用原位杂交法研究大鼠脑损伤后胆囊收缩素和脑啡肽mRNA量…

应用原位杂交技术，研究大鼠脑损后前胆囊收缩素（ＰＣＣＫ）和前脑啡肽原ＰＰＥ）ｍＲＮＡ的表达。结果表明，在大鼠脑损伤２４ｈ后同侧脑内ＰＣＣＫ和ＰＰＥｍＲＮＡ量增加，尤其以新皮质和海马显著。阳ＮＭＤＡ受体非竞争性拮抗剂ｋｅｔａｍｉｎｅ可以抑制增加。因此，作者认为在脑损伤后可诱发胆囊收缩素（ＣＣＫ）和脑啡肽（ＥＮＫ）合成增加，并参与脑损病理改变，另外这种合成增加可能由ＮＭＤＡ受体介导。     

实验性癫痫时海马内兴奋性氨基酸受体对内阿片肽基因表达的 …

目的 阐明在癫痫发作与发展中起着重要作用的脑内兴奋性氨基酸类递质和内阿片肽之间的关系。方法 应用原位杂交方法观察了青霉素致痫及海马内微量注射ＮＭＤＡ受体阻断剂ＭＫ－８０１（５－ｍｅｔｈｙ１－１０,１１－ｄｉｈｙｄｒｏ－５Ｈ－ｄｉｂｅｎｚｏ［ａ,ｂ］ｃｙｃｌｏｈｅｐｔａｎ－５,１０－ｉｍｉｎｅｍａｌｅａｔｅ）和非ＮＭＤＡ受体阻断剂ＤＮＱＸ（６,７－ｄｉｎｉｔｒｏｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｅ－２,３－ｄｉｏ     

用原位杂交法研究大鼠脑损伤后胆囊收缩素和脑啡肽mRNA量的变化

应用原位杂交技术，研究大鼠脑损伤后前胆囊收缩素（ＰＣＣＫ）和前脑啡肽原（ＰＰＥ）ｍＲＮＡ的表达。结果表明，在大鼠脑损伤２４ｈ后同侧脑内ＰＣＣＫ和ＰＰＥｍＲＮＡ量增加，尤其以新皮质和海马显著。给予ＮＭＤＡ受体非竞争性拮抗剂ｋｅｔａｍｉｎｅ可以抑制增加。因此，作者认为在脑损伤后可诱发胆囊收缩素（ＣＣＫ）和脑啡肽（ＥＮＫ）合成增加，并参与脑损伤病理改变，另外这种合成增加可能由ＮＭＤＡ受体介导。     

胚鼠大脑皮质神经元原代培养中NMDA诱导c—fos mRNA表达

为了进一步研究对神经元的早期保护，本实验观察Ｎ－甲基－Ｄ－天门冬氨酸（ＮＭＤＡ）在胚鼠大脑皮层神经元原代培养诱导ｃ－ｆｏｓ基因表达特点。结果显示：ＮＭＤＡ可诱导快速、短暂的ｃ－ｆｏｓ基因表达，并呈剂量、时间依赖关系；ｃ－ｆｏｓ ｍＲＮＡ表达可被ＮＭＤＡ竞争性或非竞争性受体拮抗剂Ａｐ－５（５０μｍｏｌ／Ｌ）ＭＫ－８０１（１０μｍｏｌ／Ｌ）完全阻断，Ｍｇ＾２＋（２ｍｍｏｌ／Ｌ）可部分阻滞，异搏定、尼凡     

福尔马林致痛及针刺时大鼠中央灰质内c－fos的表达及其与前脑啡肽原mRNA的共存

福尔马林致痛及针刺时大鼠中央灰质内ｃ－ｆｏｓ的表达及其与前脑啡肽原ｍＲＮＡ的共存王妙珍，俞逸红，张菁，何莲芳（医学神经生物学国家重点实验室，上海医科大学基础医学院神经生物学教研室２０００３２）本室以往的工作表明伤害性刺激可引起大鼠中脑导水管周围灰质（...     

