胆盐诱发肝细胞凋亡及蛋白激酶C信号通道的作用

目的 从细胞凋亡的角度探讨阻塞性黄疸肝损害的调控机理。方法 采用胶原酶原位肝灌注法获取大鼠肝细胞,行原代培养,使用不同浓度甘氨鹅脱氧胆酸钠（ＧＣＤＣ）及蛋白激酶Ｃ激动剂ＰＭＡ,拮抗剂白屈莱赤碱作用肝细胞后,用流式细胞术（ＦＣＭ）分析肝细胞的凋比率,用生物率－ｄＵＴＰ标记的ＴＵＮＥＬ技术进行凋亡的原位检测。结果 随ＧＣＤＣ浓度的增加,肝细胞的凋亡比率明显增加,１５０μＭ ＧＣＤＣ作用后肝细胞的凋亡率     

类风湿关节炎与骨性关节炎成纤维样滑膜细胞蛋白酪氨酸磷酸化状态的比较

目的 比较类风湿关节炎（ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ,ＲＡ）与骨性关节炎（ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ,ＯＡ）成纤维样滑膜细胞（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ－ｌｉｋｅ ｓｙｎｏｖｉｏｃｙｔｅｓ,ＦＬＳ）蛋白酪氨酸磷酸化状态的差异。方法滑膜细胞原代培养,流式细胞仪鉴定滑膜细胞型别,提取蛋白进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ单向电泳和ＩＣＥ－ＰＡＧＥ双向电泳分离后,应用抗蛋白酪氨酸磷酸化抗体进行ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测。结果 滑膜细胞原代培养至第三代时,ＣＤ３、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ｖｏｎ Ｗｉｌｌｉｂｒａｎｄ ｆａｃｔｏｒ阳性细胞比例小于１％,ＲＡ ＦＬＳ蛋白酪氨酸磷酸化程度是ＯＡ ＦＬＳ的４～６倍。结论 滑膜细胞原代培养至第三代时即可以获得型别均一的ＦＬＳ,ＲＡ ＦＬＳ酪氨酸磷酸化程度较ＯＡ ＦＬＳ明显增     

雪旺氏细胞分泌的神经营养活性物质的提取及体外生物活…

雪旺氏细胞（ＳＣ）分泌多种神经营养因子促进周围神经再生，但ＳＣ分泌的各种蛋白质对周围神经再生的影响尚未完全阐明。为此，从成年大鼠瓦勒氏变性坐骨神经中分离出ＳＣ，经培养获ＳＣ无血清条件培养液（ＳＣ－ＳＦＣＭ）。通过ＰＭ１０超滤浓缩、Ｄｉｓｃ－ＰＡＧＥ和Ｂｉｏｔｒａｐ电洗脱，从ＳＣ－ＳＦＣＭ中分离出Ｄ蛋白带，分子量在４７－６７Ｋｄ之间，经ＭＴＴ检测，Ｄ带蛋白在２５－５０ｎｇ／ｍｌ浓度时对脊髓产角神经元     

雪旺氏细胞分泌的神经营养活性物质的提取及体外生物活性研究

雪旺氏细胞（ＳＣ）分泌多种神经营养因子促进周围神经再生，但ＳＣ分泌的各种蛋白质对周围神经再生的影响尚未完全阐明。为此，从成年大鼠瓦勒氏变性坐骨神经中分离出ＳＣ，经培养获得ＳＣ无血清条件培养液（ＳＣ－ＳＦＣＭ）。通过ＰＭ１０超滤浓缩、Ｄｉｓｃ－ＰＡＧＥ和Ｂｉｏｔｒａｐ电洗脱，从ＳＣ－ＳＦＣＭ中分离出Ｄ蛋白带，分子量在４３～６７Ｋｄ之间。经ＭＴＴ检测，Ｄ带蛋白在２５～５０ｎｇ／ｍｌ浓度时对脊髓前角神经元表现出明显的体外成活作用。Ｄ蛋白带可能是一种有别于已知的ＳＣ源神经营养物质，其活性浓度达到了神经营养因子分子检测水平，值得深入研究     

人肝细胞系生物功能筛选测定

生物人工肝利用原代肝细胞或人肝细胞系提供肝功能支持［１～４］。我国是世界上最早建立人肝细胞系的国家之一［５］。本研究收集国内的９株人肝细胞系,从中筛选出分化程度高者,测定其生物功能,以备作为人工肝的生物材料。材料与方法１．材料９株人肝细胞系由中国科学院上海细胞生物学研究所提供,编号为细胞系１～９（ＣＬ１～９）。原代肝细胞取自５月胎龄水囊引产的人胚胎肝组织。Ｌ－１５培养基为Ｇｉｂｃｏ产品。Ｌ－谷氨酰胺为Ｓｉｇｍａ产品。ＦＡＣＳ　４４０流式细胞仪为美国Ｂｅｃｔｏｎ　Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ公司产品。２．方…     

