胞比率,增加S期细胞和G2／M期细胞比率;并可提高细胞上清液中NO水平和SOD活性,降低MDA和LDH的释放,可抑制H2O2引起的NF-κB的过度表达。其中,中、高剂量组有显著性差异。结论：罗布庥总黄酮对H2O2引起HUVEC损伤具有明显的保护作用,其作用机制可能与其抗氧化作用及调节有关NF—κB的表达有关。     

�������ɻ���ģ���ԭȱ��С���ļ���֯ȱ���͵������׵�Ӱ��

??OBJECTIVE To investigate the effects of nitronyl nitroxide(HPN)on the myocardial hypoxia- and the expression of apoptosis-associated proteins in hypobaric hypoxia condition mice. METHODS Sixty BALB/c mice were divided into normal control group,hypoxia model group,acetazolamide group and HPN group randomly. After single intraperitoneal injection of HPN for 30 min,the mice were exposed to a simulated high altitude of 8 000 m for 12 h. After hypoxic exposure,mice were sacrificed and the content of lactate(LD) and lactate dehydrogenase(LDH) activity in heart were determined. HIF-1,VEGF,caspase-3,Bax and Bcl-2 were detected by immunohistochemistry. RESULTS Compared with normal control group,the LD level and LDH activity in hypoxia model group increased significantly. In addition,the expression of HIF-1??,VEGF,caspase-3 and Bax were increased,Bcl-2 and Bc1-2/Bax ratio was decreased. Pre-treated with HNP the LD level and LDH activity,the expression of HIF-1??,VEGF,caspase-3 and Bax were decreased effectively,the expression of Bcl-2 and Bc1-2/Bax ratio was increased. CONCLUSION HPN has protective effect on heart injury induced by hypobaric hypoxia in mice. Its mechanism may be related to the amelioration of energy metabolism,alleviation of oxidative stress as well as inhibition of myocardial apoptosis.     

黄芩茎叶总黄酮对培养大鼠心肌细胞H2O2损伤的保护作用

目的:探讨黄芩茎叶总黄酮保护培养大鼠心肌细胞抗过氧化氢(H2O2)损伤。方法:应用H2O2培养大鼠心肌细胞损伤模型,采用乳酸脱氢酶(LDH)活性及MTT代谢率的测定等方法。结果:与H2O2损伤组比较,黄芩茎叶总黄酮保护组的LDH释放量显著减少(P<0.01),而MTT代谢率显著增高(P<0.01)。结论:黄芩茎叶总黄酮能保护培养大鼠心肌细胞,减轻自由基损伤。     

降压宝蓝片含药血清对过氧化氢损伤的人脐静脉内皮细胞的保护作用

目的:探讨降压宝蓝片含药血清对过氧化氢(H₂O₂)诱导人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用。方法:体外培养HUVECs,分为空白组、模型组、降压宝蓝片含药血清低、中、高浓度组(含量血清体积分数为5%,10%,15%),显微镜下观察细胞形态,用噻唑蓝(MTT)法检测HUVECs活力,微板法检测上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性及一氧化氮(NO)的含量,ELISA法检测内皮素-1(ET-1),组织型纤溶酶原激活物(tPA),组织型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)的含量。结果:与空白组比较,模型组细胞活力显著降低,上清液中LDH活性明显增高,ET-1和PAI-1含量显著增加,NO和tPA含量显著下降(P<0.01);与模型组比较,降压宝蓝片中、高浓度组细胞活力显著升高,LDH活性显著减低,ET-1和PAI-1含量显著减少,NO和tPA显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论:降压宝蓝片含药血清对H₂O₂诱导的HUVECs损伤具有显著地保护作用。     

蕨麻正丁醇部位对缺氧损伤心肌细胞的保护作用

[目的]研究蕨麻正丁醇部位对缺氧损伤心肌细胞的保护作用.[方法]建立大鼠原代培养心肌细胞缺氧损伤模型,采用噻唑蓝(MTT)法检测心肌细胞代谢活力;胎盼兰染色法检测细胞成活率;比色法测定细胞外乳酸脱氢酶(LDH),肌酸激酶(CK)活性及细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量.[结果]与模型组比较,蕨麻正丁醇提取部位各剂量组细胞代谢活力及细胞成活率显著提高(P<0.01),并均可显著减少缺氧损伤引起的LDH、CK的外漏量(P<0.01),提高细胞SOD活性(JD<0.01),减少MDA的产生(P<0.01或P<0.05).[结论]蕨麻正丁醇部位具有抗心肌缺氧损伤作用,其途径之一可能与其抗自由基氧化的能力有关.     

4-�ǻ�-2,2,6,6-�ļ׻���ऻ�-N-������Ը�ԭȱ��С���ļ���֯���˵ı������ü������о�

??OBJECTIVE To study the effect mechanism of tempol against hypobaric hypoxia-induced heart damage in mice. METHODS One hundred and ten BALB/c mice were randomly divided into normal control group, hypoxia model group, acetazolamide group and tempol group. After single intraperitoneal injection for 30 min, the mice were exposed to a simulated high altitude of 8 000 m for 12 h. After hypoxic exposure, blood was collected from the eye sockets and separated into serum to measure the activities of lactic dehydrogenase (LDH)and creatine kinase (CK). Then the mice were sacrificed and the content of H₂O₂ and malondialdehyde (MDA) as well as ATPase and antioxidant enzyme activity in heart were determined. HIF-1, VEGF, Nrf2, and HO-1 were detected by immunohistochemistry. RESULTS Compared with normal control group, the activities of plasma CK and LDH in hypoxia model group significantly increased. In addition, the content of H₂O₂ and MDA in hypoxia model group significantly increased while ATPase and antioxidant enzymes activity markedly decreased compared with the normal control group. Moreover, the expression of HIF-1??, VEGF, Nrf2 and HO-1 increased. Prior administration of tempol effectively decreased the activities of plasma CK and LDH as well as the content of H₂O₂ and MDA in heart tissue. Tempol could increase ATPase and antioxidant enzyme activities and decreased the expression of HIF-1?? and VEGF compared with hypoxia model, while it could further increase the expression of Nrf2 and HO-1. CONCLUSION Tempol has protective effect on heart injury induced by hypobaric hypoxia in mice. Its mechanism may be attributed to the amelioration of energy metabolism, scavenging free radical, improvement of antioxidant enzyme activity the activation of the Nrf2/HO-1 pathway as well as alleviation of oxidative stress.