脑缺血再灌流后大鼠海马脑源性神经营养因子和睫状神经营养因子mRNA的表达

目的：观察大鼠脑缺血再灌流损伤后脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）和睫状神经营养因子（ＣＮＴＦ）ｍＲＮＡ在海马中的分布及其表达。方法：大鼠颈总动脉夹闭造成脑缺血３０ｍｉｎ，于６，１２，２４，７２ｈ进行点杂交和原位杂交，７２ｈ时进行神经元尼氏小体染色。结果：脑缺血后，海马ＣＡ１区神经元大量死亡，ＢＤＮＦｍＲＮＡ表达于６ｈ开始增加，７２ｈ恢复正常。２４ｈ时齿状回ＢＤＮＦｍＲＮＡ表达高于ＣＡ１区。ＣＮＴＦｍＲＮＡ表达于１２ｈ开始持续增加。结论：脑缺血再灌流损伤后，海马ＢＤＮＦｍＲ－ＮＡ和ＣＮＴＦｍＲＮＡ的表达均增加。ＢＤＮＦ可能有利于齿状回神经元耐受缺血，ＣＮＴＦ可能在局部发挥神经营养作用     

胚鼠大脑皮质神经元原代培养中NMDA诱导c－fosmRNA表达

为了进一步研究对神经元的早期保护，本实验观察了Ｎ－甲基－Ｄ－天门冬氨酸（ＮＭＤＡ）在胚鼠大脑皮层神经元原代培养诱导ｃ－ｆｏｓ基因表达特点。结果显示：ＮＭＤＡ可诱导快速、短暂的ｃ－ｆｏｓ基因表达，并呈剂量、时间依赖关系；ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ表达可被ＮＭＤＡ竞争性或非竞争性受体拮抗剂Ａｐ－５（５０μｍｏｌ／Ｌ）ＭＫ－８０１（１０μｍｏｌ／Ｌ）完全阻断，Ｍｇ２＋（２ｍｍｏｌ／Ｌ）可部分阻滞，异搏定、尼凡地平与安定则无阻断作用。     

NMDA受体Ⅰ及白细胞介素—1在癫痫机制中的作用

应用北京医科大学培育的听源性癫痫易感大鼠Ｐ７７ＰＭＣ,以癫痫不易感大鼠Ｗｉｓｔａｒ为对照,系统研究了ＮＭＤＡ受体亚单位Ⅰ（ＮＲ－１）与白细胞介素－１（ＩＬ－１）在癫痫发生发展中的作用及相互关系。实验在整体、脑片、神经细胞培养及分子水平进行。所得较有意义的结果如下：（１）在听源性惊厥易感大鼠Ｐ７７ＰＭＣ整个发育过程中脑内ＮＲ－１ｍＲＮＡ的表达,以及成年鼠脑内ＮＭＤ受体活性（ＭＫ－８０１结合）都高于对     

低密度脂蛋白对肾小珠系膜细胞,TGF—β和FN mRNA表达的影响

目的：观察低密度脂蛋白（ＬＤＬ）对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞（ＭＳＣ）生长及转化生长因子β（ＴＧＦ－β）和纤维连接蛋白（ＦＮ）基因表达的影响。方法：体外培养的ＭＳＣ培养液中加入ＬＤＬ共同孵育,采用＾３Ｈ－ＴｄＲ渗入法检测ＭＳＣ增殖情况,应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ检测ＴＧＦ－β ｍＲＮＡ、ＦＮ ｍＲＮＡ的表达,应用斑点杂交法检测抗ＴＧＦ－抗体对ＦＮ ｍＲＮＡ表达的影响。结果（１）ＬＤＬ刺激ＭＳ     

谷氨酸受体在大鼠c—fos基因的表达及其与癫痫易感性的关系

为探讨Ｎ－甲基－Ｄ－天冬氨酸（ＮＭＤＡ）受体在ｃ－ｆｏｓ基因表达及其与癫痫易感性的关系，我们以Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交法测定结果显示：（１）外源性ＮＭＤＡ可诱导脑细胞ｃ－ｆｏｓ基因的ｍＲＮＡ表达；竞争性或非常竞争性ＮＭＤＡ受体拮抗剂可完全阻断ｃ－ｆｏｓ基因ｍＲＮＡ表达。（２）ＮＭＤＡ诱导脑内ｃ－ｆｏｓ的ｍＲＮＡ表达随神经元发育呈上升趋势，于体外培养２４天达高峰。（３）在发育中，听源性癫痫易感大鼠脑     