3-脱氧葡糖醛酮诱导人血管内皮细胞凋亡

目的 探讨３－脱氧葡糖醛酮（３－ＤＧ）对人血管内皮细胞（ＶＥＣｓ）存活的影响及作用机制。方法 从人脐静脉分离血管内皮细胞并与不同浓度的３－ＤＧ在体外共同培养,细胞凋亡用形态学和原位末端标记（ＴＵＮＥＬ）法证实,凋亡或死亡细胞数量用ＦＴＴＣＡｎｎｅｘｉｎ－Ｖ及碘经丙碇（ＰＩ）染色后,以流式细胞仪检测。细胞内氧化水平以氧化敏感的荧光染料２,７－二氢二氯荧光素（ＤＣＦＨ）染色,用流式细胞仪测定。结果     

β-环糊精14硫酸酯选择性抑制微血管内皮细胞增殖的研究

目的 研究β－环糊精１４硫酸酯（β－ＣＤ－１４Ｓ）抑制肿瘤新生血管的作用机制。方法 采用＾３Ｈ－胸腺嘧啶核苷（＾３Ｈ－ＴｄＲ）掺入法，检测β－ＣＤ－１４Ｓ单独及与氢化可的松（ＨＣ）联合应用（以各种药物加药浓度不同分别分为５个组）对血管内皮细胞、正常肝细胞系（Ｌ０２）细胞，人肝癌７７２１细胞和肝癌Ｗａｋｅｒ２５６细胞增殖的影响。结果 各种不同浓度的β－ＣＤ－１４Ｓ、ＨＣ以及联合用药对内皮细胞生长率有     

梗阻性黄疸肝功能受损机制——胆盐诱发肝细胞凋亡

梗阻性黄疸呆导致肝功能受损，其机理尚不清楚，细胞凋亡规律的失常与许多肝胆系统疾病有关，本实验观察胆盐是否诱发肝细胞的凋亡。方法经胶原酶灌注取肝细胞后３５ｍｍ，６孔培养板短期培养，培养基为Ｆ１２／ＤＭＥＭ各半，胰岛素０．５μ／ｍｌ，胶原铺底，分别加入２５、５０、１００、２００、３００μｍｏｌ的甘氨鹅脱胆酸后培养３、６、９、１２、１８、２０、２４小时，行流式细胞术检测，抽提ＤＮＡ电泳，涂片后生物素－ｄ     

Bcl-2基因在阻塞性黄疸大鼠肝细胞凋亡中的作用

目的:探讨Bcl-2基因对阻塞性黄疸大鼠肝细胞损害中细胞凋亡的调控作用。方法:采用胶原酶原位肝灌注法获取对照组大鼠肝细胞及阻塞性黄疸实验组术后3、7、14、21d大鼠的肝细胞,分别用RT-PCR检测Bcl-2mRNA的表达。分离对照组及实验组14d组大鼠的肝细胞行原代培养后,使用100μmol/L甘氨鹅脱氧胆酸钠(GCDC)作用于两组肝细胞24h后,用FCM法测定肝细胞的凋亡比率,用TUNEL技术进行肝细胞凋亡的原位检测。结果:(1)对照组大鼠肝细胞无Bcl-2mRNA表达,实验组术后7、14、21d组大鼠肝细胞均有Bcl-2mRNA表达;(2)GCDC作用两组大鼠肝细胞后,实验组比对照组肝细胞凋亡明显减少(P<0.001)。结论:在阻塞性黄疸过程中,大鼠肝细胞通过表达Bcl-2基因是抑制胆盐致肝细胞的凋亡作用的途径之一。     

多药耐药相关蛋白在阿霉素诱导人肝癌细胞SMMC—7721耐药性产生中的作用及

目的 动态观察阿霉素（ＡＤＭ）诱导肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１耐药性的产生,了解多药耐药相关蛋白（ＴＲＰ）在其耐药机理中的作用。方法 分别用逐步提高培养基中ＡＤＭ的浓度诱导ＳＭＭＣ－７７２１细胞和用含不用ＡＤＭ浓度的培养基直接短期培养ＳＭＭＣ－７７２１细胞的方法,诱导细胞产生耐药性,绘制剂量反应曲线,确定细胞耐药倍数,ＲＴ－ＰＣＲ法测定细胞ＭＲＰｍＲＮＡ的表达水平,流式细胞仪检测细胞内柔红霉素（ＤＮＲ）的浓度。结果 随着培养基中ＡＤＭ浓度的逐步提高,ＭＲＰｍＲＮＡ的表达也逐渐增强,细胞内ＤＮＲ浓度明显下降,ＳＭＭＣ－７７２１细胞的耐性逐渐增加;用含不同ＡＤＭ浓度的培养基直接培养亲代细胞后,虽然ＭＲＰｍＲＮＡ表达明显升高,但细胞内ＤＮＲ浓度仍维持较高水平,并且绝大部分细胞短期内死亡。结论 ＡＤＭ可以逐步诱导肝癌细胞