大鼠孤束核内谷氨酸受体亚型对心脏伤害性感受信息的调控作用

目的：探讨大鼠孤束核(NTS)内谷氨酸受体亚型对心包内注射辣椒素诱发的心脏-躯体运动反射(CMR)的影响,阐明NTS对心脏伤害性信息调控的作用机制。方法：SD大鼠60只随机分为鹅膏蕈氨酸(IBO)组、谷氨酸组、5-甲基二氢丙环庚烯亚胺马来酸（MK-801）组、α-甲基,4-羧基苯丙氨酸（MCPG）组、MCPG联合MK-801组和6,7-二硝基喹喔啉-2,3-二酮（DNQX）组;各组大鼠孤束核内分别微量注射13 mmol•L^-1 IBO　100 nL,100、200、500 mmol•L^-1谷氨酸100 nL,NMDA受体拮抗剂 40和60 mmol•100•^-1 MK-801 100　nL,代谢型谷氨酸受体拮抗剂 25 和50 mmol•L^-1 MCPG 100 nL,25 mmol•L^-1MCPG 50 nL联合40 mmol•L^-1MK-801 50 nL,非NMDA受体拮抗剂20和50 mmol•L^-1 DNQX 100 nL;观察各组大鼠CMR的变化。结果：与对照组比较, IBO组大鼠CMR减少(P<0.05);谷氨酸组随着谷氨酸浓度的增加,大鼠CMR不断增加(P<0.05); MK-801和MCPG组CMR均减少(P<0.05); MCPG联合MK-801组CMR减少(P<0.05); DNQX组CMR无明显变化(P>0.05)。结论：NTS对心脏伤害性感受信息有易化调控作用,这种易化调节作用主要由NMDA和mGluRs受体介导。     

下丘脑弓状核内微量注射谷氨酸提高大鼠痛阈及其受体机制

目的观察下丘脑弓状核（ARC）内微量注射谷氨酸（Glu）对大鼠痛阈的影响,初步探讨Glu参与ARC痛觉调制作用的受体机制。方法ARC内分别微量注射Glu或NMDA受体激动剂N-甲基-D-天门冬氨酸（NMDA）和拮抗剂5-甲基-二氢-丙环庚烯-亚胺马来酸（MK-801）以及非NMDA受体拮抗剂6-氰基-7-硝基喹喔啉-2,3-二酮（CNQX）,用电刺激鼠尾-嘶叫法测定痛阈。结果ARC内微量注射Glu（3.0,5.0,10.0 nmol）能剂量依赖性地提高大鼠的痛阈,出现镇痛效应。ARC内微量注射NMDA受体激动剂NMDA（0.1,0.5,1.0 nmol）能模拟Glu的作用,也能剂量依赖性地提高痛阈,出现镇痛效应。NMDA受体拮抗剂NK-801可翻转Glu和NMDA的镇痛效应,而非NMDA受体拮抗剂CNQX不能翻转这种效应。结论ARC内微量注射Glu能参与ARC对痛觉的调制,产生镇痛效应,且这种调制是由NMDA受体介导的。     

戊四氮诱导发育鼠癫癎持续状态后海马突触素的变化及MK-801的影响

目的探讨戊四氮诱导发育鼠癫癎持续状态（SE）后海马结构的突触重建以及NMDA受体在其中的作用。方法利用图像分析仪测定戊四氮诱导的发育鼠癫癎持续状态模型及用NMDA受体拈抗剂MK-801治疗后海马结构内CA3区及齿状回内分子层突触素（p38）的阳性免疫反应产物的光密度值（A）。结果不同日龄SD大鼠SE后海马结构内各部p38阳性免疫反应产物光密度值较对照组显著增加，尤以CA3区苔藓纤维层和齿状回分子层内带为甚；MK-801可显著减少p38的表达。结论癫癎持续状态后存在突触重建现象，一方面是癫癎发作的结果，另一方面也可能是导致癫癎反复发作的分子学基础；在此过程中NMDA受体发挥着重要的作用。     

Propofol can Protect Against the Impairment of Learning-memory Induced by Electroconvulsive Shock via Tau Protein Hyperphosphorylation in Depressed Rats

Objective To explore the possible neurophysiologic mechanisms of propofol and N-methyl-D-aspartate (NMDA) receptor antagonist against learning-memory impairment of depressed rats without olfactory bulbs.
Methods Models of depressed rats without olfactory bulbs were established. For the factorial design in analysis of variance, two intervention factors were included: electroconvulsive shock groups (with and without a course of electroconvulsive shock) and drug intervention groups [intraperotoneal (ip) injection of saline, NMDA receptor antagonist MK-801 and propofol. A total of 60 adult depressed rats without olfactory bulbs were randomly divided into 6 experimental groups (n=10 per group):ip injection of 5 ml saline;ip injection of 5 ml of 10 mg/kg MK-801;ip injection of 5 ml of 10 mg/kg MK-801 and a course of electroconvulsive shock;ip injection of 5 ml of 200 mg/kg propofol;ip injection of 5 ml of 200 mg/kg propofol and a course of electroconvulsive shock;and ip injection of 5 ml saline and a course of electroconvulsive shock. The learning-memory abilities of the rats was evaluated by the Morris water maze test. The content of glutamic acid in the hippocampus was detected by high-performance liquid chromatography. The expressions of p-AT8Ser202 in the hippocampus were determined by Western blot analysis.
Results Propofol, MK-801 or electroconvulsive shock alone induced learning-memory impairment in depressed rats, as proven by extended evasive latency time and shortened space probe time. Glutamic acid content in the hippocampus of depressed rats was significantly up-regulated by electroconvulsive shock and down-regulated by propofol, but MK-801 had no significant effect on glutamic acid content. Levels of phosphorylated Tau protein p-AT8Ser202 in the hippocampus was up-regulated by electroconvulsive shock but was reduced by propofol and MK-801 alone. Propofol prevented learning-memory impairment and reduced glutamic acid content and p-AT8Ser202 levels induced by electroconvulsive shock.
Conclusion Electroconvulsive shock might reduce learning-memory impairment caused by protein Tau hyperphosphorylation in depressed rats by down-regulating glutamate content.     

脊髓NK1受体与非NMDA受体对大鼠心脏-躯体运动反射的调节作用

目的观察脊髓水平神经激肽-1（NK1）受体和非N-甲基-D-天门冬氨酸（NMDA）受体对大鼠心脏-躯体运动反射的调节作
用。方法鞘内注射NK1受体激动剂Sar-SP及拮抗剂CP-96345与非NMDA受体激动剂NMDA及拮抗剂6,7-二硝基喹喔啉-2,
3-二酮（DNQX）,观察心包内注射缓激肽（BK）诱发大鼠心脏-躯体运动反射的变化,该反射以背斜方肌肌电（EMG）为观测指
标。结果鞘内注射NK1受体激动剂Sar-SP后,对心包内BK诱发的背斜方肌EMG有明显的易化作用（P<0.05）,这种易化作用
被鞘内预先注射NK1 拮抗剂CP-96345 完全阻断;鞘内注射非NMDA受体激动剂NMDA后,对心包内BK诱发的背斜方肌
EMG有显著的易化作用（P<0.05）,这种易化作用被鞘内预先注射非NMDA受体拮抗剂DNQX部分阻断;鞘内联合注射Sar-SP
与NMDA,对EMG的易化作用较单一注射Sar-SP或NMDA显著增强（P<0.05）。结论脊髓水平的NK1受体与非NMDA受体
参与了大鼠心脏-躯体运动反射的调节。
     

地卓西平对局灶性脑缺血大鼠海马N-甲基-D-天门冬氨酸受体的影响

目的　探讨地卓西平 (Dizocilpine ,MK 80 1)对局灶性脑缺血大鼠海马N 甲基 D 天门冬氨酸 (N methyl D asparticacid ,NM DA)受体的影响。方法　线栓法研制大脑中动脉阻断 (MCAO)大鼠模型 ,观察MK 80 1对局灶性脑缺血大鼠神经功能缺损评分、梗死体积以及脑海马NMDA受体结合位点数的影响。结果　MK 80 1组缺血 1、6、2 4小时各时相NMDA受体数量明显低于模型组 ;缺血 2 4小时MK 80 1组神经功能缺损评分及梗死体积明显低于模型组 (P <0 .0 1)。结论　MK 80 1对局灶性脑缺血大鼠的神经保护作用可能与下调脑缺血后兴奋性氨基酸受体结合位点数的上调有关。     

米诺环素对大鼠原代神经元和海马脑片缺氧缺糖及NMDA损伤的保护作用

目的:建立神经元和海马脑片缺氧缺糖(OGD)及N-甲基-D-门冬氨酸(NMDA)损伤模型,观察抗炎药米诺环素的神经元保护作用及其特点.方法:体外培养大鼠脑皮层神经元,以OGD和NMDA(50 μmol/L)处理,观察损伤前后神经元形态变化,并以MTT检测神经元活性;以透光法检测OGD和NMDA处理引起的大鼠海马脑片透光度(LT)改变;在上述模型中同时观察米诺环素及NMDA受体拮抗剂MK-801的作用.结果:在OGD过程中米诺环素1、10 μmol/L能浓度依赖地提高神经元的活性,改善神经元形态改变;米诺环素10、100 μmol/L对NMDA损伤有保护作用;MK-801 1 μmol/L对两种损伤模型均有保护作用.米诺环素1或10 μmol/L对OGD和NMDA引起的海马脑片LT增加无明显影响;MK-801 1 μmol/L则能显著抑制LT增加.结论:米诺环素对神经元OGD损伤具有保护作用,可能是通过对NMDA受体介导的兴奋性毒性的间接抑制;但对海马脑片OGD和NMDA即刻损伤无保护作用.     

颈交感神经阻滞对放烧复合伤小鼠HPA轴的调节及相关机制研究

目的 探讨颈交感神经阻滞(SB)对放烧复合伤小鼠HPA轴的调节及可能机制.方法 TBSA15%Ⅲ度烧伤合并5 Gy放射损伤小鼠分为:对照组、放烧复合伤组及伤后SB治疗组,比较各组血清糖皮质激素(GC)及ACTH浓度的差异;同时利用膜片钳技术检测各组间海马NMDA受体通道特性的变化.另外,将腹腔注射足量NMDA受体阻断剂MK-801的小鼠分为:放烧复合伤组、伤后SB治疗组,比较两组血清GC及ACTH浓度的差异.结果 放烧复合伤后血GC及ACTH水平显著升高,SB治疗组血GC和ACTH水平显著底于放烧复合伤组.SB组海马NMDA受体通道开放概率、开放时间常数τ1、τ2虽然高于对照组,但显著低于放烧复合伤组.足量MK-801预处理的放烧复合伤组与SB组之间的血清GC和ACTH水平无显著差异.结论 SB通过降低NMDA受体的活性,抑制了严重创伤(放烧复合伤)小鼠HPA轴的亢进.     

室旁核内iGluRs对旋转刺激诱发的大鼠心血管反应的影响

[目的]探讨下丘脑室旁核(PVN)内的促离子型谷氨酸受体(iGluRs)对旋转刺激诱发的心血管反应的影响.[方法]以旋转刺激为应激刺激,在电脑控制的代谢笼内记录大鼠清醒状态、自由活动时的心血管活动变化情况的同时,分别向PVN局部灌流2种离子型谷氨酸受体阻断剂,观察其对旋转刺激诱发的心血管反应的影响.[结果]向PVN区灌流N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体阻断剂MK-801,再给予旋转刺激,大鼠血压从(99.9±0.5)mmHg上升至(104.5±1.0)mmHg,心率从(357.3±9.1)次/min加快至(387.2±8.5)次/min,MK-801旋转组大鼠血压及心率的增加反应与对照组相比较明显受到抑制;向PVN区灌流非NMDA受体阻断剂CNQX,再给予旋转刺激,大鼠血压从(104.9±2.3)mmHg上升至(113.2±1.3)mmHg,心率从(375.2±5.7)次/min加快至(421.1±5.4)次/min,CNQX旋转组大鼠心血管反应未受到明显的影响.[结论]PVN内NMDA受体参与旋转刺激诱发的心血管反应的调节过程.     

NMDA受体和IP3受体介导NMDA诱导的小脑颗粒神经元内Ca2＋超载

目的探讨N-甲基-D-天门冬氨酸（NMDA）诱导的小脑颗粒神经元（CGNs）钙超载与NMDA受体（NMDAR）及细胞内钙库受体三磷酸肌醇受体（IRR）和兰尼定受体（RyR）之间的关系。方法取出生后8dSD大鼠小脑进行颗粒神经元体外培养。用NMDA（100μmol／L）急性损伤神经元,在激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）扫描开始前30min,或扫描开始后4,9,14min分别加入NMDAR、IRR、RyR拮抗剂MK．80l、2-APB和DAN,检测神经元内Ca^2＋浓度的动态变化。结果MK-801预孵育神经元经NMDA急性刺激后,神经元内ca2’的荧光强度不再升高,NMDA刺激后加入MK-801,上升的ca^2＋水平立即下降,最终下降至基线水平;NMDA急性刺激2-APB预孵育神经元,神经元内ca^2＋的荧光强度升高,但升高幅度明显低于未经NMDA刺激组,NMDA刺激后加入2-APB,细胞内升高的Ca^2＋水平急剧下降,最终下降至接近基线水平;DAN预孵育的神经元经NMDA急性刺激后,胞内ca^2＋的荧光强度急剧升高,达到NMDA刺激组水平,NMDA刺激后加入DAN,神经元内ca^2＋水平无明显下降。结论NMDA诱导的神经元ca^2＋超载,主要由细胞膜钙通道NMDAR和细胞内钙释放通道IP3R介导,而细胞内钙释放通道RyR不起主导作用．